CC BY
24
УДК 636.7:612.115
Ключевые слова: гемостаз, агрегация тромбоцитов, здоровые щенки
Key words: hemostasis, platelet aggregation, healthy puppies
Баруздина Е. С., Ошуркова Ю. Л.
ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ СИСТЕМы ГЕМОСТАЗА
у здоровых собак в возрасте от двух до шести месяцев
FEATURES OF THE FUNCTIONING OF THE HEMOSTATIC SYSTEM IN HEALTHY DOGS AT THE AGE OF 2-6 MONTHS
ФГБОУ ВПО «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н. В. Верещагина» Адрес: 160555, Россия, Вологда-Молочное, ул. Шмидта, д. 2
Vologda State Dairy Farming Academy named after N. V. Vereshchagin Address: 160555, Russia, Vologda-Molochnoe, Shmidt str., 2
Баруздина Елена Сергеевна, Старший преподаватель кафедры внутренних незаразных болезней, аспирант Baruzdina Elena S., Senior Teacher of Anatomy and Physiology Dept., Post-Graduate Student Ошуркова Юлия Леонидовна, к. б. н., доцент, зам. декана факультета ветеринарной медицины и биотехнологий
Oshurkova Yulia L., PhD in Biological Sciences, Associate Professor, Deputy Dean of Faculty of Veterinary Medicine and Biotechnologies
Аннотация. Исследование было выполнено на 10 клинически здоровых щенках в возрасте от 2 до 6 месяцев и 20 здоровых взрослых собаках разных пород и разного пола в возрасте от 1 года до 8 лет. Установлено, что у щенков в возрасте от 2 до 6 месяцев адгезивно-агрегационные свойства эндотелия более выражены, чем у взрослых животных, что проявляется повышением СИАТ под действием ристомицина, который является маркером молекул фактора Виллебранда сосудистой стенки (110,69±12,36 % у щенков против 78,28±10,12 % у взрослых собак). Исследование показателей плазменно-коагуляционного гемостаза у щенков в возрасте до полугода показало укорочение ПВ (8,87±0,75 с.), ТВ (9,86±0,21 с.) и увеличение концентрации фибриногена (2,92±0,30 г/л) в плазме крови щенков в сравнении со взрослыми собаками (11,05±0,33 с., 12,7±0,44 с. и 1,98±0,12 г/л соответственно). Это компенсируется активностью антитромбина III, которая у щенков была выше (146,65±4,30 %), чем у взрослых собак (129,62±3,34 %). Но поскольку количество РФМК у щенков (4,35±0,28 мг / 100 мл) достоверно не отличалось от группы взрослых здоровых собак (5,24±0,37 мг / 100 мл), мы пришли к заключению, что наблюдаемые нами особенности системы гемостаза у здоровых щенков не несут в себе риск гиперкоагуляционных состояний. Summary. The study was conducted on 10 clinically healthy puppies at the age of 2-6 months and 20 healthy adult dogs of different breed and sex aged 1 to 8 years. We found that the adhesively-aggregation properties of the endothelium in 2-6-month-oldpuppies are more pronounced than in adult animals. This was manifested by increased ristomycin-induced platelet aggregation which amounted to 110.69±12.36 % in puppies against 78.28±10.12 % in adult dogs. Research of the indicators of coagulation hemostasis in puppies under the age of six months showed a shortening of the PT (8.87±0.75 seconds), TT (9.86±0.21 seconds) and an increase in the concentration of fibrinogen (2.92±0.30 g/l) in blood plasma compared to adult dogs (11.05±0.33 sec., 12.7±0.44 sec. and 1.98±0.12 g/l respectively). This was offset by the activity of antithrombin III which was higher in puppies (146.65±4.30 %) than in adult dogs (129,62±3,34%). But since the number of SFMC in puppies (4.35±0.28 mg /100 ml) was not significantly different from that in the group of healthy adult dogs (5.24±0,37 mg /100 ml) we came to the conclusion that those features of hemostatic system in healthy puppies did not carry the risk of hypercoagulable states.
Введение
Гемостаз - это весьма лабильная функция организма, физиологические параметры которой могут меняться даже в пределах одного организма [8].
Исследования, проведенные в гуманной медицине, указывают на возрастные изменения системы гемостаза [5, 7], также показаны возрастные изменения у телят и поросят [1, 6]. Доступные литературные данные по возрастным изменениям показателей
гемостаза у собак нами не найдены, хотя имеется немало исследований, которые описывают вариации гематологических показателей, связанные с возрастом [9, 11, 12, 13].
Одним из наиболее важных периодов физиологического и психологического формирования собаки является период от двух месяцев до полугода, когда происходит созревание ряда систем, идет наиболее активный рост, закладываются основы социального поведения и т. д. Поэтому целью нашего
исследования стало изучение особенностей функционирования системы гемостаза у щенков в возрасте до полугода.
