CC BY
47
особенности иммунодиагностики локальных форм туберкулезa у детей
Е.А. Бородулина1 (Borodulinbe@ yandex.ru), Т.Е. Ахмерова1, Ж.П. Васнева2, Е.С. Еременко1, Б.Е. Бородулин1, Е.А. Амосова1
1Самарский государственный медицинский университет 2Самарский диагностический центр
Резюме
Методом сплошной выборки обследовали 100 детей с локальными формами туберкулеза (ЛФТ). Оценены результаты иммунодиагностики локальных форм туберкулеза у детей с применением препарата Диаскинтест. В г. Самара препарат начали применять одними из первых в России. У детей с ЛФТ наличие туберкулезной инфекции в организме подтверждается в 99% случаев положительными кожными туберкулиновыми пробами Манту 2 ТЕ, в 84,0% - положительными пробами в Диаскинтесте. Показано, что Диаскинтест не может быть принят за абсолютный диагностический критерий при диагностике туберкулезной инфекции. При определении уровня продукции IFN-y отмечено, что при отрицательном результате кожной пробы с использованием Диаскинте-ста, значительно снижен уровень стимулированной продукции IFN-y в тест-системе ФГА (в 1,7 раза), и повышен в тест-системе с Диаскинтест более 18 пг/мл. Данное наблюдение показывает, что вопросы иммунодиагностикии туберкулезной инфекции нуждаются в дальнейшем изучении.
Ключевые слова: препарат Диаскинтесттуберкулез, проба Манту, микобактерия туберкулеза, туберкулинодиагностика, иммунодиагностика, IFN-y
Features immunodiagnostic Local Forms of Tuberculosis in children
E.A. Borodulina1 (Borodulinbe@ yandex.ru), T.E. Ahmerova1, E.S. Егетепко1, B.E. Borodulin1, Zh.P. Vasneva2, E.A. Amosova1
1 Samara State Medicine University
2 Samara Diagnostic Centre Abstract
The 100 children with local forms of tuberculosis (LFT) were examinated used by the method of continuous sampling. The results of the LFT immunodiagnostic with the Diaskintest (DST) in the children were evaluated. Diaskintest were started applying in Samara one of the first from Russia. The confirmation of the tuberculosis in children with LFT was done in 99% of cases by the positive skin tuberculin tests and in 84% by Diaskintest positive. It is shown that Diaskintest can not be taken as an absolute diagnostic criteria for the diagnosis of the tuberculosis. Were noted that the FGA stimulated IFN-y production level were significantly reduced (1,7 times), the DST stimulated IFN-y production level were elevated more than 18 pg/ml in the children with negative skin Diaskintest. This observation shows that the issues in the fields of tuberculosis immunodiagnostic require further investigations.
Key words: Diaskintest, tuberculosis, tuberculin skin test, Mycobacterium tuberculosis, tuberculindiagnostic, immunediagnostic, IFN-y
введение
В последние годы на фоне неблагоприятной ситуации по туберкулезу, отмечается возросший интерес к иммунодиагностике как методу раннего выявления туберкулезной инфекции у детей. Несмотря на то что с момента открытия M. tuberculosis прошло более 100 лет, основным методом для первичного массового скрининга населения для выявления туберкулеза продолжает оставаться достаточно старый по современным меркам кожный туберкулиновый тест [1 - 3].
Благодаря успехам современной медицины синтезирован рекомбинантный белок ESAT6-CFP10, легший в основу нового диагностического препарата Диаскинтест® [4 - 7].
В Самарской области Диаскинтест стали применять с 2008 года одними из первых в стране. Опыт использования препарата показал преимущества
методики с использованием кожной пробы с препаратом Диаскинтест® для раннего обнаружения проявлений туберкулезной инфекции [8, 9].
В настоящее время опыт по применению Диа-скинтеста представлен во многих работах [10 - 13].
Публикации последних лет показывают неоднозначность результатов и не исключают отрицательного результата в Диаскинтесте при активных формах туберкулеза [14 -16]. Этот вопрос является наиболее обсуждаемым в настоящее время [17].
