CC BY
19
Пробл. особо опасных инф. 2018; 1:98-102. DOI: 10.21055/0370-1069-2018-1-98-102
УДК 616.98:579.841.95
л.В.саяпина1, и.и.хорева2, н.П.Байдалова2, АА.Горяев1, Д.С.Давыдов1, В.Б.Поступайло1,
ВА.Меркулов1
оценка остаточной вирулентности вакцинного штамма francisella tularensis 15 нииЭг по данным многолетних наблюдений
1ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», Москва, Российская Федерация; 2АО Научное производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген»,
Москва, Российская Федерация
Цель исследования. Изучение и анализ многолетних данных ежегодного контроля остаточной вирулентности вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ для уточнения нормы показателя и внесения изменений в нормативную документацию. Материалы и методы. В работе использовано восемь ампул с лиофилизирован-ными культурами вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ 1953, 1966, 1969, 1987, 1990, 2003, 2012 и 2013 гг., изготовленными на различных площадках производства. Для получения более полной информации по остаточной вирулентности штамма F. tularensis 15 НИИЭГ проведен анализ паспортов контроля качества 76 лиофили-зированных культур в ампулах, из них 48 - изготовленны на базах Одесского ППБП в 1980, 1987 и 1990 гг., и 28 - в ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России, (Омское ППБП) в 2003-2013 гг. Результаты и обсуждения. В результате проведенной работы выявлено, что из восьми изученных культур штамма F. tularensis 15 НИИЭГ различных лет лиофилизации семь культур имели остаточную вирулентность в пределах от 1102 до 2,5 102 м.к., LD50 штамма 1966 г. лиофилизации составила 7,3 105 м.к. (норма 1 102 - 2 106 м.к.). Полученные в ходе анализа паспортов контроля качества вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ, хранившегося в лиофилизированном состоянии в период с 1987 по 2013 год при температуре минус (19±1) °С, данные показали, что остаточная вирулентность стабильна в пределах регламентированных требований. В нормативную документацию внесено изменение нормы показателя «Остаточная вирулентность» в пределах от 1102 до 5 103 м.к.
Ключевые слова: вакцинный штамм F. tularensis 15 НИИЭГ, остаточная вирулентность, анализ паспортов оценки качества.
Корреспондирующий автор: Саяпина Лидия Васильевна, e-mail: [email protected].
L.V.Sayapina1, I.I.Khoreva2, N.P.Baidalova2, A.A.Goryaev1, D.S.Davydov1, V.B.Postupailo1, V.A.Merkulov1
Assessment of Residual Virulence of Francisella tularensis 15 NIIEG Vaccine Strain Based on Long-Term Observations
1 Scientific Center on Expertise of Medical Application Products, Moscow, Russian Federation;2Joint Stock Company Scientific Production Association on Medical Immunobiological Preparations "Microgen", Moscow, Russian Federation
Objective of the study is to assess and analyze the long-term data on annual control of residual virulence of Francisella tularensis 15 NIIEG vaccine strain for clarifying the value of the parameter and amending the regulatory documentation. Materials and methods. Utilized were 8 vials containing lyophilized cultures of vaccine strain F. tularensis 15 NIIEG dated 1953, 1966, 1969, 1987, 1990, 2003, 2012, and 2013, manufactured at different industrial sites. To gather additional information on residual virulence of F. tularensis 15 NIIEG strain, evaluation of quality control files of 76 lyophilized cultures in vials was performed, out of which 48 strains manufactured at the premises of Odessa Bacterial Products Enterprise in 1980, 1987, and 1990, and 28 - at Joint Stock Company Scientific Production Association on Medical Immunobiological Preparations "Microgen", Omsk Bacterial Products Enterprise, in 2003-2013. Results and discussion. Assessment of the parameter has revealed that out of 8 tested cultures of F. tularensis 15 NIIEG strain of various date of lyophilization 7 cultures have virulence rate ranging within 1102 - 2.5102 mc, LD50 of the strain dated 1966 is 7.3105 mc (the standard range 1 102 - 2 106 mc). Obtained in the course of analysis of quality control files on F. tularensis 15 NIIEG strain, stored in lyophilized form at (19±1) °C, data demonstrate that residual virulence stays within the specified limits. Amendments regarding the value of "Residual virulence" parameter have been introduced into the regulatory documentation, the level ranging within 1 102 - 5 103 mc.
Key words: Francisella tularensis 15 NIIEG vaccine strain, residual virulence, analysis of quality control files. Conflict of interest: The authors declare no conflict of interest. Corresponding author: Lidiya V. Sayapina, e-mail: [email protected].
