Раздел - молекулярная медицина
Опыт изучения статуса метилирования промоторной области гена MGMT как основа
для создания регистра пациентов с опухолями центральной нервной системы
12 2 1 1 Рыжова М.В., Снигирева Г.П., Григорьева Т.В., Старовойтов Д.В., Никитин П.В.,
2Шайхаев Е.Г., 2Телышева Е.Н., 1Шишкина Л.В., 1Панина Т.Н.1, 1Шибаева И.В.,
1Шугай СВ., 1Сычева Р.В., 1Зубова ИВ.
1ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр нейрохирургии имени академика Н.Н. Бурденко» Минздрава России, 125047, Москва, 4-я Тверская-Ямская, д. 16 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский Научный Центр Рентгенорадиологии» МЗ РФ, 117997, Москва, ул. Профсоюзная, д. 86 Информация об авторах
Рыжова Марина Владимировна — доктор медицинских наук, заведующая патологоанатомическим отделением ФГАУ «НМИЦ нейрохирургии» Минздрава России Снигирева Галина Петровна — доктор биологических наук, заведующая лабораторией молекулярной биологии и цитогенетики ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России Григорьева Татьяна Викторовна — младший научный сотрудник молекулярной биологии и цитогенетики ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России
Старовойтов Дмитрий Валерьевич — биолог патологоанатомического отделения НМИЦ нейрохирургии
Никитин Павел Владимирович — ординатор патологоанатомического отделения НМИЦ нейрохирургии
Шайхаев Евгений Гаджиевич — к.б.н., научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и цитогенетики ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России
Телышева Екатерина Николаевна — младший научный сотрудник лаборатории молекулярной биологии и цитогенетики ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России
Шишкина Людмила Валентиновна — к.м.н., в.н.с. патологоанатомического отделения НМИЦ нейрохирургии
Панина Татьяна Николаевна — врач патологоанатомического отделения НМИЦ нейрохирургии
Шибаева Ирина Вячеславовна — медицинский лабораторный техник патологоанатомического отделения НМИЦ нейрохирургии
Шугай Светлана Викторовна — врач патологоанатомического отделения НМИЦ нейрохирургии
Сычева Регина Валерьевна — к.б.н., биолог патологоанатомического отделения НМИЦ нейрохирургии
Зубова Ирина Васильевна — фельдшер-лаборант патологоанатомического отделения
НМИЦ нейрохирургии
Контакты для переписки с редакцией
Рыжова Марина Владимировна, доктор медицинских наук, заведующая патологоанатомическим отделением ФГАУ «НМИЦ нейрохирургии» Минздрава России Адрес: 125047, 4-ая Тверская-Ямская ул., д.16, г. Москва, Россия, e-mail: mrizhova@nsi.ru ORCID:http://ortid.org/0000-0001-7206-6365
Снигирева Галина Петровна, доктор биологических наук, заведующая лабораторией молекулярной биологии и цитогенетики ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России Адрес: 117997, ГСП-7, ул. Профсоюзная, д.86, г. Москва, Россия, e-mail: sni_gal@mail.ru ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2584-802X
Резюме
Исследование посвящено изучению статуса метилирования промоторной области гена ЫОЫТ у пациентов с опухолями центральной нервной системы.
Цель исследования: изучить статус метилирования промоторной области гена ЫОЫТ у пациентов с различными гистологическими типами злокачественных новообразований ЦНС. Материал и методы. Исследование проведено с помощью метил-специфической полимеразной цепной реакции в реальном времени на серии из 244 опухолей. Результаты исследования. Проанализирован статус метилирования гена ЫОЫТ в серии из 244 образцов преимущественно глиальных опухолей у взрослых пациентов. В 74 случаях (30%) опухоли имели метилированный ген ЫОЫТ. Создана молекулярно-генетическая база данных пациентов со злокачественными заболеваниями головного мозга. Заключение. Полученные результаты молекулярно-генетического исследования станут основой для создания базы данных пациентов с нейрохирургической патологией. Выявленные клинические и молекулярно-генетические характеристики в ближайшем будущем могут быть использованы для разработки современных подходов к прогнозированию и лечению злокачественных заболеваний ЦНС.
