CC BY
0
■ УДК 611.813.3,59.085
Д. А. ПОЖИЛОВ1, Т. А. РУМЯНЦЕВА1, А. С. ПОЖАРОВ2
ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ НЕЙРОДИСТРОФИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА В ОБОНЯТЕЛЬНЫХ ЛУКОВИЦАХ КРЫС РЕПРОДУКТИВНОГО И ПРЕДСТАРЧЕСКОГО ВОЗРАСТОВ
1 Ярославский государственный медицинский университет, Ярославль, Российская Федерация
2 Ярославский государственный университет им. П. Г. Демидова, Ярославль, Российская Федерация
_ АННОТАЦИЯ_
Введение. Изучение возрастных особенностей направленности и выраженности компенсаторных реакций является необходимым условием для определения мишеней терапии. В обонятельной луковице заканчивается основной путь миграции прогениторов из стволовых ниш мозга, что позволяет по маркерам мигрирующих нейробластов (DCX) и астроци-тов (GFAP) оценить возможности компенсации путем ней-рогенеза и реакцию глии.
Цель - установить возрастные особенности изменений в обонятельных луковицах крыс при моделировании нейро-дистрофического процесса в предстарческом и репродуктивном возрастах.
Материалы и методы. Для моделирования использовали подкожное введение нейротоксина капсаицина (алкалоида перца) в дозировке 30, 30 и 60 мг/кг массы через день крысам репродуктивного и предстарческого возрастов. Контролем служилиложнолеченные крысы. Всего 90 животных. Оценивали численную плотность БСХ- и GFAP-позитивных клеток в слоях обонятельной луковицы.
Результаты. В предстарческом возрасте в обонятельной луковице наблюдаются снижение плотности прогениторных
клеток и нарастание инволютивных изменений. В репродуктивном возрасте клеточный состав стабилен. Гибель части нейронов вызывает у крыс репродуктивного возраста активизацию нейрогенеза в виде увеличения плотности DCX-прогениторов в слоях луковицы, которое нивелируется в течение месяца. В предстарческом возрасте плотность прогениторов не возрастает, но отсутствует возрастное снижение показателя, характерное для контроля. В экспериментальных группах выявлено необратимое увеличение плотности астроцитов, более выраженное в предстарче-ском возрасте.
Заключение. Нейротоксическое воздействие на фоне возрастных дегенеративных изменений в обонятельных луковицах у крыс предстарческого возраста приводит к развитию выраженной компенсаторной реакции в виде длительного сохранения стабильного уровня прогениторов. Затем наблюдается усугубление возрастных дегенеративных изменений и усиление астроглиоза.
Ключевые слова: нейрогенез, обонятельная луковица, реактивный глиоз, возрастной глиоз, даблкортин, капсаицин.
Для цитирования: Пожилов Д. А., Румянцева Т. А., Пожаров А. С. Особенности течения нейродистрофического процесса в обонятельных луковицах крыс репродуктивного и предстарческого возрастов // Оренбургский медицинский вестник. 2024. Т. ХП, № 4 (48). С. 22-26. Рукопись получена: 10.10.2024 Рукопись одобрена: 15.11.2024 Опубликована: 15.12.2024
DMITRIJ A. POZHILOV1, TATYANA A. RUMIANTSEVA1, ARSENY S. POZHAROV2
FEATURES OF THE NEURODYSTROPHIC PROCESS IN THE OLFACTORY BULB
OF ADULT AND PRESENILE RATS
1 Yaroslavl State Medical University, Yaroslavl, Russian Federation
2 Yaroslavl State University named after P. G. Demidov, Yaroslavl, Russian Federation
_ ABSTRACT_
Introduction. Studying age-related features of direction and severity of compensatory reactions is a prerequisite for determining therapy targets. The olfactory bulb is the final point of migration of progenitors from the brain stem niches, which allows one to assess the potential for compensation by neurogenesis and the glial response using markers of migrating neuroblasts (DCX) and astrocytes (GFAP).
Objective. To establish age-related features of changes in the olfactory bulbs of rats during modeling of the neurodystrophic process in presenile and reproductive ages.
Materials and methods. For modeling, subcutaneous administration of the neurotoxin capsaicin (pepper alkaloid) at a dosage of30, 30 and 60 mg/kg body weight every other day was used in rats of reproductive and pre-senile ages. Sham-treated rats served as a control. A total of 90 animals. The numerical density of DCX-
and GFAP-positive cells in the granular and glomerular layers of the olfactory bulb were estimated.
