CC BY
8
Всероссийская научно-практическая
конференция с международным участием Санкт-Петербург
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ» 30-31 мая 2019 г.
В. И. Ругаль1, Н. Ю. Семенова1, С. С. Бессмельцев1, С. В. Грицаев1, И. И. Кострома1, З. Е. Артюхина1, А. В. Чубарь2, Н. И. Енукашвили2
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург;
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт цитологии Российской академии наук, г. Санкт-Петербург
ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУР ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ НИШИ И МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ
Введение. Анализ трансформации нормального микроокружения в опухолевое у больных множественной миеломой (ММ) важен для получения новых данных о факторах, влияющих на появление и становление лейкозного клона при этом заболевании, а также для раскрытия причин развития костной болезни. В решении этой задачи особое значение приобретает изучение структур гемопоэтической ниши, которые одновременно определяют развитие ГСК и непосредственно участвуют в остеогенезе.
Цель. Выявить особенности структурной организации элементов гемопоэтической ниши костного мозга и функциональных свойств ме-зенхимных стромальных клеток (МСК) у больных ММ и оценить влияние на их состояние проводимой терапии, включая АутоТГСК.
Материал и методы. Материалом исследования послужили цельные фрагменты подвздошной кости 32 больных ММ в возрасте от 48 до 78 лет (медиана возраста 56 лет). Пациенты были разделены на группы: 1 группа — дебют заболевания (впервые выявленная ММ, не получавшие терапию, 20 человек); 2 группа — прогрессирующая ММ после проведенного лечения (химиотерапия по схемам VD, CVD; АутоТГСК, 12 пациентов). В исследовании применяли гистологические, гистохимические и иммуногистохимические (ИГХ) методы. МСК изучены in vitro.
Результаты. В костном мозге (КМ) установлены изменения стромальных нишеобразую-щих элементов: повышение площади микрососудов, увеличение количества эндостальных стромальных клеток, появление эндостальных и периваскулярных очагов ретикулинового склероза. Остеолизис наблюдался у пациентов со всеми типами инфильтрации КМ, и встречались случаи ярко выраженного остеолизиса при минимальном поражении КМ опухолевыми клетками. Ретикулиновый рисунок у пациентов всех групп был увеличен по сравнению с контролем. Миелофиброз 1 или 2 стадии отмечался у 9 пациентов (45 %) из 1 группы и у 8 пациен-
тов (68 %) из 2 группы. Площадь сосудов КМ при диффузной инфильтрации КМ была больше, чем в контроле. Повышенный ангиогенез коррелировал с количеством плазматических клеток в миелограмме (г = 0,58; р < 0,05), с типом инфильтрации КМ (г = 0,85; р < 0,05), а также с остеодеструктивными изменениями в анамнезе больного (г = 0,65; р < 0,05). У всех пациентов 2 группы определялось увеличенное количество микрососудов в паренхиме КМ и в субэндосталь-ной зоне — 12,7 ± 2,3 % при интерстициальной инфильтрации и 15,2 ± 2,8 % при диффузной, по сравнению с 7,1 ±1,2% в контрольной группе (р < 0,05). На эндосте отмечалось повышение количества клеток на единицу длины костной трабекулы 2,5 ± 0,3 при интерстициальной инфильтрации и 2,7 ± 0,4 при диффузной, по сравнению с 1,4 ± 0,2 в контроле (р < 0,05). Также в субэндостальной зоне и вокруг синусов КМ наблюдалось увеличение экспрессии коллагена IV типа и зоны ярко выраженного ретикулинового склероза. Показано сокращение площади костной ткани максимально до 12,6 ± 2,7 % по сравнению с 21,0± 2,41 % в контрольной группе. При культуральных исследованиях МСК КМ больных ММ по сравнению со здоровыми донорами показано снижение скорости пролиферации (в среднем в 2,4 раза), снижение общего времени пассирования с 7 до 5 пассажей. После АутоТГСК пролиферативная активность сильно варьировала в разных культурах. После лечения только у небольшой части больных (17 %) происходило восстановление кривой роста до показателей доноров. Остеогенная дифферен-цировка у пациентов с остеодеструктивным синдромом в анамнезе и диффузной инфильтрацией снижена по сравнению с контролем, в группе пациентов без остеодеструкции близка к нормальным значениям. Независимо от осте-деструктивного синдрома у всех исследованных пациентов после терапии, включая АутоТГСК отмечалось усиление экспрессии маркеров, ассоциированных с миофибробластоподобным фенотипом и старением (гладко-мышечный актин,
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 3, 2019
Р-галактозидаза) — 45-80 % клеток в культуре положительно окрашивались этими маркерами. Исследования уровня VEGF в культурах МСК коррелировали с данными по площади микрососудов, полученными морфологическим методом (г = 0,68; р < 0,05). Уровень VEGF определялся выше контрольных цифр у пациентов после индукционной терапии, оставался повышенным после проведения АутоТГСК.