Ключевые слова: опухоли головного мозга, ген ЫОЫТ, метил-специфическая полимеразная цепная реакция
The experience of studying the methylation status of the promoter region of the MGMT gene as a basis for creating a register of patients with tumors of the central nervous system
1Ryzhova M.V., 2Snigireva G.P., 2Grigorieva T.V., 1Starovoytov D.V., 1Nikitin P.V., 2Shaykhayev E.G., 2Telysheva E.N., 1Shishkina L.V., 1Panina T.N., 1Shibaeva I.V., 1Shugay S.V., 1Sycheva R.V., 1Zubova IV.
1Federal State Autonomous Institution «N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery» of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, 125047, Moscow, the 4th Tverskaya-Yamskaya str., 16
2Federal state budgetary institution "Russian Scientific Center of Roentgenoradiology" of the Ministry
of Healthcare of the Russian Federation (RSCRR), 117997 Moscow, Profsoyuznaya, 86
Authors
Ryzhova M. V. - MD, Head of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Snigireva G. P. - D.Sci. (Biol.), Head of Laboratory of Molecular Biology and Cytogenetic, Federal state budgetary institution "Russian Scientific Center of Roentgenoradiology" of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation (RSCRR)
Grigorieva T.V. - Researcher of Laboratory of Molecular Biology and Cytogenetic, Federal state budgetary institution "Russian Scientific Center of Roentgenoradiology" of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation (RSCRR)
Starovoytov D.V. - Biologist of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Nikitin P.V. - Resident of of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Shaikhaev E.G. - Researcher of Laboratory of Molecular Biology and Cytogenetic, Federal state budgetary institution "Russian Scientific Center of Roentgenoradiology" of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation (RSCRR)
Telysheva E.N. - Researcher of Laboratory of Molecular Biology and Cytogenetic, Federal state budgetary institution "Russian Scientific Center of Roentgenoradiology" of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation (RSCRR)
Shishkina L.V. - Candidate of Medical Sciences, Senior Researcher of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery Panina T.N. - Neuropathologist of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Shibaeva I.V. - Medical Laboratory Technician of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Shugay S.V. - Neuropathologist of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Sycheva R.V. - Biologist of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Zubova I.V. - Medical Laboratory Technician of Department of Neuropathogy of N.N. Burdenko National Medical Research Center of Neurosurgery
Summary
The study is devoted to the research of the methylation status of the promoter region of the MGMT gene in patients with tumors of the central nervous system.
Objective: to study the status of methylation of the promoter region of the MGMT gene in patients with different histological types of tumors of the central nervous system.
Material and methods. The study was performed using a methyl-specific polymerase chain reaction on a series of 244 tumors.
Results. The methylation status of the promoter region of the MGMT gene was analyzed in a series of 244 samples of predominantly glial tumors in adult patients. In 74 cases (30%), the tumor had a
methylated MGMT gene. A molecular genetic database of patients with malignant brain diseases has been created.
Conclusion. The results of the molecular genetic research will be the basis for creating a database of patients with neurosurgical pathology. The identified clinical and molecular genetic characteristics in the near future can be used to develop modern approaches to the prediction and treatment of malignant diseases of the CNS.
