Особенности врожденного иммунитета у новорожденных с дыхательными расстройствами, находящихся на искусственной вентиляции легких Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ИММУНОЛОГИЯ № 3, 2012

ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ

© М. в. ДУДАРЕВА, л. П. СИЗЯКИНА, 2012 УДК 616.24-008.4-053.31-092:612.017.1]-078.33

М. В. Дударева1, Л. П. Сизякина2

особенности врожденного иммунитета у новорожденных с дыхательными расстройствами, находящихся на искусственной вентиляции легких

1ФГБУ Институт акушерства и педиатрии Минздравсоцразвития РФ (344012, г Ростов-на-Дону, ул. Мечникова, 43); 2ФГБУ ГОУ ВПО РостГМУ

С целью раннего прогнозирования исхода дыхательных расстройств у новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции легких, определяли уровни экспрессии ToN-подобных рецепторов моноцитами периферической крови и содержание натуральных киллеров методом проточной цитометрии. Наиболее высокие показатели процентного содержания TLR2 регистрировались у новорожденных с дыхательными расстройствами, осложненными сепсисом.

Ключевые слова: новорожденные, дыхательные расстройства, Toll-подобные рецепторы, натуральные киллеры M.V Dudareva, L.P. Sizyakina

peculiarities of congenital immunity in newborn infants suffering respiratory disorders and undergoing artificial lung ventilation

The objective of the present study was to measure expression of Toll-like receptor in peripheral blood monocytes and the amount of natural killer cells for the early prognosis of the outcome of respiratory disorders in the newborn infants undergoing artificial lung ventilation. The flow cytometric technique was employed for the purpose. It was found that the newborn infants suffering respiratory disorders complicated by sepsis exhibited the highest percent of TLR-2.

Key words: newborn infants, respiratory disorders, Toll-like receptors, natural killer cells

Последнее десятилетие характеризуется бурным развитием перинатальной медицины, усовершенствованием существующих диагностических и лечебных методов и интенсивным внедрением в практику новых, высокоэффективных технологий выхаживания новорожденных детей. Все это способствует неуклонному снижению показателей младенческой смертности [3]. Достигнут значительный прогресс и в совершенствовании медицинских технологий по выхаживанию новорожденных детей с дыхательными расстройствами. При этом в структуре заболеваемости и смертности новорожденных детей остается высоким процент летальных исходов вследствие гнойно-воспалительных заболеваний различной этиологии и локализации. Наиболее уязвимыми для бактериальных инфекций являются новорожденные с дыхательными расстройствами в связи с применением им искусственной вентиляции легких (ИВЛ) и большого количества инвазивных процедур. Инфекционно-воспалительные осложнения, развивающиеся при применении искусственной вентиляции легких у новорожденных с дыхательными нарушениями, являются одной из основных причин смерти у этих детей.

Доказана ведущая роль иммунной системы в развитии, клиническом течении и исходе гнойно-вос-

Сизякина Людмила Петровна - д-р мед. наук, проф., зав. каф., тел. 8(928)761-70-38, e-mail:[email protected]

палительных заболеваний у новорожденных детей [6].

В настоящее время изучение механизмов врожденного иммунитета является важной задачей клинической иммунологии. Система врожденного иммунитета - филогенетически более древняя линия защиты организма от патогенов, она функционирует, опираясь на воспаление и фагоцитоз. Механизмы врожденного иммунитета обеспечивают быструю элиминацию патогенов и предотвращение инфекции на ранних этапах, когда механизмы адаптивного иммунитета еще отсутствуют [1, 2, 4, 5].

Цель нашего исследования - сравнительное изучение параметров врожденного иммунитета у новорожденных с синдромом дыхательных расстройств (СДР), обусловленных мекониальной аспирацией (основная группа), и здоровых новорожденных (контроль).

Материалы и методы. Исследование выполнено на базе отделения реанимации и интенсивной терапии НИИ акушерства и педиатрии. Дети, рожденные в родильных домах города Ростова-на-Дону и области, поступали в течение 1-х суток жизни в реанимационное отделение РНИИАП.

