CC BY
83
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ... 73
УДК 615.3.014.2:577.352.2 А.О. Райков1;2, А.А. Матюшин1, И.И. Краснюк1 ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФОРМЫ МИТОКСАНТРОНА 1 Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, Москва 2ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина», Москва Контактная информация Райков Александр Олегович, аспирант кафедры фармацевтической технологии адрес: 119019 Москва, Никитский б-р, д. 13; тел. +7(495) 291-85-20 e-mail: [email protected] Статья поступила 17.10.2014, принята к печати 23.11.2014. Резюме Цель исследования - получение липосомальной лекарственной формы митоксантрона с 0 везикул 100— 115 нм. Липосомы получали методом обращения фаз из фосфолипидов, DSPE-PEG2000 и холестерина с последующим пропусканием через поликарбонатные мембранные фильтры с 0 пор 400; 200 и 100 нм с нагреванием и без. В исследовании использовалась активная загрузка с использованием градиента сульфата аммония. Эффективность загрузки митоксантрона составила 94,9 %, средний размер липосом — 105± 6 нм. Ключевые слова: митоксантрон, липосомы, экструзия.
A.O. Raikov1; 2, A.A. Matyushin1, I.I. Krasnyuk1 OPTIMIZATION METHOD OF RECEIVING LIPOSOMAL FORMS OF MITOXANTRONE 1I.M. Sechenov First Moscow Medical University 2FSBSI «N.N. Blokhin Russian Caner Research Center», Moscow Abstract Our study aimed to produce liposome formulation of mitoxantrone with mean size 100-115 nm. Liposomes were prepared by reverse evaporation method using phospholipids, lipid-grafted, cholesterol, with followed by passage through polycarbonate membrane filters with pore diameters of 100; 200 and 400 nm, with heating and without heating. The study used an active loading by using ammonium sulfate gradient. Loading efficiency of mitoxantrone was 94,9 % , mean liposome size — 105 ± 6 nm. Key words: mitoxantrone, liposome, extrusion. Введение странство липосомы [2; 3; 67]. Жирорастворимые субстанции включаются в липидный бислой [42; Последние два десятилетия активно разраба- 43; 46; 47]. Этим объясняется появление большого тываются липосомальные формы доставки лекарст- количества липосомальных препаратов для фотовенных препаратов [4; 5; 8; 18; 37; 44; 45]. Некото- динамической терапии [19—21; 26; 54—60; 72; 75]. рые из них дошли до практического клинического Для защиты от захвата клетками РЭС в состав ли-применения [32—34; 48—53]. Особенно интенсивно посом включается ПЭГ с ММ 2000 и создает вокруг липосомальные препараты внедряют в практику липосомы повышенное осмотическое давление, онкологических учреждений для лечения злокаче- препятствуя контакту липосом с фагоцитирующи-ственных новообразований. В первую очередь это ми клетками. В связи с этим липосомы долгое вре-обусловлено особенностями кровоснабжения опу- мя циркулируют в кровотоке и постепенно накап-холи [12; 61; 69; 76-80]. Опухоль растет быстро, и ливаются в опухоли [40]. Кроме того, липосомаль-образование новых сосудов не успевает за ее рос- ные препараты преодолевают МЛУ и резистент-том [64]. Вследствие этого в эндотелии кровенос- ность к действию препаратов, обусловленную от-ных сосудов образуются поры размером до 700 нм, сутствием CD95/Fas-рeцeптoра внешнего апоптоза в которые могут проникать наночастицы, в том [9—11; 13; 73]. Хороший терапевтический эффект числе и липосомы [17]. В нормальных сосудах по- оказывает также накопление в опухоли большого ры в эндотелии имеют размер меньше 2 нм в боль- количества препарата [38; 71]. Для бонусного вы-шинстве тканей, 6 нм — в посткапиллярных вену- свобождения препарата разрабатываются термочу-лах, 40—60 нм — в почечных клубочках и до 150 нм ствительные липосомы, которые расплавляются — в синусоидальном эпителии печени и селезенки. при заданной температуре (при этом сразу высво-Липосомы проникают в опухолевый узел и застре- бождается большое количество лекарства [65; 66]). вают в строме [40]. Мелкие липосомы могут снова Для специфического связывания липосом с опухо-выходить в кровоток. Это обстоятельство вынуж- левыми клетками многие группы исследователей дает создавать липосомы размером 100—200 нм. разрабатывают иммунолипосомы [1; 6; 7; 22 — 25; Вторым фактором, влияющим на расширение при- 29; 39; 41; 68; 74]. менения липосомальных препаратов, являются Фармакокинетические характеристики липо-фармакокинетические характеристики липосом. сом зависят от физико-химических свойств, таких Бислой липосом похож на мембрану живой клетки, как: размер, поверхностный заряд, структура ли-поэтому они биосовместимы. Липосомы биодегра- пидного бислоя, стерическая стабилизация, доза и дируемы и нетоксичны [30; 35; 36]. Водораствори- путь введения. В связи с этим совершенствуются мые препараты включаются во внутреннее про- составы липосомальных лекарственных форм для
№ 4/том 13/2014 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
74 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ...