цель работы - оценить результаты диагностики локальных форм туберкулеза у детей с применением препарата Диаскинтест®, поступающих на лечение в стационары г. Самары.
материалы и методы
Методом сплошной выборки обследовали 100 детей с локальными формами туберкулеза. Группу
контроля составили 85 здоровых детей, не инфицированных МБТ. Обследование пациентов проводилось в соответствии с протоколом исследования, принятым и одобренным этическим комитетом СамГМУ, и включало в себя: клинические, инструментальные, лабораторные и иммунологические методы. Были оценены:
а) возрастно-половые,
б) социальные,
в) эпидемиологические,
г) медико-биологические (неспецифические),
д) медико-биологические (специфические) характеристики.
Выделены факторы, значимые для детей, больных туберкулезом, по сравнению с детьми из группы контроля. Для каждого ребенка была разработана анкета сбора данных, содержащая основные результаты обследования. Всем детям проводились кожные аллергологические тесты, которые включали пробу Манту 2 ТЕ (очищенный туберкулин ППД-Л в стандартном разведении 2 ТЕ в 0,1 мл) на правой руке (согласно Приказу МЗ РФ № 109 от 21 марта 2003 г. «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации») и пробу с препаратом Диаскинтест на левой руке (согласно Приказу № 855 от 29.10.2009 «О внесении изменения в приложение № 4 к приказу Минздрава России от 21 марта 2003 г.»). Оценка результатов проводилась в соответствии с инструкцией к препаратам. Иммунологические исследования in vitro выполнены в отделе лабораторной диагностики Самарского диагностического центра.
Иммунологическими методами определяли процентное содержание субпопуляций лимфоцитов (CD4+, CD16+) с помощью меченых ФИТЦ и фико-эритрином МКАТ серии LT («Сорбент», Москва). Им-мунофлюоресценция клеток оценивалась на лазерном проточном цитофлюориметре Calibur (BD, США) в режиме CellQuest Pro. Проводили клинический анализ крови для определения абсолютного количества лейкоцитов (WBC) с помощью гематологического анализатора Medonic (Швеция). Абсолютное содержание CD4+-, CD16+-клеток (абс. х 109 клеток /мл) определяли по формуле:
абс. лимфоцитов х %-ное
содержание субпопуляции
Абс. субпопуляции =..........................................
100
Оценку неспецифической и специфической функциональной активности клеток иммунной системы проводили путем выявления уровня продукции IFN-y после инкубации цельной гепаринизиро-ванной периферической крови соответственно с фитогемагглютинином (ФГА) и диаскинтестом (ДСТ) в течение 24 часов при 37 °С. Уровень IFN-y определяли в супернатанте с использованием ИФТС (НПО «Вектор-Бест», г. Новосибирск).
В работе нами ^N-7 с ФГА рассматривался, как показатель общего противоинфекционного иммунитета. Впервые мы провели изучение противоинфекционного иммунитета при воздействии Диаскинтеста, причем в качестве антигена использовали препарат Диаскинтест, применяемый для постановки кожных проб.
Статистическую обработку числового материала осуществляли в программе Statistica 5.5 с заданной надежностью Р = 95% или уровнем значимости р = 0,5.
Результаты исследований
При обследовании 100 детей с локальными формами туберкулеза были диагностированы: туберкулез внутригрудных лимфатических узлов (ТВГЛУ) (50 детей), первичный туберкулезный комплекс (2 детей), очаговый туберкулез легких (15 детей), инфильтративный туберкулез легких (22 ребенка), экссудативный плеврит туберкулезной этиологии (6 детей), внелегочный туберкулез (5 детей). Одинаково часто туберкулез выявлялся у мальчиков и девочек, наиболее часто - у детей 4 - 7 лет (26%) и 15 - 18 лет (30%),
Локальные формы туберкулеза были выявлены по результатам массовой туберкулинодиагностики в 51%, при флюорографическом обследовании у подростков - в 25% и при обследовании контактных лиц из очага туберкулеза в 7%. Таким образом, в 83% случаев (п = 83) заболевание выявлено при профилактических осмотрах. Среди обратив-щихся с жалобами в общую лечебную сеть выявлено 17% детей (интервал от момента обращения до выявления туберкулеза составлял от 5 до 30 дней).
