CC BY
11
УДК 577.29:615+615.017:616.079
ОЦЕНКА ДОЗОЗАВИСИМОГО ДЕЙСТВИЯ З-ФОРМИЛ-ЗАМЕЩЕННОГО ПРОИЗВОДНОГО ХРОМОНА В УСЛОВИЯХ МЫШЕЧНОЙ ДИСФУНКЦИИ
А.В. Воронков1, Д.И. Поздняков1, О.Ф. Веселова2, Е.А. Олохова2, В.М. Руковицина1
Пятигорский медико-фармацевтический институт, филиал ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации;
2ФГБОУ ВО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации
В исследовании представлены данные, отражающие зависимость «доза-эффект» нового 3-формил-замещенного производного хромона в условиях мышечной дисфункции, воспроизведенной в тесте «бег на тредбане», в сравнении с референтным препаратом - «Метапрот» в дозе 25 мг/кг. В результате установлено, что изучаемое 3-формил-замещенное производное хромона оказывает наиболее выраженное влияние на активность скелетной мускулатуры в дозе 20 мг/кг, что подтверждалось функциональными и биохимическими тестами.
Ключевые слова: мышечная дисфункция, производные хромона, дозозависимое действие.
DOI 10.19163/1994-9480-2019-2(70)-62-66
EVALUATION OF DOSE-DEPENDENT EFFECTS OF 3-FORMYL-SUBSTITUTED DERIVATIVE OF CHROMONE IN CONDITIONS OF MUSCLE DYSFUNCTION
A.V. Voronkov1, D.I. Pozdnyakov1, O.F. Veselova2, ЕЛ. Olohova2, V.M. Rukovicina1
Pyatigorsk medical and pharmaceutical Institute, branch of FSBEI HE «Volgograd State Medical University»
of Public Health Ministry of the Russian Federation; 2FSBEI HE «Krasnoyarsk State Medical University named after professor V.F. Voyno-Yasenetsky» of Public Health Ministry of the Russian Federation
The study presents data reflecting the dose-dependent action of the new 3-formyl-substituted derivative of chromone in the conditions of muscle dysfunction, reproduced in the «treadmill running» test, in comparison with the reference drug -«Metaprot» at a dose of 25 mg/kg. As a result of study, it was found that the studied 3-formyl-substituted derivative of chromone has the most pronounced effect on the activity of skeletal muscle at a dose of 20 mg/kg, which was confirmed by functional and biochemical tests.
Key words: muscle dysfunction, chromone derivatives, dose-dependent action.
Оптимальный уровень физической активности является одной из определяющих детерминант здорового образа жизни и качества жизни населения в целом. Установлено, что дозированные физические нагрузки способствуют формированию адаптационного резерва скелетной мускулатуры, респираторной и кардиоваскулярной систем [10]. В противовес субмаксимальным физическим нагрузкам интенсивное воздействие на организм, носящее стрессо-пограничный либо прямой стрессогенный характер, способствует формированию ряда патологических синдромов, первоочередным из которых является мышечная дисфункция [11]. В отсутствии должной и своевременной фармакологической коррекции дальнейшее про-грессирование мышечной дисфункции опосредует деструктивные процессы в поперечно-полосатой мускулатуре, раннюю активацию анаэробного окисления субстратов, интенсификацию окислительного стресса, что, в свою очередь, ухудшает функциональную активность скелетных мышц, снижает общий уровень работоспособности, приводя к гиподинамии. Таким образом, рациональное фармакологическое вмешательство в течение
мышечное дисфункции позволит в значительной степени избежать ряда осложнений, ассоциированных с низким уровнем физической активности и гиподинамией [7].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Оценить дозозависимое действие 3-формил-замещенного производного хромона в условиях мышечной дисфукции.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование выполнено на 80 мышах-самцах линии Ва1Ь/с массой 20-22 г. Животные были получены из питомника лабораторных животных «Рапполово» и включались в исследование после 14 дней карантинного содержания. В качестве экспериментальной модели мышечной дисфункции в работе использовали протокол методики «бег на тредбане» (продолжительность бега животных составляла 900 с при скорости вращения вала 20 об/мин.). Формирование экспериментальных групп осуществляли путем рандомизации
по уровню физической активности в тесте «бег на тредбане» после предварительного 4-дневного обучения животных. Согласно разработанному дизайну исследования было сформировано 8 равных экспериментальных групп животных (n = 10). Первая группа мышей - группа интактных животных (ИЖ). Вторая группа мышей - группа негативного контроля (НК), лишенная фармакологической поддержки. Третья группа животных получала рефрентный препарат «Метапрот» (AnviLab, РФ) в дозе 25 мг/кг [2].
