CC BY
48
Бурдаха поясничного отдела). Распад миелина, слабая окрашиваемость осевых цилиндров, дистрофия нервных клеток, лимфоплазмоцитарные инфильтраты по ходу сосудов. Аорта: наличие в среднем слое гуммозных инфильтратов с разрастанием соединительной ткани и формированием полей склероза. Сифилитическая аневризма аорты.
Патологоанатомический диагноз: Нейросифилис. Спинная сухотка с нижним парапарезом и нарушением функции тазовых органов. Сифилитический мезаортит с формированием аневризмы. Смерть наступила в ре-
зультате выраженной интоксикации и полиорганной недостаточности.
Таким образом, основной причиной смерти у наблюдаемых нами больных явились острые процессы в головном мозге, несовместимые с жизнью (инсульты, распад гуммозных образований, отек головного мозга и т. д.), полиорганная недостаточность, специфическое поражение сердечно-сосудистой системы, марантическое истощение. Патологоанатомическое вскрытие подтвердило сифилитическую природу патологических изменений внутренних органов и нервной системы больных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кочетков В.Д. Клиника и ранняя диагностика современных форм сифилиса нервной системы: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. — М., 1978. — 45 с.
2. Липманович А.С. Динамика смертности от нейросифилиса по данным аутопсий за 24 года (1933-1956) // Вестн. дерматологии и венерологии. — 1958. — № 6. — С. 54-58.
3. Милич М.В., Ощепкова Л.М. Патологоанатомические
данные о лицах, состоявших на учете по поводу сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. — 1988. — №11. — С. 5054.
4. Hutchinson C. M., Hook E.W. (3d) Syphilis in adults // Med. Clin. North Am. — 1990. — V.74, №6. — P. 1386-1416.
5. Lowhagen G.B. Syphilis: test procedures and therapeutic strategies // Semin. Dermatol. — 1990. — V.9, №2. — P. 152-159.
Информация об авторах: 660022,Красноярск, ул. Партизана Железняка, 1, e-mail: [email protected] Родиков Михаил Владимирович — профессор кафедры, д.м.н.,
Шпрах Владимир Викторович — ректор, заведующий кафедрой, профессор, д.м.н.
© ХОРОШИХ О.В., БЕЛОХВОСТИКОВА Т.С., КИСЕЛЕВА Н.В., МУСИНЦЕВА Я.А. — 2010
ОПЫТ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ НА ТЕРРИТОРИИ ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ
МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ
О.В. Хороших1,2, Т.С.Белохвостикова1'2, Н.В. Киселева1-2, Я.А. Мусинцева1,2 ^Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра клинической лабораторной диагностики, зав. — д.б.н., проф. Р.Г. Скворцова;
2ГУЗ Иркутская ордена «Знак Почета» областная клиническая больница, гл. врач — к.м.н., П.Е. Дудин, центр лабораторных исследований, зав. — д.м.н., проф. Т.С. Белохвостикова)
Резюме. Внедрение проточной цитофлуориметрии в комплекс исследования гематологических больных позволяет значительно улучшить лабораторную диагностику и является основой возможности постановки полного лабораторного диагноза острого лейкоза. Предлагается проведение одноэтапного иммунофенотипирования для выявления лейкозного клона.
Ключевые слова: острый лейкоз, проточная цитофлуориметрия, моноклональные антитела, лабораторная диагностика.
EXPERIENCE OF LABORATORY DIAGNOSTICS OF ACUTE LLEUKEMIA ON THE TERRITORY OF IRKUTSK REGION BY THE METHOD OF FLOW CYTOMETRY
O.V. Khoroshikh 1-2, T.S. Belokhvostikova h2, N.V.Kiseleva1-2, J.A. Musintseva 1,2 ('Irkutsk State Institute for Postgraduate Medical Education; 2 Irkutsk Regional Clinical Hospital)
Summary. Using the flow cytometry in the complex of researches for patients with hematological diseases can significantly improve laboratory diagnostics and it is a basis for opportunity of making the complete laboratory diagnosis of acute leukemia. The one-stage immunophenotyping for revealing leukosis clone is suggested.
Key words: acute leukemia, flow cytometry, monoclonal antibodies, laboratory diagnostics.