Key words: brain tumours, MGMT gene, methyl-specific polymerase chain reaction Введение
Хорошо известно, что в основе развития любых онкологических заболеваний лежит накопление генетических повреждений (мутаций) в специфических генах (протоонкогенах /генах-супрессорах). Последствиями таких мутаций является активация онкогенов и инактивация генов-супрессоров. В результате происходит утрата контроля над нормальным клеточным ростом, дифференцировкой и пролиферацией, которые, в конечном итоге, могут приводить к злокачественной трансформации клетки. Показано, что эпигеномные процессы, которые регулируют экспрессию генов, также участвуют в процессе канцерогенеза [15]. Важнейшим механизмом эпигенетической регуляции является метилирование промоторных участков ДНК. Среди генов-супрессоров, участвующих в развитии опухолей центральной нервной системы (ЦНС) особого внимания заслуживает ген MGMT, белковый продукт которого является ключевым элементом репарационной системы ДНК. Фермент О6-метилгуанин-ДНК-метилтрансфераза активирует перенос метильной группы от О6-метилгуанина к остатку цистеина, что позволяет восстановить нормальную структуру ДНК после повреждения, вызванного алкильными соединениями. Снижение уровня экспрессии данного гена в различных типах опухолей часто связано с абберантным метилированием его промоторной области в районах CpG островков. При инактивации гена MGMT происходит накопление повреждений ДНК, вызванных простыми алкилирующими агентами, что
индуцирует опухолевое образование. Исследования последних лет показали, что статус метилирования промоторной области гена ЫОЫТ (наличие или отсутствие метилирования) коррелирует с выживаемостью пациентов, при этом пациенты с высоким уровнем метилирования имеют большую продолжительность жизни [23].
Среди исследователей до сих пор идет спор о значении статуса метилирования гена ЫОЫТ для нейроонкологии. В классификации ВОЗ 2017 года предиктивное и прогностическое значение этого маркера, к сожалению, не отражено [19]. Тем не менее, в большом количестве исследований была показана необходимость анализа статуса метилирования для подбора корректной химиотерапии, в том числе простыми алкилирующими агентами, такими как темозоломид. В некоторых случаях статус метилирования может быть предиктивным фактором, например, при отсутствии мутаций в «горячих точках» генов ЮИ1 и ЮИ2 при глиомах Ш-1У степени злокачественности [2, 24, 26].
В настоящие время существует много методов исследования статуса метилирования промоторной области гена ЫОЫТ [7, 8, 12, 20, 21]. Для своих исследований мы выбрали методику качественного определения статуса метилирования гена ЫОЫТ методом метилспецифической полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени, как наиболее удобную в применении, экономически выгодную и достоверную [6, 15, 27].
У человека промотор гена ЫОЫТ содержит 98 СрО-динуклеотидов, но, как правило, в исследованиях изучаются не все. Кроме того, минимальный уровень метилирования, при котором подавляется экспрессия белка МОМТ, окончательно не установлен. Набор, который мы используем для детекции абберантного метилирования, анализирует только 10 из 98 СрО-нуклеотидов, но при этом не дает информацию о статусе метилирования каждого конкретного динуклеотида [3]. Тем не менее, используемый метод хорошо коррелирует с другими, например, с валидированным методом метил-специфической ПЦР с последующей
детекцией ампликонов с помощью агаразного гель-электрофореза, а также с пиро- и бисульфитным секвенированием [13]. Учитывая необходимость изучения молекулярных маркеров для выбора адекватного протокола лечения пациентов с опухолями головного мозга, а также стремясь улучшить гистологическую и молекулярную диагностику новообразований ЦНС, в патологоанатомическом отделении ФГАУ «НМИЦ нейрохирургии им. академика Н.Н. Бурденко» Минздрава России при исключительной поддержке детских благотворительных фондов и при продуктивном научном сотрудничестве с лабораторией молекулярной биологии и цитогенетики ФГБУ "РНЦРР" Минздрава России, в начале 2018 года была создана и успешно функционирует генетическая группа, занимающаяся изучением молекулярно-генетических нарушений при злокачественных новообразованиях ЦНС. Цель настоящей работы - изучить статус метилирования промоторной области гена MGMT у пациентов с различными гистологическими типами злокачественных новообразований ЦНС. Материалы и методы Дизайн исследования: проспективное.
