CC BY
32УДК 577.344.3:616.594.171.2:611.31
оценка
фотодинамического воздействия на рост популяций дрожжевых грибов CANDIDA, выделенных из слизистой оболочки полости рта
1 Царев В.Н. (директор института, зав. кафедрой)*, 1Ипполитов Е.В. (профессор кафедры), 2Плахтий Л.Я. (зав. кафедрой), 1Подпорин М.С. (м.н.с.), 1Ильясова С.Т. (врач-стоматолог), 1Ахмедов Г.Д. (доцент кафедры)
1 Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова МЗ РФ (кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии и кафедра хирургической стоматологии), Москва; 2 СевероОсетинский государственный медицинский университет МЗ РФ (кафедра микробиологии с вирусологией и иммунологией), Владикавказ, Россия
©Коллектив авторов, 2017
Низкую эффективность химиотерапии орального кандидоза и Candida-ассоциированного пародонтита связывают со свойствами микробной биопленки и развитием резистентности к фунгицидным препаратам. Однако альтернативные методы эрадикации биопленок, в частности, образуемых при участии дрожжевых грибов, находятся в начальной фазе исследования. Обсуждается возможность фотодинамической терапии для лечения кандидоза слизистой оболочки.
Цель исследования - проведение сравнительного анализа воздействия фотодинамической терапии (ФДТ) с различными фотосенсибилизаторами (ФС) на рост популяций грибов рода Candida в экспериментах in vitro.
Для определения чувствительности выделенных штаммов применяли оригинальную методику с использованием биореактора «Ре-верс-Спиннер RTS-1» (Латвия). Оптическую плотность полученной взвеси измеряли с помощью денситометра DEN-1B, которая для каждого эксперимента составила 2,01±0,3 McF. Результаты культивирования микроорганизмов в биореакторе после применения фотодинамического воздействия и без него интерпретировали по изменению оптической плотности при длине волны 850 нм. Статистическую обработку результатов проводили по Манну-Уитни с помощью программного пакета Biostat 9,0.
При исследовании кривых роста бактериальных и дрожжевых популяций выявили статистически значимое снижение количества жизнеспособных клеток использованных штаммов в разные фазы кривых роста. При анализе динамики роста отмечали различия в наступлении максимума размножения (стимуляции роста) и его ингибирования у представителей разных видов бактерий и грибов Candida. Установлены различия антимикробной активности различных ФС, а также эффективности применения ФДТ при разной экспозиции в экспериментах in vitro.
Фотодинамическая терапия, в зависимости от экспозиции, оказывает различное воздействие на процесс размножения микробных клеток штаммов Candida spp. Более чувствительны к фотодинамическому воздействию были виды C. albicans, C. tropicalis, а C. glabrata и C. krusei, напротив, устойчивы.
Ключевые слова: биоплёнка, дрожжевые грибы, оральный кан-дидоз, фотодинамическая терапия, фотосенсибилизаторы
Контактное лицо: Царёв Виктор Николаевич, e-mail: [email protected]
evaluation of photodynamic impact on the growth of populations of CANDIDA yeast fungi extracted from the oral mucosa
1Tsarev V.N. (director of the institute, head of the chair), 1Ippolitov E.V. (professor of the chair), 2Plachtiy L.Y. (head of the chair), 1Podporin M.S. (junior scientific researcher), 1Ilyasova S.T. (stomatologist), 1Ahmedov G.D. (associate professor of the chair)
1 A.I. Yevdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry (chair of microbiology, virology, immunology and chair of surgical dentistry), Moscow; 2 North Ossetian State Medical Academy (chair of microbiology with virology and immunology), Vladikavkaz, Russia
©Collective of authors, 2017
Low efficiency of chemotherapy of oral candidosis and Candida-associated periodontitis is associated with the properties of microbial biofilm and the development of resistance to fungicidal drugs. However, alternative methods of eradication of biofilms, in particular, formed with the participation of yeast fungi, are in the initial phase of the study The possibility of photodynamic therapy for the treatment of mucosal candidosis has been discussed.
The purpose of the study was a conducting of the comparative analysis of the effects of photodynamic therapy (PDT) with various photosensitizers (FS) on the growth of populations of fungi of the genus Candida in experiments in vitro.