Citation: Sayapina L.V., Khoreva I.I., Baidalova N.P., Goryaev A.A., Davydov D.S., Postupailo V.B., Merkulov V.A. Assessment of Residual Virulence of Francisella tularensis 15 NIIEG Vaccine Strain Based on Long-Term Observations. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2018; 1:98-102. (In Russian). DOI: 10.21055/0370-1069-2018-1-98-102
Достигнутые успехи в борьбе с туляремией связаны с широким применением в России вакцины туляремийной живой, разработанной в начале 40-х годов прошлого столетия, и по сей день являющейся эффективным профилактическим средством [2, 3, 8]. С 60-х годов и по настоящее время
вакцину туляремийную изготавливают на основе штамма Е tularensis № 15 НИИЭГ, полученного путем десятикратного пассирования культуры штамма Е. tularensis № 15 (восстановленного) через организм морской свинки [4].
Известно, что эффективность живых вакцин обе-
спечивается стабильностью и высокой иммуноген-ной активностью вакцинного штамма. Рекомендации ВОЗ относительно общих требований к качеству вакцин касаются, прежде всего, их безопасности и специфической активности [11]. Подобный подход реализован при разработке критериев оценки качества туляремийной вакцины Н.Г.Олсуфьевым. Многочисленными исследованиями показано, что основной оценкой иммунобиологических свойств вакцинного штамма является определение остаточной вирулентности (LD50), имеющей большое значение для своевременного выявления изменения им-муногенности производственного штамма [5, 6, 9]. В свое время еще Н.А.Гайский придавал особое значение остаточной вирулентности вакцинных штаммов, считая, что иммуногенным является тот штамм, который сохранил остаточную вирулентность для белых мышей, но остался безвредным для морских свинок и человека [1].
Вакциной, приготовленной из штамма Е ш!а-rensis 15, до 1960 г. было привито более 60 млн человек. однако данный штамм оказался нестабильным, в процессе хранения несколько раз снижал остаточную вирулентность и, как следствие, иммуноген-ность. Для исправления создавшегося положения проводились работы по его восстановлению, а также разрабатывались новые штаммы, соответствующие требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам [5, 10].
Л.В.Сиротюк проведены сравнительные испытания штаммов Е tularensis 15, Е tularensis 15 НИИЭГ (восстановленный), Е. tularensis 15/Кб, Е. Ш-\arensis 33, Е. tularensis 53, имеющих различную степень иммуногенной активности и в разные годы использующихся в производстве туляремийной вакцины. В ходе исследований обнаружены существенные различия изучаемых штаммов по степени остаточной вирулентности. Выявлено, что высокоимму-ногенные штаммы при подкожном введении белым мышам доз от 100 до 1 млн м.к., вызывали гибель от 56 до 91 % животных, что значительно превышало ранее установленную норму (от 30 до 50 %). При этом введение белым мышам слабоиммуногенных штаммов сопровождалось гибелью от 11 до 30 % животных. Вместе с тем все штаммы были безвредными (вызывали одинаковое допустимое падение веса) для морских свинок при подкожном введении больших доз (15 и 25 109 м.к.) в течение 15 сут (срок наблюдения).
Анализ полученных данных по изучению иммунобиологических свойств предложенных штаммов позволил определить наиболее иммуногенные и безопасные штаммы, а также возможность их использования в производстве живой туляремийной вакцины [7]. Основываясь на полученных результатах, установлена норма показателя «Остаточная вирулентность» в пределах от 100 до 2 млн м.к., при этом гибель белых мышей должна составлять от 70 до 80 %.
Позднее Н.Г.Олсуфьевым и соавт. (1971 г.) в расширенных комиссионных исследованиях у вакцинированных людей изучена иммунологическая активность и реактогенность туляремийных вакцин, полученных на основе предложенных исследователями новых вакцинных штаммов. Установлено, что в организме людей при вакцинации живыми туляремий-ными вакцинами развивались строго специфические прививочные реакции. Однако из всех изученных ту-ляремийных вакцин наиболее иммуногенным оказался препарат, изготовленный из штамма Е tularensis 15 нииэг. Полученные данные, свидетельствующие о его высокой иммуногенности и умеренной реакто-генности, явились основанием для решения вопроса об использовании штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ в производстве туляремийной вакцины. Учитывая не равноценность вакцинных штаммов по остаточной вирулентности, колеблющейся в достаточно широком диапазоне, принято решение оставить норму показателя в установленных пределах от 1102 до 2106 м.к. и включить в нормативную документацию [5].