Ежегодно в Иркутской области увеличивается число пациентов с онкогематологическими заболеваниями. Так, за последние 20 лет количество зарегистрированных случаев острых лейкозов по данным Т.С. Капорской выросло в 2,3 раза [1]. Основными причинами является не только рост заболеваемости, а также доступность специализированной гематологической помощи и улучшение качества лабораторной диагностики. Диагноз острого лейкоза не может быть поставлен без подтверждения современными лабораторными методами [1,11].
Лабораторная диагностика острых лейкозов начинается с обнаружения более 20% бластных клеток в периферической крови и/или в пунктате костного мозга пациента. Оптимальным для диагностики является одномоментное взятие материала на исследование клеточного состава и морфологических особенностей,
для постановки цитохимических реакций, проведения иммунофенотипирования и цитогенетического анализа [1, 3, 12].
Применение метода проточной цитофлуориметрии требует хорошего знания клинической картины гемо-бластозов, понимания этапов развития и созревания гемопоэтических клеток, их физиологических и патологических изменений. Несмотря на строгий отбор пациентов для иммунофенотипирования, являющегося затратным и трудоемким лабораторным методом, по нашим данным, 9% исследований являются малоинформативными, не позволяющими установить причину пролиферации клеток. Лабораторное исследование включает три главных этапа: преаналитический (обработка материала, окраска моноклональными антителами), аналитический этап (сбор данных на проточном цитофлюориметре), постаналитический этап
Рис. 1. Структура распределения исследований методом проточной цитофлуориметрии, 2004-2009 гг.
(анализ полученных данных и их интерпретация) [10].
Целью нашего исследования являлось обобщение первого опыта лабораторной диагностики острых лейкозов на территории Иркутской области методом проточной цитофлуориметрии.
Материалы и методы
С 2004 г. диагноз верифицирован у 823 пациентов с гемобластозами. Анализ проводился для пациентов стационара и поликлиники ГУЗ Иркутской ордена «Знак Почета» областной клинической больницы, отделения онкогематологии Иркутской областной детской клинической больницы, оказывалась консультативная помощь соседним регионам (республика Бурятия). С целью определения цитоза материала для проточной цитофлуориметрии в лаборатории использовался 23-х параметровый гематологический анализатор «Sysmex SF 3000» («Roch», Швейцария), что дало возможность оптимально рассчитать количество моноклональных антител для анализа клеток периферической крови, костного мозга, лимфоузла, ликвора, выпотных жидкостей. Предварительная морфологическая оценка помогает скорректировать панель моноклональных антител для исследования, особенно при подозрении на про-миелоцитарный, эритробластный, мегакариобластный варианты острого миелобластного лейкоза (ОМЛ), лимфобластную лимфому.
Определение иммунофенотипа проводилось на 2-х лазерном проточном цитофлуориметре FACS Calibur («Bekcton Dickinson», США) с анализом 2-х оптических и 4-х параметров флуоресценции. Настройка прибора производилась с применением калибровочных частиц «CaliBRAITE» в программном обеспечении «FACSComp». Полученные данные обрабатывались с помощью программы «CellQuest pro».
Использовалась широкая панель моноклональных антител (50 маркеров), для определения линейности, стадии развития и выявления абберантного иммунофенотипа опухолевых клеток. Набор используемых реагентов варьирует в зависимости от наличия их в лаборатории, с учетом клинической картины и данных микроскопии. Применялись маркеры фирмы «Bekcton Dickinson», «Dako» «Miltenyi Biotec»: Т- и NK-клеточные (Ш1а, œ2, œ3, œ4, œ5, œ7, œ8, œi6+56, CD56, CD103, TCR-aß, TCR-yô, UGD294, Zap-70), B- клеточные (œi9, œ20, œ22, œi0, Œ79a, IgM, FMC7, Kappa, Lambda, Cyclin Di, CD138), миелоидные и мо-ноцитарные (СD13, СD14, СD15, СD33, СD36, СD41а, СD61, СD64, СD117, МРО, CD235a, CD203с), линейно-нерестриктированные антигены ^D45, СD9), ранние маркеры ^D34, TDT), активационные и прогностические (Ш11с, СD23, СD25, СD28, Œ38, СD71, СD95, HLA-DR), маркеры пролиферации (Ki-67). Во всех случаях выполнялось одноэтапное исследование с использованием технологии лизирования с отмывкой.