повышения доли включения препарата в липосомы, экструдере без подвода тепла или при температуре лучшей стабильности, упрощения технологии про- +55 °С. Дисперсию многослойных липосом помеща-изво детва и практического применения [14-16; 27; ли в шприцы мини-экстру дера, которые затем уста-28; 31; 62; 63]. навливали на нагреваемый блок. Затем шприцы ос-Одной из групп препаратов, активно исполь- тавляли на 10 минут - для выравнивания температу-зуемых при создании липосомальных лекарствен- ры. Далее начинали экструзию. Производилось 15 ных форм, являются антибиотики антрациклиново- циклов экструзии. Температура фиксировалась с го ряда: митоксантрон, доксорубицин, дауноруби- помощью термометра на блоке мини-экструдера. цин, акларубицин и др., - широко применяемые в химиотерапии целого ряда онкологических заболе- Загрузка ЛМ ваний. Одним из существенных недостатков дан- Загрузка липосом митоксантроном производи-ной группы препаратов является их токсичность по лась против градиента сульфата аммония. Весовое отношению к тканям костного мозга, эпителия же- соотношение препарат : липиды составило 0,12 : 1. лудочно-кишечного тракта, сердечной мышцы, по- Градиент концентрации сульфата аммония формиро-чек. Повышение специфичности действия и изме- вался при пятикратном разбавлении липосомальной нение фармакокинетики лекарственных препаратов дисперсии буфером, содержавшим 10 мМ HEPES и этой группы является актуальным вопросом. 145 мМ раствор хлорида натрия (pH 8,2-8,4). ПолуОсновной задачей в процессе данного иссле- ченную смесь инкубировали 60 мин на водяной бане дования являлось уменьшение размеров липосом, при температуре +50° С, затем 12 ч при температуре загруженных митоксантроном, с помощью измене- +5 ° С. Нагревание производилось для увеличения ния состава и существующей технологии получе- проницаемости липидной мембраны. Разделение за-ния липосом. Ранее липосомальную форму миток- груженных частиц от фракции не включившегося сантрона получали с использованием EPC, с добав- митоксантрона для последующего анализа включения лением холестерина и ПЭГ, коньюнгированного с митоксантрона производили методом гельфильтрации фосфатидилэтаноламином [41; 70]. При этом холе- на сорбенте G-50 standart (колонка C10/20). стерин добавлялся в целях придания необходимой «жесткости» конструкции, а ПЭГ - для достижения Измерение размеров липосом длительной циркуляции. Данная смесь пропуска- Анализ среднего 0 полученных везикул и лась последовательно через поликарбонатные оценку их распределения по размерам проводили с фильтры с размером 400; 200 и 100 нм для получе- использованием метода корреляционной спектроско-ния однослойных липосом. пии светорассеяния (динамического лазерного свето-Для модификации данной лекарственной рассеяния) с помощью прибора Nicomp 380 Submi-формы было решено изменить состав и использо- cron Particle Sizer. Образцы готовили непосредственно вать гидрогенизированный соевый фосфатидилхо- перед проведением измерений. Концентрацию вези-лин в качестве основного компонента. кул подбирали таким образом, чтобы частота импульсов, поступающих на фотоэлектронный умножитель, Материалы и методы составляла 200-600кГц. В качестве