Несмотря на многочисленные исследования по разработке туляремийных штаммов, кандидатов в вакцинные, на протяжении многих лет штамм Е. tularensis 15 НИИЭГ остается единственным, используемым в производстве туляремийной вакцины. Но за последние 30 лет накопились данные, позволяющие пересмотреть норму верхней границы (2 106 м.к.) показателя остаточной вирулентности для высокоиммунногенного штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ в сторону уменьшения. Данное решение также согласуется с рекомендациями ВОз об ограничении использования животных при контроле иммунобиологических препаратов.
Целью настоящего исследования явилось изучение и анализ многолетних данных ежегодного контроля остаточной вирулентности вакцинного штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ для уточнения нормы показателя и внесения изменений в нормативную документацию.
Материалы и методы
Для получения информации по остаточной вирулентности штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ проведен анализ паспортов контроля качества 76 лиофилизи-рованных в ампулах культур, из них 48 - изготов-ленны на базе Одесского предприятия производства бактерийных препаратов (Одесское ППБП) в 1980, 1987 и 1990 гг., и 28 - на производственной площадке ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России филиале г. Омск «Омское предприятие по производству бактерийных препаратов» (Омское ППБП) в 20032013 гг.
Проанализированы паспортные данные иммунобиологических свойств (остаточная вирулентность, специфическая безопасность, иммуногенность и прививаемость) вакцинного штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ за период с 1987 по 2013 год, хранившегося
при температуре минус (19±1) °С в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов (ГкПМ) Ш-1У групп патогенности ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России (ГИСК им. Л.А.Тарасевича).
Помимо этого в работе использовано восемь ампул с лиофилизированными коллекционными культурами штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ 1953, 1966, 1969, 1987, 1990, 2003, 2012 и 2013 гг., изготовленными на различных площадках производства. Иммунобиологические свойства вакцинного штамма изучали в соответствии с требованиями, изложенными в Промышленном регламенте на производство препарата «Вакцина туляремийная живая». В ходе анализа остаточную вирулентность штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ оценивали перед началом каждого производственного цикла (один раз в год) в специализированной лаборатории ГИск им. Л.А.Тарасевича (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России) и ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России (Омское ППБП) в 2003 и 2013 гг.
Руководствуясь требованиями, предъявляемыми к вакцинному штамму, контроль вновь приготовленной серии вакцинного штамма (срок годности 10 лет), в том числе остаточную вирулентность, определяли в специализированной лаборатории туляремии ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи Минздрава России.
Исследуемые культуры вакцинного штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ культивировали на плотных питательных средах Мак-Коя лабораторного приготовления или Ft-агаре при температуре (37±1) °С в течение 48 ч. Стандартные суспензии клеток штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ готовили в стерильном 0,9 % растворе натрия хлорида с использованием ОСО мутности бактериальных взвесей 10 МЕ, что эквивалентно 5 109 м.к./мл.
Остаточная вирулентность вакцинного штамма изучалась на белых мышах инбредных линий обоего пола (масса 18-20 г). Использование белых мышей для определения остаточной вирулентности связано с их высокой чувствительностью даже к штаммам с ослабленной вирулентностью. По 10 белых мышей иммунизировали подкожно штаммом Е. tularensis 15 НИИЭГ дозами от 5 до 5106 м.к. в объеме 0,5 мл. Для подсчета LD50 и расчета вводимых доз проводили высев культуры из разведения 10-6 м.к. по 0,1 мл на три чашки Петри с питательной средой Ft-агар.
Гибель мышей учитывали в течение до 21 сут после введения культуры. За животными наблюдали от 3 до 21 сут. Животных, павших до 10 сут, вскрывали, обращали внимание на патоморфологические изменения органов, асептично извлекали селезенку и производили ее посев методом отпечатка на питательные среды Мак-Коя или FT-агар. Посевы инкубировали при температуре (37±1) °С в течение 10 сут.
Для установления причин гибели животных культуру штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ, выросшую в посевах селезенки, идентифицировали в РИФ (ре-
акции прямой иммунофлуоресценции) с помощью иммуноглобулинов туляремийных диагностических флуоресцирующих.
Гибель мышей от испытуемого штамма устанавливали на основании патологоанатомических данных вскрытия (плотный инфильтрат на месте введения, гиперемия сосудов подкожной клетчатки и паховых лимфатических узлов, увеличение и уплотнение селезенки) и выделения из посевов туляремийного микроба.
