CC BY
8
и низкомолекулярных образцов полимера. Введение ПАА с молекулярной массой 360 0Э0 и 740 ООО вызвало выраженную белковую дистрофию паренхимы печени и повреждение эпителия канальцев семенников, применение образца с молекулярной массой 72 ООО — нарушение структуры почек. Для выявления особенностей биологического действия ПАА при продолжительном его контакте с организмом были проведены подострый и хронический эксперименты. Изучали более широкий спектр полимеров с различной молекулярной массой (6 образцов с диапазоном ее от 80 0Э0 до 960 ООО). Исследование токсичности ПАА в подостром и хроническом опытах показало, что полимер вызывает полисимптомную картину интоксикации. У животных выявлены функциональные изменения и нарушения структуры печени, почек и семенникоз. Как и при однократном введении ПАА., получены данные, свидетельствующие о различии характера биологического действия образцов с различной молекулярной маесол. Ннзкомолекулярные (от 80 000 до 170 ООО) образцы оказызали позреждао-щее действие на почки: появились застойные яз-ления в области извитых канальцев, набуханиэ клеток канальцевого эпителия. При введении срэд-немолекулярных образцов полимера (молекулярная масса от 270 000 до 700 ООО) в первую очередь определялись структурные нарушения в печени: вакуолизация цитоплазмы гепатоцитоз, пролиферация клеток ретикулоэндотелия, застойное полнокровие органа и в некоторых случаях обеднение паренхиматозных клеток гликогеном. У крыс, получавших средне- и высокомолекулярный ПАА, наряду с дистрофическими изменениями ретикулоэндотелия наблюдались грубые изменения структуры семенников в виде дегенеративных и атрофи-ческих процессов, в большинстве случаев приводивших к полной атрофии сперматогенного эпителия. В сперматогенном эпителии семенников крыс, получавших низкомолекулярный ПАА (72 000 в
остром, 83 0Э0 и 170 000 в подостром, 90 000 в хроническом), отклонений от контроля не выявлено.
Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что ПВКЛ и ПАА при парентеральном способе введения в дозах, близких к предполагавшимся к использованию в клинике, оказывают вредное воздействие на организм. Результаты изучения зависимости степени токсичности образ-цоз полимэроз от их молекулярной массы в ряде ПВКЛ и ПАА дают основание предположить, что указанная корреляция присуща полимерным соединениям, но характер ее не является общим для всех классов полимеров. Так, в ряду ПВКЛ более выраженной биологической активностью обладали ннзкомолекулярные, а в ряду ПАА — средне- и высокомолекулярные изученные образцы. Эти данные подтверждают предположение о том, что токсичность полимерного соединения обусловлена величиной, структурой, а также пространственным положением молекулы, определяющими возможность проникновения ее через мембранные обра-зозания микрососудов организма.
Выводы. 1. Гигиеническая оценка полимеров медицинского назначения должна проводиться в эксперименте, наиболее близко имитирующем ус-лозия их применения с учетом таких факторов, как путь введения, сроки пребывания изделия в организме и др., что позволяет дифференцированно подходить к определению сфер использования материала.
2. Установленная в эксперименте зависимость характера и степени биологической активности высокомолекулярного соединения от величины его молекулы указывает на необходимость изучения токсичности имплантируемых полимеров с учетом их молекулярной массы. Это дает возможность находить границы, в пределах которых искусственные материалы могут быть биологически индифферентны.
Поступила 16.09.80
УДК 615.277.4:632.961.070
Кандидаты мед. наук Р. А. Рязанова и Л. С. Дедова
ОРГАННОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ТКАНИ КАК СКРИНИНГОВЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ БЛАСТОМОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ
Московский НИИ гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
Оценка бластомогенной активности химических соединений классическим методом связана с определенными трудностями, в основном сдлительным (не менее 2—3 лет) проведением опытов на животных.
При наличии значительного разрыва между количеством вновь синтезируемых химических соединений и числом выполняемых исследований их влияния на бластомогенность применение уско-
ренных методов приобретает особое значение. К таким методам относится органное культивирование эмбриональной ткани на трансплацентарном поступлении химических веществ, разработанное акад. Л. М. Шабадом и соавт. Метод основан на повышенной чувствительности эмбриональной ткани к действию химических агентов.
