Оценка нефротоксических свойств фавипиравира на модели клеточной линии RPTEC

Евтеев Владимир Александрович; Семенова Ирина Семеновна; Бунятян Наталья Дмитриевна; Прокофьев Алексей Борисович

ДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ / PRECLINICAL AND CLINICAL STUDIES

УДК 615.03:615.06

https://doi.orq/10.30895/2312-7821-2023-11-4-423-429 Оригинальная статья | Original article

Щ Check for updates

(«D

BY 4.0

Оценка нефротоксических свойств фавипиравира на модели клеточной линии RPTEC

В.А. Евтеевш, И.С. Семенова1, Н.Д. Бунятян12, А.Б. Прокофьев1,2

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051, Российская Федерация

2 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение

высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), Трубецкая ул., д. 8, стр. 2, Москва, 119991, Российская Федерация

И Контактное лицо: Евтеев Владимир Александрович [email protected] РЕЗЮМЕ

Актуальность. Фавипиравир - противовирусный препарат, относящий к группе ингибиторов РНК-полиме-раз, применяется в терапии COVID-19. Одной из нежелательных реакций при применении фавипиравира является нарушение функции почек.

Цель. Изучение нефротоксичности фавипиравира путем оценки его влияния на целостность монослоя клеточной линии RPTEC.

Материалы и методы. В исследовании использовали клеточную линию проксимальных почечных канальцев человека RPTEC (renal proximal tubule epithelial cells), которую культивировали в планшетах с мембранными вставками c диаметром пор 0,4 мкм. Посевная концентрация клеток составляла 6*104 клеток/см2. В лунки планшета добавляли раствор фавипиравира в концентрациях 5, 10 и 15 мкг/мл. Оценку нефротоксического действия проводили по измерению трансэпителиального сопротивления (transepithelial electrical resistance, TEER) монослоя RPTEC. Критерием наличия нефротоксического действия считали снижение трансэпителиального сопротивления до значений 120-140 Ом*см2.

Результаты. Инкубирование клеток линии RPTEC с раствором фавипиравира дозозависимо вызывало понижение TEER монослоя RPTEC. Однако показатели TEER (250-280 Ом*см2) через 6 сут инкубации с фавипира-виром не достигли критических значений (120-140 Ом*см2).

Выводы. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии значимого влияния фавипиравира на показатель трансэпителиального сопротивления в монослое клеточной линии RPTEC.

Ключевые слова: фавипиравир; нефротоксичность; RPTEC; клеточные линии; трансэпителиальное сопротивление; доклинические исследования; in vitro

Для цитирования: Евтеев В.А., Семенова И.С., Бунятян Н.Д., Прокофьев А.Б. Оценка нефротоксических свойств фавипиравира на модели клеточной линии RPTEC. Безопасность и риск фармакотерапии. 2023;11(4):423-429. https://doi.org/10.30895/2312-7821-2023-11-4-423-429

Финансирование. Работа выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-0005223-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР 121022400082-4). Конфликт интересов. А.Б. Прокофьев - член редколлегии журнала «Безопасность и риск фармакотерапии» с 2021 г. Остальные авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов, требующего раскрытия в данной статье.

Evaluation of Nephrotoxic Properties of Favipiravir Using the RPTEC Line Model

Vladimir A. Evteev1®, Irina S. Semenova1, Natalia D. Bunyatyan12, Alexey B. Prokofiev1,2

1 Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products, 8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051, Russian Federation

2 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), 8/2 Trubetskaya St., Moscow 119991, Russian Federation

El Corresponding author: Vladimir A. Evteev evteev@ expmed.ru ABSTRACT

Scientific relevance. Favipiravir is an antiviral RNA polymerase inhibitor used to treat COVID-19. An adverse drug reaction associated with the use of favipiravir is renal disorder.

Aim. This study aimed to investigate favipiravir nephrotoxicity by assessing its effects on the integrity of a mono-layer formed by renal proximal tubular epithelial cells (RPTECs).

Materials and methods. This study focused on an RPTEC monolayer culture that was seeded at a density of 6*104 cells/cm2 on plates with membrane inserts with 0.4 |m pores. Favipiravir was added to the plate wells at a concentration of 5, 10, or 15 |g/mL. The nephrotoxicity evaluation relied on measuring the transepithelial electrical resistance (TEER) of the RPTEC monolayer. A TEER value of 120-140 Q*cm2 was considered an indication of nephrotoxicity.

