CC BY
27
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ АУТОИММУНИТЕТА ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ И СИНДРОМЕ СОЧЕТАНИЯ С ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЛЕГКИХ
Конищева А.Ю.1, Гервазиева В.Б.1, Оспельникова Т.П.2
1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия 2 ФГБУ «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии» им Н.Ф. Гамалеи», Москва, Россия
Хронические заболевания органов дыхания, такие как бронхиальная астма (БА) и хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), представляют одну из значимых проблем здравоохранения в мире. Самостоятельный синдром сочетания БА и ХОБЛ (ACOS — англ.), впервые выделенный в версии GINA-пересмотра 2014, характеризуется стойким ограничением воздушного потока в сочетании с худшим прогнозом, более частыми и тяжелыми обострениями и высокой скоростью регресса легочной функции. Предпосылки существования патогенетической взаимосвязи между аутоиммунитетом и хроническими иммуноо-посредованными заболеваниями респираторной системы подтверждаются данными исследований, свидетельствующими о наличии аутоАТ IgG классов к различным тканевым белкам у больных тяжелой формой астмы и ХОБЛ. Ранее в нашей лаборатории был разработан метод твердофазного ИФА для определения IgG-и ^Е-антител к некоторым тканевым антигенам и выявлено их повышенное содержание в сыворотке крови при аллергической форме БА и атопическом дерматите.
Задачей данной работы явилось дальнейшее исследование ^Е аутореактивности и оценка IgG4-аутоАТ в группах пациентов БА с установленным персистирующим ограничением воздушного потока и тяжелым течением заболевания. Были исследованы 48 пациентов с синдромом сочетания БА и ХОБЛ в сравнении с 83 больными БА различной степени тяжести (средний возраст 49±17 лет), ранжированными по полу, возрасту и параметрам ФВД. Группу контроля составили 30 условно здоровых лиц.
В сыворотке крови методом ИФА определяли содержание общего ^Е, а также количественное содержание ^Е- и IgG4-АТ к некоторым тканевым антигенам — эпителиальному кератину, коллагену III и VI типов, миозину и эластину с помощью конъюгатов моноклональных АТ и референс-реагентов ^Е и IgG4 для калибровочной кривой («Полигност», Санкт-Петербург). Количественное содержание цитокинов Ш-4, Ш-6, Ш-8, TGF-P1, ТОТа и интерферонов IFNа, №N7 определяли в образцах индуцированной мокроты и сыворотках крови с помощью ИФА наборов производства ЗАО «Вектор-Бест» (Россия).
Содержание общего ^Е в сыворотках крови пациентов с БА составило 518 (90; 560) и 128 (6; 311) МЕ/мл у лиц при сочетанном синдроме (ACOS). Уровень ^Е ответа ко всем исследуемым АГ достоверно возрастал у пациентов с БА с более чем 5-летним стажем заболевания в сравнении с группой пациентов, у которых диагноз БА был установлен в течение последних 6 месяцев (р < 0,005). Наибольшая частота выявления ^Е-аутоАТ отмечена при БА тяжелого течения. Вклад ^Е-АТ к исследуемым ауто-АГ в поддержание аллергического воспаления у пациентов с БА подтверждается выявленными положительными корреляциями между уровнем общего ^Е и содержанием ^Е-
аутоАТ к коллагену III типа (г = +0,3), эластину (г = +0,43) и миозину (г = +0,39). Следует отметить, что среди пациентов с сочетанным синдромом частота выявления IgE-аутоАТ к эндотелиальному антигену миозину была максимально высокой (69%), а их уровень был значимо выше (4,1±0,3 МЕ/мл), чем у пациентов с БА (2,3±0,053 МЕ/мл, p < 0,005). При этом было отмечено снижение содержания IgG4-AT ко всем аутоАГ у пациентов с БА тяжелого течения [3750 (2960/5100) нг/мл], в сравнении с легким течением заболевания (р < 0,02), и которое было наиболее выражено среди лиц с сочетанием БА и ХОБЛ. Нами установлена прямая корреляция между уровнем IL-4 и IgE-аутоАТ к эластину (г = +0,57), коллагену III типа (г = +0,6), кератину (г = +0,4) и миозину (г = +0,34) в сыворотках крови больных БА персистирующего течения. Вывялена также обратная корреляция между IgE- и IgG4-аутоАТ (г = -0,55). Важно отметить, что содержание IgG4-аутоАТ находилось в прямой корреляции с сывороточным уровнем IL-10 (г = +0,7) у больных БА и ассоциировалось с избыточной спонтанной продукцией IL-8 при сочетанном ACOS синдроме. Далее было обнаружено, что в образцах индуцированной мокроты у пациентов с БА и повышенным содержанием IgG4-аутоAТ определяется достоверно более высокое содержание профиброгенного цитокина TGF-ß1 [8,9 (6,7/21) пг/мл] и IL-4 [240 (115/580) пг/мл]. Было отмечено также, что у 11 пациентов с сочетанным синдромом ^COS) повышенное содержание IgG4-аутоАТ ассоциировало с более низким уровнем спонтанной продукции IL-17 [18(52,3/3,4)] и сопровождалось увеличением спонтанной продукции IL-8 [3585(60/12500) пг/мл]. У 65% пациентов в этой группе отмечалось осложненное течение заболевания, сопровождающееся формированием легочной эмфиземы (согласно данным КТ органов грудной клетки) и характеризующееся преобладанием IgE-АТ к коллагену 3 типа и эластину (р = 0,006) и более низким уровнем IgG4-аутоАТ к указанным антигенам.