Определение LD50, а также доверительных интервалов (для вероятности 95 %) проводили согласно методу Кербера в модификации И.П.Ашмарина и А.А.Воробьева (1962 г.), используя для расчетов формулу:
^ LD50 = ^ D-1 (I Li - 0,5),
где D - максимальная из испытанных доз; Li -отношение числа животных, павших при введении данной дозы к общему числу животных, которым эта доза была введена; I Li - сумма значений Li, вычисленных для всех испытанных доз.
Иммуногенность, прививаемость и специфическая безопасность оценивались на морских свинках массой (250±50) г и (400±50) г.
Результаты и обсуждение
Производство вакцины туляремийной живой на двух производственных площадках (Омское и Одесское ППБП) было разрешено в 1963 г. Приказом министра МЗ РСФСР. При этом получение вакцинного штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ, использовавшегося в Российской Федерации для производства вакцины туляремийной до 2003 г., было возложено на Одесское ППБП. По истечению срока годности в 2003 и 2013 гг. очередные серии вакцинного штамма изготовлены на базе Омского ППБП.
Необходимо отметить, что вакцинные штаммы туляремийного микроба, использующиеся в разные годы для производства вакцины туляремийной живой, в том числе и штамм Е. tularensis 15 НИИЭГ, хранятся в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов (ГКПМ) Ш-1У групп патогенности ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России (ГИСК им. Л.А.Тарасевича).
На первом этапе работы использовали культуры восьми штаммов Е. tularensis 15 НИИЭГ различных лет лиофилизации (1953, 1966, 1969, 1987, 1990, 2003, 2012 и 2013 гг.). При определении остаточной вирулентности, в первую очередь, учитывали гибель белых мышей в течение 5-10 сут после введения культуры, которая в среднем составляла от 50 до 70 %. Проведенными исследованиями установлено, что семь культур вакцинного штамма имели остаточную вирулентность в пределах от 1 до 2,5 102 м.к. (норма 1 102-2 106 м.к.). Существенные различия по степени остаточной вирулентности для белых мышей обнаружены у штамма 1966 г. лиофилизации, LD50 которого составила 7,3 105 м.к. Изучение пато-
Рис. 1. Результаты определения LD50 культур штамма F. tularensis 15 НИИЭГ разных лет лиофилизации по данным ГИСК им. Л.А.Тарасевича
морфологических изменений в организме животных показало, что наибольшие изменения в виде плотного инфильтрата на месте введения, гиперемии сосудов подкожной клетчатки и лимфатических узлов, а также увеличения и уплотнения печени и селезенки наблюдали при введении культуры штамма, содержащей высокие дозы, за исключением штамма 1966 г. лиофилизации. Патоморфологические изменения в органах животных при введении как низких, так и высоких доз данного штамма были менее выражены. Выявленное значительное увеличение показателя остаточной вирулентности у одного из исследуемых штаммов, в который раз подтверждает раннее установленный факт, что лиофилизация не предохраняет штамм Е tularensis 15 НИИЭГ от изменения его первоначальной остаточной вирулентности при длительном хранении [6].
Полученные данные (рис. 1) свидетельствуют о том, что ЬБ50 у изученных культур вакцинного штамма, кроме штамма 1966 г., не имела достоверных отличий и соответствовала установленным требованиям, предъявляемым к вакцинному штамму. Помимо этого оценка остаточной вирулентности вакцинного штамма, хранившегося в коллекции ГКПМ, проводилась по паспортным данным, полученным за период 1987-2013 гг. на двух базах (специализированная лаборатория и Омское ППБП).
С 1987 по 2002 год анализ данных ежегодного определения остаточной вирулентности проводился у культур вакцинного штамма, лиофилизированного
на базе Одесского ППБП, а с 2003 по 2013 год - на базе ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России (Омское ППБП). Как видно из представленных материалов (рис. 2), различия в показателе «Остаточная вирулентность» выявлены в 1995 и 2008 гг., при этом в Омском ППБП ЬБ50 составила 1103 м.к., что в пять раз выше данных, полученных в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России (2102 м.к).