Results. In pre-senile age, a decrease in the density of progenitor cells and an increase in involutional changes are observed in the olfactory bulb of rats. In reproductive age, the cellular composition is stable. The death of some neurons causes activation of neurogenesis in reproductive-age rats in the form of an increase in the density of DCX progenitors in the bulb layers, which levels out within a month. In pre-senile age, the density of progenitors does not increase, but there is no age-related decrease in the indicator, characteristic of the control. In the experimental groups, an irreversible increase in the density of astrocytes was revealed, more pronounced in pre-senile age.
Conclusion. Neurotoxic effects against the background of age-related degenerative changes in the olfactory bulbs of pre-se-
nile rats lead to the development of a pronounced compensatory reaction in the form of long-term maintenance of a stable level of progenitors. Then, there is an aggravation of age-related degenerative changes and an increase in astrogliosis.
ВВЕДЕНИЕ
Нейрогенез (образование новых нейронов) во взрослом возрасте - сравнительно недавно обнаруженное, но достаточно подробно изученное явление [1-3]. Несколько менее изучена активация нейрогенеза при различных патологических состояниях [4-6], и еще меньше исследователей сосредоточены на возрастных аспектах течения нейродегенеративных и регенеративных процессов [7]. В этой работе мы постарались ответить на некоторые вопросы, связанные с особенностями компенсаторно-приспособительных реакций в обонятельной луковице крыс предстарческого возраста.
ЦЕЛЬ исследования — выявить возрастные особенности компенсаторно-приспособительных изменений в обонятельных луковицах крыс при нейродистрофи-ческом процессе, вызванном введением капсаицина. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работа выполнена на 90 белых крысах-самцах линии Wistar репродуктивного (180-240 сут.) и предстарческого (540-600 сут.) возрастов, разделенных на контрольную и экспериментальную группы. Нейродистрофический процесс у экспериментальных животных моделировали введением алкалоида перца капсаицина трехкратно с интервалом в сутки, подкожно в дозировке 30, 30 и 60 мг/кг массы тела соответственно [8]. Животные выводились из эксперимента на 15, 30, 45 и 60-е сутки. Продолжительность сроков наблюдения основывается на работах Т. А. Румянцевой, Л. С. Агаджановой, Д. А. Пожилова [9, 10], в которых установлено, что капсаицин-чувствительные нейроны гибнут в ближайшие сроки после введения (в течение 30 суток). Забирали правые обонятельные луковицы (ОЛ) с участками лобной и теменной долей полушарий головного мозга.
Для иммуногистохимического исследования были выбраны маркеры, специфичные для субпопуляций клеток, вовлеченных в нейродистрофический процесс. Даблкортин (DCX) определяется в проходящих диффе-ренцировку и мигрирующих нейробластах [1]. Кислый фибриллярный белок астроцитов (GFAP) является основным маркером зрелых клеток астроглии и прогени-торов соответствующего направления [4].
При световой микроскопии на каждом срезе в 50 полях зрения оценивалась численная плотность DCX+ и GFAP+ клеток (шт/мм2) в гломерулярном и гранулярном слоях ОЛ.
При статистической обработке данных использовали методы описательной и вариационной статистики в Statistica 10, Microsoft Excel 2010. Характер распределения данных определяли с помощью критериев Шапиро - Уилка и Колмогорова - Смирнова. Для оценки
Key words: neurogenesis, olfactory bulb, reactive gliosis, age-related gliosis, doublecortin, capsaicin.
достоверности различий при нормальном распределении использовали критерий Стьюдента, при отличном от нормального - непараметрический критерий Уилкоксона. Достоверными считали различия при значении р < 0,05. РЕЗУЛЬТАТЫ
Тела DCX+ нейробластов имеют округлую или ово-идную форму с одним слабоизвитым неветвящимся отростком. По мере продвижения через гранулярный слой ОЛ отростки клеток приобретают радиальное направление. В гломерулярном слое DCX+ клетки не имеют позитивных отростков, включены в состав клубочков.