Обследованы 165 доношенных новорожденных с гестационным возрастом от 39 до 41 нед, массой тела от 3700 до 4200 г, оценкой по шкале Апгар 3,2 ± 1,6 балла. Тяжесть состояния новорожденных была обусловлена преимущественно тяжелой дыхательной недостаточностью, обусловленной мекониальной аспирацией. Все дети были переведены на ИВЛ в родильном зале и транспортированы в отделение реани-

- 142 -

ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ

мации. Новорожденные поступили в отделение в тяжелом и крайне тяжелом состоянии, с выраженными нарушениями деятельности дыхательной, сердечнососудистой, нервной систем, глубокими метаболическими расстройствами. Режимы ИВЛ подбирали соответственно данным кислотно-основного состояния крови и динамического клинического наблюдения за состоянием ребенка. Неврологическую симптоматику отметили у 100% новорожденных основной группы.

Всем пациентам в процессе нахождения в отделении реанимации осуществляли динамическое клинико-лабораторное и иммунологическое обследование при поступлении, на 3-5-е и 20-е сутки (или исходе заболевания).

У новорожденных детей при поступлении не зарегистрировали клинических признаков бактериального инфицирования. При наблюдении в динамике на основании клинико-лабораторных данных установили, что к 3-5-м суткам пребывания в реанимационном отделении у 11 новорожденных детей развился неонатальный сепсис. При постановке диагноза сепсиса клинико-анамнестические и лабораторные данные были подтверждены положительной гемокультурой, у 3 - положительным посевом ликвора при отрицательной гемокультуре. У 3 больных одновременно выделялись возбудители в крови и ликворе, у 5 - в крови и аспирате из трахеи. Наиболее часто обнаруживали Pseudomonas aeruginosa, Kl. pneumoniae, Strept. epidermidis.

Новорожденные родились у женщин с отягощенным соматическим и акушерско-гинекологическим анамнезом при осложненном течении беременности и родов.

У матерей детей основной группы экстрагенитальная патология была представлена следующим образом: вегетососудистая дистония (36,96%), заболевания мочевыделительной системы (27,7%), заболевания ЛОР-органов (8,6%), хронический гастрит (6,8%), ожирение II-III степени (11,8%).

Результаты анализа гинекологической заболеваемости у матерей детей основной группы показали, что у них чаще всего встречался кольпит (20,63%), бактериальный вагиноз (17%), аднексит (11,34%), эн-доцервицит (8,16%), эрозия шейки матки (2,72%).

Из осложнений течения данной беременности у матерей детей основной группы наиболее часто регистрировали фетоплацентарную недостаточность (ФПН; 42%), поздний гестоз (18,8%), угрозу прерывания беременности (25,9%), анемию (22,7%), многово-дие (12,2%), нарушение маточно-плацентарного кровообращения (8,6%), хроническую внутриутробную гипоксию плода (22%).

Очевидно, что ФПН, хроническая гипоксия плода, ранний и поздний гестоз, угроза прерывания беременности наиболее часто отягощали течение беременности у матерей детей основной группы.

У новорожденных контрольной группы отмечали физиологическое течение периода адаптации. Все они не имели соматических, неврологических нарушений и были выписаны домой в удовлетворительном состоянии на 4-5-е сутки жизни.

У 29 (76,3%) матерей детей контрольной группы соматическая патология отсутствовала, а у 9 (23,7%) она выявлена: вегетососудистая дистония (5,3%), за-

болевания мочевыделительной системы (2,6%), хронический гастрит (5,3%), хронический тонзиллит (2,6%), ожирение II-III степени (7,9%). Необходимо отметить, что только у 2,63% матерей детей контрольной группы встречался аднексит, а у 2,6% ФПН и хроническая гипоксия плода.

Исследование одобрено этическим комитетом РНИИАП. У родителей пациентов получено информированное согласие на все проводимые исследования.

Исследования проводили на 3-цветном проточном цитометре «Beckman Coulter” (США) с использованием реагентов фирмы «Beckman Coulter” (США). Лизис осуществляли ручным методом раствором «Op-tiLyse C” (“Beckman Coulter”, США). Для корректного исключения из зоны анализа всех частиц, которые не соответствовали по размеру и гранулярности живым моноцитам, вводили необходимые логические ограничения в гистограммы распределения частиц по малоугловому, боковому светорассеянию.