дисперсионной среды использовали предварительно дегазированную Препараты и реактивы. Фосфатидилхолин деионизированную воду. В стеклянную кювету раз-(S PC-3)(Lipoid, Германия); 1,2-дистеароил-5и- мером 6*50 мм вносили 20 мкл исследуемого образца глицеро-3-фосфоэтаноламин-№карбонил- (свежеприготовленных везикул) и добавляли деиони-[метокси(полиэтиленгликоль)-2000] (PE 18 : 0/18 : 0 зированную воду до 1мл. Затем кювету помещали в - PEG 2000; Lipoid, Германия); Холестерин (Sigma прибор и начинали процесс измерения. Продолжи-aldrich, США). тельность измерений составляла 10 мин и более. На Приборы и аппаратура. Испаритель ротаци- экране монитора наблюдали кривую распределения онный BÜCHI Rotavapor R-200 (BÜCHI липосом по размерам. Все математические операции Labortechnik AG, Швейцария), наносайзер Nicomp проводили с помощью компьютерной программы. 380 Submicron Particle Sizer (Particle Sizing Systems, США), мини-экструдер Avanti Mini-Extruder Количественное определение (Avanti Polar Lipids, Inc., США), поликарбонатные митоксантрона в липосомах мембранные фильтры, система очистки воды Elix 5 Для определения митоксантрона в липосо-(Millipore S.A.S., Франция), спектрофотометр DU мальной дисперсии применяли спекгрофотометриче-800 (Beckman Coulter, США) скую методику количественного определения вещества с использованием РСО митоксантрона при длине Получение липосомальных везикул волны 242±2нм, применяемую ранее [70]. Измерение Для приготовления липосом использовали оптической плотности спиртовых растворов проводи-метод обращения фаз. Точные навески фосфатидил- ли относительно 95 %-ного этилового спирта в кюве-холина, холестерина, DSPE-PEG2000 растворяли в тах с толщиной оптического слоя 10 мм. хлороформе. Смесь переносили в круглодонную Содержание митоксантрона (X, мг) рассчи-колбу вместимостью 150 мл и упаривали органиче- тывали по формуле: ский растворитель на роторном испарителе под вакуумом при температуре 40±2 °С до образования D х a х C липидной пленки. Пленку сушили под вакуумом в X =-, где течение 40-50 мин, далее гидратировали р-ром D0 х C0 сульфата аммония при постоянном перемешивании до полного исчезновения пленки со стенок колбы и ^ образования белой эмульсии (дисперсия многослой- D - оптическая п™™0^ Р^твор^азвд; Hbix липосом). Для получения однослойных липосом D0 - оптическая плотность ГСО Мит; использовался метод экструзии, основанный на про- C - величина разбав ™ давливании дисперсии липосом через поликарбо- C- - вел^раМвления РсО Мит; натные мембранные фильтры на ручном мини- а навеска т= мг-
№ 4/том 13/2014 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
Эффективность включения митоксантрона в липосомы (B, %) рассчитывали по формуле:
B = D Х C Х V X 100%, где
D х C х V
D1 - оптическая плотность раствора фракции с очищенным липосомальным Мит;
D - оптическая плотность раствора исходной липосо-мальной дисперсии;
C1 - величина разбавления фракции с очищенным липосомальным Мит;
C - величина разбавления исходной липосомальной дисперсии;
V1 - объем фракции с очищенным липосомальным Мит, мл; V - объем исходной липосомальной дисперсии, нанесенной на колонку, мл.
Все растворы использовали ex tempore.