В патологоанатомическом отделении ФГАУ «НМИЦ нейрохирургии им. академика Н.Н. Бурденко» Минздрава России в период с января по август2018 года было проведено 244 исследования статуса метилирования гена MGMT. Показанием к проведению исследования статуса метилирования гена MGMT был гистологический тип опухоли. Сразу же после постановки гистологического диагноза, согласно критериям текущей классификации ВОЗ опухолей ЦНС «Диффузная астроцитома WHO grade II», «Олигодендроглиома WHO grade II», «Анапластическая астроцитома WHO grade III», «Анапластическая олигодендроглиома WHO grade III», «Глиобластома WHO grade IV», «Эмбриональная опухоль с обилием нейропиля и многорядными розетками WHO grade IV», а также при наличии достаточного количества биологического материала, проводилось исследование статуса метилирования гена MGMT [19]. Для проведения исследования использовали образцы опухолевой ткани -свежезамороженные или фиксированные в парафиновых блоках, занимающие не менее 80%
площади препарата. Для успешного проведения реакции требуется от 100 до 500 нг геномной ДНК.
Оценка статуса метилированияпромоторной области гена MGMT проводилась методом метил-специфической полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, согласно протоколу и инструкции, рекомендованной производителем [3]. Анализ предполагает два этапа. На первом этапе проводится бисульфитная обработка опухолевой ДНК, в результате которой все остатки цитозина превращаются в урацил, а области, содержащие метилированные остатки, сохраняют исходную нуклеотидную последовательность. Во время второго этапа проводится ПЦР в режиме реального времени с очищенной ДНК после проведенной бисульфитной обработки. Во время ПЦР амплифицируются два фрагмента ДНК: ген MGMT - на наличие метилирования его промоторной области и ген ACTB (бета-актин), который используется в качестве контроля. Методом аллель-специфической ПЦР в режиме реального времени проводится анализ с праймерами и зондами типа Taqman, расположенными в области CpG-динуклеотидов, по которым и происходит метилирование. Зонд и праймеры для амплификации промотора MGMT специфичны к последовательности, которая сохраняет исходную структуру динуклеотидов после бисульфитной обработки. Следовательно, продукт ПЦР будет образовываться только при наличии метилированной ДНК. Одновременно с исследуемыми образцами ДНК проводится анализ двух контрольных образцов. При этом отрицательный контрольный образец (ОКО) содержит ДНК, в которой промотор MGMT не гиперметилирован, а положительный контрольный образец (ПКО) содержит смесь ДНК с гиперметилированным и не гиперметилированным промотором MGMT в сотношении 1:10. Таким образом, данный метод позволяет выявлять аберрантное метилирование, если оно произошло в 10 и более % поврежденной ДНК на фоне интактной ДНК.
«Пороговый цикл» - Ct (threshold cycle), на котором интенсивность флуоресценции начинает превышать базовый уровень, является показателем накопления продукта реакции.
Если выполнены все условия достоверного прохождения метил-специфической ПЦР реакции, то достоверное определение гиперметилированной ДНК в образцах проводят путем сравнения ДО для исследуемых образцов и для ПКО (ДО = ctмgмт - О;атсв). Метилированным считается образец, если ДО; образца была меньше или равной ДО; в положительном контрольном образце. На рисунке 1 показаны возможные варианты прохождения метил-специфической реакции, основанной на взаимном расположении кривых флуоресценции в ПКО и в исследуемом образце.
Рисунок 1. Варианты прохождения метил-специфической реакции с детекцией в режиме реального времени. А и Б - типичные варианты прохождения реакции для образца с гиперметилированным промотором гена MGMT, В и Г - варианты, когда в исследуемом образце метилирование присутствует, но удельное количество такой ДНК недостаточное, Даобр > ДО; ПКО. В вариантах Д и Е гиперметилирование отсутствует.