При определении статистической обоснованности различия исследуемых групп применяли критерий Манна-Уитни для независимых групп и критерий Вил-коксона для связанных. В расчет принимали случаи при максимальном уровне ошибки первого рода < 0,05.

Результаты и обсуждение. Мы определили экспрессию Toll-подобных рецепторов (TLR2) (CD282+) и TLR4 (CD284+) на моноцитах периферической крови у новорожденных с СДР и здоровых новорожденных. Установили достоверное снижение экспрессии TLR2 (54,98 ± 0,78% против 78 ± 0,67%) и TLR4 (44,11 ± 0,98% против 65,05 ± 0,7%) у новорожденных с СДР по сравнению с таковой у здоровых новорожденных (р < 0,05). Следствием снижения уровня экспрессии на моноцитах рецепторов, распознающих патоген, могут стать отсутствие адекватной реакции на проникновение чужеродных агентов, пер-систенция инфекции и хронизация процесса.

Известно, что характерный для моноцитов/макро-фагов поверхностный антиген CD142+ функционирует как патогенраспознающий рецептор. Однако ввиду отсутствия трансмембранного и цитоплазматического доменов для передачи сигнала он нуждается в коре-цепторах, роль которых выполняют TLR4. Есть данные, указывающие на то, что микробные компоненты в первую очередь взаимодействуют с CD142+, а затем с TLR. У детей с СДР наблюдали достоверное снижение экспрессии CD142+ по сравнению с аналогичным показателем у здоровых новорожденных (74,35 ± 1,89% против 89,55 ± 0,45%) (р < 0,05).

У новорожденных с СДР, осложненных сепсисом, в процессе динамического наблюдения на 3-5-е сутки происходило достоверное повышение экспрессии TLR2 по сравнению с таковой в 1-е сутки (81,69 ± 1,38% против 71,33 ± 1,27%) (р < 0,05), при этом наблюдали достоверное снижение экспрессии CD142+ (47,45 ± 2,13% против 63,43 ± 2,29%) (р < 0,05). Хотя на 20-е сутки заболевания выявили незначительное снижение экспрессии TLR2 по сравнению с аналогичным показателем в 3-5-е сутки (79,7 ± 1,21% против 81,69 ± 1,38%) и увеличение экспрессии CD142+ по сравнению с таковой в 3-5-е сутки (58,47 ± 3,42% против 47,45 ± 2,13%), это носило недостоверный характер. Интересно отметить, что по TLR4 значимых различий между 1, 3-5 и 20-ми сутками не получили,

- 143 -

ИММУНОЛОГИЯ № 3, 2012

уровень экспрессии соответствовал возрастной норме (65,05 ± 0,7%). Экспрессия TLR2 превышала уровень экспрессии TLR4. Это можно объяснить более широким спектром микробных лигандов, распознаваемых TLR2, а также его димеризацией с TLR1 и TLR6.

Таким образом, при сепсисе у новорожденных существенное и быстрое повышение экспрессии TLR2 на моноцитах прослеживается уже при первоначальных признаках воспаления, и измерение экспрессии CD14+CD282+ может служить ранним маркером развития бактериального осложнения. Не исключено, что такой высокий уровень экспрессии TLR2 индуцирует выработку цитокинов, вызывает опосредованный цитокинами апоптоз иммунокомпетентных клеток и различные осложнения.

Натуральные киллеры (NK) являются третьей популяцией лимфоцитов иммунной системы, это клетки врожденного иммунитета. Механизм действия NK-клеток заключается в индукции апоптоза и пер-форинзависимом лизисе. T-NK(CD3+CD16+56+) - уникальный подкласс как Т-клеток, так и NK-клеток, которые регулируют продукцию, а также сами являются продуцентами важнейших цитокинов, направляющих течение иммунной реакции. Их значение важно у детей раннего возраста, когда система адаптивного иммунитета только формируется.

