CC BY
34
Исследование структуры легкого выявило наличие стаза эритроцитов в кровеносных капиллярах легочных альвеол и тромбоз сосудов легкого (рис. 5)
Б
Рис. 5. Стаз эритроцитов в кровеносных капиллярах легочных альвеол (А) и тромбоз сосудов легкого (Б) при введении частиц цеолитов Вангинского месторождения.
Окраска толуидиновым синим. Увеличение 10х90.
Выводы. Из полученных нами данных следует, что нано- и микрочастицы цеолитов оказывают местное токсическое действие при их внутримышечном введении интактным животным. В течение 10-ти су-
ток введения частиц цеолитов развиваются некроз мышечных волокон и воспалительный процесс. При этом частицы цеолитов захватываются макрофагами и накапливаются в их лизосомальном аппарате. Как результат деструктивных изменений в мышечной ткани бедра происходит возрастание транспортной и детоксикационной функции регионарных паховых лимфатических узлов - расширение краевого и мозговых синусов и увеличение макрофагов. Частицы цеолитов обнаруживаются в цитоплазме эпителиоцитов проксимального отдела почки, приводят нарушению микроциркуляции в почке и печени. Внутримышечное введение частиц цеолита обусловливает тромбоз сосудов легких, что может свидетельствовать о развитии системного воспалительного ответа.
Работа выполнена при поддержке Аналитической ведомственной целевой программы «Развитие научного потенциала высшей школы (2009-2011 годы)», Гранта РФФИ 12-04-13002-ДВФУ_а и Гранта Президента для молодых ученых МК-1547.2013.5.
Литература
1. Биологические эффекты наноразмерных частиц лития / Н.П. Бгатова [и др.]// Успехи наук о жизни.- 2012.- № 5.- С. 29-46.
2. Богатиков, О.А. Неорганические наночастицы в природе / О.А. Богатиков // Вестник РАН.- 2003.-Т.73.- № 5.- С. 426-428.
3. Дурнев, А.Д. Токсикология наночастиц / А.Д. Дурнев // Бюлл. эксперим. биол. и мед..- 2008.-Т. 145.- № 1.- С. 78-80.
4. Токсичность наноматериалов - 15 лет исследований / А.В. Колесниченко [и др.] // Российские нанотехнологии.- 2008.- Т. 3.- №3-4. С. 54-61.
5. Мешалкин, Ю.П. Перспективы и проблемы использования неорганических наночастиц в онкологии (обзор) / Ю.П. Мешалкин, Н.П. Бгатова // Журнал Сибирского федерального университета. Серия: Биология.- 2008.- Т. 1.- № 3.- С. 248-268.
УДК: 616.61-002.3-036.11-08:612.014.464
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ РЕЖИМОВ ГИПОБАРИЧЕСКОЙ ГИПЕРОКСИГЕНАЦИИ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ОСТРОГО ГНОЙНОГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ПИЕЛОНЕФРИТА НА ОСНОВАНИИ ЛАБОРАТОРНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
Ю.М. ГОНЧАРОВА, В.В.КУЗЬМЕНКО, А.В.КУЗЬМЕНКО
ГБОУ ВПО Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко Минздрава России ул. Студенческая, 10, г. Воронеж, 394036, тел. 8 (473)265-37-22
Аннотация: в представленной статье автор проводит анализ влияния различных режимов гипобарической гипероксигенации на показатели общего анализа крови, перекисного окисления липидов и неферментативного звена антиоксидантной системы защиты. Статья представляет интерес как для практикующих врачей, так и для преподавателей вузов.
Ключевые слова: острый гнойный пиелонефрит, антибактериальная терапия, гипобарическая гиперокси-
генацмн.
ASSESSMENT THE EFFECTIVENESS OF DIFFERENT MODES HYPOBARIC SUPEROXYGENATION IN THE COMPLEX TREATMENT OF EXPERIMENTAL ACUTE PURULENT PYELONEPHRITIS ON THE BASIS OF
LABORATORY INDICES
Y.M. GONCHAROVA, V.V. KUZMENKO, A.V. KUZMENKO
N.N. Burdenko Voronezh state medical academy
Absatract: this paper presents the author's analysis of the effects of different modes of hypobaric superoxygenation on blood quotients, lipid peroxidation and non-enzymatic antioxidant defense system. The paper is of interest to practical doctors and teachers of university.