An original technique was used to determine the sensitivity of the isolated strains using the Revers-Spinner RTS-1 bioreactor (Latvia). The optical density of the resulting suspension was measured with a DEN-IB densitometer, which for each experiment was 2,01±0,3 McF. Results of microorganisms' cultivation in the bioreactor after application of photodynamic action and without it, were interpreted according to the change in the optical density at a wavelength of 850 nm. The statistical processing of the results was carried out according to Mannu-Whitney using the Biostat 9.0 software package.
Investigation of the growth curves of bacterial and yeast populations revealed a statistically significant decrease in the number of viable cells of the strains used in different phases of the growth curves. When analyzing the dynamics of growth, differences were revealed between reproduction maximum occurrence (growth stimulation) and its inhibition in representatives of different bacteria species and Candida spp. The differences were established in the antimicrobial activity of various PSs, as well as the effectiveness of PDT application in different exposures in in vitro experiments.
Photodynamic therapy, depending on the exposure, has a different effect on the multiplication process of microbial cells strains - Candida fungi. C. albicans, C. tropicalis are more sensitive to photodynamic effect, while C. glabrata and C. krusei are to the opposite - stable.
Key words: biofilm, oral candidosis, photodynamic therapy, photosensitizers, yeast fungi
Дрожжевые грибы рода Candida, являясь оппортунистическими условно-патогенными микроорганизмами, встречаются на слизистой оболочке полости рта более чем у половины всего населения. Факторы, предрасполагающие к развитию кандидоза в полости рта, разнообразны: чаще всего он возникает у новорожденных, в старческом возрасте, при беременности, вследствие нарушений функций эндокринной, пищеварительной, иммунной и кроветворной систем, системы кровообращения, обмена веществ, при онкологических заболеваниях, ВИЧ-инфекции и др. [1, 2].
При снижении иммунной реактивности организма при воспалительных заболеваниях пародонта проис-
ходит нарушение колонизационной резистентности, усиление размножения патогенов и развитие воспалительно-деструктивных процессов в пародонте [3]. Микроэкологический дисбаланс слизистой оболочки десен и нарушение иммунных реакций, в свою очередь, приводят к длительному рецидивирующему течению пародонтита, торпидному и рефрактерному к проводимой традиционной терапии антибактериальными препаратами [2, 4, 5].
И хотя ведущая роль при развитии воспалительного процесса в пародонте связана с облигатной анаэробной и микроаэрофильной микробиотой, всё чаще, наряду с бактериальной, присутствует и грибковая [57]. В стоматологической практике часто встречаются ситуации, когда при длительном применении больших доз антибиотиков микобиота в полости рта начинает активироваться и проявлять патогенные свойства [1]. Интерес к изучению видового состава грибов Candida связан также и с тем, что разные виды дрожжевых грибов имеют неодинаковую чувствительность к применяемым антимикотическим и антисептическим препаратам, что, в дальнейшем, может привести к безуспешности проводимой терапии. В частности, C. glabrata и C. krusei отличаются высокой устойчивостью к флуко-назолу [8].
Лечение хронических воспалительных заболеваний пародонта, в том числе, ассоциированных с различным представительством Candida spp. в биотопе, является актуальной проблемой стоматологии. Лазерные технологии открывают новые перспективы в лечении данной патологии, особенно на фоне растущей резистентности микробиоты к антибактериальным и противогрибковым препаратам. За последнее десятилетие накоплен достаточно большой клинический материал по применению фотодинамической терапии при лечении различных заболеваний полости рта, включая патологию слизистой оболочки, дёсен, пародонта, а также в амбулаторной хирургии челюстно-лицевой области [4, 9; Soukos N.S., et al. Antimicrob. Agents. Chemother. 1999; 42]. В частности, установлено, что Candida spp. нередко присутствуют в составе смешанных микробных биоплёнок полости рта либо при развитии кандидоза сами формируют мощную биоплёнку [1, 7].