В данном сообщении изложены материалы экспериментальных иследований по выявлению воз-
Сроки появления морфологических изменений (в сут) в органных культурах эмбриональных почек мышей, трансплантарно подвергавшихся воздействию пестицидов
Доза пестицида Число эксплантатов Рост Диффузия гиперплазия Выросты Кистозиое расширение Эпителиальные пласты, очаго-пые пролифераты Гибель »ксплан-татов
Ни трохлор
2,38 мг/кг 153 15 4—9 4—9 4—7 8—15
(1/3500 и),,,,) (39—84) (16,6-6,6) (22,2—3,8) (6,6—100)
Изофос-32
0,228 мг/кг 209 17 4—17 4—12 4—17 4-17 14—17
(1/1600 1ЛЭ60) (18,9—100) (2,7-3) (8—28,5) (2,7-58) (12,5-56,25)
О,114 мг/кг 126 14 4—13 4 4—13 0 4—14
(1/3200 ЬЭ50) (46,4-12,5) (1.7) (7,1-10) 0 (7—100)
Дианат
0,96 мг/кг 282 24 4—24 4—18 6—24 4—24 14—24
(1/300 ЬО60) (48—70) (1063-1,4) (4,5-13) (10-13) (12,4-57)
0,096 мг/кг 269 15 4—15 4-6 4—14 4-15 15
(1/3000 ЬО60) (65-94) (6,3—13,5) (13,1—19) (15-30) (37,5)
Этилнитрозомочевина
5 мг/кг 188 18 1—14 10—14 4—14 10 12—18
(10—9л 8) (9-14) (16,6—30) (2,4) (7,7-100)
Контроль
85 15 4 4 4 5 4-15
(44) (2,8) (6) (0) (6,2—90,3)
Примечание. О—изменения не обнаружены; в скобках—процент наблюдений.
можной бластомогенной опасности пестицидов (диа-ната, нитрохлора, изофоса-3), относящихся к различным классам химических соединений.
Опыты поставлены на мышах-самцах линии ВАЬВ/С. Пэдолыгные и контрольные группы включали по 25—30 особей. Пестицидные препараты вводили беременным мылам перорально 4—5 раз в последнюю треть беременности в пороговой и недействующей дозах, установленных в токсикологическом эксперименте по показателям общетоксического действия. При наличии эффекта дозу снижали на 1 порядок. На 19—20-й день беременности мышей забивали, проводили органное культивирование эмбриональных почек по общепринятой методике в модификации Т. С. Колесниченко.
После инкубирования в термостате органные культуры эмбриональных почек фиксировали в формалине и обрабатывали по гистологической схеме. Исследования осуществляли в динамике с 3-го по 21-й день инкубации. Контролем служили 2 группы: в одной использовали органные культуры, полученные от ингакгных м л дел, в другой — от мышей, подвергавшихся воздействию канцерогена — этилнитрэзэяочэзяны.
Критерием бласгомогенного действия служили морфогистологические изменения в органных культурах эмбриональных почек подопытных мышей в
сравнении с контрольными. При этом учитывали продолжительность роста эксплантатов, сроки появления и характер развития морфологических сдвигов (диффузной гиперплазии, выростов, кис-тозного расширения канальцев, эпителиальных пластов и очаговой пролиферации), а также сроки гибели эксплантатов. Особое внимание уделяли развитию в органных культурах специфических нарушений (очаговой пролиферации, цистаденом), которые обычно возникают при действии заведомых канцерогенов (Л. М. Шабад и соавт.; Н. И. Голубь, и др.).
