CC BY
20
the same time. The test animals were killed on 12th, 16th and 20th day of pregnancy.
Results. The study of the ovaries morphology of pregnant rats at different stages of gestation in the control and experimental groups was performed by estimating basic structural components of the cortex and medulla organ. The results showed that in the rats of experimental group lead intoxication led to the emergence of a number of morphological changes in ovaries of various degree of severity. At all stages of gestation ovaries in the experimental group were covered with cubic epithelium, the height of which was comparable to the control. Unlike the control group, microvilli on the superficial epithelium were partially reduced. The structure and the degree of protein membrane showed not significant differences compared to the norm in relevant terms of the research. On the 12th day of gestation ovarian cortex exposed to lead acetate follicles was observed to be of different maturities, often oval or irregular shape. In following terms of the study we observed progression of follicle degeneration with the replacement of primordial follicles by connective tissue. Regression of primary follicles occurred through the formation atretic bodies in the form of wrinkled shiny membrane surrounded by tecocytes. All this led to the fact that at the 20th day of gestation in the ovarian parenchyma we observed a marked decrease the total content of the follicles and the predominance of yellow and atretic bodies. We can conclude that the process of follicular atresia during pregnancy in conditions of lead intoxication became intense and ahead of control. Against the background relative volume of corpora lutea we also observed growth of the vascular stream. Circulatory disorders appeared as a plethora of capillary-venous components of hemocirculation of various severity, perivascular edema, sludged erythro-cytes in capillaries. Stroma cortex and medulla of rat ovaries of experimental group on the 12th day of pregnancy were characterized by friable connective tissue fibres perhaps due to its swelling. On the 16th day of gestation disorganization and thickening of fibrous stroma component occurred. The study has shown that the effect of lead intoxication causes rapid and active atresia of follicles, manifested in the reduction of the total content of follicle in rats ovaries, the size of corpora lutea, and their premature regression, as well as degeneration and reduction of content luteocytes, proliferation of ovaries stroma, hemodynamic disorders caused by severe damaging effect of lead acetate. All this leads to changes in hormonal balance and disorders of the reproductive function pregnant female rats.
УДК 616.379-008.64+ 616.3-02 Кост'1цька 1.О.
ОПТИМ1ЗАЦ1Я КОМПЛЕКСНОГО Л1КУВАННЯ МОРФОЛОГ1ЧНИХ ПРОЯВ1В Д1АБЕТИЧНОГО ГАСТРОПАРЕЗУ
ДВНЗ «1вано-Франювський нацюнальний медичний уыверситет», кафедра ендокринологи
Робота присвячена питанням вивчення морфофункцюнальних зм/'н м'язовоУ оболонки шлунка при експериментальному цукровому д'абет'! та його корекцУУ. Встановлено, що на 56-у добу протiкання стрептозотоцинового цукрового д'абету у шлунку спостергаються морфологiчнi ознаки д'абети-чного гастропарезу. Найбльш оптимальним лкуванням д'!абетичного гастропарезу, за даними наших досп'джень, е комплексне застосування '¡нсул'ну i ексенатиду, яке забезпечуе у хворих тва-рин нормалiзацiю гл'кем'чного профлю упродовж доби без ризику розвитку гiпер- / г'1погл'1кем'мних стан'!в. Така комплексна mерапiя призводила до в'дновлення структурних елементiв м'жм'язового нервового сплетення, нтерсти^альних кл'1тин Кахаля та гладких мiоциmiв м'язово/' оболонки шлунку, а як насл'док - до нормалiзацiУ моторно-евакуаторноУ функцУУ шлунка, що св'дчить про адеква-тнють запропонованоУ терап 'УУ.
Кпючов1 слова: шлунок, м1жм'язове сплетення, кл1тини Кахаля, стрептозотоциновий цукровий д1абет, ексенатид, гларпн. У сmаmmi використано мате^ал дисертацЮного дослiдження, яке виконуеться вiдповiдно до плану 1вано-Франювського национального медичного ушверситету i е частиною 2 науково-дослiдних робт кафедри анатомп людини, оперативноУ х1рургп та mопографiчноT анатомп «Опmимiзацiя комплексного л^вання морфоло&чних ушкоджень травноУ, ендокринноУ та сечос-татевоУ систем при цукровому дiабеmi» (№ держ. реестрацп 0113и000769) та «Вiковi особливой патоморфогенезу деяких оргашв нейроендокринноУ, серцево-судинноУ, травноУ та дихальноУ систем при цукровому дiабеmi» (№ держ. реестрацп 011би003598).