Подбор методов фотодинамического воздействия, фотосенсибилизатора, способного влиять на данный инфекционный фактор, возможно, может дать оптимальный результат при лечении кандидоза слизистой оболочки полости рта. Однако вопрос о влиянии фотохимической реакции, опосредованной различными фотосенсибилизаторами и при использовании разных типов аппаратов для проведения фотодинамической терапии, остаётся открытым, так как исследований в эксперименте in vitro c применением современных технологий мониторинга роста дрожжевых грибов, по нашим данным, не проводили. Последнее и явилось основанием для настоящего исследования.
Цель работы - оценка фунгистатической эффективности фотодинамического воздействия с применением разных типов аппаратов и фотосенсибилизаторов в отношении различных видов грибов рода Candida - клинических изолятов и референтного штамма, с использованием автоматизированной системы культивирования грибов на жидкой питательной среде в режиме реального времени.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для экспериментального исследования использовали клинические изоляты Candida spp., выделенные при воспалительных заболеваниях полости рта: C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. krusei. В качестве контроля был взят референтный штамм C. albicans ATTC 90028™, любезно предоставленный нам из коллекции НИИ медицинской микологии имени П.Н. Кашкина (СевероЗападный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова).
Для сохранности жизнеспособности микроорганизмов, выделенных у пациентов в ЛПУ, в процессе транспортировки материала в лабораторию, использовали транспортную среду М306 Stuart Transport Medium (Himedia, Индия). Выделение, культивирование и идентификацию штаммов выполняли в соответствии со стандартным протоколом [1, 6].
Первичный посев для выявления Candida spp. осуществляли на хромогенную питательную среду М1297А (Himedia Labs, Индия). Посевы помещали в термостат при 37 оС на 48 часов. После получения и идентификации чистых культур, которую проводили с помощью интерпретирующих таблиц к хромогенной питательной среде, готовили взвеси двухсуточных культур стандартной концентрации по оптической плотности, которые использовали для экспериментального исследования с применением биореактора «Реверс-Спиннер RTS-1» (BioSan, Латвия). Данная система предназначена для культивирования микроорганизмов и сравнительной оценки их роста при разных воздействиях в режиме реального времени. Для культивирования микроорганизмов в биореакторе применяли жидкую питательную среду производства HiMedia Labs Pvt. Limited (Индия): Fluid Sabouraud Medium (М013) - для культивирования грибов рода Candida (тип пробирок объемом 50 мл с мембранным фильтром TubeSpin®, SW).
Результаты интерпретировали по изменению оптической плотности (OD) при длине волны Х=850 нм (Рис. 1).
Рис. 1. Система для одновременного культивирования микроорганизмов «Реверс-Спиннер RTS-1» (BioSan, Латвия).
В исследовании использовали два разных типа диодных аппаратов для генерации излучения 630-635 нм - с импульсным (FotoSan 360) и непрерывным (Ьагигй) режимом работы. Описание и технические характеристики приборов фотодинамического воздействия представлены в таблице 1.
Таблица 1
Технические характеристики диодных устройств для фотодинамической обработки, использованных в экспериментальном исследовании
Ро1о5ап360 1а7игИ
Тип устройства диодный лазер низкой мощности диодный лазер низкой мощности
Длина волны 630 нм 635 нм
Выходная мощность 50-100 мВт 50-100 мВт
Время излучения 10-30 с 10-150 с
Режим работы импульсный непрерывный
Фотосенсибилизатор (ФС) толуидиновый синий хлоридтолония
Для определения чувствительности выделенных штаммов к фотодинамическому воздействию применяли собственную модификацию метода серийных разведений, разработанную на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии МГМСУ им. А.И. Евдокимова МЗ РФ [8]. Для каждого эксперимента, отдельно в стерильных пробирках объемом 15 мл, готовили бактериальную взвесь в общем количестве 5 мл. Оптическую плотность полученной взвеси измеряли с помощью денситометра «DEN-1B» (BioSan, Латвия), которая, в конечном итоге, для каждого эксперимента составила 2,82±0,3 McF.
В каждой серии эксперимента (для каждого вида грибов) проводили культивирование в трех разных пробирках: №1 - контроль кривой роста; №2 - ФДО FotoSan (фотосенсибилизатор Fotosan; состав - толуи-диновый синий); №3 - ФДО Lazurit (фотосенсибилизатор Lazurit-L; состав - хлорид толония медицинского качества).