Материалы и методы исследования
Исследование было выполнено на 10 клинически здоровых щенках разных пород в возрасте от 2 до 6 месяцев (5 кобелей и 5 сук). В качестве контроля использовали 20 взрослых клинически здоровых собак обоего пола.
Подсчет тромбоцитов производили по Фонио в мазке крови, стабилизированной ЭДТА, окрашенному по Романовскому.
Адгезивно-агрегационную активность тромбоцитов определяли количественным методом по Howard M. A. [2]. Для исследования брали кровь в вакуумные пластиковые пробирки, содержащие 3,8%-й раствор цитрата натрия. Определяли суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) с индукторами агрегации - аденозиндифосфат (АДФ) (концентрация 0,1 мг/мл), коллагеном (концентрация 20 мг/мл) и ристомицином (концентрация 15 мг/мл) [6].
Параметры плазменно-коагуляционного гемостаза определяли на двухканальном ко-агулометре Thrombostat производства Behnk Elektronik (Германия). Для оценки состояния плазменно-коагуляционного гемостаза определяли следующие показатели: АЧТВ (активированное частичное тромбопласти-новое время), ПВ (протромбиновое время), ТВ (тромбиновое время), количественный анализ фибриногена.
Функцию противосвертывающей системы оценивали с помощью измерения активности антитромбина III (АТ III) с хромогенным субстратом в бедной тромбоцитами плазме (принцип U. Abildgaard в модификации А. П. Момота и А. Н. Мамаева) [4]. Фибри-нолитическую активность в плазме исследуемых животных измеряли с помощью обнаружения растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК) в о-фенантролиновой пробе (планшетный вариант)
Полученные в ходе исследования результаты обрабатывались с помощью про-
граммного пакета Statistica 6.1. Значения полученных результатов в работе представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней (M±m), а также доверительного интервала. Сравнение между собой данных проводилось с применением U-критерия Манна - Уитни. P-значение приняли за 0,05.
Результаты и обсуждение
Количество тромбоцитов у исследуемых щенков составило 405,77±13,11 109/л, что не выходило за рамки нормативных значений (200-500 109/л, по L. Duncan et al.) [10] и достоверно не отличалось от количества тромбоцитов у взрослых собак (361,07±23,35 109/л) [3].
Адгезивно-агрегационные свойства тромбоцитов у исследуемых щенков в возрасте до полугода характеризовалась следующими показателями: суммирующий индекс агрегации тромбоцитов составил 92,96±10,23 % с АДФ, 114,01±12,05 % с коллагеном, 110,69±12,36 % с ристомици-ном; скорость агрегации 0,01±0,0026 мин. с АДФ, 0,01±0,0036 мин. с коллагеном, 0,01±0,0028 мин. с ристомицином; индекс дезагрегации 5,31±1,19 % с АДФ, 7,15±1,52 % с коллагеном, 5,75±1,26 % с ристомицином.
Причем суммирующий индекс агрегации тромбоцитов у щенков до полугода с ристомицином был достоверно (р = 0,044) выше, чем у взрослых собак: 110,69±12,36 % у щенков против 78,28±10,12 % у взрослых собак [3] (рис. 1).
Рис. 1. Суммирующий индекс агрегации с ристомицином у щенков до полугода и взрослых собак.
Рис. 2. Показатели плазменно-коагуляционного гемостаза у щенков в возрасте до полугода и взрослых собак.
Первую фазу свертывания крови (образование протромбиназы) характеризует активированное частичное тромбо-пластиновое время АЧТВ, составившее у щенков 12,29±0,94 с., было короче, чем у взрослых, но достоверности это различие не имело (р = 0,35).
Протромбиновое время характеризует первую (образование протромбиназы) и вторую (образование тромбина) фазы свертывания крови и отражает активность про-тромбинового комплекса (факторов VII, V, X и собственно протромбина - фактора II).
Протромбиновое время у щенков до полугода составило 8,87±0,75 с. (рис. 2), что достоверно (р = 0,016) короче, чем у взрослых собак (11,05±0,33 с.).
Третью фазу свертывания крови (образование фибрина) оценивали с помощью показателей фибриногена и тромбино-вого времени. ТВ, отражающее скорость превращения фибриногена в фибрин, у щенков также было достоверно короче: 9,86±0,21 с. (р = 0,000076) против 12,7±0,44 с. у взрослых собак. При этом количество фибриногена (2,92±0,30 г/л) было выше (р = 0,0061), чем у взрослых (1,98±0,12 г/л). Фибриноген в результате ферментативного процесса под воздействием тромбина и фактора ХШа может превращаться в нерастворимый фибрин, формируя каркас плотного вторичного тромба.
Антитромбин III (АТ III) - основной физиологический антикоагулянт, для которого кофактором является гепарин, инактивирует тромбин и активные IX,
X, XI, XII факторы. Активность антитромбина III (рис. 3) у исследуемых щенков составила 146,65±4,30 %, что достоверно выше (р = 0,0061), чем у взрослых собак (129,62±3,34 %).