Следует отметить, что у новорожденных детей с СДР достоверно снижено как абсолютное, так и относительное содержание NK(CD3-CD16+56+) и T-NK(CD3+CD16+56+) по сравнению с таковым у здоровых новорожденных (1,98 ± 0,22% против 7,44 ± 0,31% и 0,05 ± 0,01 ■ 109/л против 0,25 ± 0,0Н09/л; 0,61 ± 0,04% против 2,52 ± 0,06% и 0,014 ± 0,002 ■ 109/л и 0,08 ± 0,002 ■ 109/л) (р < 0,05). На 3-5-е сутки динамического наблюдения и к 20-м суткам заболевания не наблюдали повышения содержания в периферической крови NK(CD3-CD16+56+) и T-NK(CD3+CD16+56+). Таким образом, полученные данные свидетельствуют о выраженной редукции клеток, обладающих киллерной активностью.

У новорожденных с СДР и документированным сепсисом отметили достоверно значимое снижение абсолютного и относительного количества NK -NK(CD3-CD16+56+) и T-NK(CD3+CD16+56+) по сравнению с таковым у здоровых новорожденных (р < 0,05). В процессе динамического наблюдения продолжалось достоверное снижение уровня NK(CD3-CD16+56+) и T-NK(CD3+CD16+56+) во все сроки наблюдения. Резюмируя вышеизложенное, можно заключить, что эта особенность эффекторного звена иммунологического реагирования, по-видимому, свидетельствует о напряжении защитной функции NK на фоне бактериальной инфекции и может лежать в основе сниженной резистентности новорожденных детей к инфекционным агентам.

Выводы. 1. Измерение экспрессии CD14+CD282+ на моноцитах может быть ранним маркером развития бактериального осложнения.

2. TLR можно использовать как новые маркеры осложнений при респираторной патологии, а также потенциальную мишень терапевтических вмешательств.

ЛИТЕРАТУРА

1. Ковальчук Л. В., Хорева М. В., Варидова А. С. Врожденные компоненты иммунитета: ToU-подобные рецепторы в норме и при патологии // Журн. микробиол. - 2005. - № 4. - С. 96-104.

2. Кокряков В. Н. Очерки о врожденном иммунитете. - СПб., 2006.

3. Солдатова И. Г., Дегтярева М. В., Володин Н. Н. и др. Применение ронколейкина в комплексной терапии неонатального сепсиса // Вопр. гематол., онкол. и иммунопатол. - 2003. - Т. 2, №

1. - С. 62-65.

4. Хаитов Р. М., Пащенков М. В., Пинегин Б. В. Биология рецепторов врожденной иммунной системы // Физиол. и патол. иммун. сист. - 2008. - Т. 12, № 6. - С. 3-28.

5. Хаитов Р. М., Пащенков М. В., Пинегин Б. В. Роль паттернра-спознающих рецепторов во врожденном и адаптивном иммунитете // Иммунология. - 2009. - Т. 30, № 1. - С. 66-76.

6. Guntur A. Role of immune response in sepsis and septic shock // Inter. Immunorehabil. - 2002. - Vol. 4, N 3. - P. 370-374.

Поступила 13.01.12

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012

УДК 615.281.8.03:616.2-002-022:578.831.31].036.8

И. П. Шиловский, Г. В. Корнилаева, М. Р Хаитов

НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ В ТЕРАПИИ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ

вирусной инфекции: данные доклинического исследования препарата «эргоферон»

ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России (115478, г. Москва, Каширское ш., 24, стр. 2); Научноисследовательский институт вирусологии им. д. И. Ивановского (123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 16)

Инфекционные заболевания, вызываемые респираторно-синцитиальным вирусом (РСВ), зачастую приводят к развитию серьезных осложнений у детей. В настоящее время существуют препараты для профилактики и патогенетической терапии данного заболевания, однако их широкое применение ограничено главным образом нежелательными явлениями, связанными с приемом препаратов, а также высокой стоимостью лечения. В рамках изучения противовирусной активности препарата «Эргоферон» исследована его эффективность в отношении РСВ на клетках линии LeLa in vitro. Противовирусную активность оценивали методом RT-PcR и титрованием на монослое клеток MDKB. данные, полученные в ходе исследования, показывают, что эргоферон оказывает противовирусное действие в отношении РСВ и может быть использован в составе комплексной терапии и профилактики данного заболевания.

Ключевые слова: респираторно-синцитиальный вирус, эргоферон, противовирусная терапия, антитела, интерферон-у, CD4, гистамин

- 144 -