Для осуществления культивирования в каждую пробирку объемом 50 мл добавляли 19,5 мл питательной среды и вносили заранее подготовленную взвесь в количестве 0,5 мл, в пробирки №2 и №3 - соответствующий фотосенсибилизатор по 0,5 мл. Через 60 секунд обрабатывали инфракрасным пучком света через наконечник, который вводили в пробирку. Экспозиция составляла 30 секунд (в соответствии с инструкцией). Продолжительность эксперимента культивирования в биореакторе составила 96 часов.
Статистическую обработку данных проводили по Манну-Уитни с использованием компьютерной программы Biostat 9.0. За достоверную разницу принимали значения p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Динамику роста Candida spp. изучали в трех параллелях, что отражалось на графиках кривых роста популяций каждого вида: после фотодинамической терапевтической обработки (FDT) с использованием аппарата FotoSan 360 и фотосенсибилизатора на основе толуидинового синего, а также аппарата Lazurit и фотосенсибилизатора на основе хлорида толония. В качестве контроля оценивали рост соответствующего вида грибов, который характеризовался наступлением экспоненциальной фазы роста через 4-12 часов и достигал максимума с переходом в стационарную фазу роста через 16-20 часов от начала культивирования в зависимости от вида микроорганизма. Во всех случаях показатель начала стационарной фазы роста был достоверно выше (от 5,0 до 6,3 OD), чем при фотодинамическом воздействии. При оценке кривых роста бактериальных популяций исследуемых видов микроорганизмов получены следующие данные.
Рис. 2. Кривая роста штамма - клинического изолята C.
albicans при использовании разных вариантов FDT.
У клинического изолята C. albicans (Рис. 2) лаг-фаза была до 12 часа культивирования и оказалась самой продолжительной по сравнению с референтным штаммом C. albicans (Рис. 3) и образцами других видов (Рис. 4-6). На кривых роста данного штамма логарифмическая фаза роста начиналась одновременно для всех проб с разными аппаратами для фотодинамического воздействия, а ее окончание различалось только в показаниях оптической плотности. Для контрольного образца и образца с аппаратом Lazurit окончание логарифмической фазы и начало стационарной - 20 час с показателем 5,25 McF и 5,19 McF соответственно. Образец с аппаратом FotoSan 360 показал окончание логарифмической фазы на 28 час, с последующим сохранением прироста бактериальных популяций до начала стационарной фазы до 5,01 McF. Максимальная концентрация бластоспор была достигнута на 72 час и соответствовала 6,46 McF, что на 1,46 единиц McF меньше по сравнению со средним показателем оптической плотности в первых двух образцах.
Следовательно, торможение роста популяции дрожжевых грибов при FDT аппаратом FotoSan 360 было максимальным, а аппаратом Lazurit - статистически достоверно меньше.
Рис. 3. Кривая роста референтного штамма C. albicans ATTC 90028™ при использовании разных вариантов FDT.
У референтного штамма C. albicans ATTC 90028™ (Рис. 3) продолжительность лаг-фазы отмечали до 16 часа культивирования, и аналогично предыдущему образцу она была достаточно длительной. На кривых роста штамма логарифмическая фаза роста в разных пробах (с FDT и без таковой) началась не одновременно, а с задержкой при использовании аппарата Lazurit - на 4 часа (подъём зафиксирован на 20 час), а аппарата Fotosan - на 8 часов (подъём зафиксирован на 24 час). Прирост популяции при использовании аппарата Fotosan также был значительно менее выраженный, по
сравнению с аппаратом Lazurit и контрольным образцом. Для контрольного образца и образца с FDT аппаратом Lazurit окончание логарифмической фазы и начало стационарной - 40-44 час с показателем OD 6,857,18 McF и 6,0-6,1 McF соответственно. Образец с FDT аппаратом FotoSan 360 показал окончание логарифмической фазы на 60 час и последующую стабилизацию стационарной фазы на показателях OD 6,01 единиц McF, то есть торможение роста популяции дрожжевых грибов было максимальным.