Актуальнють проблеми цукрового дiабету (ЦД) зумовлена значною поширенютю захворю-вання та тим, що вш е базою для розвитку скла-дних супутшх захворювань та ускладнень, ран-ньо'Г мвалщносп та смертность Витрати на лку-вання ЦД та його ускладнень для закладiв охо-рони здоров'я вах кра'н складають близько 10% нацюнальних бюджелв охорони здоров'я [6, 9]. Сучасна стратепя в лшуванш ЦД направлена на
Вступ
корекцш хрошчно' ппергл1кеми та шдтримки ни-зьких рiвнiв глкозильованого гемоглобшу (НЬА1с). На жаль, на даний час при застосуванн юнуючих цукрознижуючих препаралв, включаю-чи шсулш, не завжди можна досягнути змен-шення вираженост судинних ускладнень та по-долати шсулЫорезистентнють у хворих з ЦД 2-го типу [1], окрiм того мало уваги клшщистами зве-ртаеться на лкування таких ускладнень ЦД, як дiабетичний гастропарез. Проте останнш значно попршуе якють життя хворих, осктьки охоплюе
безлiч нейром'язових дисфункцш шлунка, вклю-чаючи аномали шлунковоТ скоротливостi та мю-електричноТ дiяльностi [4, 7]. Тому перспектив-ним у комплексному лшуванш ЦД е використан-ня анти^абетичних препаратiв, якi б володти нейропротекторною дiею. Одним iз таких серед-ниш е ексенатид. Вш е агонютом глюкагоно-подiбного пептиду 1 (ГПП-1), забезпечуе глюко-зозалежну секрецiю iнсулiну, знижуе секрецiю глюкагону, знижуе масу тiла, нормалiзуе лтщний обмiн [2, 8], зупиняе процеси пошкодження ней-ронiв при рiзних патологiчних станах [11, 12]. Проте, в лiтературi ми не знайшли даних про йо-го вплив на нервовi волокна шлунку.
Мета дослщження
Встановлення морфологiчних змiн нервового апарату, гладких мюци^в м'язовоТ оболонки шлунка при стрептозотоциновому дiабетi та роз-робка методiв Тх корекцп.
Матерiали та методи дослiдження
Матерiалом для дослiдження послужив шлу-нок 19 статевозртих щурiв-самцiв лiнiТ Вютар вагою 180-220 г., якi розподтялися на 5 груп: 1-контрольна (3 тварини), 2 - з стрептозотоцин-iндукованим ЦД (4 тварин), 3 - з стрептозотоцин-шдукованим ЦД, якi отримували лiкування ексе-натидом (4), 4 - з стрептозотоцинчндукованим ЦД, якi отримували лкування iнсулiном (4), 5 - з стрептозотоцинчндукованим ЦД, якi отримували лкування iнсулiном та ексенатидом (4). Стреп-тозотоцин-iндуконаний ЦД моделювали шляхом одноразового внутршньоочеревинного введен-ня стрептозотоцину (6 мг на 100 гр маси тта), контрольна групi тварин у е^валентнш дозi внутрiшньоочеревинно вводили 0,1 М цитратний буфер з рН 4,5. Тварини 3-Т, 4-Т i 5-Т груп з 14-го дня розвитку ЦД отримували антидiабетичну те-рапiю: 3-я група отримувала ш'екци ексенатиду (препарат ВуеИа», Елi Лтл^ США) по 0,04 мкг/100 г маси тта один раз на добу пщшмрно, 4-а група - ш'екци шсулшу гларгiн («LantusSoloStar») в дозi 1 ОД/кг маси тта/добу пiдшкiрно ранком за 30 хвилин до годування, з наступним титруванням вщповщно до рiвня глю-кози кровi натще, 5-а група отримувала: пщшф-нi ш'екци iнсулiну гларгш («LantusSoloStar») в дозi 1 ОД/кг маси тта/добу (ранком за 30 хвилин до годування, з наступним титруванням вщповн дно до рiвня глюкози кров^ та ввечерi пщшфш ш'екци ексенатиду («ВуеИа», Елi Лтл^ США) в дозi 0,02 мкг/кг маси тта/добу (за 30 хвилин до годування, попередньо розвiвши: на 20 мкг препарату - 20 мл фiзрозчину).