При оценке результатов пробы Манту с 2ТЕ в 99% случаев результат был положительный, в 53% (п = 53) установлен «вираж» (конверсия пробы), в 25% (п = 25) - усиливающаяся реакция на туберкулин по годам, в 18% (п = 18) - монотонный характер проб. Большинство детей имели положительные реакции: 10 - 16 мм - 62%, 5 - 9 мм - 18%, гиперергические (более 16 мм) - у 16% детей. Сомнительные результаты отмечены у 3% детей, отрицательные - у 1%. Отрицательная проба была у ВИЧ-инфицированного ребенка с ТВГЛУ.
Оценка проб с препаратом Диаскинтест® проводилась в соответствии с инструкцией к препарату. У 84% (п = 84) детей результат был положительным: с размером папулы 10 - 14 мм (31% детей), 5 - 9 мм (26% детей, до 5 мм - 10% детей), более 15 мм - у 17% детей. Отрицательных результатов (16%) на пробу с препаратом Диаскинтест0 у детей с локальными формами туберкулеза было достоверно больше, чем при пробе Манту 2 ТЕ (1%) (р < 0,05). Таким образом, проведенные исследования показывают, что при достаточно высокой эффективности препарата Диаскинтест, положительные результаты у детей с локальными формами туберкулеза составили 84%, при пробе Манту 2 ТЕ - 99%.
Среди детей, положительно реагирующих на пробу Манту 2 ТЕ, отрицательный результат в Диаскинтесте был у 6 детей с ТВГЛУ (р < 0,05), у одного ребенка с первичным туберкулезным комплексом, у одного с инфильтративным туберкулезом легких, у четырех детей с очаговым туберкулезом легких (р < 0,05), у трех детей с внелегочным туберкулезом (р < 0,05). Положительными обе пробы (Диаскинтест и проба Манту 2 ТЕ) были у 6 детей с экссудативным плевритом (100%).
При определении фазы воспаления у детей с локальными формами туберкулеза выявлено, что среди легочных форм туберкулеза (95 детей) фаза инфильтрации была установлена в 94,7%. У детей, с впервые выявленным туберкулезом в фазе инфильтрации, чувствительность кожных иммунологических проб более выражена: при оценке в реакции Манту 2 ТЕ выраженные положительные пробы были у 43% детей, гиперергические - у 16%; при использовании Диаскинтеста - 31 и 17% соответственно. При обследовании детей с отрицательным результатом на пробу Диаскинтест установлено, что среди детей с ТВГЛУ в 5 случаях процесс был выявлен в фазе кальцинации, в одном случае в фазе начинающегося уплотнения и у одного ребенка с ТВГЛУ - в фазе инфильтрации - был сопутствующий диагноз «ВИЧ-инфекция, IVA стадия» (реакция Манту 2 ТЕ и Диаскинтест отрицательные). У одного ребенка с первичным туберкулезным комплексом и отрицательным результатом в Ди-аскинтесте была выявлена фаза начинающегося уплотнения. Среди детей с вторичными формами туберкулеза с отрицательным результатом в Диаскинтесте у 4-х детей был установлен очаговый туберкулез легких (продуктивное воспаление) и у одного инфильтративный туберкулез легких в фазе распада.