Количество растворимых фибрин-мономерных комплексов у щенков в возрасте до полугода составило 4,35±0,28 мг / 100 мл и не имело достоверной разницы со взрослыми собаками, у которых количество РФМК составило 5,24±0,37 мг / 100 мл.
В гуманной медицине выявление в повышенном количестве РФМК имеет важное значение для диагностики тромбинемии и внутрисосудистого свертывания крови.
Выводы
1. У щенков в возрасте от двух до шести месяцев адгезивно-агрегационные свойства эндотелия более выражены, чем у взрослых животных, что проявляется повышением СИАТ под действием ристомицина, который является маркером молекул фактора Вилле-бранда сосудистой стенки.
2. У щенков в возрасте до полугода более высокая свертывающая способность плазмы крови, чем у взрослых собак. Что проявилось укорочением протромбинового и тромбино-вого времени и увеличением концентрации фибриногена в плазме крови.
3. Высокие коагуляционные свойства плазмы крови у щенков компенсируются высокой активностью противосвертывающей системы, а конкретно активностью антитромбина III.
Рис. 3. Активность антитромбина III у щенков в возрасте до полугода и взрослых собак.
4. Особенности системы гемостаза у здоровых щенков от 2 до 6 месяцев не несут в себе риск гиперкоагуляционных состояний, т. к. количество РФМК - маркера тромбине-мии - достоверно не отличается от группы взрослых здоровых собак.
Список литературы
1. Бабанин, Н. А. Особенности системы гемостаза у поросят в период новорожденности (краткие сведения) [Текст] / Н. А. Бабанин. - Курск, 2005. -С. 154-156.
2. Балуда, В. П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза [Текст] / В. П. Балуда, З. С. Баркаган, Е. Д. Гольдберг. - Томск, 1980. - 304 с.
3. Баруздина, Е. С. Некоторые аспекты системы гемостаза у здоровых взрослых собак в условиях Севера Европейской части России [Текст] / Е. С. Баруздина, Ю. Л. Ошуркова // Международное научное периодическое издание по итогам международной. науч.-практ. конф. (Стерлитамак, 14.03.2016 г.). -Стерлитамак : РИЦ АМИ, 2016. - С. 12-16.
4. Долгов, В. В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза [Текст] / В. В. Долгов, П. В. Свирин. - М. : Триада, 2005. - 223 с.
5. Дронь, А. Н. Физиологические изменения гемостаза в различные возрастные периоды жизни [Текст] / А. Н. Дронь // Медицинская наука и образование Урала. - 2012. - 3. - С. 123.
6. Медведев, И. Н. Физиологическое становление тромбоцитарного звена гемостаза у продуктивных животных в постнатальном онтогенезе : дис. ... докт. биол. наук : 03.00.13 [Текст] / Медведев Илья Николаевич. - Чебоксары, 2008. - 396 с.
7. Якунина, Л. Н. Возрастные особенности гемостаза и алгоритм диагностики скрытых и субклинических форм кровоточивости у детей : дис. ... докт. мед. наук : 14.00.09 [Текст] / Якунина Людмила Никитична. - М., 1991. - 250 с.
8. Blois, S. L. Biologic variability and correlation of platelet function testing in healthy dogs [Текст] / S. L. Blois, S. T. Lang , R. D. Wood , G. Monteith // Vet. Clin. Pathol. - 2015. - 42 (2). - Р. 23-29.
9. Bourges-Abella, N. H. Reference intervals, intraindividual and interindividual variability, and reference change values for hematologic variables in laboratory beagles [Текст] / N. H. Bourges-Abella, T. D. Gury, A. Geffre, D. Concordet, K. C. Thibault-Duprey, A. Dauchy, C. Trumel // J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. - 2015. - 54 (1). - Р. 17-24.
10. Duncan, L. Handbook of small animal practice: fifth edition [Текст] / L. Duncan et al. - USA, Library of Congress Control, 2008. - Р. 1270.
11. Harper, E .J. Age-related variations in hematologic and plasma biochemical test results in Beagles and Labrador Retrievers [Текст] / E. J. Harper, R. M. Hackett, J. Wilkinson, P. R. Heaton // J. Am. Vet. Med. Assoc. -2003. - 223 (10). - Р. 1436-1442.
12. Lawrence J. Breed-specific hematological phenotypes in the dog: A natural resource for the genetic dissection of hematological parameters in a mammalian species [Текст] / J. Lawrence, Y. Mr. Chang, B. Szladovits, L. J. Davison, O. A. Garden // PLoS ONE. - 2013. -8 (11). - Р. 812-888.
13. Strasser, A. The effect of aging on laboratory values in dogs [Текст] / A. Strasser, H. Niedermuller, G. Hofecker, G. Laber // Zentralbl. Veterinarmed. A. -1993. - 40 (9-10). - Р. 720-30.