В 1997 г. более высокая остаточная вирулентность вакцинного штамма проявилась при проведении контроля в специализированной лаборатории ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Вместе с тем полученные результаты укладывались в регламентирующие требования, согласно которым ЬБ50 штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ должна иметь значения от 1102 до 2106 м.к. Выявленное расхождение в показателе «Остаточная вирулентность» на двух производственных площадках в 1995, 1997 и 2008 гг. можно объяснить использованием не стандартного поголовья лабораторных животных или возможной погрешностью в концентрации микробной взвеси при разведении культуры вакцинного штамма.
Анализ данных изменения ЬБ50 вакцинного штамма одного и того же года лиофилизации показал, что результаты, полученные на базе специализированной лаборатории (от 1 до 2,5 102 м.к.), зачастую были сравнимы с данными, полученными за тот же год на базе Омского ППБП (1,58 до 5 102 м.к.).
Резюмируя выше изложенное, можно сделать заключение о том, что за указанный период времени (с 1987 по 2013 год) показатель «Остаточная вирулентность» имел достаточно стабильное значение, который находился в пределах от 1102 до 4102 м.к. и не превышал более 1103 м.к. При этом статистически различий (р^)-0,25 при а=0,95 %), независимо от места проведения исследований, не получено.
Проведенный ретроспективный анализ паспортных данных и протоколов ежегодного контроля специфической безопасности, иммуногенной активности и прививаемости вакцинного штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ за период с 1987 по 2013 год на производственных площадках предприятий производителя и специализированной лаборатории позволил установить, что штамм был безвреден при накожном нанесении на депилированный участок кожи морских
Рис. 2. Результаты определения LD50 культур штамма Е. tularensis 15 НИИЭГ разных лет лиофилизации по данным ГИСК им. Л.А.Тарасевича и филиала НПО «Микроген», Омское ППБП
свинок доз 5 106 и 5 107 м.к./мл, вызывал умеренно выраженную прививочную реакцию размером от 5 до 10 мм (норма от 5 до 15 мм); иммуногенность исследуемых культур разных лет лиофилизации и хранения была в пределах от 25 до 2102 м.к. (норма не более 1103 м.к. ).
Таким образом, полученные в ходе исследования результаты показали, что изучение и анализ паспортных данных контроля вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ, хранившегося в ГКПМ ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России (ГИСК им. Л.А.Тарасевича) в лиофилизированном состоянии в период с 1987 по 2013 год при температуре минус (19±1) °С, подтверждают стабильность его основных иммунобиологических свойств (остаточная вирулентность, специфическая безопасность, иммуногенность и прививаемость) в установленных пределах регламентированных требований. Представленные данные оценки LD50 штамма F. tularensis 15 НИИЭГ послужили основанием для внесения в нормативную документацию изменения нормы показателя «Остаточная вирулентность» в пределах от 1102 до 5 103 м.к. Изменение нормы показателя в сторону уменьшения позволит сократить количество животных, необходимых для проведения данного контроля.
конфликт интересов. Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Гайский Н.А., Хижинская О.П. Первые итоги применения живой туляреминой вакцины. Известия Иркутского Гос. противочум. ин-та Сибири и Дальнего Востока. 1946; 6:10-5.
2. Избанова УА., Куница Т.Н., Лухнова Л.Ю. Достижения в области специфической профилактики туляремии. Medicine (Almaty). 2016; 10(172):49-59.
3. Олсуфьев Н.Г. Итоги и перспективы изучения и применения в СССР живой туляремийной вакцины. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1967; 5:3-10.
4. Олсуфьев Н.Г., Дунаева Т.Н. Туляремия. М.; 1960. 268 с.
5. Олсуфьев Н.Г., Емельянова О.С., Угловой Г.П., Салтыков Р.А., Сиротюк Л.В., Сильченко В.С., Катцын М.С., Левачева З.А., Кочуркова С.А., Бобылкова Т.В., Баранчиков В.Д., Веденеева Е.В., Егорова Л.С., Иванов В.С., Баранова Н.К., Денисова В.Д., Шильмовер Э.С., Хомутова Н.В., Куцерыб Г.Г., Панышева М.Д., Пелехова К.И., Красицкая З.И., Назарова М.Г., Красникова Е.И., Штучная А.А., Владимирова А.И., Коржева В.С. Сравнительное испытание на людях вариантов вакцинного туляремийного штамма 15 Гайского. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1971; 5:55-7.
6. Саяпина Л.В., Соловьев Е.А., Горяев А.А., Бондарев В.П. Изучение иммунобиологических свойств вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ в условиях длительного хранения. Пробл. особо опасных инф. 2015; 2:87-91.
7. Сиротюк Л.В. Биологические свойства туляремийных
вакцинных штаммов НИИЭГ. Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1964; 10:116-20.