Данные о численной плотности нейробластов показывают, что в период с 180 по 240 сутки клеточный состав слоев ОЛ стабилен, и только в предстарческом периоде от 540 до 600 суток наступает ее прогрессивное снижение, особенно выраженное на периферии, в гломерулярном слое (табл. 1) (р < 0,05 для соседних сроков). Стабильность показателя в зрелом возрасте на фоне описанного в литературе снижения интенсивности нейрогенеза может также свидетельствовать о низком фоновом уровне апоптоза или существовании «микродоменов» нервных стволовых клеток в самой ОЛ [2, 11].
Астроциты визуализируются как клетки округлой или полигональной формы со светлым ядром и с 3-5 извитыми ветвящимися отростками. Значения численной плотности приведены в таблице 2. Если в репродуктивном возрасте показатель стабилен, то в предстарческом на протяжении всего наблюдения происходит рост численной плотности астроцитов во всех слоях (р < 0,05 для соседних сроков), то есть отмечается нарастание астроцитарного глиоза, обоснованное тем, что помимо структурной и регуляторной функции астроциты также отвечают за фагоцитоз закономерно погибающих ней-робластов и зрелых нейронов [3, 12].
После введения капсаицина животным репродуктивного возраста характер распределения маркеров в клетках сохраняется. Нейротоксическое воздействие в этом возрасте приводит к постепенному возрастанию численной плотности DCX+ клеток на 18-26 % к 30-м суткам эксперимента в разных слоях (табл. 1). После волнообразного подъема показатель возвращается к контрольному уровню в конце наблюдения.
Аналогичная острая реакция на повреждение с подъемом экспрессии даблкортина на 15-е сутки и дальнейшим снижением описана в литературе на других экспериментальных моделях [5, 13]. Одним из факторов, стимулирующих образование новых нейронов, является усиление апоптоза гранулярных клеток ОЛ в ответ на прямое токсическое действие капсаицина [6]. Ряд работ доказывают, что новые прогениторы из субвентрикулярной зоны, до-
For citation: Pozhilov D. A., Rumiantseva T. A., Pozharov A. S. Features of the neurodystrophic process in the olfactory bulb of adult and presenile rats. Orenburg Medical Bulletin. 2024;ХП;4(48):22-26. (In Russia). Received: 10.10.2024 Accepted: 15.11.2024 Published: 15.12.2024
стигая мест назначения, интегрируются в разные слои ОЛ, становясь зрелыми интернейронами, тем самым подтверждая компенсаторный характер нейрогенеза [1].
Динамика численной плотности астроцитов в слоях ОЛ при введении капсаицина в репродуктивном возрасте однотипна - резкое увеличение до 45-48 %. Плотность клеток максимально увеличивается к 30-м суткам эксперимента (табл. 2), что соответствует длительности острой фазы реактивного глиоза (4-5 недель). На протяжении от 30 до 60 суток значимого затухания реактивного глиоза в зрелом возрасте не происходит (р > 0,05 для соседних сроков).
Введение капсаицина животным предстарческого возраста не приводит к достоверному нарастанию численной плотности DCX+ прогениторов в гломерулярном слое в первые 30 суток наблюдения. Но с учетом динамики показателя в контрольной группе отмечается превышение на 14 %, т. е. не происходит возрастного снижения показателя (табл. 1).
В гранулярном слое относительная плотность DCX+ клеток сохраняется без достоверных изменений до 45 суток эксперимента, на 60-е сутки - снижается на 30 % (табл. 2). Сравнение с контролем показывает, что различия проявляются только на 45-е сутки эксперимента, когда показатель превышает возрастную норму на 13 %. К 60-м суткам эксперимента плотность снижается до значений, близких к возрастной норме (р > 0,05).
Таким образом, введение капсаицина крысам пред-старческого возраста нарушает нормальную возрастную динамику, для которой характерно постепенное снижение плотности прогениторов. Наблюдаемый эффект в течение последующего месяца нивелируется.
В экспериментальном исследовании К. Shetty с соавторами [7] получены сходные данные по экспрессии DCX в гиппокампе после деафферентации (значительное повышение в молодом и зрелом возрасте, но не в старческом).
Численная плотность астроцитов при введении капсаицина постепенно увеличивается во всех слоях ОЛ.