Results. RPTEC incubation with favipiravir led to a dose-dependent decrease in the TEER values. However, the TEER values after 6 days of incubation ranged within 250-280 Q*cm2 and were above the critical threshold of 120-140 Qxcm2.

Conclusions. The results of this study indicate that favipiravir has no pronounced effect on the TEER of the RPTEC monolayer.

Keywords: favipiravir; nephrotoxicity; RPTEC; cell lines; transepithelial electrical resistance; non-clinical studies; in vitro

For citation: Evteev V.A., Semenova I.S., Bunyatyan N.D., Prokofiev A.B. Evaluation of nephrotoxic properties of favipiravir using the RPTEC line model. Safety and Risk of Pharmacotherapy. 2023;11(4):423-429. https://doi. org/10.30895/2312-7821-2023-11-4-423-429

Funding. The study reported in this publication was carried out as part of publicly funded research project No. 056-00052-23-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D registration No. 121022400082-4). Disclosure. Alexey B. Prokofiev has been a member of the Editorial Board of Safety and Risk of Pharmacotherapy since 2021. The other authors declare having no conflict of interest requiring disclosure in this article.

Введение

С внедрением более эффективных и мощных противовирусных препаратов, таких как ингибиторы протеаз, аналоги ациклических фосфонатов нуклеотидов, особенно в условиях полипрагмазии, частота поражения почек вследствие их нефро-токсического действия неуклонно возрастает [1]. Нефротоксическое действие противовирусных препаратов усиливается в связи с тем, что при комплексной терапии тяжелых вирусных инфекций почки получают дополнительную нагрузку при выведении целого ряда лекарственных средств, применяющихся в качестве вспомогательных при противовирусной терапии, в частности антибиотиков и противовоспалительных препаратов.

Эпителий проксимального отдела почечных канальцев принимает участие в транспорте широкого спектра ксенобиотиков из крови в просвет канальца, поэтому является основной мишенью для нефротоксического действия лекарственных средств [2]. Захват ксенобиотиков из кровотока в проксимальных канальцах осуществляется специфическими белками-транспортерами, располагающимися на базальной мембране. Большинство из них относится к SLC-семейству (solute carriers): транспортеры органических анионов (organic anion transporters, OAT) - ОАТ1, ОАТ3, транспортеры органических катионов (organic cation transporters, OCT) -ОСТ1. В выведении ксенобиотиков в просвет

канальца принимают участие, как правило, АВС-транспортеры (ATP-binding cassette transporters): MRD1 (multidrug resistance protein 1), BCRP (breast cancer resistance protein), MATE (multidrug and toxin extrusion protein) [3].

Фавипиравир является противовирусным препаратом, относящимся к группе ингибиторов РНК-полимераз. Учитывая широкий противовирусный спектр фавипиравира, его использовали в терапии новой коронавирусной инфекции COVID-19, вызываемой SARS-CoV-2 [4]. В исследовании на здоровых добровольцах было показано, что одной из нежелательных реакций при применении фавипиравира является повышение в крови уровня мочевой кислоты. Уровни мочевой кислоты по сравнению с исходным уровнем повышались в среднем на 4,4 мг/дл после 6 сут приема фавипиравира (3200 мг в 1 сут, затем 1200 мг в период со 2 до 5 сут) и возвращались к норме через 7 сут после отмены препарата [5]. Данное обстоятельство связывали с конкуренцией фавипиравира и мочевой кислоты на уровне почечных транспортеров. В другом исследовании на моделях клеточных линий, экспрессирующих почечные транспортеры OAT1, OAT3 и URAT1, фавипиравир в концентрации 126 мкг/мл ингибировал опосредованное этим транспортерами поглощение стандартных субстратов. Активность поглощения OAT1, OAT3 и URAT1 была снижена до 30,9, 50,0 и 65,7% от контроля соответственно1. Таким образом, снижение канальцевой секреции мочевой кислоты за счет ингиби-рования транспортеров OAT1 и OAT3, а также стимулирование обратного захвата мочевой кислоты в канальцах через URAT1 является основным механизмом повышения уровня мочевой кислоты в крови под действием фавипи-равира.

Проводить изучение возможного цитотокси-ческого действия фавипиравира целесообразно на модели клеточной линии RPTEC (renal proximal tubule epithelial cells), полученной из эпителия проксимальных почечных канальцев человека. RPTEC имеет сходную морфологию с проксимальным эпителием in vivo, что позволяет ожидать более высокую корреляцию результатов тестирования с использованием этой модели с данными клинических исследований [6, 7].