Результаты и обсуждение
Яичный фосфатидилхолин является смесью лецитинов и обладает меньшей стабильностью по сравнению с чистыми фосфатидилхолинами. Известно, что липосомы, состоящие только из фосфа-тидилхолина отличаются низкой стабильностью и высокой степенью утечки препарата [4]. Для стабилизации яичного фосфатидилхолина в составе ли-посом, используется холестерин. При создания липосомальной формы митоксантрона было решено использовать гидрогенезированный соевый фосфатидилхолин HSPC с высоким содержанием насыщенных жирных кислот, что повышает химическую и физическую стабильность конечной лекарственной формы. Однако липосомы, состоящие из фосфолипидов с насыщенными остатками жирных кислот, значительно хуже подвергаются экструзии через поликарбонатные мембранные фильтры. В связи с этим при изготовлении липосом необходимо учитывать характеристики смеси липидов. В то же время, липосомы, состоящие из насыщеных жирных кислот, являются более стабильными, что позволяет уменьшить используемое количество холестерина в сравнении с липосомами, состоящими из яичных фосфатидилхолинов. Таким образом, в отличие от формы, состоящей из яичного фосфатидилхолина, холестерина и модифицированного полиэтиленгликолем фосфатидилэтаноламина в молярном соотношении EPC : Chol : mPEG2000-DSPE 11 : 9 : 1) [41], была использована композиция, содержащая HSPC, холестерин и модифицированный фосфатидилэтаноламин в молярном соотношении HSPC : Cho l: mPEG2000-DSPE 6 : 3 : 1, что заставило незначительно изменить технологию получения однослойных липосом, добавив нагревание при экструдировании до температуры +55 °C.
Приведенные изменения состава и технологии привели к изменению размера частиц с 141± 6 нм при использовании смеси яичного фосфатидилхолина и без нагревания при экструзии до 105±6 нм, при использовании HSPC и нагрева при экструзии.
Литература
Кроме того, нагретая дисперсия многослойных липосом является более текучим составом, удалось получить липосомы заданного размера без применения дополнительных мембранных фильтров о 400 и 200 нм. Состав пропускали сразу через фильтр о 100 нм.
Изменения процедуры загрузки и липидной композиции липосомального митоксантрона Процедура активной загрузки липосомального митоксантрона против градиента сульфата аммония при использовании липидной композиции Chol : mPEG2000-DSPE (11 : 9 : 1) производилась с использованием 250 мМ сульфата аммония [70]. При изменении базового липида на HSPC загрузка предыдущим методом стала менее эффективной и упала до 70±6%. Вероятно этот факт связан с меньшей проницаемостью липидной мембраны по отношению к проницаемости липидной стенки у предшествующей композиции.
Было решено изменить процедуру загрузки и повысить концентрацию сульфата аммония до 300 мМ, кроме того, для увеличения проницаемости липидной мембраны применили нагрев липидной композиции. Исследованы три липидных композиции с различным содержанием липидов и холестерина. Результаты загрузки представлены в табл. Весовое соотношение препарат : суммарные липи-ды составило 0,12 : 1.
Наиболее эффективное включение и стабильность липосомальных наночастиц показали липосомы состава МП-3 с молярным соотношением липидов HSPC : Chol : mPEG2000-DSPE (60 : 39,5 : 0,5). Их средний размер после загрузки составил 105±6 нм.
Дисперсия данного состава была наиболее однородна и легче поддавалась экструзии через поликарбонатные мембранные фильтры.
Влияние состава липидов на включение митоксан-трона в липосомы__
Партия препарата Соотношение липидов(моль%) HSPC/Chol /PEG-DSPE Эффективность загрузки, %
МП-1 50 : 49,5 : 0,5 85,6± 4
МП-2 70 : 29,5 : 0,5 94,9± 3
МП-3 60 : 39,5 : 0,5 96,8± 3
Выводы
1. Были подобраны оптимальные условия для процедуры загрузки липосом, содержащих насыщенный соевый фосфатидилхолин, холестерин и шРЕв2000-Б8РЕ
2. В результате исследования удалось получить липосомы, загруженные миток-сантроном, с диаметром везикул 105 нм.
1. Алексеева A.C., Апкаева М.Р., Щегловитова О.Н. и др. Специфическое связывание и накопление в эндотелиальных клетках цитотоксических липосом с лигандом селектинов сиалил-Люис-Х // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, №1. - С. 58.
2. Альбассит Б., Зангиева М.Т., Барышникова М.А. и др. Липосомальный противоопухолевый препарат 0Р-2011 из класса нитрозомочевины для лечения меланомы // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, №1. - С. 59.
