CC BY
23
УДК 576.8:616-07
Л.В.Саяпина1, Г.В.Адамова1, Т.И.Анисимова1, Г.Л.Карбышев2, А.Н.Малахаева1, И.В.Касина1,
Л.М.Веркина2, Г.В.Гальцева3, М.М.Швагер4
ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ДИАГНОСТИКУМА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНОГО СЕРОГРУППЫ 1 АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО ПО РЕЗУЛЬТАТАМ ГОСУДАРСТВЕННЫХ ИСПЫТАНИЙ
1Государственный институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича, Москва;2Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт;3Причерноморская противочумная станция, Новороссийск;
4Центр Государственного санитарно-эпидемиологического надзора в Ростовской области
В работе обобщены результаты государственных испытаний по изучению диагностической ценности диаг-ностикума легионеллезного серогруппы 1 антигенного полимерного для реакции агломерации производства Ростовского-на-Дону НИПЧИ с целью решения вопроса о целесообразности его регистрации.
Роль легионелл в инфекционной патологии во всем мире за последние годы значительно возросла [8, 9, 10]. Способность возбудителя колонизировать искусственные водные системы кондиционирования и охлаждения на промышленных предприятиях и местах индивидуального пользования может приводить к возникновению как групповых, так и спорадических случаев заболевания [5]. Эта проблема особо актуальна для южных регионов нашей страны, где ежегодно регистрируются спорадические случаи заболевания легионеллезом [1,2].
Одним из важнейших элементов эпидемиологического надзора за легионеллезной инфекцией является своевременная диагностика заболевания и проведение противоэпидемических мероприятий [3, 4]. По данным ВОЗ, в странах европейского сообщества серологические методы диагностики легионеллеза составляют в среднем 75 % среди всех использованных методов [6,7]. Из-за отсутствия простых в постановке и надежных препаратов диагностика легионеллеза в нашей стране значительно затруднена.
Специалистами Ростовского-на-Дону НИПЧИ разработан диагностикум легионеллезный серогруппы 1 антигенный полимерный сухой для реакции агломерации (РАО), предназначенный для выявления специфических антител к L. pneumophila серогруппы 1 у больных людей, а также по эпидемическим показаниям.
Целью настоящего исследования было изучение чувствительности, специфичности и воспроизводимости диагностикума для решения вопроса о внедрении его в практику здравоохранения.
Материалы и методы
Диагностическую ценность препарата испытывали в сравнении с диагностическим набором для определения легионеллезных антител методом непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Набор включал иммуноглобулины флюоресцирующие ан-тивидовые против глобулинов кролика и иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие ан-тивидовые против глобулинов человека, используемые для научно-исследовательских целей.
Чувствительность препарата изучали с 50 сы-
воротками крови людей, больных легионеллезом (диагноз подтвержден клинически или методом РНИФ); 25 сыворотками, полученными от кроликов, инфицированных 1-109м.к./мл вирулентным штаммом возбудителя легионеллеза. Определяли по проценту положительных реакций с сыворотками больных легионеллезом людей и животных к числу исследованных и по среднегеометрическим значениям титров антител в сыворотках больных легионеллезом людей и животных для вероятности 95 %.
Специфичность диагностикума изучали при исследовании 50 сывороток крови доноров, 56 сывороток крови людей, больных легочными инфекционными заболеваниями и острыми респираторными инфекциями, а также 18 кроличьих и лошадиных чумных, псевдотуберкулезных, лептоспирозных, холерных, туляремийных и ишерихиозных сывороток. Оценивали по проценту отрицательных и ложноположительных реакций в диагностических значениях титров антител в сыворотках доноров и больных другими инфекционными заболеваниями для вероятности 95 %.
Воспроизводимость полученных результатов с помощью испытуемого диагностикума определяли по проценту совпадений результатов при исследовании сывороток, полученных от больного легионеллезом человека и от донора в 10 повторностях.