Цель работы - изучение нефротоксичности фавипиравира путем оценки его влияния на целостность монослоя клеточной линии RPTEC.

Задачи исследования:

1) культивирование клеточной линии RPTEC в планшетах с мембранными вставками до достижения значений трансэпителиального сопротивления в диапазоне 280-320 Ом*см2, не меняющихся в течение 5-7 сут;

2) изучение влияния инкубации с фавипира-виром на показатель трансэпителиального сопротивления монослоя RPTEC с фавипиравиром в концентрациях 5, 10, 15 мкг.

Материалы и методы

Клеточная культура и условия культивирования. Клеточная линия проксимальных почечных канальцев человека RPTEC, иммортализованная путем ретровирусной трансфекции гена hTERT (вектор pLXSN), была получена из банка культур клеток ATCC (код: CRL-4031).

Восстановление клеточной линии производили по следующей методике: культураль-ный флакон 25 см2, содержащий 10 мл среды DMEM/F12 (с добавлением следующих веществ: рекомбинантного человеческого фактора роста EGF - 10 нг/мл, трансферрина - 5 мкг/мл, инсулина - 5 мкг/мл, гидрокортизона - 25 нг/мл, селенита натрия - 8,65 нг/мл) помещали в инкубатор на 15-20 мин для достижения нормального pH (7,0-7,6), а также предотвращения защелачи-вания среды в процессе восстановления клеток. Пробирку с клетками размораживали на водяной бане в течение 2 мин при температуре 37 °С. После размораживания флакон обрабатывали 70% этанолом и далее все действия проводили в асептических условиях. Содержимое переносили в центрифужную пробирку, содержащую 9,0 мл культуральной среды, и центрифугировали при 250g в течение 5-7 мин. Супернатант удаляли, клетки ресуспендировали в свежей среде. Полученную суспензию переносили в культуральный флакон. Условия культивирования стандартные: 37 °С и 5% СО2. В эксперименте использовали клетки 12-го пассажа.

Клеточную линию RPTEC культивировали в 2^-планшетах c мембранными вставками с диаметром пор 0,4 мкм (Costar® 12 mm Transwell®, 0.4 |m Pore Polyester Membrane Inserts). Посевная концентрация клеток составляла 6*104 клеток/см2. В качестве культураль-ной среды использовали DMEM/F12 (Gibco, CHIA), 50 ед./мл гентамицина и 0,1 мг/мл пирувата натрия (Santa Cruz, США) при 37 °С, 5% СО2 и относительной влажности 80-85%. В среду были

1 Report on the deliberation results. Avigan Tablet 200 mg. Japan: Evaluation and Licensing Division, Pharmaceutical and Food

Safety Bureau Ministry of Health, Labour and Welfare; 2014. https://www.pmda.go.jp/files/000210319.pdf

добавлены: инсулин - 5 мкг/мл, трансфер-рин - 5 мкг/мл, селенит натрия - 5 мкг/мл (Insulin-Transferrin-Sodium Selenite Supplement; Siqma-Aldrich, кат. № I1884), hEGF (Siqma-Aldrich, кат. № E9644) - 10 нг/мл, гидрокортизон - 25 нг/мл (Siqma-Aldrich, кат. № H6909). Замена среды производилась через каждые 2-3 сут. Объем буферного раствора для апикального и базолатерального отделов составил 0,5 и 1,5 мл соответственно (чтобы избежать разности гидростатических давлений).

Измерение трансэпителиального сопротивления (TEER) монослоя. Оценку нефротоксического действия проводили по измерению TEER монослоя RPTEC, которое отражает состояние плотных межклеточных контактов в монослое и является одной из главных характеристик функциональной активности эпителиальных клеток [8]. E.M. Shaughnessey et al. [9] было показано, что изменение TEER применяется в качестве индикатора нефротоксичности на ранних стадиях повреждения проксимальных канальцев почки.

Измерение проводили с помощью вольтоме-тра Millicell® ERS-2 (Millicell, США) с электродом MERSSTX02. Расчет TEER монослоя RPTEC проводили по формуле:

R=RT-RB, (1)

где RT - сопротивление лунки с монослоем клеток (Ом*см2), RB - сопротивление пустой лунки (Ом*см2).