Результаты и обсуждение
Анализ результатов лабораторной диагностики острых лейкозов, привел к выводу о том, что только
морфологический и цитохимический анализ бластных клеток вызывал затруднения в определении вариантов острого лейкоза в 18% случаев. Дальнейшее внедрение метода многоцветной проточной цитофлуориметрии изменило картину результатов лабораторных исследований и позволило верифицировать варианты острых лейкозов во всех случаях. С помощью этого метода появилась возможность выявлять дополнительные критерии прогноза, контролировать степень анеуплоидии, минимальную остаточную болезнь. Структура выполненных исследований выглядит следующим образом (рис.1): преобладали хронические лимфопролиферативные заболевания (60%), острые лейкозы составили 31%, а 9% — условно не информативные исследования, при которых не было выявлено патологического клона клеток: реактивные изменения, неправильный выбор субстрата или некорректный забор материала.
Среди острых лейкозов у взрослого населения Иркутской области преобладали миелобластные — 67,7%, лимфобластные составили 29%, бифенотипиче-ские — 3,2%. Распределение по вариантам миелобласт-ных лейкозов, с учетом морфологии, цитохимии и иммунофенотипа, представлено на рисунке 2.
Нами проведен анализ экспрессии неродственных антигенов при ОМЛ и получены следующие данные. При ОМЛ с минимальной миелоидной дифференци-ровкой, который наблюдался в 9% случаев, выявлялась экспрессия СБ4 (11,1%) и ТБТ (10,9%), при ОМЛ без созревания и с созреванием в единичных случаях выявлялась экспрессия В-клеточных маркеров (2%), СБ56 (12,2%). Острый промиелоцитарный лейкоз в 20% случаев характеризовался экспрессией СБ2, что соответствовало гипогранулярному варианту. При ОМЛ миеломонобластной и монобластной линейности наиболее часто выявлялся неродственный маркер СБ56 (38,9% и 87,2% случаев соответственно). С обнаружением экспрессии неродственных антигенов встает вопрос о бифенотипических вариантах острых лейкозов. Для уточнения диагноза удобно использовать таблицу подсчета баллов, предложенную европейской группой им-мунофенотипической характеристики лейкемий EGIL. За период 2004-2009гг в нашей лаборатории диагностировано 7 случаев бифенотипических вариантов острых лейкозов, которые требуют отдельного подхода при выборе тактики лечения.
Для повышения эффективности терапии в ряде случаев потребовалось определение остаточного клона опухолевых клеток. Высокая разрешающая способность проточной цитофлуориметрии делает возможным диагностировать наличие минимальной остаточной болезни в процессе и после окончания химиотерапии. В Российских стандартах оказания гематологической помощи нет упоминания о проведении такого рода диагностики, несмотря на ее решающее значение при выборе тактики ведения больных гемобластозами. Считаем, что для клиник, занимающихся оказанием гематологической помощи, необходимы дополнения к существующим стандартам: утвержденные протоколы иммунофенотипирования для каждой нозологической формы гемобластозов и определение кратности имму-
Рис. 2. Структура острых миелобластных лейкозов.
нофенотипирования для диагностики минимальной ляется надежным методом диагностики острых лейкоостаточной болезни. зов, одноэтапное проведение исследования позволяет
Таким образом, проточная цитофлуориметрия яв- быстро и достоверно поставить диагноз.
ЛИТЕРАТУРА
1. Диагностика лейкозов. Атлас и практическое руководство. / Под ред. Д.Ф. Глузмана. — Киев: Морион, 2000 — 224с.
2. Капорская Т.С. Динамика заболеваемости гемобластоза-ми населения Иркутской области: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. — Новосибирск, 2007. — 27 с.
3. Клиническая онкогематология: Рук-во для врачей / Под ред. М.А. Волковой. — М.: Медицина, 2001. — 576 с.
4. Луговская С.А., Почтарь М.Е., Тупицын Н.Н. Иммунофенотипирование в диагностике гемобластозов. — М.-Тверь: Триада, 2005. — 168 с.
5. Хоффбранд В., Петит Д. Гематология: Атлас-справочник. — Пер. с англ. — М.: Практика, 2007. — 408с.
6. Jennings C.D., Foon K.A. Recent Advances in Flow Cytometry: Application to the Diagnosis of Hematologic Malignancy// Blood. — 1997. — Vol. 90, №7. — P. 2863-2892.