Таблица 1 - Численная плотность DCX+ клеток в слоях обонятельной луковицы, шт/мм2, данные представлены в виде «среднее арифметическое ± стандартное отклонение» (x ± а) Table 1 - The numerical density of DCX+ cells in the layers of the olfactory bulb, pcs/mm2, data are presented as «mean ± standard deviation» (x ± а)
Возраст (срок эксперимента), сут. Гломерулярный слой Гранулярный слой
Контроль Эксперимент Контроль Эксперимент
Репродуктивный возраст 180 (0) 551 ± 39,9* 551 ± 39,9 528 ± 63,7* 528 ± 63,7
195 (15) 576 ± 27,1 615 ± 23,4*° 536 ± 51,2 589 ± 38,2°
210 (30) 537 ± 48,6 638 ± 56,2° 543 ± 28,5 684 ± 31,5*°
225 (45) 552 ± 28,9 618 ± 26,7° 548 ± 27,1 661 ± 21,6°
240 (60) 582 ± 32,6 595 ± 34,7 532 ± 21,5 532 ± 22,7*°
Предстарческий возраст 540 (0) 491 ± 32,7* 491 ± 32,7 398 ± 31,5* 398 ± 31,5
555 (15) 462 ± 26,7 451 ± 43,9 382 ± 32,2 371 ± 34,5
570 (30) 421 ± 22,1 483 ± 27,1 391 ± 21,5 405 ± 39,2
585 (45) 380 ± 16,3* 406 ± 28,1*° 341 ± 24,1* 391 ± 18,3°
600 (60) 326 ± 36,2* 374 ± 36,4 293 ± 31,7 273 ± 28,0
* Достоверно различается по отношению к предыдущему сроку. ° Достоверно различается по отношению к контрольной группе.
Таблица 2 - Численная плотность астроцитов в слоях обонятельной луковицы, шт/мм2, данные представлены в виде «среднее арифметическое ± стандартное отклонение» (x ± а) Table 2 - Numerical density of astrocytes in the layers of the olfactory bulb, pcs/mm2, data are presented as «mean ± standard deviation» (x ± а)
Возраст (срок эксперимента), сут. Гломерулярный слой Гранулярный слой
Контроль Эксперимент Контроль Эксперимент
Репродуктивный возраст 180 (0) 375 ± 32,2* 375 ± 32,2* 173 ± 16,6 173 ± 16,6
195 (15) 346 ± 22,7 452 ± 28,5* 178 ± 17,5 245 ± 13,7*°
210 (30) 351 ± 21,8 668 ± 35,8*° 170 ± 12,1 307 ± 24,8*°
225 (45) 338 ± 23,1 652 ± 31,7° 182 ± 11,2 310 ± 17,4°
240 (60) 368 ± 34,1 625 ± 32,4 189 ± 24,5 284 ± 35,1°
Предстарческий возраст 540 (0) 422 ± 24,3 422 ± 24,3 263 ± 21,7 263 ± 21,7
555 (15) 489 ± 28,1* 491 ± 31,1* 251 ± 28,9 333 ± 22,6*°
570 (30) 431 ± 41,2 518 ± 27,6° 278 ± 22,4 363 ± 29,5°
585 (45) 523 ± 42,8* 591 ± 37,4*° 351 ± 21,8* 391 ± 31,5°
600 (60) 544 ± 48,6 612 ± 29,0° 401 ± 22,7* 452 ± 39,7°
* Достоверно различается по отношению к предыдущему сроку. ° Достоверно различается по отношению к контрольной группе.
Отмечается выраженный градиент повышения плотности: в центральной части и гранулярном слое изменения достоверны на 15-30-е сутки, гломерулярном - только на 45-60-е сутки. Численная плотность астроцитов к концу наблюдения во всех слоях превышает возрастной контроль. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Сравнение показателей экспериментальных групп репродуктивного и предстарческого возрастов показывает, что у последних нейродистрофический процесс
_ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ_
1. Shapiro L. A., Ng K., Zhou Q. Y., Ribak C. E. Subventricular zone-derived, newly generated neurons populate several olfactory and limbic forebrain regions // Epilepsy Behav. - 2009 Jan. - 14 Suppl 1 (Suppl 1). - Р. 74-80.
2. Merkle F. T., Fuentealba L. C., Sanders T. A. et al. Adult neural Sem cells in diSinct microdomains generate previously unknown interneuron types // Nat. Neurosci. - 2014. - № 17. - P. 207-214.
3. Lee J. H., Kim Jy., Noh S. et al. ASrocytes phagocytose adult hippocampal synapses for circuit homeoSasis // Nature. - 2021. - № 590. - P. 612-617.
4. Araki T., Ikegaya Y., Koyama R. The effects of microglia- and aSrocyte-de-rived factors on neurogenesis in health and disease // Eur J Neurosci. - 2021. -№ 54(5). - Р. 5880-5901.