Key words: acute purulent pyelonephritis, antibiotic therapy, hypobaric superoxygenation.
Проблема лечения острого гнойного пиелонефрита остается актуальной и в настоящее время [3,8,9]. Самыми частыми и серьёзными урологическими заболеваниями являются инфекции мочевыводящих путей [10]. Острый пиелонефрит занимает важное место среди причин первичной инвалидизации и летальных исходов [5]. По данным различных авторов острый пиелонефрит достигает 22% всех заболеваний почек [1,4,8]. В настоящее время отмечается увеличение частоты гнойных форм пиелонефрита, которые выявляются у 1/3 больных, что составляет около 30% [2]. Осложнениями острого гнойного пиелонефрита являются: нарушение функции почек (4044%), бактериально-токсический шок (10,3%), острая почечно-печёночная недостаточность (6,4%), с последующей летальностью до 80% [2,11].
Вышеописанная нозология представляет актуальную клиническую проблему, обусловленную неудовлетворительными результатами терапии, сложностью выбора оптимальной лечебной тактики, значительными экономическими затратами и длительной реабилитацией этой категории больных [4,6]. Таким образом, острый пиелонефрит является одним из самых распространенных заболеваний в урологии, требующим оказания неотложной помощи [8,9].
Материалы и методы исследования. Исследование проведено на 60 беспородных собаках весом от 14 до 18 кг. Моделирование осуществляли в асептических условиях под эндотрахеальным наркозом. Производилась нижняя срединная лапаротомия, высокое сечение мочевого пузыря, резекция мочевого пузыря с устьем правого мочеточника, отступая от устья на 1,5 см. Дефект в мочевом пузыре ушивался двурядным швом. Резецированное устье правого мочеточника выводилось на кожу передней брюшной стенки, подшивалось к апоневрозу и коже с формированием уретерокутанеостомы. По катетеру в лоханку вводился 1 мл взвеси Escherichia coli х 105 КОЕ в
1 мл. В эксперименте использовались клинические штаммы E.coli, полученные из мочи больных хроническим пиелонефритом. На устье мочеточника накладывался П-образный шов, который после удаления
катетера затягивался. Введение взвеси Escherichia coli, 105 КОЭ в 1 мл обеспечивает получение достоверной модели пиелонефрита при отсутствии инфицирования брюшной полости и послеоперационной раны [7]. На 3 сутки эксперимента уродинамика на стороне поражения восстанавливалась путем снятия П-образного шва с устья мочеточника. После восстановления пассажа мочи начиналась антибактериальная терапия. Производилась инцизионная биопсия с целью гистологического исследования (гистологическое подтверждение развития гнойного пиелонефрита). Все экспериментальные животные были разделены на четыре группы, по 15 животных в каждой. В контрольной группе проводилась антибактериальная терапия путем внутривенных инъекций цефотаксима. В I опытной группе осуществлялась традиционная антибактериальная терапия в сочетании с гипобариче-ской гипероксигенацией (500 метров над уровнем моря и одновременная подача увлажнённого кислорода 70-80%). Во II опытной группе проводилась традиционная антибактериальная терапия в сочетании с гипобарической гипероксигенацией (1500 метров над уровнем моря и одновременная подача увлажнённого кислорода 70-80%). В III опытной группе осуществлялась традиционная антибактериальная терапия в сочетании с гипобарической гипероксиге-нацией (3000 метров над уровнем моря и одновременная подача увлажнённого кислорода 70-80%). Ги-побарическая гипероксигенация осуществлялась путём помещения животных в барокамеру, где создавалось пониженное давление и одновременная подача увлажненного кислорода 70-80%. Процедуру производили с 3 до 9-х суток эксперимента ежедневно в течение 45 мин. На 6 сутки всем животным производилась ревизия, декапсуляция почки, при выявлении карбункулов - крестообразное рассечение. После этого производилась биопсия почки. На 9 сутки производилась нефрэктомия, взятие материала для гистологического исследования. С целью оценки эффективности применяемого лечения использовали общий анализ крови (уровень лейкоцитов, скорости оседания эритроцитов (СОЭ), палочкоядерных
нейтрофилов, лимфоцитов), перекисное окисление липидов (малоновый диальдегид), показатели анти-оксидантной системы защиты (сульфгидрильные группы). Во всех группах забор крови осуществляли перед началом эксперимента (исходный уровень), на 3, 6 и 9 сутки эксперимента. Статистическая обработка данных осуществлялась с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.1 фирмы StatSoft. Статистически значимыми считали различия при уровне значимости p<0,05.