Следовательно, результатами, полученными с референтным штаммом C. albicans ATTC 90028™, подтверждены данные, выявленные с клиническим изоля-том данного вида, о более выраженном фунгистатиче-ском воздействии аппарата FotoSan 360, по сравнению с аппаратом Lazurit.
Рис. 4. Кривая роста штамма - клинического изолята C.
tropicalis при использовании разных вариантов FDT.
Кривая роста штамма - клинического изолята C. tropicalis (Рис. 4) характеризовалась средней продолжительностью лаг-фазы с переходом в фазу логарифмического роста (экспоненциального) на 8-ой час культивирования с достаточно резким подъёмом кривой роста популяции. Окончание экспоненциальной фазы происходило одновременно во всех пробах на 16 час культивирования, но переход в стационарную фазу отличался скоростью прироста бактериальных популяций в пробирках №2 и №3, где заканчивался на 20 час, а в контрольной пробирке - скорость прироста практически отсутствовала, и начало стационарной фазы совпадало с окончанием экспоненциальной фазы. Дальнейший бактериальный прирост в стационарной фазе характеризовался достижением максимальной концентрации. В контрольном образце кривая роста достигала максимума на 84 час (7,11 McF), что было на 0,58 единиц McF больше, чем после обработки аппаратом Lazurit, и на 1,41 единицу McF больше, чем после обработки аппаратом FotoSan 360.
Следовательно, торможение роста популяции дрожжевых грибов при FDT аппаратом FotoSan 360 было слабо выраженным, хотя в отдельных участках кривой роста (в фазе стационарного роста) достоверно отличалось от контрольного образца без фотодинамического воздействия, а с аппаратом Lazurit - практически не отличалась от контрольного образца.
Рис. 5. Кривая роста штамма - клинического изолята С.
д1аЬгМа при использовании разных вариантов РОТ.
Кривая роста штамма - клинического изолята С. glabrata (Рис. 5) отличалась более длинной лаг-фазой, чем в предыдущем образце, и достаточно резким переходом в фазу логарифмического роста после 12 часа культивирования. Окончание экспоненциальной фазы в контрольной пробирке отмечали на 20 час с четким переходом в стационарную фазу. Максимальная концентрация была достигнута на 76 час культивирования - 8,16 МсЕ Для фазы логарифмического роста в исследуемых пробирках №2 и №3 был характерен постепенный переход в стационарную фазу с равномерным распределением скорости прироста бактериальных клеток относительно времени культивирования. При обработке аппаратом Lazurit экспоненциальная фаза заканчивалась на 20 час с показанием оптической плотности 5,00 МсД максимальная концентрация в стационарной фазе - 84-96 час (7,35 McF), а при обработке аппаратом FotoSan 360 - на 28 час с показанием оптической плотности 4,5 МсД максимальная концентрация в стационарной фазе - 76-92 час (5,77 McF).
Следовательно, торможение роста популяции дрожжевых грибов при FDT аппаратом FotoSan 360 было максимальным, а аппаратом Lazurit - статистически достоверно меньше.
Рис. 6. Кривая роста штамма - клинического изолята С. krusei при использовании разных вариантов РОТ.
Очень короткую лаг-фазу отмечали на кривых роста штамма - клинического изолята С. кгш^ (Рис. 6). Логарифмическая фаза роста начиналась на 4-й час культивирования, а ее переход в стационарную фазу был одинаковым для всех проб - 16 час культивирования. Скорость прироста бактериальных популяций (в фазе замедления логарифмического роста) наблюдали во всех пробирках в промежутке с 12 по 16 час. В контрольном образце максимальная концентрация была достигнута на 76 час культивирования с показателем 7,19 МсЕ В исследуемых пробирках кривые ста-
ционарной фазы в разных образцах FDT отличались перекрестным расположением по отношению друг к другу: для аппарата FotoSan пик был достигнут на 80 час культивирования - 6,55 McF, а для аппарата Lazurit - на 84 час с показателем 6,78 McF. Средняя разница пиковых показателей между контролем и исследуемыми образцами - 0,23 McF.
Для клинического изолята C. krusei не выявили существенных различий торможения роста популяции, по данным сравнения кривых роста между разными устройствами для FDT, а также и по сравнению с контролем.