Абсолютным диагностическим критерием туберкулеза является выделение у пациента МБТ с помощью различных методов. В группе детей c локальными формами туберкулеза было выявлено 12 пациентов бактериовыделителей. Среди детей, выделяющих МБТ, было 9 девочек и 3 мальчика, в возрасте 8 - 14 лет (5 девочек и один мальчик) и 15 - 17 лет (4 девочки и один мальчик). Неэффективная вакцинация БЦЖ (слабо выраженный рубчик до 3 мм, отрицательная проба Манту 2 ТЕ в 1 год) отмечалась у 4-х пациентов. Основной формой туберкулеза с бактериовыделением был инфильтративный туберкулез легких (9 чел.), из них у 4-х детей патология выявлена бактериоскопически. У всех детей-бактериовыделителей отмечалась положительная проба Манту с 2 ТЕ, при этом выраженность реакции была различной. Большинство детей имели выраженные положительные пробы 10 - 14 мм (9 человек). Средний размер папулы составил 9,25 ± 4,5 мм. По результатам
пробы с препаратом Диаскинтест® большинство (7 человек) имели выраженные положительные пробы (папулы 10 - 14 мм); гиперергические пробы были у 3-х детей, инфильтрат 5 - 9 мм - у одного ребенка (7 мм), в одном случае результат был отрицательным (у подростка с инфильтративным туберкулезом легких в фазе распада). Средний размер папулы составил 10 ± 5 мм.
У всех детей с бактериовыделением была определена лекарственная чувствительность (ТЛЧ). В 2-х (16,7%) случаях выявлена множественная лекарственная устойчивость (МЛУ): в одном случае - устойчивость к изониазиду и рифампицину; во втором - к изониазиду, ри-фампицину, стрептомицину и этамбутолу. Размер проб у них был по реакции Манту 2 ТЕ 5 - 9 мм, по пробе с препаратом Диаскинтест0 15 - 16 мм. Все это дети были в контакте с больными туберкулезом взрослыми, у которых также определялась МЛУ.
По мнению многих авторов, формирование эффективной иммунологической защиты от ми-кобактерии туберкулеза определяется взаимодействием лимфоцитов, участвующих в реализации клеточноопосредованного иммунитета. Ведущая роль принадлежит клеткам CD4+ [18, 19]. Особенно выражены иммунорегулятор-ные эффекты у IFN-y, который является одним из основных цитокинов клеточного иммунного ответа и ингибитором гуморального. Антиген-специфическая индукция интерферона - IFN-y Т-лимфоцитами CD4+ является одним из ключевых факторов иммунной защиты при туберкулезной инфекции [7, 19 - 21].
В результате проведенного сравнительного анализа иммунологических показателей детей с ЛФТ относительно группы контроля было отмечено, что выброс IFN-y клетками периферической крови в тест-системе с ФГА достигал меньших значений по сравнению с группой контроля в среднем на 400,0 пг/мл.
Регистрируемые показатели содержания IFN-y имели большой разброс (что, возможно, связано с особенностями туберкулезного процесса и разной степенью выраженности иммунного ответа). Учитывая данное наблюдение, проведено изучение показателей IFN-y в тест-системе с препаратом ДСТ in vitro по формам туберкулеза.
Данный анализ показывает, что для форм туберкулеза в фазе инфильтрации с выраженным экссудативным компонентом характерны более высокие уровни IFN-y в ДСТ in vitro - более 18 пг/мл (средний 166,7 ± 68,8 пг/мл). Для форм туберкулеза в фазе уплотнения и обратного развития характерны более низкие показатели (табл. 1).
Наши наблюдения привели к выводу, что определение уровня IFN-y в тест-системе ДСТ in vitro может характеризовать течение туберкуле-
Таблица 1.
Распределение показателей IFN-y в тест-системе с Диаскинтест по формам туберкулеза
Показатель IFN-y в тест-системе с ДСТ
формы туберкулеза До 18,0 пг/мл (средний 10,8 ± 6,1 пг/мл) Более 18,0 пг/мл (средний 166,7 ± 68,8 пг/мл)
ТВГЛУ ■ фаза инфильтрации ■ фаза уплотнения 6 1 5 44 44 0
ПТК 1 1
Инфильтративный туберкулез 2 20
Экссудативный плеврит 0 6
Очаговый туберкулез 10 5
Внелегочный туберкулез 3 2
Всего 22 78
Примечание. В таблице абсолютные числа совпадают с % (n = 100)
за. Так, уровень IFN-y более 18,0 пг/мл свидетельствует об активности туберкулезного процесса.