Группы мышей № 4-8 получали исследуемое соединение X3AOAC в дозах 10; 20; 40; 60 и 80 мг/кг соответственно. Изучаемое соединение и препарат сравнения вводились per os однократно в виде тонкодисперсной водной суспензии. Предварительно (после тренировочных тестов, на 5-й день эксперимента) для экспериментальных групп мышей № 2-8 было определено исходное значение коэффициента физической работоспособности (КФР) в тесте «бег на тредбане»: в течение 900 с фиксировали продолжительность нахождения животных на электростимулирующей подложке тредбана в с, после чего производили расчет КФР по формуле:
Кфр = ТобЩ.-Тпэпх Тобщ
где Тобщ. - общая продолжительность теста (900 с);
Тпэп. - время, проведенное животным на элек-тростимулирующей подложке тредбана, с.
После определения исходного значения КФР осуществляли введение препарата сравнения и различных доз исследуемого соединения. В дальнейшем по истечении 2 часов повторно воспроизводили тест «бег на тредбане» с определением величины КФР [4].
С целью подтверждения развития мышечной дисфункции у мышей в тесте «бег на тредбане», а также для углубленного изучения влияния препарата сравнения и исследуемого соединения на течение патологического процесса в мышечной ткани проводили серию биохимических тестов, для чего у животных всех экспериментальных групп производили забор биологического материала (кровь и мышечная ткань - m. gastrocnemius обеих конечностей).
Впоследствии получали сыворотку крови, в которой определяли концентрацию молочной кислоты (стандартный набор реактивов «Ольвекс Диагностикум») и мочевины (стандартный набор реактивов «Арбис+»), при этом пробоподготовка и ход анализа соответствовал инструкции, прилагаемой к каждому набору. Гомогенат мышечной
ткани готовили на 1М фосфатном буфере (рН 7,8) в соотношении 1:10, в котором определяли концентрацию белка по реакции с бромфеноловым синим и содержание ТБК-АП (ТБК-активные продукты) в пересчете на малоновый диальдегид в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой [5].
Полученные в ходе выполнения исследования результаты подвергались статистическому анализу с применением программного пакета «STATISTICA6.0». Данные выражали в виде М ± SD. Сравнение групп средних производили методом ANOVA с post-hoc тестом Ньюмена-Кейсла.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Оценивая уровень физической работоспособности у мышей (рис.) при тестировании на тредбане, установили, что у животных НК группы при повторном тестировании (после определения исходного значения КФР и 2 часов экспозиции) восстановление мышечной активности носило слабо выраженный характер, о чем свидетельствует снижение величины КФР у данной группы мышей в сравнении с первоначальным показателем работоспособности животных НК группы на 54,8 % (p < 0,05).
В то же время применение препарата сравнения способствовало восстановлению активности скелетной мускулатуры. Так, у мышей, получавших Метапрот (рис.), значение КФР после 2-часовой экспозиции статистически значимо не отличалось от исходного значения уровня мышечной работоспособности данной группы животных и превосходило показатель НК группы мышей на 45,2 % (p < 0,001).
Применение исследуемого соединения в дозе 10 мг/кг значимого влияния на изменение физической работоспособности мышей не оказало (статистически значимых отличий относительно НК группы животных при повторном тестировании не выявлено, в сравнении с исходным показателем группы мышей, получавших исследуемое соединение X3AOAC в дозе 10 мг/кг, КФР уменьшился на 46,3 %, p < 0,05). На фоне введения экспериментальным животным вещества X3AOAC в дозах 20; 40; 60 и 80 мг/кг значение КФР при повторном воспроизведении теста «бег на тредбане» статистически значимо не отличалось от первоначального показателя работоспособности данных групп мышей и превосходило величину КФР НК группы животных при повторном тестиро-в а н и и на 39 % (p < 0,001); 30,6 % (p < 0,001); 33,4 % (p < 0,001) и 37,5 % (p < 0,001) соответственно. При этом следует отметить, что относительно группы мышей, которым вводили референт-н ый п репарат, и животных, получавших соединение X3AOAC в дозах 20; 40; 60 и 80 мг/кг статистически значимых отличий не установлено (рис.).