Результаты и их обсуждение. При изучении показателей периферической крови собак на 3 сутки эксперимента во всех группах было отмечено повышение процентного содержания палочкоядерных нейтрофилов, снижение процентного содержания лимфоцитов при повышенном уровне лейкоцитов и ускорение СОЭ по сравнению с данными забора крови перед началом эксперимента. Полученные данные отражают наличие воспалительного процесса у собак.
В контрольной группе к 6 суткам исследования на фоне проводимой антибактериальной терапии и устранении обструкции мочевых путей в анализах периферической крови оставался достоверно повышенный лейкоцитоз по сравнению с исходными данными - 19,46±1,18х109/л, снижение процентного содержания лимфоцитов на 7,26±0,67%, ускорение СОЭ до 29,27±2,87 мм/час и повышение процентного содержания палочкоядерных нейтрофилов до 8,87±1,51% при исходном уровне 2,13±0,64%.
В I опытной группе на фоне проводимого лечения к 6 суткам исследования сохранялся умеренный лейкоцитоз (18,77±1,41х109/л) и умеренная лимфоци-топения (17,33±0,82%). Уровень СОЭ превысил норму более, чем в 4 раза, процентное содержание палочкоядерных нейтрофилов составило 7,47±1,46%.
Во II опытной группе отмечена положительная динамика показателей периферической крови собак по сравнению с остальными опытными группами. Так, количество лейкоцитов крови составило 15,72±0,97х109/л, лимфоциты - 21,53±1,60%, произошло снижение СОЭ до 15,53±1,19 мм/час, процентное содержание палочкоядерных нейтрофилов составило 4,93±1,10%, что в 2 раза превысило норму.
В III опытной группе динамика показателей периферической крови собак была идентична I опытной группе. Лейкоцитоз составил 18,54±1,05х109/л, лимфоциты - 17,27±0,80%, СОЭ - 25,40±1,68 мм/час (исходный уровень 6,47±1,36 мм/час), палочкоядерные нейтрофилы - 7,60±1,24, что свидетельствует о сохраняющемся воспалительном процессе.
В контрольной группе при лабораторном исследовании показателей периферической крови на 9е сутки наблюдалось снижение уровня лейкоцитов (14,53±1,32х109/л) и СОЭ (20,73±1,62 мм/час). Лимфоциты практически нормализовались (21,33±1,54%), содержание палочкоядерных нейтрофилов составило 4,80±1,37%.
К 9 суткам исследования показатели периферической крови I и III опытных групп были идентичны. Так, количество лейкоцитов крови на данный экспериментальный срок составило 13,01±1,40х109/л и 13,03±1,10х109/л, соответственно. Приблизилось к норме процентное содержание лимфоцитов и составило 22,13±1,96% и 22,00±1,56%, соответственно. Происходило дальнейшее снижение СОЭ, в I опытной группе до 16,40±1,30 мм/час, во II опытной - до16,33±1,35 мм/час. Процентное содержание палочкоядерных нейтрофи-лов на данный экспериментальный срок составило 3,67±0,72% и 3,73±0,71%, соответственно.