Уровень выброса IFN-y в тест-системе с ДСТ in vitro в группе с положительными кожными пробами в Диаскинтесте в 92,6% случаях поднимался выше 18,0 пг/мл и в среднем составил 166,7 ± 34,5 пг/мл. В оставшихся 7,4% случаях отмечался невысокий выброс IFN-y в тест-системе ДСТ in vitro (до 18 пг/мл) и составлял, в среднем, 10,8 ± 4,2 пг/ мл.
Уровень выброса IFN-y в тест-системе с ДСТ in vitro в группе с отрицательными кожными пробами при использовании препарата Диаскинтест в 56,5% случаях поднимался выше 18,0 пг/мл и в среднем составил 42,7 ± 14,5 пг/мл. В остальных 43,5% случаях отмечается невысокий выброс IFN-y (до 18 пг/мл), в среднем - 11,2 ± 4,2 пг/мл.
Принимая во внимание, что продукция IFN-y в тест-системе с ДСТ in vitro для рассматривемой группы детей может быть одним из показателей противотуберкулезной активности системы иммунитета, возникает предположение, что продукция IFN-y более 18,0 пг/мл является одним из диагностических критериев подтверждения туберкулезной инфекции в случае отрицательного результата Диаскинтеста in vivo.
выводы
1. У детей при локальных формах туберкулеза в фазе экссудативного воспаления отмечалась более высокая чувствительность кожных проб: по реакции Манту 2 ТЕ выраженные положительные пробы выявлены в 43%, гиперергические -в 16%; по пробе препарата Диаскинтест® - 31 и 17% соответственно. Корреляционная связь прямая (0,3), средней степени выраженности.
2. При локальных формах туберкулеза у детей, имеющих отрицательные результаты на пробу с препаратом Диаскинтест0 (16%),определение IFN-y в тест-системе с Диаскинтестом in vitro более 18 пг/мл предполагает возможность активной туберкулезной инфекции.
Затронутые новые аспекты вопросов иммуно-диагностикии туберкулезной инфекции в сложных диагностических случаях позволяют предположить, что препарат Диаскинтест не может быть принят за абсолютный диагностический критерий при диагностике туберкулезной инфекции. Проблема улучшения и оптимизации диагностики туберкулезной инфекции подлежит дальнейшему изучению. Ш
литература
1. Нечаева О.Б. Эпидемиологическая ситуация по туберкулезу среди детей России. Туберкулез и болезни легких. 2013; 6: 62.
2. Бородулина Е.А., Бородулин Б.Е. Индивидуальная туберкулинодиагностика прик-тестом. Туберкулез и болезни легких. 2006; 3: 33.
3. Слогоцкая Л.В. Кожные иммунологические пробы при туберкулезе - история и современность. Туберкулез и болезни дегких. 2013; 5: 39 - 46.
4. Киселев В. И., Барановский П. М., Пупышев С. А., Рудых И. В., Перельман М. И., Пальцев М. А. Новый кожный тест для диагностики туберкулёза на основе рекомбинантного белка ESAT-CFP. Молекулярная медицина. 2008; 4: 4 - 6.
5. Пальцев М.А., ред. Кожная проба с препаратом «Диаскинтест»- новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Москва: Издательство Медицина; 2011: 40 - 96.
6. Литвинов В.И., ред., Слогоцкая Л.В., Сельцовский П.П. Диаскинтест в диагностике туберкулезной инфекции. Научные труды к 85-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки, профессора М.М. Авербаха. Москва: МНПЦБТ. 2010: 26 - 39.
7. Renshaw P.S., Lightbody K.L., Veverka V., Muskett F.W., Kelly G., Frenkiel T.A. et al. Structure and function of the complex formed by the tuberculosis virulence factors CFP-10 and ESAT-6. The EMBO Journal 24. 2005; 2491 - 2498.
8. Ахмерова Т.Е., Бородулина Е.А., Титугина А.Ю. Проба Манту и Диаскинтест в диагностике туберкулеза у детей. Материалы 1-го конгресса Национальная ассоциация фтизиатров. Санкт-Петербург; 2012: 71 - 73.
9. Барышникова Л.А., Лебедева Н.О., Каткова Л.И., Вдовенко С.А. Илясова Э.В., Крюкова А.М. и др. Опыт новой технологии скрининга детей и подростков на туберкулезную инфекцию в Самарской области. Туберкулез и болезни легких. 2012; 11: 27 - 31.