5. Zuo Y., Wang J., Enkhjargal B. et al. Neurogenesis changes and the fate of progenitor cells after subarachnoid hemorrhage in rats // Experimental Neurology. - 2019. - № 311. - P. 274-284.
6. Corotto F. S., Henegar J. R., Maruniak J. A. Odor deprivation leads to reduced neurogenesis and reduced neuronal survival in the olfactory bulb of the adult mouse // Neuroscience. - 1994. - № 61. - P. 739-744.
7. Ashok K. Shetty, Bharathi Hattiangady, Muddanna S. Rao, Bing Shuai. Deafferentation Enhances Neurogenesis in the Young and Middle Aged but not in the Aged Hippocampus Hippocampus // Hippocampus. - 2011. -№ 21 (6). - P. 631-646.
_REFERENCES_
1. Shapiro L. A., Ng K., Zhou Q. Y., Ribak C. E. Subventricular zone-derived, newly generated neurons populate several olfactory and limbic forebrain regions. Epilepsy Behav. 2009 Jan; 14 Suppl 1 (Suppl 1):74-80.
2. Merkle F. T., Fuentealba L. C., Sanders T. A. et al. Adult neural &em cells in diSinct microdomains generate previously unknown interneuron types. Nat. Neurosci. 2014;17:207-214.
3. Lee J. H., Kim Jy., Noh S. et al. ASrocytes phagocytose adult hippocampal synapses for circuit homeoSasis. Nature. 2021;590:612-617.
4. Araki T., Ikegaya Y., Koyama R. The effects of microglia- and aSrocyte-derived factors on neurogenesis in health and disease. Eur J Neurosci. 2021;54(5):5880-5901.
5. Zuo Y., Wang J., Enkhjargal B. et al. Neurogenesis changes and the fate of progenitor cells after subarachnoid hemorrhage in rats. Experimental Neurology. 2019;311:274-284.
6. Corotto F. S., Henegar J. R., Maruniak J. A. Odor deprivation leads to reduced neurogenesis and reduced neuronal survival in the olfactory bulb of the adult mouse. Neuroscience. 1994;61:739-744.
7. Ashok K. Shetty, Bharathi Hattiangady, Muddanna S. Rao, Bing Shuai. Deafferentation Enhances Neurogenesis in the Young and Middle
накладывается на возрастные дегенеративные изменения и усугубляет их. Это подтверждается меньшей интенсивностью нейрогенеза, более высоким процентом гибнущих нейронов, отсутствием тенденции квосстанов-лению их численности, а также более высокими показателями численной плотности астроцитов. Тем не менее отмечается выраженная компенсаторная реакция в виде длительного сохранения стабильного уровня прогени-торов, особенно в гранулярном слое, что нехарактерно для контрольной группы.
8. Патент № 2674086 C1 Российская Федерация, МПК G09B 23/28, A61K 31/16, A61P 25/00. Способ моделирования нейродегенеративно-го заболевания у половозрелых лабораторных крыс: № 2018110503: заявл. 23.03.2018: опубл. 4.12.2018 / О. А. Знаткова, В. Е. Варенцов, Т. А. Румянцева, Д. А. Пожилов; заявитель: федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Ярославский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
9. Румянцева Т. А. Клеточный состав спинномозгового узла белой крысы после неонатального введения // Морфология. - 2000. - Т. 118, № 5. - С. 22.
10. Пожилов Д. А., Румянцева Т. А., Накибулла Д. А., Агаджанова Л. С. Реакция астроцитарной глии на острое нейротоксическое воздействие у крыс разного // Вестник новых медицинских технологий. -2022. - Т. 29, № 3. - С. 78-82.
11. Mannino G., Russo С., Maugeri G. et al. Adult Sem cell niches for tissue homeostasis // J Cell Physiol. - 2022. - № 237(1). - P. 239-257.
12. Pekny M., Pekna M., Steinhäuser С. et al. ASrocytes: a central element in neurological diseases // Acta Neuropathologica. - 2016. - № 131. - P. 323-345.
13. Cummings D. M., Brunjes P. C. The effects of variable periods offunctional deprivation on olfactory bulb development in rats // Exp Neurol. - 1997. -№ 148. - P. 360-366.
Aged but not in the Aged Hippocampus Hippocampus. Hippocampus. 2011;21(6):631-646.