Таблица 2
Сравнительная характеристика количественных параметров
(по оптической плотности) роста популяций Candida spp. после фотодинамической обработки аппаратами FotoSan 360 и Lazurit с учётом узловых точек кривой роста
ФАЗА Лагфаза Пик подъема экспоненц. фазы Пик подъема стационарной фазы Среднее по стационарной фазе
Штамм / Проба
C. albicans ATTC 90028тм K 0,33±0,03 7,68±0,14 7,99±0,11 7,86±0,12
FotoSan 0,36±0,04 6,00±0,11* 6,40±0,13* 6,04±0,10*
Lazurit 0,45±0,05 6,90±0,15* 7,70±0,12* 7,39±0,14*
C. albicans K 0,15±0,04 5,25±0,11 8,16±0,15 7,14±0,24
FotoSan 0,09±0,03 5,01±0,10* 6,46±0,16* 5,91±0,23*
Lazurit 0,10±0,03 5,09±0,11* 7,68±0,24* 5,97±0,24*
C. krusei K 0,10±0,03 5,33±0,14 7,19±0,26 6,34±0,26
FotoSan 0,06±0,02 5,10±0,15 6,55±0,25 5,96±0,25
Lazurit 0,09±0,03 5,04±0,16 6,78±0,26 5,90±0,25
C. glabrata K 0,15±0,04 6,30±0,14 8,16±0,26 7,35±0,25
FotoSan 0,09±0,03 4,50±0,15 5,77±0,16* 5,25±0,25*
Lazurit 0,10±0,03 5,00±0,15 7,35±0,25* 6,53±0,26*
C. tropicalis K 0,12±0,03 5,00±0,15 7,11±0,25 6,28±0,26
FotoSan 0,15±0,04 4,48±0,14 5,78±0,26 5,47±0,26*
Lazurit 0,15±0,03 4,94±0,15 6,56±0,25 6,02±0,25
Примечание: * достоверное снижение показателя при исследуемом фотодинамическом воздействии по сравнению с контролем (p<0,05).
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Широкое использование химиотерапевтических препаратов приводит к развитию полирезистентных штаммов, на которые традиционные средства перестают действовать, поэтому в настоящее время все чаще, наряду с медикаментозными методами лечения заболеваний слизистой оболочки рта и пародонта, применяют физические и физиотерапевтические методы, оказывающие местное воздействие на воспаление, к которым можно отнести также и фотодинамическую терапию [4, 9].
Кроме того, известно, что недостаточная концентрация препаратов в десневой жидкости и микробной биоплёнке, формируемой на слизистой оболочке, зачастую оказывается ниже минимальной ингибирую-щей концентрации для микроорганизма-мишени [3, Soukos N.S., et al. Antimicrob. Agents. Chemother. 1999; 42]. Ситуация осложняется тем, что матрица микробной биопленки формирует экологическое убежище, защищающее бактериальные клетки от действия антибиотиков, что приводит к необходимости увеличения концентрации препарата [5, 10]. Так, по данным исследований Пинегиной О.Н. с соавт. (2014), биоплёнки C. krusei были резистентны к вориконазолу и флуконазо-
лу, причём к последнему МИК в биоплёнке возрастала с 64 до 1024 мкг/мл [8].
При воспалительных заболеваниях пародонта, практически во всех случаях, имеется колонизация пародонтальных карманов с участием нескольких анаэробных бактерий-пародонтопатогенов в ассоциации с дрожжевыми грибами. Состав колонизирующих микроорганизмов, а точнее их комбинации (Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum, Streptococcus sanguis и др.), могут варьировать как для разных зон поражения, так и для разных больных и конструкционных материалов, из которых изготовлены зубные протезы [7]. Аналогичные данные ранее получены для смешанных биоплёнок сосудистых и уретральных катетеров, где вместе с C. albicans определяли Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa [11]. В связи с этим проведение антисептических воздействий должно основываться на результатах микробиологических исследований, включая видовую идентификацию грибов [3, 12].