Таким образом, можно сделать выводы об участии аутореактивности в механизмах прогрессии БА и ХОБЛ. При этом детекция в сыворотке IgE и IgG4^T к кератину, коллагену, эластину и миозину может быть использована для клинико-иммунологического мониторинга течения БА, особенно при сочетанном фенотипе с ХОБЛ, осложненном легочной эмфиземой.
ОСОБЕННОСТИ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ САРКОИДОЗОМ
Кудрявцев И.В.1, 2, Баранова О.П.1, Лазарева Н.М.1, Серебрякова М.К.2, Илькович М.М.1, Сесь Т.П.1
1 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
Саркоидоз — полисистемное заболевание неизвестной этиологии, характеризующееся развитием иммунного воспаления с формированием эпителиоидноклеточ-ных гранулем без некроза с исходом чаще в рассасывание и реже — в фиброз. Факторы, определяющие особенности клинического течения саркоидоза (разрешение гранулемы или прогрессирование фироза) остаются не достаточно изученными. Предполагают, что ремиссия возникает при клиренсе антигена посредством выраженной ТЫ-клеточной
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
реакции и восстановления регуляторных Т-клеток, а также нарушения в гуморальном звене иммунитета. Для более полной характеристики особенностей иммунопатогенеза саркоидоза необходимо тщательное изучение механизмов и межклеточных взаимодействий. Анализ состава Ти В-лимфоцитов в периферической крови был выполнен у больных саркоидозом (п = 40) и у условно здоровых добровольцев (п = 47), подбор группы сравнения осуществлялся с учетом возрастного и полового состава больных саркоидозом. Исследования выполнены с помощью метода многоцветной проточной цитометрии. Относительное содержание Т-хелперов (ТЪ) в периферической крови достоверно не различалось между группами, однако абсолютное содержание ТЪ у больных было снижено (р < 0,001) до 605 (483; 757) кл/мкл по сравнению с группой контроля 757 (670; 923) кл/мкл. Анализ уровня дифференцировки ТЪ выявил снижение как относительного, так и абсолютного числа клеток памяти с фенотипами CD27+CD28+CD45RA-CD62L+ (с 40,04% (35,44; 47,36) до 28,81% (25,58; 35,16) и с 299 (257; 377) до 181 (128; 245) кл/мкл (р < 0,001) и клеток памяти с фенотипами CD27+CD28+CD45RA-CD62L-(с 15,97% (12,22; 20,11) до 11,18% (8,70; 15,16) и с 119 (99; 165) до 62 (49; 101) кл/мкл (р < 0,001). Относительное и абсолютное число «наивных» ТЪ было сопоставимо у больных саркоидозом и в группе сравнения, в то время как число зрелых эффекторных CD27-CD28- ТЪ у больных саркоидозом было достоверно выше (р = 0,001). Известно, что именно эти субпопуляции (клетки памяти CD27+CD28+CD45RA-CD62L+ и CD27+CD28+CD45RA-CD62L-) «патрулируют» периферические лимфоидные органы и способны мигрировать в воспаленные ткани соответственно. Таким образом, на фоне общей анергии Т-звена иммунного ответа на периферии, при более детальном анализе субпопуляций Т-лимфоцитов у больных саркоидозом выявлено существенное повышение числа Т-клеток-эффекторов, мигрирующих в очаги воспаления. При изучении регуляции гуморального ответа установлено снижение относительного числе «циркулирующих» фолликулярных ТЪ (Т£Ъ) с фенотипом CD45RA-CXCR5+ с 18,29% (14,48; 21,37) до 14,07% (10,32; 16,22) (р < 0,001) у больных саркоидозом. Существенные изменения выявлены и в субпопуляционном составе Т£Ъ у больных отмечено снижение СХСЯ5+СХСК3+ ТЫ с 3,63% (2,43; 5,12) до 2,10% (1,42; 2,53) (р < 0,001) и СХСЯ5+ССЯ6+ ТШ7 с 3,63% (2,43; 5,12) до 1,31% (0,85; 1,65) (р = 0,001), при повышенном числе CXCR5+CCR4+ Т&2 (р = 0,001). Изменение «баланса» между субпопуляциями «циркулирующих» фолликулярных Т1Ъ (ТШ — с одной стороны и Т1Ъ2 и Т&17 — с другой) рассматривается в качестве важнейшего признака нарушения гуморального ответа, так как Т1Ъ2 и Т&17 играют ведущую роль в регуляции механизмов переключения