Результаты
Проанализировав статус метилирования гена ЫОЫТ в серии из 244 образцов преимущественно глиальных опухолей у взрослых пациентов, мы обнаружили, что в 74 случаях (30%) опухоли имели метилированный ген ЫОЫТ. Обращал на себя внимание тот факт, что два случая эмбриональной опухоли с обилием нейропиля и многорядными розетками имели метилированный ген ЫОЫТ.
Возраст пациентов с глиальными опухолями и метилированным геном ЫОЫТ колебался от 25 до 77 лет, причем пациенты молодого и среднего возраста в большинстве случаев имели диагноз «Глиобластома», в то время как у пациентов пожилого возраста вторыми по частоте после глиобластомы были анапластические олигодендроглиомы. Среди опухолей с метилированным геном ЫОЫТ, развивающихся в молодом возрасте, встречались диффузные астроцитомы и олигодендроглиомы низкой степени злокачественности, в то время как в среднем и пожилом возрасте, в основном, возникали глиомы высокой степени злокачественности. Локализация опухолей с метилированным геном ЫОЫТ чаще других была представлена лобной долей, преимущественно левой лобной долей. Основные клинико-морфологические характеристики обследованной группы представлены в таблице 1.
Таблица 1. Основные клинико-морфологические характеристики обследованной группы больных с метилированным и неметилированным геном ЫОЫТ
Группа с Группа с
Характеристики метилированным геном неметилированным
ЫОЫТ (п=74) геном ЫОЫТ (п=170)
Пол мужской/Пол женский, чел. (%) 35 (47%) /39 (53%) 97 (57%) /73 (43%)
Возраст согласно критериям ВОЗ, чел. (%)
Дети (0 - 17 лет) 2 (3%) 3 (2%)
Молодой возраст (18 - 44 лет) 13 (17%) 21 (12%)
Средний возраст (45 - 59 лет) 42 (57%) 98 (58%)
Пожилой возраст (60 - 74 лет) 14 (19%) 44 (26%)
Старость (75 - 89 лет) 3 (4%) 4 (2%)
Долгожители (старше 90 лет) 0 0
Диагноз, чел. (%)
Диффузная астроцитома 6 (8%) 9 (5%)
Олигодендроглиома 12 (16%) 5 (3%)
Анапластическая астроцитома 7 (9%) 11 (6%)
Анапластическая олигодендроглиома 15 (20%) 3 (2%)
Глиобластома 32 (44%) 142 (84%)
Эмбриональная опухоль с обилием 2 (3%) 0
нейропиля и многорядными розетками
Локализация, чел. (%)
Лобная доля 39 (53%) 64 (38%)
Височная доля 20 (27%) 47 (28%)
Теменная доля 1 (1%) 16 (9%)
Затылочная доля 0 14 (8%)
Лобно-височная доля 7 (10%) 13 (8%)
Лобно-теменная доля 6 (8%) 5 (3%)
Теменно-затылочная доля 1 (1%) 11 (6%)
Возраст 170 пациентов, в опухолях которых метилирование промоторной области гена MGMT не обнаружено, варьировал от 9 до 75 лет. Самым частым гистологическим диагнозом, как и в группе с метилированным геном MGMT, был диагноз «Глиобластома», а самой частой локализацией опухоли являлась, соответственно, левая лобная доля. Диффузные астроцитомы встретились у пациентов молодого возраста от 17 до 31 года.
В группе пациентов с глиальными опухолями и метилированным геном ЫОЫТ в 72% случаев (53 чел.) иммуногистохимическим методом была выявлена мутация Ю32Н в гене ЮИ1. В группе с неметилированным геном ЫОЫТ в большинстве случаев (61%) был выявлен дикий тип гена ЮИ1. Коделеция 1р/19д найдена у 27 чел. (37 %) из группы с метилированным геном ЫОЫТ и только у 3 чел. (2%) из группы с неметилированным геном ЫОЫТ. Результаты исследования представлены в таблице 2.