Вышеизложенные факты побуждают специалистов к развитию и разработке новых способов воздействия на микроорганизмы ротовой полости, и одним из них является фотодинамическая терапия. Однако, согласно нашим исследованиям, чувствительность разных штаммов грибов существенно различается, что может зависеть как от используемого фотосенсибилизатора (толуидиновый синий, толония хлорид, т.п.), так и от характеристик фотодиодного источника излучения.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, оптимизм клиницистов в отношении применения фотодинамической терапии при лечении воспалительных процессов полости рта, ассоциированных с Candida spp., далеко не всегда оправдан [4, 9]. Очевидно, что эффективность эрадикации, прежде всего, определяется таксономической характеристикой, то есть зависит от видовой принадлежности грибов.
Так, в нашем исследовании клинические изоляты C. albicans и C. glabrata были чувствительны к фотодинамическому воздействию, и отмечали существенное снижение амплитуды кривой роста популяции в результате этого воздействия. Напротив, клинический изолят C. krusei оказался устойчивым к фотодинамическому воздействию (достоверных различий по сравнению с контролем не получено для обоих фотодиодных аппаратов, использованных в исследовании). Аналогичную картину наблюдали в эксперименте со штаммом C. tropicalis, причём его чувствительность при фотодинамической обработке аппаратом Fotosan 360 была минимальной, а аппаратом Lazurit - отсутствовала.
Полученные результаты о влиянии фотохимической реакции на штаммы разных видов Candida spp. свидетельствуют, в лучшем случае, о фунгистатиче-ском воздействии фотохимической реакции на возбудителя, которое было продемонстрировано при использовании аппарата Fotosan 360 со штаммами C. albicans (клинический изолят и референтный) и C. glabrata, в то время как другой аппарат - Lazurit оказался практически неэффективным.
ЛИТЕРАТУРА
1. Мороз А.Ф., Снегирёва А.Е. Дрожжевые грибы рода Candida - возбудители кандидозов. В кн.: Руководство по медицинской микробиологии. Кн. III. Том 1. Оппортунистические инфекции: возбудители и этиологическая диагностика. Под ред. А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой. М.: Бином, 2013: 504-557. [Moroz A.F., Snegiryova A.E. Drozhzhevyie gribyi roda Candida - vozbuditeli kandidozov. V kn.: Ru-kovodstvo po meditsinskoy mikrobiologii. Kn. III. Tom 1. Opportunisticheskie infektsii: vozbuditeli i etiologicheskaya diagnostika. Pod red. A.S. Labinskoy, N.N. Kostyukovoy. M.: Binom, 2013: 504-557. (In Russ) ]
2. Cannon R.D., Firth N.A. Mushrooms and fungal infections of the mouth. In: R.J. Lamont Microbiology and Immunology for Dentists. 2010: 378-396.
3. Царев В.Н., Суркова С.А., Давыдова М.М. Особенности диагностики инвазивной кандидозной инфекции слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта. Медицинский алфавит. 2012; Т.4. №19:10-14. [Tsarev V.N., Surkova S.A., Davyidova M.M. Osobennosti diagnostiki invazivnoy kandidoznoy infektsii slizistoy obolochki polosti rta i tkaney parodonta. Meditsinskiy alfavit. 2012; T.4. №19:10-14. (In Russ) ]
4. Разина И.Н., Чепуркова О.А., Чеснокова М.Г., Недосеко В.Б. Лазерные технологии при лечении хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с Candida spp. Опыт клинического применения. Пародонтология. 2013; №1(18): 24-30.[ Razina I.N., Chepurkova O.A., Chesnokova M.G., Nedoseko V.B. Lazernyie tehnologii pri lechenii hronicheskogo generalizovannogo parodontita, assotsiirovannogo s Candida spp. Opyit klinicheskogo primeneniya. Parodontologiya. 2013; №1(18): 24-30. (In Russ)]