Помимо этого учитывалась простота постановки реакции и скорость получения ответа в РАО и РНИФ.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных государственных испытаний было установлено (таблица), что из 50 сывороток крови больных легионеллезом людей со всеми сыворотками с помощью испытуемого препарата получен положительный результат с титрами антител от 1:40 до 1:160. При этом среднегеометрические значения титров специфических антител составили 1:96 с доверительными интервалами от 1:39 до 1:264. Методом РНИФ положительные результаты наблюдали с 20 сыворотками из 50 больных легионеллезом людей. Средний геометрический титр антител, обнаруженный методом РНИФ у людей, составил 1:9 (0 - 1:30). Различия по проценту обна-
Сводные данные испытания диагностической ценности диагностикума легионеллезного серогругты 1 антигенного полимерного сухого для РАО в сравнении с набором диагностическим для определения легионеллезных антител в РНИФ
Результаты Достоверность
Наименование тестов Кол-во испытании различий
РАО | РНИФ между методами
Процент (Р±р) обнаружения положительных проб гомологичных сывороток к числу исследованных людей Средний геометрический титр антител у людей больных легионеллезом (Х±28)
Процент (Р±р) обнаружения положительных проб кроличьих гомологичных сывороток к числу исследованных
Средний геометрический титр антител у кроликов, инфицированных легионеллезом (Х±28)
Процент (Р±р) специфичности с сыворотками доноров и больных другими заболеваниями (с диагностическими титрами)
Средний геометрический титр (Х±26) сывороток от доноров и больных другими заболеваниями
Воспроизводимость (Р±р)
Срок получения ответа в часах с момента постановки реакции до учета результатов
Количество парных кроличьих легионеллезных сывороток с повышением титра антител
Средний геометрический титр (Х±2б) антител у кроликов через 2 нед. после инфицирования легионеллезом
Средний геометрический титр (Х±26) антител у кроликов через 2 нед. после инфицирования легионеллезом Во сколько раз повысился через неделю титр антител парных сывороток
50 100 40±9,8 0,001
50 1:96 1:9 0,01
(1:39- 1:264) (0- 1:32)
25 100 84±7,3 0,05
25 1:416 1:29 0,01
(1:80- 1:2048) (0- 1:124)
106 99,1±0,8 100,0 0,50
106 1:14 1:6 0,50
(0-1:56) (0 - 1:99)
20 100% Не определяли
3,5 ч 3,5 ч 0,50
6 6 4
6 1:192 1:24
(1:16- 1:2048) (0 - 1:64)
6 1:832 1:26
(1:280- 1:4640) (1:16-1:104)
6 4,3 1,5
ружения серопозитивных сывороток больных легионеллезом людей и титрами антител в них, исследованных с помощью опытного препарата и методом РНИФ достоверны (р=0,001).
При исследовании в РАО с помощью испытуемого полимерного диагностикума 25 сывороток, полученных от инфицированных легионеллезом животных, в 100 % случаев были серопозитивными в разведениях от 1:80 до 1:1280. В РНИФ среди этих же сывороток серопозитивных обнаружено 84 % (р=0,05).
Анализ полученных данных позволил установить, что в сыворотках крови людей с диагнозом легионеллез с помощью полимерного легионеллезного диагностикума средняя величина титра антител в 10 раз превышала определяемую методом РНИФ, т.е. по чувствительности и проценту выявляемое™ положительных сывороток испытуемый препарат превосходил препарат сравнения.
В 25 сыворотках, инфицированных легионеллезом животных, с опытным препаратом среднегеометрический титр антител составил 1:416 (доверительный интервал - от 1:80 до 1:2048), методом РНИФ среднегеометрический титр антител равен 1:29 с доверительными интервалами от 0 до 1:124. Различия между препаратами по титрам антител достоверны (р=0,01).
При исследовании парных сывороток кроликов, инфицированных легионеллами через 2 и 3 нед. после их заражения, установлено, что с помощью испытуемого диагностикума в РАО во всех сыворотках и во все сроки исследования выявлены специфические антитела. Методом РНИФ у одного из 6 кроликов в первый срок исследования получен отрицательный результат, у остальных кроликов наблюдали положительные результаты.
Среднегеометрические значения титра антител
у кроликов через 2 нед. после их инфицирования, зарегистрированные с помощью испытуемого диагностикума, составили 1:192 (доверительные интервалы от 1:16 до 1:2048). Через 3 нед. после заражения у всех кроликов титры антител повысились -средние значения составляли 1:832 с доверительными интервалами от 1:280 до 1:4640. Метод РНИФ отличался меньшей чувствительностью. В первый срок исследования среднегеометрический титр антител был равен 1.24 с доверительными интервалами от 0 до 1:64, во второй - 1:36 (1:16 - 1:104).
Различия между испытуемым препаратом как по титрам антител через 2 нед. в 8 раз и через 3 нед. в 23 раза выше, так и по степени их нарастания достоверны (р=0,001).
При изучении специфичности со 106 сыворотками больных людей другими заболеваниями и доноров с помощью испытуемого препарата лишь в одной сыворотке была зарегистрирована положительная реакция в диагностическом титре 1:80. Отклонения от средней величины среднегеометрического титра антител 1:14 у таких людей, определяемого с помощью испытуемого диагностикума, находятся в пределах разведений сывороток от 0 до 1:56, т.е. ниже, чем у больных легионеллезом людей. В РНИФ неспецифических реакций с диагностическим титром также не зарегистрировано.
Отрицательные реакции составили 99,1 % для испытуемого и 100 % для контрольного препарата. Различия препаратов по проценту неспецифических реакций и по среднегеометрическим значениям титров антител в сыворотках людей были статистически незначимы (р>0,50).
При исследовании 18 гетерологичных сывороток с 11 сыворотками испытуемый препарат дал положительный результат в разведениях сывороток 1:20, 1:40 - 7 сывороток и 1:80-2 сыворотки. Ме-
тодом РНИФ выявили положительные реакции с 14 сыворотками в разведении 1:20 (11. сывороток) и 1:40 (3 сыворотки). Различия между процентами неспецифических реакций и титрами антител, выявленных испытуемым препаратом и методом РНИФ, в гетерологичных сыворотках животных статистически незначимы (р=0,50).