Коделеция 1р/19д в сочетании с мутацией R132H в гене ЮИ1 и метилированным геном ЫОЫТ была обнаружена у 12 пациентов с олигодендроглиомами и у 15 пациентов с анапластическими олигодендроглиомами. У двух пациентов с олигодендроглиомой и одного пациента с анапластической олигодендроглиомой из группы с неметилированным геном ЫОЫТ была найдена коделеция 1р/19д в сочетании с мутацией R132H в гене ЮИ1.
Таблица 2. Иммуногистохимические и молекулярно-генетические характеристики опухолей ЦНС с метилированным и неметилированным геном ЫОЫТ
Маркеры Вся группа (п=244) Группа с метилированным геном ЫОЫТ (п=74) Группа с неметилированным геном ЫОЫТ (п=170)
Ш32И-мутантный ЮИ1, чел. (%) (%)
ГОН+ 100 (41%) 53 (72%) 47 (28%)
ГОН- 114 (47%) 11 (15%) 103 (61%)
не исследовали 30 (12%) 10 (13%) 20 (11%)
Коделеция 1р/19ц, чел. (%) 1р19я+ 1р19я- не исследовали 30 (12%) 28 (11%) 186 (77%) 27 (37%) 4 (5%) 43 (58%) 3 (2%) 24 (14%) 143 (84%)
Обсуждение
Несмотря на тот факт, что последняя классификация ВОЗ опухолей ЦНС (2017 г.) не признает значения статуса метилирования гена MGMT, научные исследования за последние 15 - 20 лет свидетельствуют о важной прогностической и предиктивной роли данного маркера [9, 14, 25, 26]. К сожалению, благоприятное прогностическое значение метилированного гена MGMT в большинстве случаев справедливо лишь для взрослых пациентов с глиальными опухолями и совершенно не распространяется на детские глиомы высокой степени злокачественности по причине того, что промоторная область гена MGMT в педиатрических глиальных опухолях редко бывает метилированной [1, 4, 5, 10, 11, 16, 17, 22].
Данные об изучении статуса метилирования промоторной области гена MGMT в других опухолях головного мозга в мировой научной литературе представлены довольно скудно. Единственное сообщение, которое удалось найти, это исследование Kurimoto и соавт., в котором представлены данные о благоприятном прогностическом значении метилирования гена MGMT при медуллобластомах [18]. В нашей практике такой случай зафиксирован один раз - это долгоживущий пациент с MYC-амплифицированной медуллобластомой и метилированным геном MGMT (метилирование гена MGMT в медуллобластомах по нашим данным событие крайне редкое).
Не менее важным представляется изучение статуса метилирования промоторной области гена MGMT в эмбриональных опухолях с многорядными розетками - ETMR опухоли (Embryonal tumour with multilayered rosettes) [27]. Согласно неопубликованным данным профессора А.Г. Коршунова, около 70% ETMR опухолей имеют метилированный ген MGMT и хорошо отвечают на темозоломид что, безусловно, будет способствовать улучшению показателей выживаемости этой редкой потенциально летальной опухоли. Следует особо отметить, что в настоящем исследовании два пациента с этим диагнозом имели метилированный ген MGMT.