Во II опытной группе на 9 сутки эксперимента наблюдалась нормализация показателей периферической крови собак. Так, лейкоциты составили
11,19±1,70х109/л по сравнению с данными забора крови перед началом эксперимента - 10,72±2,17х109/л, лимфоциты составили 23,27±1,67% при исходном уровне 23,33±1,80%, СОЭ снизилась до нормальных цифр и составила 7,13±0,84 мм/час (исходный уровень 6,33±1,72 мм/час), процентное содержание палочкоядерных нейтрофилов составило 2,33±0,62% при исходном значении 2,20±0,77%.
Среди показателей процессов свободнорадикального окисления, оценивали перекисное окисление липидов (ПОЛ) по уровню малонового диальдегида (МДА).
В ходе проведенных исследований было констатировано, что на 1 сутки во всех экспериментальных группах уровень МДА находился в пределах физиологической нормы и составил в контрольной группе 6,4±0,64 нмоль/л, в I опытной - 6,6±0,47 нмоль/л, во
II опытной - 6,5±0,51 нмоль/л, в III опытной -6,6±0,59 нмоль/л.
На 3 сутки эксперимента в контрольной группе уровень МДА составил 13,6±0,58 нмоль/л. Это более чем в 2 раза превысило физиологическую норму и свидетельствовало об интенсификации процессов ПОЛ.
К 3 суткам эксперимента на фоне развития острого воспалительного процесса произошла статистически достоверная (p<0,05) активация процесса перекисного окисления липидов во всех опытных группах. Уровень МДА в I опытной группе составил 13,5±0,89 нмоль/л, что в 2,10 раза превысило уровень физиологической нормы; во II опытной группе - 13,7±0,78 нмоль/л, в
III опытной группе - 13,4±0,82 нмоль/л.
К 6 суткам в контрольной группе уровень МДА составил 11,2±0,69 нмоль/л. Это в 1,75 раза превысило уровень физиологической нормы.
На данный экспериментальный срок в I опытной группе уровень МДА был ниже, чем в контрольной группе (10,9±0,56 нмоль/л), но данное снижение было статистически не значимым.
Во II опытной группе к 6 суткам исследования, на фоне применения гипобарической гипероксиге-нации 1500 м над уровнем моря, произошло снижение уровня перекисного окисления липидов по отношению к другим экспериментальным группам.
Содержание МДА составило 9,8±0,54 нмоль/л.
В III опытной группе на 6 сутки в отношении процессов перекисного окисления липидов отмечалась динамика, аналогичная I опытной группе. Уровень МДА сыворотки лабораторных животных составил 10,8±0,60 нмоль/л.
На 9 сутки эксперимента в контрольной группе сохранялась высокая активность процессов перекис-ного окисления липидов, что привело к развитию клеточных изменений. Уровень МДА составил 10,0±0,58 нмоль/л.
К данному сроку эксперимента в I опытной группе отмечалась положительная динамика, однако уровень МДА не пришел к физиологической норме, превысив ее в 1,3 раза (8,6±0,60 нмоль/л).
Во II опытной группе на 9 сутки исследования на фоне применения гипобарической гипероксигена-ции 1500 м над уровнем моря происходило купирование воспалительного процесса, что подтверждалось снижением активности процессов свободнорадикального окисления, уровень МДА составил 7,0±0,59 нмоль/л.
В III опытной группе отмечалась тенденция, идентичная I опытной группе, уровень МДА составил 8,5±0,61 нмоль/л.
Одним из показателей неферментативного звена антиоксидантной системы защиты (АОС) являются сульфгидрильные группы (БИ-группы). Сульфгидриль-ные группы восстанавливают пероксидные радикалы до нетоксических продуктов.
В ходе проведенных исследований было констатировано, что на 1 сутки в контрольной группе уровень БИ-групп составил 132,3±5,31 мг%. В I опытной группе данный показатель составил 132,5±,21 мг%, во
II опытной группе - 132,4±5,16 мг%, в III опытной группе - 132,5±5,26 мг%, что соответствует референтному пределу нормы.