При изучении воспроизводимости реакции во всех определениях в РАО с сывороткой донора получены отрицательные, с сывороткой больного легионеллезом человека - положительные результаты.
По скорости постановки реакции и получения результатов анализа, по четкости реакции испытуемый диагностикум и метод РНИФ получили одинаковую оценку.
При полевых испытаниях на 2 базах - Причерноморской противочумной станции и Центра госсанэпиднадзора Ростовской области при исследовании 174 сывороток крови людей больных острыми пневмониями в 11 (63 %) сыворотках в разведениях 1:80 (7 сывороток) и 1:160 (4 сыворотки) с помощью испытуемого препарата выявили легионеллез-ные антитела.
Диагностикум легионеллезный серогруппы 1 антигенный сухой для РАО внедрен в практику здравоохранения.
На основании результатов, полученных при лабораторных и полевых испытаниях, в инструкции по применению дополнено, что необходимо считать людей больными легионеллезом, начиная с титра 1:80. При обнаружении серопозитивных сывороток с титром 1:40 считать подозреваемыми на заболевание легионеллезом и проводить исследование парных сывороток с интервалом в 1-2 нед. В случае нарастания титров антител - ставить диагноз легионеллез.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
1.Гальцева Г.В., Стержантова J1.B., Ус З.И. и др. // Сб. науч. тр. - Новороссийск, 1994. - Вып. 1. - С. 276. -
2.Карбышев Г.Л., Новиков Д.Н., Подоляков М.П. и др. // Сб. науч. тр. - Новороссийск, 1994. - Вып. 1. - С. 271. -
3. Тартаковский И.С., Бархатова О.И., Темежникова Н. Д. и др. // Диагн. возбудит, опасных инф. забол. - Саратов, 1998. - Т. 1. - С. 166. - 4. Темежникова Н. Д. Диагностика легионеллера в Краснодарском крае: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Саратов,1994. - 23 с. - 5. Byrne В., Swanson M.S. // Infect. Immun. - 1998. - Vol. 66, N 7. - P. 3029-3034. -6. Dominguez J.A., Matas L., Manterola J.M. et al. // J. Clin. Microbiol. - 1997. - Vol. 35, N 6. - P. 1627-1629. - 7. Dominguez J.A., Gali N., Pedroso P. et al. II J. Clin. Microbiol. - 1998. - Vol. 36, N9. - P. 2718-2722. - 8. Swancon M.S., Hammer B.K. // Annu. Rev. Microbiol. - 2000. -Vol. 54.-P. 567-613.-9. Joseph C.A.//EuroSurveill.-2001.-Vol. 6, N4. - P. 53-60. - 10. Sanches J.L., Polyak C.S., Kolavic S.A. etal.ll Mil. Med. - 2001. - Vol. 166.N9.-P. 753.
L.V.Sayapina, G.V.Adamova, T.I.Anisimova, G.L.Karbyshev, A.N.Malakhayeva, I.V.Kassina, L.M.Verkina, G.V.Galtseva, M.M.Shvager
Quality Assessment of Legionella Serogroup 1 Antigenic Polymer Diagnosticum According to the Results of State Trials
State Institute of Standardization and Control of Medical and Biological Preparations Named after LA.Tarasevich, Moscow; Rostov-on-Don Anti-Plague Research Institute;
Black Sea Plague-Control Station, Novorossiysk;
Centre of State Sanitary-Epidemiologic Surveillance for Rostov Region
Summarized are the results of state trials to assess diagnostic value of Legionella Serogroup 1 antigenic polymer diagnosticum for agglomeration tests produced by the Rostov-on-Don APRI with the aim of solving the problem of practicability of its registration.
Поступила 14.01.04
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
УДК 616.91/98+616-07(477)
Л.М.Мухарская, Н.И.Голубятников, Л.В.Третьякова, Л.С.Некрасова, В.Н.Свита, И.Н.Капитанова
ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИЙ ПО ДИАГНОСТИКЕ ОСОБО ОПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ В УКРАИНЕ
Министерство здравоохранения Украины; Центральная санэпидстанция М3 Украины;
Центральная санэпидстанция на водном транспорте Украины, Ильичевск
Представлен краткий анализ работы лабораторий отделов особо опасных инфекций учреждений санитарно-эпидемиологического профиля в Украине.
Эпидемиологическая обстановка по особо опас- государство, имеет интенсивные международные
ным инфекциям в Украине остается напряженной, связи, в том числе со странами, где постоянно ре-
Ситуация по указанным инфекциям иногда не про- гистрируются особо опасные карантинные инфек-
гнозируема не только из-за того, что на территории ции, и завоз их реален. Следует отметить, что почти
страны существуют активные стационарно неблаго- все возбудители этих заболеваний относятся к аген-
получные пункты и природные очаги ряда особо там, которые могут быть использованы как бакте-
опасных инфекционных заболеваний человека, а и риологическое (биологическое) оружие. Индикация
потому, что Украина, как центрально-европейское и идентификация возбудителей особо опасных ин-