7. Cytometric analysis of cell phenotype and function / Ed. by
D.A. McCarthy, M.G. Macey. — Cambridge University Press, 2001.
8. Flow Cytometry: Principles and Applications / Ed. by M.G. Macey. New Jersey: Humana Press Inc., Totowa, 2007.
9. Lichtman M.A., Kipps T.J., Seligsohn U., et al. Williams Hematology. — Eighth Edition, The McGraw-Hill Companies, 2010.
10. Methods in Molecular Biology: Flow Cytometry Protocols, 2nd ed. / Edited by: T.S. Hawley, R.G. Hawley. — New Jersey Humana Press Inc., Totowa, 2004.
11. Nguyen D., Diamond L. W., Braylan R.C. Flow Cytometry in Hematopathology: A Visual Approach to Data Analysis and Interpretation, Second Edition- University of Florida College of Medicine Gainesville. — New Jersey: Humana Press Inc., Totowa, 2007.
12. SwerdlovS.H., HarrisN.L., JaffeE.S., et al. WHO classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. — 4th Edition. — Lyon: IARC, 2008.
Информация об авторах: 664079, м/р Юбилейный, 100, Центр лабораторных исследований, тел. (3952) 40-77-09, e-mail: [email protected] Хороших Оксана Владимировна — врач,
Белохвостикова Татьяна Сергеевна — д.м.н., профессор, заведующая центром; Киселева Надежда Владимировна — врач,
Мусинцева Яна Александровна — врач.
© ФЕДЧИШИН О.В — 2010
ЛАЗЕРНЫЙ 3D СКАНЕР 3SHAPE D700 ОСНОВА ТОЧНОСТИ И БЫСТРОДЕЙСТВИЯ CAD/CAM СИСТЕМЫ
О.В. Федчишин
(Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра ортопедической стоматологии, зав. — д.м.н., проф. В.В. Трофимов)
Резюме. В статье приведены технические характеристики и возможности лазерного 3D сканера 3shape D700. Подробно рассматриваются технологические решения позволяющие обрабатывать различные объекты в короткие сроки.
Ключевые слова: сканер, лазер, CAD/CAM.
LASER 3D THE SCANNER 3SHAPE D700 A BASIS OF ACCURACY AND SPEED OF CAD/CAM SYSTEM
O.V. Fedchishin (Irkutsk State Institute of Continuing Medical Education)
Summary. In article technical characteristics and possibilities laser 3D the scanner 3shape D700 are resulted. Technological decisions allowing are in detail considered to process various objects in short terms.
Key words: the scanner, the laser, CAD/CAM.
В настоящее время трудно назвать область человеческой деятельности, в которой не используются компьютерные технологии. Современные компьютерные CAD/ CAM-системы автоматизированного моделирования и изготовления стоматологических реставраций постепенно проникают и в Российскую стоматологию.
Аббревиатуру CAD/CAM (Computer Aided Design/ Computer Aided Manufacturing) можно перевести как компьютерное проектирование и высокотехнологичное производство сложных изделий под управлением компьютера. Это современная технология производства каркасов зубных протезов с помощью моделирования их на компьютере и дальнейшего фрезерования на станке с числовым программным управлением (ЧПУ). Эффективный уровень автоматизации труда позволяет изготавливать каркасы зубных протезов идеальной точности и создавать на этой основе эстетичные функциональные реставрации.
Работа всех современных стоматологических CAD/ CAM систем состоит из нескольких этапов:
1. Получение информации о рельефе поверхности протезного ложа специальным устройством и преоб-
разование полученных данных в цифровой формат для компьютерной обработки.
2. Построение оптимальной компьютерной модели конструкции протеза с учетом анатомических особенностей пациента (этап CAD).
3. Изготовление зубного протеза из выбранного конструкционного материала, на основе полученной компьютерной модели, с помощью устройства с числовым программным управлением (этап CAM).
Различные стоматологические CAD/CAM системы существенно отличаются технологическими решениями, используемыми для выполнения этих этапов. Безупречность изготовления реставрации напрямую зависит от качества сканирования источника обрабатываемой информации, точности и чистоты поверхности используемых рабочих моделей.
Рассмотрим подробнее 3D сканер 3shape D700 современный сканер с новейшим программным обеспечением. По версии Dental Lab products Magazine Сканер D700 в ноябре 2009 года вошел в ТОП 10 лучших из лучших стоматологических лабораторных продуктов 2009