76 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ...
3. Алъбассит Б., Барышникова М.А., Игнатьева Е.В. и др. Разработка липосомальной лекарственной формы нового соединения из класса нитрозоалкилмочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - №2. - С. 5.
4. Афанасьева Д.А., Барышникова М.А., Соколова З.А., Косорукое B.C. Разработка липосомальной конструкции, содержащей лизат опухолевых клеток // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. -Т. 12, № 2. - С. 5.
5. Барышников А.Ю. Наноструктурированные липосомальные системы как средство доставки противоопухолевых препаратов // Вестник РАМН. - 2012. - №3. - С. 23-30.
6. Барышников А.Ю., Барышникова М.А. Иммунолипосомы и мишени их действия // Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И.Менделеева 2012. - Т. LVI, № 3-4. - C. 60-7.
7. Барышников А.Ю., Оборотова H.A. Иммунолипосомы - новое средство доставки лекарственных препаратов // Современная онкология. - 2001. - Т. 3, № 2. - С. 4.
8. Барышникова М.А., Алъбассит Б., Сапрыкина Н.С. и др. Противоопухолевая активность нового соединения из класса нитрозометилмочевин // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 8.
9. Барышникова МЛ., Грищенко Н.В., Бурова О. С. и др. Роль CD95/Fas рецептора в индукции апоптоза противоопухолевыми препаратами // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. -С. 3-8.
10. Барышникова М.А., Грищенко Н.В., Полозкова А.П. Влияние лекарственных форм аранозы на индукцию апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 64.
11. Барышникова М.А., Зангиева М., Барышников А.Ю. Взаимодействие липидных нанокапсул с клеткой // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5.
12. Григорьева И.Н., Харатешвили Т.К., Барышников А.Ю. Васкулогенная мимикрия: альтернативный механизм кровоснабжения опухоли? // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 3.
- С. 25-30.
13. Грищенко Н.В., Барышникова М.А., Полозкова А.П. и др. Липосомальные противоопухолевые препараты не используют CD95-завиcимый сигнальный путь апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
14. Грищенко Н.В., Алъбассит Б., Барышникова М.А. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм противоопухолевых препаратов из класса нитрозомочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 49-54.
15. Гулякин И.Д., Санарова Е.В., Ланцова A.B. и др. Разработка наноструктурированной модели лекарственной формы производного индолкарбазола - ЛХС-1208 // Российский биотерапевтический журнал.
- 2014. - Т. 13, № 1. - С. 78.
16. Гулякин И.Д., Николаева Л.Л., Санарова Е.В. и др. Применение фармакологической технологии для повышения биодоступности лнкарственных веществ // Российский биотерапевтический журнал. -2014. - Т. 13, № 3. - С. 101-8.
17. Гуревич Д.Г., Меерович И.Г., Меерович Г.А. и др. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6, № 2.
- С. 45-9.
18. Дмитриева М.В., Оборотова H.A., Санарова Е.В. и др. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 4. - С. 21-7.
19. Дмитриева М.В., Оборотова H.A., Орлова О.Л. и др. Липосомальная лекарственная форма борхло-рина // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
20. Дмитриева М.В., Полозкова А.П., Оборотова H.A. и др. Качественный анализ липосомальной лекарственной формы борхлорина // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 81.
21. Дрожжина В.В., Осипчук Ю.С. Сравнительный анализ противоопухолевой активности фотосенсибилизаторов боринового хлорина и «борхлорина липосомального лиофилизата» после фотодинамической терапии саркома М-1 крыс // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. -С. 45-50.
22. Зангиева М.Т., Барышникова М.А., Игнатьева Е.В. и др. Разработка состава пространственно стабилизированных иммунолипосом направленных против Her-2 рецептора // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 85.
23. Зангиева М.Т., Игнатьева Е.В., Косорукое B.C. Оценка эффективности включения доксорубмцина в иммунолипосомы, направленные против Her-2 рецептора // Российский биотерапевтический журнал.
- 2013. - Т. 12, № 2. - С. 31.