5. Ушаков Р.В., Ушакова Т.В., Пакшин Н.И. и др. Перспективы разработки адгезивной двуслойной пленки «Диплен-ден-та» с комбинированным антибактериальным и фунгицидным эффектом. Медицинский алфавит. 2015; Т.1. №1: 1518. [Ushakov R.V., Ushakova T.V., Pakshin N.I. i dr. Perspektivyi razrabotki adgezivnoy dvusloynoy plenki «Diplen-denta» s kombinirovannyim antibakterialnyim i fungitsidnyim effektom. Meditsinskiy alfavit; 2015. T.1. №1: 15-18. (In Russ)]
6. Давыдова М.М., Плахтий Л.Я., Царев В.Н. Методы микробиологического исследования, применяемые в стоматологии. В кн. Микробиология, вирусология иммунология полости рта. Под ред. проф. В.Н. Царева. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013: 223-268. [Davyidova M.M., Plahtiy L.Ya., Tsarev V.N. Metodyi mikrobiologicheskogo issledovaniya, primenyaemyie v stomatologii. V kn. Mikrobiologiya, virusologiya immunologiya polosti rta. Pod red. prof. V.N. Tsareva. M.: GEOTAR-Media, 2013: 223-268. (In Russ)]
7. Ипполитов Е.В., Диденко Л.В., Царёв В.Н. Особенности морфологии биоплёнки пародонта при воспалительных заболеваниях дёсен (хронический катаральный гингивит, хронический пародонтит, кандида-ассоциированный пародон-тит) по данным электронной микроскопии. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; Т.60. №12: 59-64. [Ippolitov E.V., Didenko L.V., Tsaryov V.N. Osobennosti morfologii bioplyonki parodonta pri vospalitelnyih zabolevaniyah dyosen (hronicheskiy kataralnyiy gingivit, hronicheskiy parodontit, kandida-assotsiirovannyiy parodontit) po dannyim elektronnoy mikroskopii. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2015; T.60. №12: 59-64. (In Russ)]
8. Пинегина О.Н., Рауш Е.Р., Васильева Н.В. Определение чувствительности к антимикотикам Candida spp. в составе биоплёнок. Проблемы медицинской микологии. 2014; Т.16. №4: 46-48. [Pinegina O.N., Raush E.R., Vasileva N.V Opredelenie chuvstvitelnosti k antimikotikam Candida spp. v sostave bioplyonok. Problemyi meditsinskoy mikologii. 2014; T.16. №4: 46-48. (In Russ)]
9. Янушевич О.О., Айвазова Р.А., Соколова Е.Ю. Фотоактивируемая дезинфекция как альтернатива традиционным методам антисептического воздействия в эндодонтии, пародонтологии и гастроэнтерологии. Эндодонтия Today. 2014; №3: 3-8. [Yanushevich O.O., Ayvazova R.A., Sokolova E.Yu. Fotoaktiviruemaya dezinfektsiya kak alternativa traditsionnyim metodam antisepticheskogo vozdeystviya v endodontii, parodontologii i gastroentero-logii. Endodontiya Today. 2014; №3: 3-8. (In Russ)]
10. Tobudic S., Kratzer C., Lessnigg A., Presterl E. Antifungal susceptibility of Candida albicans in biofilms. Mycoses. 2011; 55:199204.
11. Степанова А.А., Васильева Н.В., Пинегина О.Н. Сканирующая электронная микроскопия биоплёнки уретральных и венозных катетеров. Проблемы медицинской микологии. 2014; Т.16. №4: 31-37. [Stepanova A.A., Vasileva N.V., Pinegina O.N. Skaniruyuschaya elektronnaya mikroskopiya bioplyonki uretralnyih i venoznyih kateterov. Problemyi meditsinskoy mikologii. 2014; T.16. №4: 31-37. (In Russ)]
12. Царев В.Н., Атрушкевич В.Г., Ипполитов Е.В., Подпорин М.С. Сравнительный анализ антимикробной активности па-родонтальных антисептиков с использованием автоматизированной системы контроля роста микроорганизмов в режиме реального времени. Пародонтология. 2017; Т.82. №1: 4-10. [Tsarev V.N., Atrushkevich V.G., Ippolitov E.V., Podporin M.S. Sravnitelnyiy analiz antimikrobnoy aktivnosti parodontalnyih antiseptikov s ispolzovaniem avtomatizirovannoy sistemyi kontrolya rosta mikroorganizmov v rezhime realnogo vremeni. Parodontologiya. 2017; T.82. №1: 4-10. (In Russ)].
Поступила в редакцию журнала 10.07.2017
Рецензент: И.А. Босак
sc