*Статистически значимо относительно исходного значения КФР (p < 0,05); #статистически значимо относительно НК группы животных ф < 0,001).
Рис. Влияние различных доз исследуемого соединения Х3АОАС и препарата сравнения на изменение величины КФР у животных в условиях теста «бег на тредбане»
Анализируя изменение биохимических параметров, характеризующих развитие мышечной дисфункции (табл.), установили, что у мышей НК группы в сравнении ИЖ группой животных отмечается увеличение концентрации лактата и мочевины в сыворотке крови в 2,9 (р < 0,05) раза и на 55,8 % ^ < 0,05) соответственно. В гомогенате мышечной ткани мышей НК относительно интактных животных наблюдалось повышение концентрации ТБК-АП в 2,9 ^ < 0,05) раза, а также уменьшение содержания белка на 79,6 % ^ < 0,05).
Введение препарата сравнения способствовало снижению концентрации лактата и мочевины в сыворотке крови по отношению к НК группе мышей на 21 % ф < 0,001) и 29,8 % ф < 0,01).
Также на фоне применения Метапрота отмечено уменьшение концентрации ТБК-АП и увеличение содержания белка в сравнении с НК группой животных в гомогенате мышц на 54,1 % ф < 0,001) и 53,5 % ^ < 0,001) соответственно.
Изменение биохимических параметров мышечного утомления на фоне коррекции мышечной дисфункции соединением Х3АОАС и препаратом сравнения в условиях теста «бег на тредбане»
Группа ИЖ НК Х3АОАС 10 мг/кг Х3АОАС 20 мг/кг Х3АОАС 40 мг/кг Х3АОАС 60 мг/кг Х3АОАС 80 мг/кг Метапрот 25 мг/кг
Лактат, ммоль/л 1,010 ± 0,112 2,880 ± 0,059* 2,230 ± 0,105# 2,180 ± 0,104# 2,270 ± 0,091# 2,600 ± 0,106 2,57 ± 0,07 2,38 ± 0,03#
Белок, г/г ткани 14,320 ± 0,237 7,960 ± 0,343* 9,99 ± 0,26е 12,060 ± 0,529# 11,610 ± 0,653 11,710 ± 0,716 11,67 ± 0,759 12,22 ± 0,516#
Мочевина, ммоль/л 4,890 ± 0,961 7,620 ± 0,308* 6,43 ± 0,87 5,260 ± 0,699а 6,130 ± 1,051 8,050 ± 0,387 7,720 ± 0,175 5,870 ± 0,149е
ТБК-АП, нмоль/мг 1,120 ± 0,105 3,220 ± 0,072* 2,730 ± 0,101а 2,100 ± 0,035# 2,390 ± 0,187е 2,550 ± 0,046е 2,360 ± 0,067е 2,090 ± 0,022#
*Статистически значимо относительно ИЖ группы мышей ф < 0,05); "статистически значимо относительно НК группы животных ф < 0,05); ^статистически значимо относительно НК группы животных ф < 0,01); "статистически значимо относительно НК группы животных ф < 0,001).
В условиях введения изучаемого соединения Х3АОАС в дозах 10; 20; 40 мг/кг относительно НК группы мышей наблюдалось уменьшение концентрации лактата на 29,1 % ф < 0,001); 32,1 % ф < 0,001) и 26,8 % ф < 0,001) соответственно. Кроме того, содержание молочной кислоты при применении исследуемого соединения в дозе
20 мг/кг было ниже аналогичного показателя, получавших вещество Х3АОАС в дозах 60 мг/кг и 80 мг/кг на 19,3 % ф < 0,05) и 17,9 % ф < 0,05) соответственно.