В предварительных экспериментах нами было выявлено, что при инкубации клеток линии RPTEC с растворами нефротоксиче-ских лекарственных препаратов (цисплатин, ванкомицин, циклоспорин А и др.) и понижении TEER монослоя RPTEC до значений 150-170 Ом*см2 в культуральной среде апикальной камеры наблюдается большое количество клеток, которые открепились от мембраны. При этом происходит уменьшение количества плотных межклеточных контактов, что является признаком необратимого нефро-токсического действия ЛС. Поэтому диапазон значений TEER 150-170 Ом*см2 мы считали проявлением токсического действия фавипи-равира. В данном эксперименте в качестве положительного контроля использовали раствор цисплатина в конечной концентрации 7,5 мкМ, а в качестве отрицательного контроля - культуральную среду.

2 https://www.vidal.ru/druqs/molecule/2975

Лекарственный препарат. Использовали субстанцию фавипиравира (АО «Фармославль», Россия). Стоковые растворы фавипиравира в концентрациях 500, 1000 и 1500 мкг/мл готовили путем растворения субстанции в деионизо-ванной воде и далее фильтровали через бактерицидный фильтр MF-MiUipore 0,22 мкм (Merck, Германия). Конечные концентрации фавипиравира в культуральной среде DMEM/F12 - 5, 10 и 15 мкг/мл. Концентрация 5 мкг/мл соответствует стандартной суточной терапевтической дозе 600 мг, концентрации 10 и 15 мкг/мл соответствуют повышенным дозам фавипиравира - 1200 и 1800 мг соответственно2. Стоковый раствор цисплатина в концентрации 750 мкМ готовили путем растворения субстанции в диметилсуль-фоксиде. Эксперимент по инкубации клеточной линии RPTEC c фавипиравиром начинали при достижении TEER значений плато: 280-320 Ом*см2. Стоковый раствор фавипиравира добавляли в культуральную среду базальной камеры планшета TransweU®. Смену среды с фавипиравиром проводили один раз в 48 ч. Длительность эксперимента составила 6 сут. Измерение TEER в каждой лунке проводили 1 раз в сутки в 4 повтор-ностях с интервалом 2-3 мин.

Статистическая обработка данных. Для каждой концентрации фавипиравира измерение TEER проводили в трех лунках. Различия в средних значениях опыта по отношению к контролю на каждой временной точке рассчитывали с помощью ANOVA. Уровнем статистической значимости считали р<0,05.

Результаты и обсуждение

В предварительных экспериментах по отработке методики измерения TEER для частичной валидации было проведено измерение TEER для контрольной группы в двух планшетах от разных производителей: 12-луноч-ный «Costar® 12 mm TransweU®, 0.4 |m Pore Polycarbonate Membrane Inserts» (кат. № 3401, Corning, США) и 24-луночный «SPLInsert® Hanging, 0.4 |m PC» (кат. № 35024, SPL, Корея). Для этого была восстановлена из заморозки отдельная аликвота RPTEC. В опыте использовали по 6 мембранных вставок из каждого планшета. По результатам измерения рассчитывали среднее значение TEER. В обоих случаях были получены схожие результаты: показатель TEER находился в диапазоне 290-310 Ом*см2. В итоге для эксперимента был выбраны мембранные

вставки из планшета «Costar® 12mm Transwell®, 0.4 |jm PC» из-за наличия в них специальных вырезов для электрода, позволяющих располагать электрод при измерении TEER строго вертикально, не касаясь при этом стенок пластика. У мембранных вставок из планшета «SPLInsert® Hanging 0.4 |jm PC» эти вырезы отсутствовали.

Было также отмечено, что при повторных измерениях TEER его значение, как правило, повышалось, по-видимому, из-за изменения pH культуральной среды и температуры, так как при измерении TEER планшет выносили из С02-инкубатора в ламинарный бокс. В связи с этим измерение TEER в каждой лунке повторяли 4 раза с интервалом 2-3 мин и рассчитывали среднее значение. Кроме того, поскольку величина показателя TEER в серии предварительных экспериментов изменялась при замене партии используемых реактивов, то для проведения исследования были использовали реактивы одной выбранной заранее партии.

Изменение трансэпителиального сопротивления в клеточной линии RPTEC при инкубации с 5, 10 и 15 мкг/мл фавипиравиром представлено на рисунке 1.