За восемь месяцев нам удалось провести 244 исследования по изучению статуса метилирования гена ЫОЫТ (при 500 случаях ежегодно оперируемых глиом). В 30% случаев в образцах опухолевой ткани был выявлен метилированный ген ЫОЫТ. Столь невысокий показатель мы связываем, в первую очередь, с гетерогенной выборкой изучаемых опухолей, как по возрастному составу, так и по нозологии. Безусловно, еще только предстоит оценить истинную прогностическую и предиктивную значимость статуса метилирования гена ЫОЫТ, но мы уверены, что база данных будет расширяться за счет включения новых, причем не только взрослых, но и детских опухолей ЦНС. Заключение
В настоящей работе изучено метилирование промоторной области гена ЫОЫТ у 244 пациентов с преимущественно глиальными опухолями. Хотелось бы отметить, что мы находимся лишь в начале пути, планируя в дальнейшем расширять спектр опухолей ЦНС и возрастные границы пациентов для изучения статуса метилирования промоторной области гена ЫОЫТ. Планируется также, что полученные результаты молекулярно-генетического исследования станут основой для создания базы данных пациентов с нейрохирургической патологией, которая будет постоянно пополняться информацией о полученном лечении и выживаемости за счет привлечения к этой работе специалистов в области нейроонкологии: химио- и радиотерапевтов. Выявленные клинические и молекулярно-генетические характеристики в ближайшем будущем могут быть использованы для разработки современных подходов к прогнозированию и лечению злокачественных заболеваний ЦНС. Участие авторов:
Концепция и дизайн исследования: Д.В.С., Т.В.Г., П.В.Н., Е.Г.Ш., Е.Н.Т., Г.П.С., М.В.Р.
Сбор и обработка материала: все авторы
Статистическая обработка данных: Д.В.С., Т.В.Г., М.В.Р.
Написание текста: все авторы
Редактирование: все авторы
Финансирование
Авторы статьи подтвердили отсутствие финансовой поддержки исследования, о которой необходимо сообщить. Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Благодарности
Авторы сердечно благодарят Благотворительный Фонд Константина Хабенского. Оказанная Фондом материальная поддержка сделала возможным сам факт проведения исследования статуса метилирования гена MGMT в злокачественных опухолях головного мозга у детей и взрослых на базе патологоанатомического отделения «НМИЦ нейрохирургии» Минздрава России.
Список литературы
1. Казарова М.В. Роль прогностических факторов в выборе вариантов послеоперационноий терапии при комбинированном и комплексном лечении первичных анапластических глиом головного мозга. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. 2016.
2. Мацко М.В. Лекарственная терапия опухолей мозга. Практическая Онкология. 2013. Т. 14.№ 3. С. 166-174.
3. Номотек. ЭпиГенТест-MGMT. Набор реагентов для детекции аберрантного метилированияпромоторной области гена человека MGMT. Инструкция по применению. Версия 06 декабря 2017 г. Обновленные версии доступны по адресу: evшgen.m>molmed.. .GenTest_MGMT/GenTest_MGMT.shtml.
4. Рыжова М.В. Молекулярно-генетические особенности глиобластом детского возраста и их клиническое значение. Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук. 2015.
5. Рыжова М.В., Кадыров Ш.У., Кумирова Э.В. Глиобластомы подкорковых узлов у детей: приговор или нет? Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2017. Т. . 16. № . 4. С. 51-55.
6. Barault L., Amatu A., Bleeker F.E., et al. Digital PCR quantification of MGMT methylation refines prediction of clinical benefit from alkylating agents in glioblastoma and metastatic colorectal cancer. Ann Oncol. 2015. V. No. 9. P. 1994-1999.
7. Du P., Zhang X., Huang C.C., et al. Comparison of Beta-value and M-value methods for quantifying methylation levels by microarray analysis. BMC Bioinformatics. 2010. V. 11. P. 587.
8. Espada J., Carrasco E., Calvo M.I. Standard DNA methylation analysis in mouse epidermis: bisulfite sequencing, methylation-specific PCR, and 5-methyl-cytosine (5mC) immunological detection. Methods Mol Biol. 2014. V. 1094. P.221-231.
9. Esteller M., Garcia-Foncillas J., Andion E., et al. Inactivation of the DNA-repair gene MGMT and the clinical response of gliomas to alkylating agents. N Engl J Med. 2000. V. 343. No. 19. P. 1350-1354.
10. Eisenstat D.D., Pollack I.F., Demers A., et al. Impact of tumor location and pathological discordance on survival of children with midline high-grade gliomas treated on Children's Cancer Group high-grade glioma study CCG-945. J Neurooncol. 2015. V. 121. No. 3. P. 573-581.
