CC BY
159
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
ПАТОГЕНЕЗ, ДИАГНОСТИКА И ИММУНОТЕРАПИЯ ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ
АУТОИММУННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПСОРИАЗА И ПСОРИАТИЧЕСКОГО АРТРИТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ
Барило А.А., Смирнова С.В., Смольникова М.В.
ФИЦ КНЦ СО РАН «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера», Россия, Красноярск
Цель. На основании изучения основных показателей клеточного и гуморального звена иммунитета провести сравнительный анализ в зависимости от степени тяжести псориаза и псориатического артрита.
Материалы и методы. В исследование включены больные вульгарным псориазом (ПС, n = 67), больные псори-атическим артритом (ПсА, n = 60), контрольная группа (n = 101). Возраст обследуемых варьировал от 18 до 66 лет. Больные ПС и ПсА обследованы в прогрессирующую стадию кожного процесса. В зависимости от степени тяжести кожного процесса, которая оценивалась по индексу PASI (Psoriasis area and severity index), больные разделены на группы: легкая степень тяжести — PASI < 10 баллов, среднетяжелая степень тяжести — PASI > 10,0 баллов. Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови оценивали по поглощению латексных частиц. Определение показателей клеточного звена иммунитета проводилось методом проточной цитофлуориметрии с использованием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD16, CD19 (ТОО «Сорбент», Москва, Россия) на проточном 5-параметровом цитометре Cytomics™ FC 500 (США). Гуморальное звено иммунитета оценивалось определением концентрации иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG) в сыворотке крови путем твердофазного им-муноферментного анализа с помощью тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск). Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови оценивали методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «DIA.METRA CIC-0 и CIC-C3D» (Италия). Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.0. Результаты исследования представлены в виде медианы с интерквартильным размахом (25-75-й процентили). Различия считались статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты. Выявлены изменения иммунологических показателей в зависимости от степени тяжести клинических проявлений ПС и ПсА. Так, в группе больных ПС легкой степени тяжести количество фагоцитирующих нейтрофилов статистически значимо выше (58,0% [38,0; 67,0] и 43,0% [32,0; 65,0] соответственно), а фагоцитарное число статистически значимо ниже в сравнении с группой больных ПС среднетяжелой степени тяжести (4,0 [3,8; 4,7] и 4,7 [4,1; 5,5] соответственно). При срав-
нительном анализе концентрации ЦИК-C3d в сыворотке крови больных ПсА и ПС в зависимости от степени тяжести заболевания установлено, что у больных легкой степени тяжести ПсА концентрация ЦИК-C3d в сыворотке крови статистически значимо выше в сравнении с группой больных ПсА среднетяжелой степени тяжести: 38,8 мг/мл [29,7; 46,5] и 22,5 мг/мл [17,5; 35,3] соответственно). В группе больных ПС среднетяжелой степени тяжести концентрация ЦИК-C3d в сыворотке крови статистически значимо выше в сравнении с группой больных ПС легкой степени тяжести: 21,4 мг/мл [16,3; 29,5] и 17,9 мг/мл [12,9; 19,9] соответственно). При сравнении основных иммунологических показателей клеточного иммунитета в зависимости от степени тяжести ПС и ПсА не выявлено статистически значимых межгрупповых различий в относительном и абсолютном количестве CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD19+ лимфоцитов, концентрации 1кМ, ДО.
Выводы. Установлены изменения иммунологических параметров в зависимости от тяжести клинических проявлений заболевания: при псориазе легкой степени тяжести относительно среднетяжелой, количество фагоцитирующих нейтрофилов в периферической крови статистически значимо выше, а фагоцитарное число ниже; при псориазе среднетяжелой степени тяжести относительно легкой и псориатическом артрите легкой степени тяжести относительно среднетяжелой, концентрация ЦИК-C3d в сыворотке крови статистически значимо выше. Полученные показатели свидетельствуют о наличии сопряженности изменений в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета со степенью тяжести псориаза и псориатического артрита.
ОСОБЕННОСТИ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ДЛИНЫ ТЕЛОМЕРНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ НА ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ХРОМОСОМАХ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ
Барковская М.Ш., Богомолов А.Г., Кнауэр Н.Ю., Блинова Е.А., Сизиков А.Э., Рубцов Н.Б., Козлов В.А.
Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
Введение. Длина теломерных последовательностей клетки является важным индикатором ее пролифератив-ной истории и потенциала. В предыдущих исследованиях было показано, что средняя длина теломер при заболеваниях атопической и аутоиммунной природы снижена в клетках иммунной системы, что может служить признаком раннего старения при иммуноопосредованных заболеваниях. Также на настоящий момент известно, что теломерные повторы распределены на различных плечах
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
индивидуальных хромосом неравномерно. Это явление получило название теломерного профиля, который считается врожденной особенностью индивидуума и может оказывать влияние на ускоренное старение иммунной системы.
Цель и задачи. Исследовать характер распределения теломерных последовательностей на отдельных плечах индивидуальных хромосом у пациентов с РА в сравнении со здоровыми донорами.
Задачи:
— оптимизация метода количественной флуоресцентной гибридизации in situ (Q-FISH) для оценки длин тело-мерных последовательностей у пациентов с иммунопатологией;
— разработка программного обеспечения, позволяющего проводить количественный анализ теломерных повторов на Q-FISH изображениях метафазных пластинок;
— измерение сигналов флуоресценции теломерных последовательностей и проведение цитогенетического анализа на препаратах метафазных хромосом доноров и пациентов с РА.