8. Barry E.M., Cole L.E., Santiago A.E. Vaccines against tularemia. Hum. Vaccin. 2009; 5(12):832-38.
9. Mann B.J., Ark N.M. Rationally designed tularemia vaccines. Expert Rev. Vaccines. 2009; 8(7):877-85. DOI: 10.1586/ erv.09.51.
10. Reed D., Smith L., Cole K., Santiago A., Mann B., Barry E. Live attenuated mutants of Francisella tularensis protect rabbits against aerosol challenge with a virulent type A strain. Infect. Immun. 2014; 82(5):2098-105. DOI: 10.1Ш/ШШ498-14.
11. WHO Technical Report Series 927. WHO Expert Committee On Biological Standardization (54 report). Geneva: Switzerland; 2005 p.
References
1. Gaisky N.A., Khizhinskaya O.P. [First results of live tularemia vaccine application]. Bulletin of Irkutsk State Anti-Plague Institute of Siberia and Far East. M.; 1946; 6:10-5.
2. Izbanova U.A., Kunitsa T.N., Lukhnova L.Yu. [Achievements in the sphere of specific prophylaxis of tularemia]. Medicine (Almaty). 2016, 10(172):49-59.
3. Olsuf'ev N.G. [Results and prospects of studies and application of live tularemia vaccine in USSR]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1967; 5:3-10.
4. Olsuf'ev N.G., Emel'yanova O.S., Uglovoy G.P., Saltykov R.A., Sirotyuk L.V., Sil'chenko V.S., Kattsyn M.S., Levacheva Z.A., Kochurkova S.A., Bobylkova T.V., Baranchikov V.D., Vedeneeva E.V., Egorova L.S., Ivanov V.S., Baranova N.K., Denisova V.D., Shil'mover E.S., Khomutova N.V., Kutseryb G.G., Panysheva M.D., Pelekhova K.I., Krasitskaya Z.I., Nazarova M.G., Krasnikova E.I., Shtuchnaya A.A., Vladimirova A.I., Korzheva V.S. [Comparative human trials of vaccine tularemia 15 Gaisky strain variants]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1971; 5:55-7.
5. Olsuf'ev N.G., Dunaeva T.N. [Tularemia]. M.; 1960. 268 p.
6. Sirotyuk L.V. [Biological properties of tularemia vaccine NIIEG strains]. Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 1964; 10:116-20.
7. Sayapina L.V., Solov'ev E.A., Goryaev A.A., Bondarev V.P. [Studies of immunobiological properties in Francisella tularensis vaccine strain 15 NIIEG under extended storage conditions]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2015; 2:87-91.
8. Barry E.M., Cole L.E., Santiago A.E. Vaccines against tularemia. Hum. Vaccin. 2009; 5(12):832-8.
9. Mann B.J., Ark Nicole M. Rationally designed tularemia vaccines. Expert Rev. Vaccines. 2009; 8(7):877-85. DOI: 10.1586/erv.09.51.
10. Reed D., Smith L., Cole K., Santiago A., Mann B., Barry E. Live attenuated mutants of Francisella tularensis protect rabbits against aerosol challenge with a virulent type A strain. Infect. Immun. 2014; 82(5):2098-105. DOI: 10.1128/IAI.01498-14.
11. WHO Technical Report Series 927. WHO Expert Committee On Biological Standardization (54 report). Geneva: Switzerland; 2005 p.
Authors:
Sayapina L.V., Goryaev A.A., Davydov D.S., Postupailo V.B., Merkulov V.A. Scientific Center on Expertise of Medical Application Products. 8, Petrovsky Bulvar, Moscow, 127051, Russian Federation. E-mail: Sayapina@ expmed.ru.
KhorevaI.I., BaidalovaN.P. Joint Stock Company Scientific Production Association on Medical Immunobiological Preparations "Microgen". 15, 1st Dubrovskaya St., Moscow, 115088, Russian Federation.
об авторах:
Саяпина Л.В., Горяев А.А., Давыдов Д.С., Поступайло В.Б., Меркулов В.А. Научный центр экспертизы средств медицинского применения. Российская Федерация, 127051, Москва, Петровский бульвар, 8, стр. 2. E-mail: [email protected].
Хорева И.И., Байдалова Н.П. Акционерное общество Научное производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген». Российская Федерация, 115088, Москва, ул. Дубровская 1-я, 15. E-mail: [email protected].
Поступила 18.12.17.
Принята к публ. 09.01.18.