Концентрация белка в гомогенате мышечной ткани мышей (табл.), получавших вещество Х3АОАС в дозах 10; 20; 40; 60 и 80 мг/кг увеличи-
лось в сравнении с группой животных без фармакологической поддержки на 25,5 % (р < 0,01); 51,5 % (р < 0,001); 45,6 % (р < 0,001); 47,1 % (р < 0,001) и 46,6 % (р < 0,001) соответственно. Концентрация мочевины в сыворотке крови статистически значимо по отношению к НК группе животных изменилась при применении соединения Х3АОАС в дозе 20 мг/кг (отмечено снижение данного показателя на 44,9 %, р < 0,05). Применение изучаемого вещества Х3АОАС в дозах 10; 40; 60 и 80 мг/кг статистически значимого влияния на изменение сывороточной концентрации мочевины не оказало (табл.).
Содержание ТБК-АП в гомогенате мышц экспериментальных животных уменьшилось по отношению к НК группе мышей на 17,9 % (р < 0,05); 53,3 % (р < 0,001); 34,7 % (р < 0,01); 26,2 % (р < 0,01) и 36,4 % (р < 0,01) на фоне введения соединения Х3АОАС в дозах 10; 20; 40; 60 и 80 мг/кг соответственно. При этом концентрация ТБК-АП у гомоге-нате мышечной ткани животных, получавших вещество Х3АОАС, в дозе 20 мг/кг было ниже относительно групп мышей, которым вводили исследуемое соединение в дозах 10 и 60 мг/кг на 30 % (р < 0,05) и 21,4 % (р < 0,05) соответственно. Таким образом, наиболее эффективной дозой вещества Х3АОАС можно считать 20 мг/кг, поскольку при введении экспериментальным животным соединения Х3АОАС в данной дозе отмечено наиболее выраженное по сравнению с другими вариантами дозирования уменьшение концентрации лактата, мочевины, ТБК-АП и увеличение показателя КФР.
Мышечная дисфункция является патологическим процессом, характеризующимся утратой сократительной способности скелетной мускулатуры с быстропрогрессирующим утомлением поперечнополосатых мышц и, как следствие, уменьшением физической силы и выносливости [6]. На сегодняшний день установлено, что развитие мышечной дисфункции является неблагоприятным прогностическим фактором в условиях манифестации кардиоваскулярной, церебральной, либо эндокринной патологии и, несомненно, требует коррекции [12]. В этой связи проведено исследование, посвященное оценке дозозависмого влияния нового 3-формил-замещенного производного хромона -Х3АОАС на развитие мышечной дисфункции у мышей в условиях теста «бег на тредбане». В результате проведенной работы установлено, что у мышей НК группы при двукратном воспроизведении теста «бег на тредбане» с коротким периодом отдыха (2-часовая экспозиция) снижается адаптационный потенциал мышечной ткани, что отражалось в уменьшении физической работоспособности, активации деструктивных и анаэробных процессов в мышцах, о чем может свидетельствовать уменьшение концентрации белка в мышцах и повышение уровня мочевины и лактата в сыворотке крови, интенсификации процессов липоперокси-
дации (увеличение концентрации ТБК-АП), что согласуется с литературными данными [8].
Применение исследуемого соединения Х3АОАС способствовало восстановлению активности поперечно-полосатой мускулатуры (отмечено увеличение КФР), снижению деструкции мышечной ткани, н ормализации аэробного энергообмена, уменьшению оксидации липидов. При этом сохранение мышечной функции при применении вещества Х3АОАС, по всей видимости, связано с наличием у данного соединения антиоксидатной [3] и анти-цитокиновой активности [7]. Зависимость «доза-эффект» соединения Х3АОАС также, вероятно, опосредована антиоскидатными свойствами изучаемого соединения и «параболическим» (инверсия антиоксидатного эффекта в прооксидатнтный) характером действия веществ, обладающих анти-оксидантными свойствами [9].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. «Бег на тредбане» с коротким периодом отдыха сопровождается у мышей развитием м ышечной дисфункции со снижением физической активности на 54,8 (р < 0,05), интенсификацией деструктивных (увеличение концентрации мочевины и снижение содержания белка на 55,8 % (р < 0,05) и на 79,6 % (р < 0,05) соответственно), анаэробных (увеличение концентрации лактата в 2,9 (р < 0,05) раза) и окислительных процессов (увеличение содержания ТБК-АП в 2,9 (р < 0,05) раза по отношению к интактным животным).