10. Овсянкина Е.С., Ерохин В.В., Губкина М.Ф. Опыт применения Диаскинтеста для дифференциальной диагностики туберкулеза и нетуберкулезных заболеваний органов дыхания у детей и подростков. Туберкулез и болезни легких. 2011; 5: 81.
11. Поддубная Л.В., Шилова Е.И., Силайкина С.Т. Диагностика туберкулезной инфекции и ее активности у детей. Туберкулез и болезни легких. 2013; 6: 70, 71.
12. Слогоцкая Л.В., Сенчихина О.Ю., Богородская Е.М.Чувствительность теста с аллергеном туберкулёзным рекомбинантным, содержащим белок ESAT6-CFP10, у впервые выявленных больных туберкулёзом детей и подростков в городе Москве. Туберкулез и социально-значимые заболевания. 2013; 1: 37 - 43.
13. Ставицкая Н.В., Молчанова Н.В., Дудченко Д.В., Дорошенкова А.Е. Оптимизация скрининга туберкулезной инфекции у детей. Туберкулез и болезни дегких. 2013; 12: 59 - 60.
14. Долженко Е.Н. Значение аллергена туберкулезного рекомбинантного (Диаскинтеста) в выявлении активного туберкулеза у детей. Туберкулез и болезни легких. 2012; 9: 31 - 36.
15. Зазимко Л.А. Использование реакции Манту и Диаскинтеста для массовой и индивидуальной диагностики туберкулеза. Медицинский алфавит. 2013; 1 (9): 34 - 36.
16. Шилова М.В. Проблемы туберкулеза у детей и подростков. Поликлиника. 2014; 1 (3): 73 - 80.
17. Филимонов П.Н. К дискуссии о латентной туберкулезной инфекции. Туберкулез и болезни легких. 2014; 5: 69 - 74.
18. Лядова И.В., Гергерт В.Я. Реакции Т-клеточного иммунитета при туберкулезе: экспериментальные и клинические исследования. Туберкулез и болезни легких. 2009; 11: 9 - 18.
19. Bakir M., Millington K., Soysal A., Deeks J.J., Efee S., Asian Y. et al. Prognostic value of a T-cell-based, interferon-gamma biomarker in children with tuberculosis contact. Ann. Intern. Med. 2008; 149 (11): 777 - 787.
20. Лядова И.В., Никитина И.Ю., Кондратюк Н.А. Способ оценки эффективности лечения туберкулеза легких. Патент РФ, № 2480765; 2011.
21. Arend S., Thijsen S.F., Leyten E., Bouwman J.J., Franken W.P., Koster B.F. et al. et al. Comparison of two interferon-gamma assays and tuberculin skin test for tracing tuberculosis contacts. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2007; 175 (6): 618 - 627.
References
1. Nechaeva O.B. Epidemiological situation on the tuberculosis in the children in Russia. Tuberculosis and lung deseases. 2013; 6: 62 (in Russian).
2. Borodulina E.A., Borodulin B.E. Individual tuberculindiagnostic of the prick-test. Tuberculosis and lung deseases. 206; 3: 33 (in Russian).
3. Slogotskaya L.V. Skin immunological tests in the tuberculosis - history and present - day. Tuberculosis and lung deseases. 2013; 5: 39 - 46 (in Russian).
4. Kiselev V.I., Baranovskii P.M., Pupyishev S.A., Rudich I.V., Perelman M.I., Paltsev M.A. New skin test for the tuberculosis diagnostic based on the recombination protein ESAT-CFP. Molecularnaya medicina. 2008; 4: 4 - 6 (in Russian).
5. Paltsev M.A., red. Skin-test with the Diaskintest - preparat - new opportunity of the identification of the tuberculosis infection. Moscow: Medicine; 2011: 40 - 96 (in Russian).