классов синтезируемых иммуноглобулинов. При анализе общего числа В-лимфоцитов не было выявлено достоверных различий у больных сарко-идозом (12,41%, 8,25; 16,42) — и в группе здоровых — 13,78% (9,71; 15,48) (р = 0,675). Однако более углубленный анализ В-лимфоцитов с учетом стадий их дифференцировки по интенсивности ко-экспрессии CD27 и IgD молекул показал, что 77,31% В-лимфоцитов периферической крови больных саркоидозом (66,79; 81,35) обладали «наивным» фенотипом IgD+CD27-, в группе контроля — 60,91% (54,15; 72,42) (р < 0,001). При этом у больных саркоидозом снижено число В-клеток памяти с фенотипом IgD+CD27+ (7,56% [5,07; 10,34] и 12,95% [9,37; 19,69] [р < 0,001]) и IgD-CD27+ (10,34% [7,06; 14,73] и 16,50% [13,00; 21,91] [р < 0,001]).Уста-новлена достоверная корреляционная связь между числом
Tfh17 и уровнем зрелых В-клеток памяти, в геноме которых произошло переключение с IgM на другие классы иммуноглобулинов (г = 0,502 при р < 0,001). Таким образом, при анализе субпопуляционного состава Т- и В-лимфоцитов в периферической крови больных саркоидозом выявлены новые закономерности регуляции субпопуляций Ти В-лимфоцитов, как на уровне эффекторных клеток, так и на уровне клеток иммунологической памяти.
ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ МИШЕНИ ПУЛЬС-ТЕРАПИИ ГЛЮКОКОРТИКОИДАМИ У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМИ АРТРИТОМ
Курочкина Ю.Д., Тихонова М.А., Тыринова Т.В., Олейник Е.А., Сизиков А.Э., Чумасова О.А., Коненкова Л.П., Сулутьян А.Э., Останин А.А.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
Введение. Дендритные клетки (ДК) играют важную роль в патогенезе ревматоидного артрита (РА), обладая способностью презентировать хрящевые гликопротеины, продуцировать провоспалительные цитокины и активировать Т-клетки к продукции Th1- и ТЫ7-цитокинов. Наряду со стимулирующей активностью, ДК могут оказывать толерогенный эффект посредством индукции апоптоза/анергии Т-лимфоцитов и генерации регуляторных Т-клеток. Поскольку такие ДК являются негативными регуляторами аутореактивных Т-лимфоцитов, усиление толерогенного потенциала ДК рассматривается в качестве новой стратегии лечения РА. Ранее нами показано, что дексаметазон in vitro ингибирует созревание, продукцию провоспалительных цитокинов и аллости-муляторную активность ДК больных РА, генерируемых из моноцитов в присутствии GM-CSF и интерферона-а (IFN-ДК). Однако влияют ли глюкокортикоиды на способность INF-ДК больных активировать аутологичные Т-клетки и воспроизводится ли данный эффект in vivo на фоне пульс-терапии глюкокортикоидами, остается неисследованным.
Цель и задачи. Изучить влияния дексаметазона на способность ДК больных РА стимулировать пролиферацию аутологичных Т-клеток in vitro и оценить аутости-муляторную активность INF-ДК в динамике до и после пульс-терапии глюкокортикоидами ex vivo.
Материалы и методы. В исследование было включено 10 пациентов с РА с высокой и умеренной активностью заболевания (DAS 28 > 3,1). Генерацию ДК и оценку их свойств проводили до проведения пульс-терапии метил-преднизолоном 500 мг № 3 и после пульс-терапии. ДК генерировали путем культивирования моноцитов в течение 5 суток с GM-CSF и IFNa в отсутствие и присутствии декасаметазона, вносимого на 3 сутки. LPS в качестве дозревающего стимула вносили на 4 сутки. Функцию ДК оценивали по способности стимулировать пролиферацию аллогенных (алло-СКЛ) и аутологичных (ауто-СКЛ) мононуклеарных клеток (МНК).
Результаты. Генерированные в присутствии дексаме-тазона ДК больных обладали меньшей стимуляторной активностью как в алло-СКЛ (p = 0,01), так и в ауто-СКЛ (p = 0,05). Ингибирующий эффект дексаметазона на стимуляторную активность в алло-СКЛ составлял 49% (LQ-UQ 38-55%), в ауто-СКЛ - 57% (LQ-UQ 38-55 %). Сравнение стимуляторной активности ДК до и после