2. Применение препарата сравнения Мета-прота способствовало сохранению физической активности животных (относительно НК группы мышей коэффициент физической работоспособности увеличился на 45,2 % (р < 0,001), снижению процессов миодеструкции, нормализации аэробного окисления и липопреоксидации (уменьшение содержания ТБК-АП на 54,1 % (р < 0,001) в сравнении с НК группой животных).
3. Введение исследуемого соединения Х3АОАС так же, как и применение референтного препарата способствовало восстановлению функциональной активности скелетных мышц, при этом наиболее эффективной дозой вещества Х3АОАС можно считать 20 мг/кг, так как при введении экспериментальным животным соединения Х3АОАС в данной дозе отмечено наиболее выраженное по сравнению с другими вариантами дозирования уменьшение концентрации лактата, мочевины, ТБК-АП и увеличение коэффициента физической работоспособности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Воронков А.В., Поздняков Д.И., Руковицина В.М., Оганесян Э.Т. Антиоксидантная активность новых производных хромон-3-альдегида в условиях мышечной дисфункции // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2018. - Вып. 21, № 6. - С. 38-42.
2. Мокренко Е.В. Сопоставление противовоспалительной и эрготропной активности иммуномодуляторов метапрота, трекрезана и полиоксидония и их комбинаций при экспериментальном бронхолегочном воспалении у крыс // Вестник Новгородского государственного университета им. Ярослава Мудрого. - 2016. - № 1 (92). -С. 116-123.
3. Руковицина В.М., Поздняков Д.И. Производные хромон-3-альдегида, обладающие противоишемической активностью // Беликовские чтения. Материалы VI Всероссийской научно-практической конференции. - Пятигорск, 2018. - C. 53-56.
4. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.
5. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью ТБК // Современные методы в биохимии / под. ред. В.Н. Ореховича. -М.: Медицина, 1977. - С. 44-46.
6. Al-Mulla M.R., Sepulveda F., Colley M. A review of non-invasive techniques to detect and predict localised muscle fatigue // Sensors (Basel). - 2011. - Vol. 11, № 4. -Р. 3545-94.
7. Carson J.A., Hardee J.P., Vander Veen B.N. The emerging role of skeletal muscle oxidative metabolism as a biological target and cellular regulator of cancer-induced muscle wasting // Semin. Cell. Dev. Biol. - 2015. -Vol. 54. - P. 53-67.
8. Delliaux S., Brerro-Saby C., Steinberg J.G., Jammes Y. Reactive oxygen species activate the group IV muscle afferents in resting and exercising muscle in rats // Pflugers. Arch. - 2009. - Vol. 459. - P. 143-150.
9. Giordo R., Cossu A., Pasciu V., et. al. Different redox response elicited by naturally occurring antioxidants in human endothelial cells // The Open Biochemistry Journal. -2013. - № 7. - Р. 44-53.
10. Johanson E., Brumagne S., Janssens L., Pijnen-burg M., Claeys K., Paasuke M. The effect of acute back muscle fatigue on postural control strategy in people with and without recurrent low back pain // Eur. Spine. J. - 2011. -Vol. 20, № 12. - Р. 2152-9.
11. Norheim K.B., Jonsson G., Omdal R. Biological mechanisms of chronic fatigue // Rheumatology (Oxford). -2011. - Vol. 50. - P. 1009-1018.
12. Wan J.J., Qin Z., Wang P.Y., Sun Y., Liu X. Muscle fatigue: general understanding and treatment // Exp. Mol. Med. - 2017. - Vol. 49, № 10. - Р. 384. doi:10.1038/emm.2017.194
REFERENCES
1. Voronkov A.V., Pozdnyakov D.I., Rukovicina V.M. , Oganesyan E.T. Antioksidantnaya aktivnost' novyh pro-izvodnyh hromon-3-al'degida v usloviyah myshechnoj disfunkcii [Antioxidant activity of new chromone-3-aldehyde derivatives under conditions of muscular dysfunction]. Voprosy biologicheskoj, medicinskoj i farmacevticheskoj
himii [Questions of biological, medical and pharmaceutical chemistry], 2018, Vol. 21, no. 6, pp. 38-42. (In Russ.; abstr. in Engl.).