К 3 суткам исследования отмечалось повышение уровня БИ-групп в контрольной группе. Однако данная активация неферментативного звена АОС была недостаточной для ингибирования свободнорадикальных процессов. Уровень БИ-групп в контрольной группе составил 134,5±5,73 мг%.
В опытных группах в ответ на активацию процессов ПОЛ происходило адекватное повышение неферментативного звена антиоксидантной системы защиты. В I опытной группе уровень БИ-групп составил 139,9±5,68 мг%, во II опытной группе - 145,2±5,67 мг%, в III опытной группе - 139,2±5,62 мг%.
На 6 сутки эксперимента в контрольной группе происходило снижение содержания БИ-групп. Уровень данного показателя в контрольной группе составил 132,9±5,32 мг%.
В опытных группах констатировали снижение уровня неферментативного звена АОС, ассоциирующееся со снижением процессов перекисного окисления липидов. Содержание БИ-групп составило в I
опытной группе 137,6±5,53 мг%, во II опытной -139,8±5,64 мг%, в Ш опытной - 137,1±5,51 мг%.
На 9 сутки исследования дальнейшее снижение уровня SH-групп в контрольных группах ассоциировалось с сохраняющимся повышением уровня пере-кисного окисления липидов, вследствие истощения резервных возможностей организма и нарушений метаболизма с гиперкатаболической направленностью. Содержание SH-групп составило в контрольной группе 131,6±4,96 мг%.
В опытных группах происходило снижение уровня SH-групп по сравнению с 6 сутками экспери-мета. В I опытной группе уровень SH-групп составил 132,8±5,14 мг%, во II опытной - 133,2±5,19 мг%, в
III опытной - 132,5±5,16 мг%.
На данные экспериментальные сроки в опытных группах проводимая терапия способствовала быстрому восстановлению нарушенного окислительновосстановительного гомеостаза. Во II опытной группе отмечалась наиболее выраженная положительная динамика.
Выводы:
1. Полученные данные свидетельствуют об ускорении темпов воспалительного процесса во
II опытной группе по сравнению с остальными экспериментальными группами, что делает целесообразным применение гипобарической гипероксиге-нации 1500 метров над уровнем моря и одновременная подача увлажнённого кислорода 70-80%.
2. Подтверждена целесообразность применения гипобарической гипероксигенации 1500 м над уровнем моря в комплексном лечении острого гнойного пиелонефрита, что характеризуется нормализующим эффектом на показатели общего анализа крови, а также на показатели перекисного окисления липидов и неферментативного звена антиоксидант-ной системы защиты, способствуя стабилизации метаболических процессов и более благоприятному течению воспалительного процесса.
Литература
1.Аляев, Ю.Г. Современные аспекты диагностики и лечения гестационного пиелонефрита / Ю.Г. Аляев, М.А. Газимиев, Д.Е. Еникеев // Урология.- 2008.-№ 1.- С. 3-6.
2. Арбулиев, K.M. Оперативная тактика при осложненных формах острого гнойного пиелонефрита / К.М. Арбулиев // Урология.— 2008.-№ 1.- С. 15-20.
3. Бешлиев, Д.А. Диагностика и лечение острого пиелонефрита / Д.А. Бешлиев, Л.А. Ходырева // Трудный пациент.- 2009.- С. 12-13.
4. Долгих, Д.В. Реабилитация больных гнойнодеструктивным пиелонефритом после
органосохраняющих операций: автореф. дис....канта мед. наук / Д.В.Долгих.- мед.фак-т Рос. ун-та дружбы народов.- М., 2006.- 23 с.
5.Летальность при остром гнойном пиелонефрите в общей структуре причин смертность у урологических больных / П.В.Глыбочко [и др.] // Современные принципы диагностики, профилактики и лечения инфекционновоспалительных заболеваний почек, мочевыводящих путей и половых органов.- М., 2007.- С.32-33.
6.Неймарк, А.И. Комплексное лечение больных острым пиелонефритом / А.И. Неймарк, А.В. Симашкевич // Современные принципы диагностики, профилактики и лечения инфекционновоспалительных заболеваний почек, мочевыводящих путей и половых органов.- Барнаул, 2007.- С. 88-91.