24. Зангиева М.Т., Игнатьева Е.В., Оборотова H.A., Барышников А.Ю. Разработка оптимального состава пространственно стабилизированных липосом, нагруженных доксорубицином // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 18.
25. Зангиева М.Т., Матюшин A.A., Соколова Д.В. и др. Разработка и исследование иммунолипосомаль-ных конструкций in vitro // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 2. - С. 19-28.
26. Истомин Ю.К., Артемьева Т.П., Александров E.H., Церковский Д.А. Сонодинамическая и сонно-фотодинамическая терапия злокачественных опухолей с использованием фотосенсибилизаторов // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. - С. 119-28.
27. Козеев С.Г., Барышникова М.А., Полозкова А.П., Оборотова H.A. Разработка наноструктурированной лекарственной формы аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. -С. 24.
28. Козеев С.Г., Барышникова М.А., Афанасьева Д. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т.11, № 2. - С. 24.
29. Коняева О.И., Кульбачевская Н.Ю., Ермакова H.H. и др. Доклиническое изучение общетоксического
действия лиофилизированной липосомальной формы тиосенса (ЛЛЛФТ) // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 43.
30. Котова Е.А., Смирнова З.С., Краснюк И.И. и др. Противоопухолевое действие липосомальной формы цифелина на лейкоз Р-388 // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 46.
31. Кортава М.А., Палкина Т.Н., Толчева Е.В. и др. Подходы к созданию иммунолипосом на примере доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 1. - С. 6.
32. Краснополъский Ю.М., Балабаньян В.Ю., Шаболов Д.Л., Швец В.И. Перспективы применения в клинической практике наноразмерных форм лекарственных препаратов // Российский химический журнал. - 2012. - № 3-4. - С. 11-32.
33. Краснополъский Ю.М., Балабаньян В.Ю., Шаболов Д.Л., Швец В.И. Липосомальные лекарственные препараты в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 48.
34. Краснополъский Ю.М., Степанов А.Е., Щвец В.И., Шахмаев А.Е. Липосомальные препараты для вспомогательной терапии в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 3. - С. 29.
35. Кулъбачевская Н.Ю., Коняева О.И., Дмитриева М.В., Оборотова H.A. Изучение «острой» токсичности липосомальной лекарственной формы борхлорина // Российский биотерапевтический журнал. -2014. - Т. 13, № 3. - С. 51-6.
36. Кулъбачевская Н.Ю., Коняева О.И., Ермакова H.H. и др. Изучение «хронической» токсичности лиофилизированной липосомальной лекарственной формы тиосенса на крысах // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 30.
37. Ланцова A.B., Барышникова М.А., Санарова Е.В. и др. Изучение в системе in vitro наноструктуриро-ванной лекарственной формы лизомустина // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11,.№ 2. - С.31.
38. Ланцова A.B., Сапрыкина Н.С., Оборотова H.A., Барышников А.Ю. Противоопухолевая активность наноструктурированной формы лизомустина на мышах с солидной опухолью меланома В-16 // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 52.
39. Левачева И.С., Барышникова М.А. Направленная доставка противоопухолевых препаратов липосо-мами // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 32.
40. Матюшин A.A., Барышникова М.А., Барышников А.Ю., Караулов A.B. Липосомы: организм, опухоль, клетка // Физиология и патология иммунной системы. Иммунофармакогеномика. - 2013. - Т. 17, № 6. - С. 3-10.
41. Матюшин A.A., Хугаева О.В., Барышникова М.А. и др. Получение и изучение анти-CD20 иммунли-посомального митоксантрона in vitro // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. - С. 15-24.
42. Меерович И.Г., Оборотова H.A. Применение липосом в фотохимиотерапии: 1. Липосомы в ФДГ // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т.2, №4. - С. 3-8.
43. Меерович И.Г. Мицеллярный фотосенсибилизатор на основе 4,5-октакис(децилио)-3,б-октахлоррофталоцианина цинка Октасенс) // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. - С. 41-4.
44. Михайлова Т.В, Барышникова М.А., Клименко О.В. и др. Разработка липосомальной формы противоопухолевой вакцины // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 4. - С. 62-6.
45. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Багирова Н.С. и др. Стерилизация многослойных протеолипосом // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 1. - С. 9-12.
46. Моисеева Е.В., Кузнецова Н.Р., Аронов Д.А. и др. Противоопухолевое действие липосом с липофиль-ным пролекарством комбрет астанина А4 на модели рстрого Т-клеточного лейкоза мышей // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 3-10.
47. Моисеева Е.В., Кузнецова Н.Р., Ситников Н.С. и др. Противоопухолевый эффект наноразмерных липосом с липофильным пролекарством комбретастатина А4 на мышиной модели острого Т-лейкоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 36.
48. Оборотова H.A. Направленная доставка противоопухолевых препаратов // Антибиотики и химиотерапия. - 1991. - Т. 36, № 10. - С. 47.
49. Оборотова H.A. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35, № 5. - С. 30.
50. Оборотова H.A., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121, № 5. - С. 464.
51. Оборотова H.A. Основные проблемы создания лекарственных форм противоопухолевых препаратов для внутривенного введения // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 2. - С. 27-31.
52. Оборотова H.A., Санарова Е.В. Роль новых фармацевтических технологий в повышении избирательности действия противоопухолевых препаратов // Российский химический журнал. - 2012. -Т.11, № 3-4. - С. 33-40.
53. Оборотова H.A., Смирнова З.С., Полозкова А.П., Барышников А.Ю. Фармацевтические аспекты разработки липосомальных лекарственных форм для внутривенного введения гидрофобных цитостати-ков // Вестник РАМН. - 2002. - № 1. - С. 42-5.
54. Осипчук Ю.С., Дрожжина B.C. Фотодинамическая терапия саркомы М-1 крыс с использованием нового фотосенсибилизатора борхлорин липосомальный лиофилизат // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 4. - С. 47-50.
55. Санарова Е.В., Оборотова H.A., Смирнова З.С. и др. Применение липосомальных систем доставки для создания нового эффективного противоопухолевого фотосенсибилизатора // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 72.
56. Санарова Е.В., Ланцова А.В., Дмитриева М.В. и др. Фотодинамическая терапия - способ повышения селективности и эффективности лечения опухолей// Российский биотерапевтический журнал. -2014.- Т.13.- №3.- С.109 - 118.
78
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ..
57. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Макарова О.А. и др. Доклиническое изучение липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. — 2003. — Т. 2, № 4. — С. 40—5.
58. Смирнова З.С., Миерович И.Г., Лукъянец Е.А. и др. Фенилтиозамещенные фталоцианины — новые фотосенсибилизаторы ближнего инфракрасного диапазона // Российский биотерапевтический журнал. — 2004. — Т. 3, № 1. — С. 54—60.
59. Смирнова З.С., Оборотова Н.А., Макарова О.А. и др. Эффективность и фармакокинетика липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора «Фотосенс» на основе сульфафталоцианина // Химико-фармацевтический журнал. — 2005. — Т. 39,№ 7. — С. 3—7.
60. Смирнова З.С., Санарова Е.В., Борисова Л.М. и др. Противоопухолевая активность фотодинамической терапии с липосомальной лекарственной формой тиосенса на перевиваемых опухолях мышей // Российский биотерапевтический журнал. — 2011. — Т. 10, №4. — С. 56—60.
61. Соломко Э.Ш., Степанова Е.В., Абрамов М.В. и др. Ингибиторы ангиогенеза растительного происхождения: перспективы использования в клинической онкологии // Российский биотерапевтический журнал. — 2010. — Т. 9, № 4. — С. 3—10.
62. Соколова Д.В., Тазина Е.В., Кортава М.А. и др. Ahth-MUC-1 иммунолипосомальная конструкция доксорубицина для направленной доставки в опухоль // Российкий биотерапевтический журнал. — 2011. — Т. 10, № 3. — С. 99—103.
63. Соколова Д.В., Трещалина Е.М., Андронова Н.В. и др. Модели для доклинического изучения in vivo противоопухолевой активности таргетных препаратов против антигена MUC-1 // Российский биотерапевтический журнал. — 2010. — Т. 9, № 3. — С. 55—60.
64. Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии. — Т. 120, № 6. — С. 599.
65. Тазина Е.В., Оборотова Н.А. Селективная доставка препаратов в опухоль с помощью термочувствительных липосом и локальной гипертермии // Российский биотерапевтический журнал. — 2008. — Т. 7, № 3. — С. 4—12.
66. Тазина Е.В., Мещерякова В.В., Игнатьева Е.В. и др. Биофармацевтические исследования термочувствительной липосомальной лекарственной формы доксорубицина // Российский биотерапевтический журнал. — 2009. — Т. 8, № 1. — С. 40—7.
67. Толчева Е.В., Оборотова Н.А. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // Российский биотерапевтический журнал. — 2006. — Т. 5, № 1. — С. 54—61.
68. Толчева Е.Н., Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. и др. Анти-CD5-иммунoлипocoмы как транспортная система для направленной доставки лекарственных препаратов к CD5+клeткам // Российский биотерапевтический журнал. — 2005. — Т. 4, № 4. — С. 38—43.
69. Франциянц Е.М., Комарова Е.Ф., Верескунова М.И. Состояние некоторых маркеров ангиогенеза и пролиферации в ткани опухолей репродуктивной системы // Российский биотерапевтический журнал. — 2012. — Т. 11, № 2. — С. 58.
70. Хугаева О.В., КортаваМ.А., ЗангиеваМ.Т. и др. Химико-фармацевтические исследования липосомальной формы митоксантрона // Российский биотерапевтический журнал. — 2012. — Т. 11, № 4. — С. 41—6.
71. Хугаева О.В., Яворская Н.П., Голубева И.С. и др. Сравнительное изучение противоопухолевой активности различных лекарственных форм митоксантрона // Российский биотерапевтический журнал. — 2010. — Т. 9, № 3. — С. 51—4.
72. Чан Тхи Хай Иен, Поздеев В.И., Меерович Г.А. и др. Липосомальная лекарственная форма фотодита-зина // Российский биотерапевтический журнал. — 2010. — Т. 9, № 2. — С. 105—7.
73. Шоуа И.Б., Полозкова А.П., Оборотова Н.А. и др. Действие липосомального доксорубицина на клетки линии, экспрессирующие активный pgp170 // Российский биотерапевтический журнал. — 2004. — Т. 3, № 1. — С. 20—3.
74. Baryshnikov A.Yu. , Baryshnikova M.A. Immunoliposomes and their targets // Russian J. General Chemistry. — 2013. — 83(12). — P. 2565—70.
75. Derkacheva V.M., Meerovich G.A., Meerovich I.G. et al. Heterooxyaluminium tetra-3-phenyl thiophta-locianin is a new effective photosentizer for phodinamic therapy and fluorescent diagnosis // Bulleten Experimental Biology and Medicine. — 2005. — 139(4). — P. 422—30.
76. Seymour L. W. Passive tumor targeting of soluble macromolecules and drug conjugates // CRC Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. — 1992. — 9. — P. 135—87.
77. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V. et al. The involvement of apoptosis in melanoma vasculogenic mimicry // Melanoma Research. — 2007. — 17(1). — P. 1—8.
78. Vartanian A.A., Burova O.S., Stepanova E.V. et al. Melanoma vasculogenic mimicry is strongly related to reactive oxygen species level // Melanoma Research. — 2007. — 17(6). — P. 370—9.
79. Vartanian A.A., Stepanova E.V., Gutorov S.V. et al. Prognostic significance of periodic acid-schiff-positive patterns in clear cell renal carcinoma // The Canadian Journal of Urology. — 2009. — 16(4). — P. 4726—32.
80. Vartanian A.A., Stepanova E.V., Grigorjeva I. et al. VEGFR1 and PKCa signaling control melanoma vasculogenic mimicry in a VGFR2 kinasa-idependent manner // Melanoma Resorch. — 2011. — 21(2). — P. 91—8.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ГСФ — гидрогенезированный соевый фосфатидилхолин
РЭС — ретикуло-эндотелиальная система
РСО — рабочий стандарт образца
ЛМ — липосом митоксантроном
EPC — яичный фосфатидилхолин