8. Patent № 2674086 C1 Russian Federation, Int.Cl. G09B 23/28, A61K 31/16, A61P 25/00. Methodofmodeling neurodegenerative diseases in adult laboratory rodents: № 2018110503: appl. 23.03.2018: publ. 04.12.2018 / O. A. Znatkova, V. E. BapeH^B, T. A. Rumyantseva, D. A. Pozhilov. (In Russian)
9. Rumyantseva T. A. Cellular composition of the spinal ganglion of a white rat after neonatal adminiSration. Morphology. 2000;118;5:22. (In Russian)
10. Pozhilov D. A., Rumyantseva T. A., Nakibulla D. A., Agadzhanova L. S. Response of aSrocytic glia to acute neurotoxic effect in rats of different ages. Journal of New Medical Technologies. 2022;3:78-82. (In Russian)
11. Mannino G., Russo C., Maugeri G. et al. Adult Sem cell niches for tissue homeoSasis. J Cell Physiol. 2022;237(1):239-257.
12. Pekny M., Pekna M., Steinhäuser C. et al. ASrocytes: a central element in neurological diseases. Acta Neuropathologica. 2016;131:323-345.
13. Cummings D. M., Brunjes P. C. The effects of variable periods of functional deprivation on olfactory bulb development in rats. Exp Neurol. 1997;148:360-366.
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ/ADDITIONAL INFORMATION
Вклад авторов. Д. А. Пожилов - постановка эксперимента, проведение иммуногистохимического исследования, статистическая обработка материала, написание текста статьи; Т. А. Румянцева - формулирование научной концепции исследования, организация и методическое обеспечение исследования, написание и редактирование текста статьи; А. С. Пожаров - участие в постановке эксперимента и гистологической окраске.
Author contribution. D. A. Pozhilov - setting up the experiment, conducting the immunohistochemical study, statistical processing of the material, writing the text of the article; T. A. Rumyantseva - formulating the scientific concept of the study, organizing and providing methodological support for the study, writing and editing the text of the article; A. S. Pozharov - participation in setting up the experiment and histological staining. Соблюдение этических стандартов. Эксперимент одобрен Этическим комитетом ФГБОУ ВО ЯГМУ Минздрава России (протокол № 19 от 26.10.17). Животные содержались в стандартных условиях на рационе вивария. Все процедуры проводили согласно ГОСТ 33215-2014 Правила оборудования помещений и организации процедур при работе с лабораторными животными, СанПиН 2.2.1.3218-14 Санитарно-
эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник и вивариев, ГОСТ 33216-2014 Правила лабораторных работ с грызунами и кроликами.
Compliance with ethical standards. The experiment was approved by the Ethics Committee of the Yaroslavl State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation (protocol No. 19, dated 10/26/17). The animals were kept under standard conditions on a vivarium diet. All procedures were carried out in accordance with GOST 33215-2014 Rules for equipping premises and organizing procedures when working with laboratory animals, SanPiN 2.2.1.3218-14 Sanitary and epidemiological requirements for the arrangement, equipment and maintenance of experimental biological clinics and vivariums, GOST 33216-2014 Rules for laboratory work with rodents and rabbits. Финансирование. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования. Funding source. This study was not supported by any external sources of funding.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Competing interests. The authors declare that there are no obvious and potential conflicts of interest associated with the publication of this article.
. ОБ АВТОРАХ-
Дмитрий Алексеевич Пожилов,
ассистент;
ORCID: 0000-0002-4086-8272; e-mail: [email protected] * Татьяна Анатольевна Румянцева,
д. м. н., профессор;
адрес: 150000, Ярославль, ул. Революционная, 5; ORCID: 0000-0002-8035-4065; e-mail: [email protected]
. AUTHORS INFO_
Dmitrij A. Pozhilov,
assistant;
ORCID: 0000-0002-4086-8272; e-mail: [email protected] * Tatyana A. Rumiantseva,
Doctor of medicine, professor;
address: 150000, Yaroslavl, Revolyucionnaya str., 5;
ORCID: 0000-0002-8035-4065;
e-mail: [email protected]
Арсений Сергеевич Пожаров,
студент;
ORCID: 0009-0007-2488-5746; e-mail: [email protected]
Arseny S. Pozharov,
student;
ORCID: 0009-0007-2488-5746; e-mail: [email protected]
f Автор, ответственный за переписку / Corresponding author