7. Лоран, О.Б. Пат. 2289852 Российская Федера-
ция, МПК С09Б23/28 (2006.01). Способ моделирования пиелонефрита / О.Б. Лоран, Л.А. Синякова, И.В. Косова, Ю.С. Пирогов.- №2004138309 / 14; за-
явл.28.12.2004; опубл.20.12.2006.
8. Синякова, Л.А. Гнойный пиелонефрит
(современная диагностика и лечение): автореф.
дис.. ..д-ра мед. наук /Л.А. Синякова.- М., 2002.- 34 с.
9. Синякова, ЛЛ. Принципы профилактики и лечения мочевой инфекции / Л.А. Синякова, И.В. Косова, А.В. Дементьева // Урология.- 2008.-№6.— С. 79-83.
10. Состояние урологической заболеваемости в Российской Федерайции по данным официальной статистики / О.А. Аполихин [и др.] // Урология-2008.- №3.- С. 3-9.
11. Treatment of urinary tract infection withgenta-micin once or three times daily /C.Y. Chong [et al.] // Acta Paediatr.- 2003.- Vol. 92.- P. 291-296.
УДК [617.55-089.844-74]:612.017.1
МОНИТОРИНГ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ РАССАСЫВАЮЩИХСЯ
ЭКСПЛАНТАТОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В АБДОМИНАЛЬНОЙ ПЛАСТИКЕ - ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ
ИССЛЕДОВАНИЕ
А.А. ГРИГОРЮК, Е.П. ТУРМОВА, С.А. БЕЛОВ
Тихоокеанский государственный медицинский университет, г. Владивосток пр-т Острякова 2, тел.: 8(423)2-451-736, E-mail: [email protected]
Аннотация: оценивали влияние эндопротеза из элементов соединительных биосовместимых, производства НПО «Экран» (у 9 крыс) и медицинского клея МК-7М (у 9 крыс), на локальную и системную продукцию цитокинов. Контролем служили 9 крыс с мышечно-апоневротической пластикой. Животных выводили из опыта на 1, 10 и 30 сутки с момента эксплантации. Определение цитокинов IL-1p, IFN-y, TNF-a, IL-10 в сыворотке крови и биоптате мышечно-апоневротического рубца с эксплантатом производили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов: Rat «R&D Diagnostics Inc.», USA. Выявлено, что при применении клея наблюдалось увеличение локальной и системной продукции провоспалительных цитокинов: IL-1 р, IFN-y, TNF- а и снижение выработки противоспалительного IL-10 c 1 по 30 сутки. При ушивании передней брюшной стенки с наложением пленок ЭСБ отмечалась более выраженная системная продукция TNF-а, с 1 по 30 сутки после эксплантации.
Ключевые слова: грыжа, эксплантаты, цитокины, крыса.
MONITORING OF CYTOKINE PROFILE BY RESOLVING ABDOMINAL EXPLANTS - EXPERIMENTAL RESEARCH
А.А. GRIGORYUK, E.P.TURMOVA, S. А. BELOV Pacific State Medical University, Vladivostok
Abstract: influence of prosthesis from ECB (the elements connecting biocompatible made by "Screen") (in 9 rats) and medical glue MK-7M (in 9 rats) on local and system cytokines'production was estimated. As the control were 9 healthy rats with musculo-aponeurotic plasty. Animals were removed from experience on 1, 10 and 30 day after explantation. It was determined the cytokines IL-1p, IFN-y, TNF-а and IL-10 in blood serum and in biopsy material of musculo-aponeurotic seam with explants by the method of solid-phase immune-enzyme analysis by means of Rat «R&D Diagnostics Inc.», USA. It was established that at application of glue the increase of local and system production of proinflammatory cytokines: IL-1p, IFN-y, TNF-а and the decrease anti-inflammatory IL-10 from 1 to 30 day after explantation. It was revealed that at anteroventral closure by ECB more expressed system production of TNF-а 1 was marked from 1 to 30 day after explantation.