Цисплатин в концентрации 7,5 мкМ на вторые сутки инкубации вызывает кратковременное повышение TEER, за которым следует резкое падение. Подобные изменения были

отмечены ранее в работах других исследователей. Предполагается, что это вызвано перестройкой плотных межклеточных контактов [10]. При инкубации клеток линии RPTEC с фавипиравиром наблюдалось незначительное (-10-20%) понижение TEER, причем на динамику понижения TEER оказывает влияние концентрация фавипиравира. Однако следует отметить, что за 6 сут инкубации с фавипиравиром значения TEER не понизилось до критических показателей (120-150 Ом*см2). Также при смене культуральной среды из апикальной камеры в ней были отмечены лишь единичные плавающие клетки, из чего можно сделать вывод об отсутствии значимого влияния фавипиравира на плотные межклеточные контакты в монослое RPTEC за изученный период времени.

Известно, что фавипиравир является проле-карством и, попадая в клетку, метаболизируется до нескольких активных метаболитов, основным из которых является рибофуранозил-5'-три-фосфат фавипиравира. Показано, что 90% фавипиравира выводится через почки именно в виде этого метаболита [11]. По-видимому, активность киназ и рибофосфорилаз, участвующих в метаболизме фавипиравира, в используемой клеточной линии находится на низком уровне, в связи с этим концентрация активного метаболита фавипиравира в клетках RPTEC недостаточна

H

ё а

600

500

400

300

200

100

Время инкубации с фавипиравиром, сут Time of incubation with favipiravir, days

— [ФП] 5 мкг/мл [FP] 5 [jg/mL

[ФП] 10 мкг/мл [FP] 10 ¡jg/mL

[ФП] 15 мкг/мл [FP] 15 y g/mL

K(-)

-А— [ЦП] 7,5 мкМ [CP] 7.5 [jM

Рисунок подготовлен авторами по собственным данным / The figure is prepared by the authors using their own data

Рис. 1. Величина трансэпителиального сопротивления при воздействии фавипиравира в различных концентрациях на клетки линии RPTEC. ФП - фавипиравир, ЦП - цисплатин (положительный контроль), К(-) - отрицательный контроль

Fig. 1. TransepitheLiaL electrical resistance of renal proximal tubular epithelial cells (RPTECs) exposed to favipiravir at various concentrations. FP, favipiravir; CP, cisplatin (positive control); K(-), negative control

для значимого изменения TEER. Также можно предположить, что токсический эффект фавипиравира (и его метаболитов) осуществляется по механизмам, непосредственно не затрагивающим трансэпителиальное сопротивление монослоя RPTEC.

По нашему мнению, клеточная линия RPTEC не подходит для адекватной оценки нефро-токсических свойств фавипиравира в связи с низкой активностью киназы и рибофосфо-рилазы - основных ферментов, участвующих в метаболизме этого препарата. Поэтому в будущих экспериментах необходимо провести измерение активности этих ферментов в клетах линии RPTEC. В случае если это предположение подтвердится, на модели данной клеточной линии целесообразно проводить изучение токсичности только с активным метаболитом фа-випиравира - рибофуранозил-5'-трифосфатом

фавипиравира, особенно принимая во внимание тот факт, что препарат выводится через почки преимущественно в виде этого метаболита.

Заключение

Результаты исследования свидетельствуют об отсутствии выраженного влияния фавипира-вира на трансэпителиальное сопротивление монослоя клеточной линии RPTEC.

На данный момент механизм нефротокси-ческого действия фавипиравира полностью не изучен. Полученные результаты указывают на необходимость проведения дальнейших исследований на данной модели, в частности других тестов на токсичность (МТТ-тест, биомаркеры нефротоксичности), а также изучения нефротоксичности основного метаболита фави-пиравира для выявления возможного механизма нефротоксического действия фавипиравира.

Литература / References

1. Izzedine H, Launay-Vacher V, Deray G. Antiviral drug-induced nephrotoxicity. Am J Kidney Dis. 2005;45(5):804-17.

https://doi.Org/10.1053/j.ajkd.2005.02.010

2. Mody H, Ramakrishnan V, Chaar M, Lezeau J, Rump A, Taha K, et al. A review on drug-induced nephrotoxicity: pathophysiological mechanisms, drug classes, clinical management, and recent advances in mathematical modeling and simulation approaches. Clin Pharmacol Drug Dev. 2020;9(8):896-909. https://doi.org/10.1002/cpdd.879