2. Mokrenko E.V. Sopostavlenie protivovospalitel'noj i ergotropnoj aktivnosti immunomodulyatorov metaprota, trekrezana i polioksidoniya i ih kombinacij pri eksperi-mental'nom bronholegochnom vospalenii u krys [Comparison of anti-inflammatory and ergotropic activity of meta-prome immunomodulators, trekrezan and polyoxidonium and their combinations in experimental bronchopulmonary inflammation in rats]. Vestnik Novgorodskogo gosudar-stvennogo universiteta im. YAroslava Mudrogo [Bulletin of Yaroslav the Wise Novgorod State University], 2016, no. 1 (92), pp. 116-123. (In Russ.; abstr. in Engl.).
3. Rukovicina V.M., Pozdnyakov D.I. Proizvodnye hromon-3-al'degida, obladayushchie protivoishemicheskoj aktivnost'yu [Chromone-3-aldehyde derivatives with anti-ischemic activity]. In Belikovskie chteniya. Materialy VI Vserossijskoj nauchno-prakticheskoj konferencii [Belikovsky Readings. Materials of the VI All-Russian Scientific and Practical Conference]. Pyatigorsk, 2018. P. 53-56.
4. Rukovodstvo po provedeniyu doklinicheskih issle-dovanij lekarstvennyh sredstv. CHast' pervaya [Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Part One]. In A.N. Mironov (ed.). Moscow: Grif i K, 2012. 944 p.
5. Stal'naya I.D., Garishvili T.G. Metod opredeleniya malonovogo dial'degida s pomoshch'yu TBK [Method for the determination of malondialdehyde using TBC]. In Sovremennye metody v biohimii [Modern methods in biochemistry]. In V.N. Orekhovich (ed.). Moscow: Medicina, 1977. P. 44-46.
6. Al-Mulla M.R., Sepulveda F., Colley M. A review of non-invasive techniques to detect and predict localised muscle fatigue. Sensors (Basel), 2011, Vol. 11, no. 4, pp. 3545-94.
7. Carson J.A., Hardee J.P., Vander Veen B.N. The emerging role of skeletal muscle oxidative metabolism as a biological target and cellular regulator of cancer-induced muscle wasting. Semin. Cell. Dev. Biol, 2015, Vol. 54, pp. 53-67.
8. Delliaux S., Brerro-Saby C., Steinberg J.G., Jammes Y. Reactive oxygen species activate the group IV muscle afferents in resting and exercising muscle in rats. Pflugers. Arch., 2009, Vol. 459, pp. 143-150.
9. Giordo R., Cossu A., Pasciu V., et. al. Different redox response elicited by naturally occurring antioxidants in human endothelial cells. The Open Biochemistry Journal, 2013, no. 7, pp. 44-53.
10. Johanson E., Brumagne S., Janssens L., Pijnen-burg M., Claeys K., Paasuke M. The effect of acute back muscle fatigue on postural control strategy in people with and without recurrent low back pain. Eur. Spine. J, 2011, Vol. 20, no. 12, pp. 2152-9.
11. Norheim K.B., Jonsson G., Omdal R. Biological mechanisms of chronic fatigue. Rheumatology (Oxford), 2011, Vol. 50, pp. 1009-1018.
12. Wan J.J., Qin Z., Wang P.Y., Sun Y., Liu X. Muscle fatigue: general understanding and treatment. Exp. Mol. Med, 2017, Vol. 49, no. 10, p. 384. doi:10.1038/emm.2017.194
Контактная информация Воронков Андрей Владиславович - д. м. н., доцент, заведующий кафедрой фармакологии с курсом клинической фармакологии, ПМФИ-филиала ФГБОУ ВО ВолгГМУ МЗ РФ, email: [email protected]