6. Litvinov V.I., red., Slogotskay L.V., Seltsovskii P.P. Diaskintest in the diagnostic of the tuberculosis infection. Nauchnyie trudyi k 85-letiyu so dnya rogdeniya zasluzhennogo deyatelya nauki, prof. M.M.Averbaha. Moscow: 2010: 26 - 30 (in Russian).
7. Renshaw P.S., Lightbody K.L., Veverka V., Muskett F.W., Kelly G., Frenkiel T.A., Gordon S.V., Hewinson R.G., Burke B., Norman J., Williamson R.A. & Carr M.D. Structure and function of the complex formed by the tuberculosis virulence factors CFP-10 and ESAT-6. The EMBO Journal 24. 2005; 2491 - 2498.
8. Ahmerova T.E., Borodulina E.A., Titugina A.U. Mantu and Diaskintest in the diagnostic of the tuberculosis in the children. Materiali 1-go kongressa Associacii Nacionalnaya associaciya ftiziatrov Sanct-Peterburg. 2012: 71 - 73 (in Russian).
9. Baryishnikova L.A., Lebedeva N.O., Katkova L.I., Vdovenko S.A., Ilyasova E.V., Kryukov A.M. et al. The experience of the new technology of the screening of the childrens and teenagers on the tuberculosis infection in the Samara region. Tuberculosis and lung deseases. 2012; 11: 27 - 31 (in Russian).
10. Ovsyankina E.S., Erohin V.V., Gubkina M.F. The experience of the application Diaskintest for the differential diagnostic of the tuberculosis and nontuberculosis lung deseases in the childrens and teenagers. Tuberculosis and lung deseases. 2011; 5: 81 (in Russian).
11. Poddubnaya L.V., Shyilova E.I., Silaikina S.T. The diagnostic of the tuberculosis infection and there activity in the children. Tuberculosis and lung deseases. 2013; 6: 70 - 71 (in Russian).
12. Slogotskaya L.V., Senchihina O.Yu., Bogorodskaya E.M. The sensitivity of the test with the recombinant tuberculosis allergen, contained of the EAST6-CFP10, in the new-onset childrens and teenagers with tuberculosis in the Moscow. Tuberkulez I socialno-znachimie zabolevaniya. 2013; 1: 37 - 43 (in Russian).
13. Stavitskaya N.V., Molchanova N.V., Dudchenko D.V., Doroshenkova A.E. Optimization of the tuberculosis infections screening in the children. Tuberculosis and lung deseases. 2013; 12: 59 - 60 (in Russian).
14. Dolzhenko E.N. The significance of the recombinant tuberculosis allergen (Diaskintest) in the active tuberculosis revealing in the children. Tuberculosis and lung deseases. 2012; 9: 31 - 36 (in Russian).
15. Zazimko L.A. Using of the Mantu and Diaskintest for the mass and individual tuberculosis diagnostic. Medicinskii alfavit. 2013; 1(9): 34 - 36 (in Russian).
16. Shyilova M.V. The tuberculosis problems in the childrens and teenagers. Policlinica. 2014; 1 (3): 73 - 80 (in Russian).
17. Filimonov P.N. To the discussion about of the latent tuberculosis infection. Tuberculosis and lung deseases. 2014; 5: 69 - 74 (in Russian).
18. I yadova I.V., Gergert V.Y. The T-cell immunity reactions in the tuberculosis: experimental and clinical investigations. Tuberculosis and lung deseases. 2009; 11: 9 - 18 (in Russian).
19. Bakir M., Millington K., Soysal A., Deeks J.J., Efee S., Aslan Y. et al. Prognostic value of a T-cell-based, interferon-gamma biomarker in children with tuberculosis contact. Ann. Intern. Med. 2008; 149 (11): 777 - 787.
20. Lyadova I.V., Nikitina I.Y., Kondratyuk N.A. Method of estimating clinical effectiveness in pulmonary tuberculosis. Patent RF, № 2480765; 2011 (in Russian).
21. Arend S., Thijsen S.F., Leyten E., Bouwman J.J., Franken W.P, Koster B.F. et al. Comparison of two interferon-gamma assays and tuberculin skin test for tracing tuberculosis contacts. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2007; 175 (6): 618 - 627.