11. Franceschi E., Mura A., De Biase D., et al. The role of clinical and molecular factors in low-grade gliomas: what is their impact on survival? Future Oncol. 2018. V. 14. No. 16. P. 15591567.
12. Fraga M.F., Esteller M. DNA methylation: a profile of methods and applications. Biotechniques. 2002. V. 33. No. 3. P. 632, 634, 636-649.
13. Havik A. B., Brandai P., Honne H., et al. MGMT promoter methylation in gliomas assessment by pyrosequencing and quantitative methylation-specific PCR. J Transl Med. 2012. 10:36.
14. Hegi M.E., Diserens A.C., Gorlia T., et al. MGMT gene silencing and benefit from temozolomide in glioblastoma. N Engl J Med. 2005. V. 352. No. 10. P. 997-1003.
15. Herman J.G., Baylin S.B. Gene silencing in cancer in association with promoter hypermethylation. N Engl J Med. 2003. V. 349. No. 21. P. 2042-2054.
16. Jakacki R.I., Cohen K.J., Buxton A., et al. Phase 2 study of concurrent radiotherapy and temozolomide followed by temozolomide and lomustine in the treatment of children with highgrade glioma: a report of the Children's Oncology Group ACNS0423 study. NeuroOncol. 2016. V. 18. No. 10. P. 1442-1450.
17. Kim H.S., Kwon M.J., Song J.H., et al. Clinical implications of TERT promoter mutation on IDH mutation and MGMT promoter methylation in diffuse gliomas. Pathol Res Pract. 2018. V. 214. No. 6. P. 881-888.
18. Kurimoto T., Kondo A., Ogino I., et al. Effect of O6-methylguanine-DNA methyltransferase methylation in medulloblastoma. Mol Clin Oncol. 2017. V. 7. No. 6. P. 1107-1111.
19. Louis D.N., Ohgaki H., Wiestler O.D., Cavenee W.K. WHO Classification of Tumours of the Central Nervous System, Revised 4th edition. IARC: Lyon. 2016.
20. Laird P. W. The power and the promise of DNA methylation markers. Nat Rev Cancer. 2003. V. 3. No. 4. P. 253-266.
21. Mikeska T., Bock C., El-Maarri O., et al.Optimization of quantitative MGMT promoter methylation analysis using pyrosequencing and combined bisulfite restriction analysis. J Mol Diagn. 2007. V. 9. No. 3. P. 368-381.
22. Perry J.R., Laperriere N., O'Callaghan C.J., et al. Trial Investigators. Short-Course Radiation plus Temozolomide in Elderly Patients with Glioblastoma. N Engl J Med. 2017. V. 376. No. 11. P. 1027-1037.
23. Rivera A.L., Pelloski C.E., Gilbert M.R., et al. MGMT promoter methylation is predictive of response to radiotherapy and prognostic in the absence of adjuvant alkylating chemotherapy for glioblastoma. NeuroOncol. 2010. V. 12. No. 2. P. 116-121.
24. Shu C., Wang Q., Yan X., Wang J. The TERT promoter mutation status and MGMT promoter methylation status, combined with dichotomized MRI-derived and clinical features, predict adult primary glioblastoma survival. Cancer Med. 2018. V. 7. No. 8. P. 3704-3712.
25. Schlegel U. The DNA-repair gene MGMT and the clinical response of gliomas to alkylating agents. N Engl J Med. 2001. V. 344. No. 9. P. 686-687; author reply 687-688.
26. Wick W., Gorlia T., Bendszus M., et al. Lomustine and Bevacizumab in Progressive Glioblastoma. N Engl J Med. 2017. V. 377. No. 20. P. 1954-1963.
27. Yoshioka M., Matsutani T., Hara A., et al. Real-time methylation-specific PCR for the evaluation of methylation status of MGMT gene in glioblastoma. Oncotarget. 2018. V. 9. No. 45. P. 27728-27735.