Материалы и методы. В исследование были включены условно здоровые доноры (n = 6, медиана возраста 51,5 [49-53]) и пациенты с РА (n = 6, медиана возраста 51,5 [50-54]). Работа проводилась на препаратах метафазных хромосом, полученных из МНК периферической крови. У всех испытуемых было получено информированное медицинское согласие на исследование. На момент забора материала все пациенты находились на лечении в Клинике иммунопатологии НИИФКИ г. Новосибирска в стадии обострения основного заболевания. Диагностика заболевания проводилась специалистами клиники в соответствии с критериями ACR/EULAR 2010. Для определения длины теломер был использован метод Q-FISH с последующей идентификацией хромосом в соответствии с ISCN 2013. В ходе работы были модифицированы методические условия, что улучшило морфологию метафазных хромосом и позволило сделать цитогенетический анализ более достоверным. Также было создано программное обеспечение (МеТе^Ьеп) (http://www.bionet.nsc.ru/en/ development/application-development/development-of-a-computer/metelen.html), позволяющее проводить анализ количества теломерных повторов на отдельных плечах индивидуальных хромосом в Q-FISH-изображениях. Тестирование и валидационные эксперименты показали, что созданная программа и модифицированная методика могут служить для корректного вычисления длины тело-мер у пациентов с РА и здоровых доноров.
Результаты. Поскольку теломерный профиль является индивидуальной характеристикой, то было проанализировано наличие укороченных теломерных последовательностей на отдельных плечах индивидуальных хромосом относительно средней длины теломер для каждого испытуемого отдельно. У пациентов с РА было обнаружено большее количество достоверно укороченных тело-мер, чем у здоровых доноров. При сравнении теломерных профилей между группами, было обнаружено, что длина теломерной последовательности на p-плече 16 хромосомы у пациентов с РА достоверно меньше, чем у доноров (р < 0,05; U-критерий Манна—Уитни).
Заключение. Выявленные особенности длины теломер пациентов с РА, с одной стороны, могут быть результатом пролиферативного стресса, который возникает в результате массового деления клеток иммунной системы в процессе аутоиммунной реакции. С другой стороны, укороченная длина теломер на p-плече 16 хромосомы при РА может иметь значение для патогенеза этого заболевания.
Так, укорочение теломер может приводить к повышенной экспрессии генов, расположенных рядом с теломер-ными регионами. В 13 регионе р плеча 16 хромосомы локализуется ряд генов (CIITA, CLEC16A, DNAJA3, SOCS1, TRAP 1), которые ассоциированы с РА или могут принимать участие в его патогенезе. Кроме того, можно предположить, что наличие большого количества укороченных теломер может способствовать гибели клетки через апоп-тоз. Потому что именно эти теломерные последовательности могут первыми подвергаться критическому укорочению, приводить к слиянию хромосом конец-в-конец и повреждению генома.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 1415-00346.
ОСОБЕННОСТИ СОДЕРЖАНИЯ НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ/ХЕМОКИНОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ АУТОИММУННЫМИ ПОРАЖЕНИЯМИ ПЕЧЕНИ
Бацунов О.К.1, 3, Арсентьева Н.А.1, Любимова Н.Е.1, Смирнова М.Н.2, Семенов А.В.1, 3, Тотолян Арег А.1, 3
1ФБУН«Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера», Санкт-Петербург, Россия
2 СПБГУЗ «Городская клиническая больница № 31», Санкт-Петербург, Россия
3 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Аутоиммунный гепатит (АИГ) — это хроническое воспалительное иммунозависимое заболевание печени. Характеризуется неблагоприятным течением с высокой частотой и быстрыми темпами развития цирроза печени. К аутоиммунным заболеваниям печени относится и первичный билиарный цирроз (ПБЦ), проявляющийся в виде малосимптомного хронического деструктивного негнойного холангита, далее проходящего стадию холестаза, которая завершается формированием цирроза. В основе патогенеза обоих заболеваний лежит развитие иммунных процессов против собственных тканей организма. Значительную роль в развитии любых иммунных реакций играют цитокины — регуляторные пептиды иммунной системы. Отдельную группу составляют хемокины — семейство цитокинов, основная функция которых состоит в контроле клеточной миграции. При гепатите в печени усиленно продуцируются провос-палительные хемокины, вызывая миграцию лейкоцитов с периферии в печеночную паренхиму, что активирует иммунные процессы в очаге воспаления. Вследствие этого изучение цитокинового/хемокинового профиля в периферической крови пациентов позволят глубже понять механизмы иммунопатологии при различных формах гепатитов, а также выявить параметры с потенциалом биомаркеров для этих заболеваний.
Цель. Определение концентраций некоторых цитоки-нов/хемокинов в плазме крови больных аутоиммунными поражениями печени.
Материалы и методы. В работе была использована плазма крови 24 больных аутоиммунными поражениями печени, из них 10 — с диагнозом аутоиммунный гепатит, 14 — с диагнозом первичный билиарный цирроз и 37 — условно здоровых доноров. В ходе эксперимента использовали коммерческие тест-системы Milliplex MAP (Millipore,