Результаты экспериментальных исследований представлены в таблице. Анализ полученных данных показал, что изофос-3 в дозе 0,228 мг/кг и дианат в дозах 0,96 и 0,096 мг/кг при повторном введении подопытным мышам вызывают стимуляцию роста эксплантантов, возникновение морфологических пролиферативных изменений в ранние сроки культивирования. Наряду с диффузной гиперплазией появлялись выросты, очаговые пролифераты и эпителиальные пласты (рис. 1 и 2). В то же время при действии изофоса-3 в меньшей дозе (0,114 мг/кг) и нитрохлора в дозе 2,38 мг/кг морфологические изменения были аналогичны выявленным в эксплантатах эмбриональных почек мышей. Отсутствие в органных культурах очаговых пролифера-
*
Рис. 1. Очаговая пролиферация эпителия капилляров и капсулы клубочков по краю эксплаитанта почечной ткани при действии 1/1600 LD60 изофоса-3, равной 225 мг/кг (17-е сутки культивирования).
тов, укорочение срока жизнедеятельности эксплантатов и ранняя гибель органных культур, начиная с 4-го дня, дают основание считать нитрохлор и изофос-3 в изученных дозах неопасными в бласто-могенном отношении.
Исследования, проведенные методом органного культивирования, позволили выявить дозовую зависимость, которая хорошо прослеживалась при действии изофоса-3. В дозе 0,228 мг/кг пестицид вызывал в органных культурах гиперплазию эпителия всех структурных единиц почки — образование эпителиальных пластов и очаговых пролифе-ратов с первых дней культивирования (4-е сутки) и до конца наблюдения (17-е сутки). При применении вещества из расчета 0,114 мг/кг морфологические изменения в органных культурах были аналогичны наблюдаемым в контроле. Эксплантаты плохо покрывались капсулой, с первых дней культивирования отмечались гибель отдельных фрагментов, дегенеративные сдвиги в ядрах и цитоплазме клеток, очаги некроза. На 14-е сутки культивирования все культуры практически погибали.
Исследования также показали, что указанный метод достаточно информативен и полученные с его помощью данные могут быть использованы в комплексе с другими показателями биологического
Рис. 2. Активная пролиферация эпителия капсулы эксплаитанта с образованием эпителиального пласта при действии 1/3000 ЬОео дианата, равной 0,096 мг/кг (4-е сутки культивирования).
действия (общетоксического, эмбриогонадотокси-ческого и мутагенного). Модель трансплацентарного бластомогенеза в качестве экспресс-метода может быть применена наряду с другими способами для предварительного отбора химических соединений и дальнейшего систематического исследования их на возможную канцерогенность. Возможность получить довольно объективную информацию за непродолжительный срок исследования позволяет отнести метод органного культивирования к заслуживающим внимания.
Выводы. 1. Изофос-3 в дозе 0,228 мг/кг и дианат в дозах 0,96 и 0,096 мг/кг вызывают диффузную гиперплазию эпителия почечных канальцев, кистозные расширения, эпителиальные пласты и очаговые пролифераты.
2. Метод органного культивирования эмбриональной почечной ткани может быть использован в токсикологическом эксперименте для предварительного отбора веществ, подозрительных в бласто-могенном отношении.
Литература. Голубь Н. И. — Бюлл. экспер. биол.,
1969, № 11, с. 83. Колесниченко Т. С. — Вопр. онкол., 1966, № 12, с. 39. Шабад Л. М., Колесниченко Т. С., Сорокина Ю. Д. Трансплацентарный бластомогенез и органные культуры. М., 1975.
Поступила 25.08.80
УДК 614.72-074:547.322.32.06:543.544
Доктор хим. наук М. Т. Дмитриев, В. А. Мищихин (Москва)
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИНИЛХЛОРИДА
В ВОЗДУХЕ
В последние десятилетия исключительно широкое распространение в быту и промышленности получили полимерные синтетические материалы на основе поливинилхлорида (ПВХ). ПВХ производится в большем по сравнению с другими полимерными материалами количестве, применяется в виде тары и упаковочной пленки, искусственной кожи, отделочных строительных материалов (линолеу-
мов, пленок), лаков, красок и шпаклевок. В то же время установлено, что используемый для получения ПВХ мономер — винилхлорид (ВХ) обладает канцерогенной активностью (А. В. Быхов-ский и Э. Н. Дюбанкова; Г. Н. Заева; В. О. Шеф-тель; Дж. Ленихен и У. Флетчер). Поэтому при гигиенической оценке материалов из ПВХ, контроле за их производством и применением в промыш-