Выводы. У больных ММ нарушения структурной организации гемопоэтической ниши и функциональных свойств МСК могут быть ключевыми факторами неопластической трансформации лимфоидных предшественников и развития костной болезни. Опухолевая трансформация микроокружения сохраняется после проведенной терапии, включая АутоТГСК.
Г Н Салогуб, М. В. Горчакова, Е. Б. Русанова
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр имени В. А. Алмазова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург; Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Первый Санкт-Петербургский Государственный Универститет имени академика И. П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ (ПЦМ) У ПАЦИЕНТОВ С МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
Цель исследования. Выявить связь клинических особенностей и иммунофенотипа мие-ломных плазматических клеток (МПК), а также их прогностическое значение у пациентов с множественной миеломой (ММ), получивших в первой линии терапии бортезомиб-содержа-щие режимы химиотерапии.
Материалы и методы. В исследование вошли 137 пациентов, которым на этапе диагностики в аспирате костного мозга, в дополнение к оценке количества МПК методом световой микроскопии (СМ), была проведена 5-цветная проточная цитометрия (ПЦМ) с использованием проточного цитофлюориметра Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США) и программного обеспечения CXP Analysis (Beckman Coulter). Для идентификации МПК использовали панлейко-цитарный маркер CD45, маркеры плазматических клеток CD38 и CD138, маркеры клеток В-клеточного происхождения CD19 и CD20, а также маркеры CD56, CD117, CD20 и CD27, позволяющие оценить аберрантность фенотипа (Beckman Coulter).
Результаты. Медиана количества МПК методом ПЦМ составила 6,4 % (НК 1,6 %, ВК 17 %, от 0 до 75,8 %), что было ниже, чем при использовании световой микроскопии — 22,1 % (НК 7,5 %, ВК 43,72 %, от 0,2 до 96,8) при сравнении пар (N = 120) и, вероятно, обусловлено примесью периферической крови в пробе костного мозга (коэффициент корреляции (R = +0,62)). Медиана ОВ пациентов 47,18 мес., 31,46 мес.
и 35,11 мес. достоверно отличалась между группами с количеством ПК в аспирате КМ до 20 %, 20-40 % и более 40 % соответственно (р < 0,05). При проведении многофакторного анализа наибольшее прогностическое значение имело число МПК по данным ПЦМ: так, медиана ОВ пациентов с числом МПК до 17 %, 17-34,9 % и 35% и выше не была достигнута в первой группе и составила 36,69 мес. и 18,93 мес. для последующих (р < 0,001). Медиана опухолевой нагрузки (ОН), рассчитанная по формуле ОН ( %) = ПК (по данным СМ) ( %) х ТПК ( %) / ПК % (по данным ПЦМ) составила 16,5 %. Высокая ОН (<17 %) ассоциировалась с возрастом (р = 0,001), мужским полом (р < 0,05), более низким уровнем гемоглобина (р = 0,023) и количеством тромбоцитов (р = 0,0007), стадией III по ISS (р < 0,05), более высоким уровнем парапротеина (р = 0,011) и кальция сыворотки крови (р = 0,019), плазмобластной морфологией (р < 0,05) и тенденцией к более высокому уровню креатинина (р = 0,065). Оценка поверхностных маркеров МПК у пациентов с наличием и отсутствием плазмоцитом показала более редкую экспрессию CD20 (12 %) и отсутствие экспрессии CD27 (32 %) в первой группе, различия статистически не достоверны. Оценка размеров костных дефектов плоских и трубчатых костей выявила тенденцию к большему размеру в плоских костях у пациентов с экспрессией CD56 (13,78 мм против 8,2 мм без экспрессии) (р = 0,08) и CD117 (15,91 мм против