3. George B, You D, Joy MS, Aleksunes LM. Xenobiotic transporters and kidney injury. Adv Drug Deliv Rev. 2017;116:73-91.

https://doi.org/10.1016/j.addr.2017.01.005

4. Chen C, Zhang Y, Huang J, Yin P, Cheng Z, Wu J, et al. Favipiravir versus arbidol for clinical recovery rate in moderate and severe adult COVID-19 patients: a prospective, multicenter, open-label, randomized controlled clinical trial. Front Pharmacol. 2021;12:683296.

https://doi.org/10.3389/fphar.2021.683296

5. Mishima E, Anzai N, Miyazaki M, Abe T. Uric acid elevation by favipiravir, an antiviral drug. Tohoku J Exp Med. 2020;251(2):87-90. https://doi.org/10.1620/tjem.251.87

6. Fisel P, Renner O, Nies AT, Schwab M, Schaeffeler E. Solute carrier transporter and drug-related nephro-toxicity: the impact of proximal tubule cell models for preclinical research. Expert Opin Drug Metab Toxicol. 2014;10(3):395-408. https://doi.org/10.1517/17425255.2014.876990

7. Мазеркина ИА, Евтеев ВА, Прокофьев АБ, Мус-лимова ОВ, Демченкова ЕЮ. Экспериментальные

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

модели клеточных линий для скрининга нефроток-сичности. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2021;11(3):160-6. Mazerkina IA, Evteev VA, Prokofiev AB, Muslimo-va OV, Demchenkova EYu. Experimental cell line models for nephrotoxicity screening. Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2021;11(3):160-6 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/1991-2919-2021-11-160-166

8. Chen S, Einspanier R, Schoen J. Transepithelial electrical resistance (TEER): a functional parameter to monitor the quality of oviduct epithelial cells cultured on filter supports. Histochem Cell Biol. 2015;144(5):509-15.

https://doi.org/10.1007/s00418-015-1351-1

9. Shaughnessey EM, Kann SH, Azizgolshani H, Black LD 3rd, Charest JL, Vedula EM. Evaluation of rapid transepithelial electrical resistance (TEER) measurement as a metric of kidney toxicity in a high-throughput microfluidic culture system. Sci Rep. 2022;12(1):13182.

https://doi.org/10.1038/s41598-022-16590-9

10. Secker PF, Schlichenmaier N, Beilmann M, Deschl U, Dietrich DR. Functional transepithelial transport measurements to detect nephrotoxicity in vitro using the RPTEC/TERT1 cell line. Arch Toxicol. 2019;93(7):1965-78.

https://doi.org/10.1007/s00204-019-02469-8

11. Hashemian SM, Farhadi T, Velayati AA. A review on favipiravir: the properties, function, and usefulness to treat COVID-19. Expert Rev Anti Infect Ther. 2021;19(8):1029-37.

https://doi.org/10.1080/14787210.2021.1866545

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства критериям ICMJE. Наибольший вклад распределен следующим образом: В.А. Евтеев - идея и дизайн эксперимента, измерение TEER, написание и редактирование текста рукописи; И.С. Семенова - культивирование клеточных линий RPTEC, инкубация клеток с фавипиравиром; Н.Д. Бунятян - участие в разработке концепции, руководство экспериментом; А.Б. Прокофьев - руководство экспериментом, утверждение окончательного варианта рукописи для публикации.

Authors' contributions. AH the authors confirm that they meet the ICMJE criteria for authorship. The most significant contributions were as follows. Vladimir A. Evteev devised the study idea, designed the experiment, measured the TEER, drafted and edited the manuscript. Irina S. Semenova carried out RPTEC cultivation and incubated the cells with favipiravir. Natalia D. Bunyatyan participated in concept development and supervised the experiment. Alexey B. Prokofiev supervised the experiment and approved the final version of the manuscript for publication.

ОБ АВТОРАХ / AUTHORS

Евтеев Владимир Александрович

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-6150-5796 [email protected]

Семенова Ирина Семеновна, канд. биол. наук

ORCID: https://orcid.org/0000-0001-9026-0508

[email protected]

Бунятян Наталья Дмитриевна, д-р фарм. наук,

профессор

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0936-5551 [email protected]

Прокофьев Алексей Борисович, д-р мед. наук, профессор

ORCID: https://orcid.org/0000-0001-7024-5546 [email protected]

Поступила 02.12.2022 После доработки 01.11.2023 Принята к публикации 17.11.2023