На 56 добу вщ початку експерименту забирали матерiал для дослщження. Евтаназш тварин проводили пщ тiопенталовим наркозом шляхом декаштацп з наступним забором кровi в пробiрку для бiохiмiчних дослiджень. Розвиток ЦД оцшю-вали за рiвнем глюкози, яку визначали з краплi кровi хвостовоТ вени за допомогою тест-смужок на глюкометрi фiрми "Асси-^ес" (Нiмеччина).
PiBeHb глкозильованого гемоглобiну НЬА1с визначали в лабораторп <«^амеб».
Утримання тварин та експерименти проводи-лися вiдповiдно до положень «европейськоТ конвенци про захист хребетних тварин, ям вико-ристовуються для експериментiв та iнших нау-кових цтей» (Страсбург, 2005), «Загальних ети-чних принципiв експериментiв на тваринах», ух-валених П'ятим нацюнальним конгресом з бюе-тики (КиТв, 2013).
Для електронно-мiкроскопiчного методу дослщження шматочки стiнки шлунка розмiрами 1х1 мм фiксували у 2% розчиш чотириокису осмiю, проводили та контрастували за загально прийн-ятою методикою. Вивчення матерiалу проводили на електронному мiкроскопi ПЭМ-125 К, при прискорюючш напрузi 75 кВ, з наступним фотог-рафуванням при збтьшеннях вiд 1200 до 12000 разiв. Напiвтонкi зрiзи, забарвленi 2% р-ном ме-тиленового синього, вивчали пщ свiтловим мк-роскопом МС 300 (ТХР) та фотографували за допомогою Digital camera for microscope DCM 900. Морфометрш здшснювали на вказаних препаратах за допомогою програмного забезпе-чення NIH USA "Image J" в ручному режимi iз урахуванням збтьшень. Структуры змши на пе-вному етапi дослiдження аналiзували в 50 полях зору i визначали площу профтю нейронiв, та Тх ядер, ядерно-цитоплазатичний шдекс (ЯЦ1), ко-ефiцieнт форми ядра (к/фя).
Комп'ютерне опрацювання даних проводило-ся за допомогою статистичного пакету Stat.Soft.Inc; Tulsa, OK, USA; Statistica 6. Викори-стали непараметричш методи дослщження.
Результати дослщження та 1х обговорення
На 56 добу експерименту в щурiв 2-Т групи р^ вень глюкози зростае до 20,09±2,94 ммоль/л (контроль 4,86±0,62 ммоль/л, р=0,0339), НЬА1с до 10,61 ±1,24% (контроль 2,11±0,02%, р=0,0323). У 3-, 4- та 5-й групах тварин застосу-вання антидiабетичних препаратiв призводило до достовiрного зменшення рiвня глюкози та НЬА1с, порiвняно з 2-ю групою, вщповщно до: 10,98±0,95 ммоль/л (р=0,0209) та 6,53±0,69% (р=0,0209); 8,28±0,97 ммоль/л (р=0,0209) та 5,73±0,55 % (р=0,0209); 5,64±0,75 ммоль/л (р=0,0209) та 3,73±0,96 % (р=0,0209). У 5-й групi рiвнi глюкози та НЬА1с були дост^рно нижчими, порiвняно з 3-ю i 4-ю групою, i статистично значимо не в^знялись вiд контрольних показнимв. При цьому слiд зазначити, що дат показники були достовiрно меншими в 4-й групi, порiвняно з 3-ю, проте в обох групах вони були достовiрно вищими за контроль.
У тварин 2-Т групи на 56-у добу експерименту в мiжм'язовому сплетены за даними морфомет-рп площа нейрошв та Тх ядер достовiрно збть-шуються, при цьому коефiцieнт форми ядра та-кож зростае (табл.), що вказуе на набряковi зм^ ни у ядрi i перикарiонi, та пiдтверджуеться на св^лооптичному i електронно-мiкроскопiчному рiвнях.
Таблиця
Морфомеmричнi показники нейронiв мiжм'язового сплетення шлунку при стрептозотоциновому дiабеmi та його корекцц' (М±т)
Групи тварин Площа кпггини (мкм2) Площа ядра (мкм2) К/ф ядра ЯЦ1
1 92,56±5,13 29,25±1,06 0,84±0,02 0,47±0,05
2 146,63±3,75 46,33±4,74 0,91±0,03 0,46±0,05
3 106,23±2,64*д° 35,40±2,15*'#'° 0,88±0,04*° 0,50±0,02
4 105,27±3,65*д" 34,98±3,24*'#'° 0,89±0,03*,а 0,49±0,03
5 91,26±4,15# § в 30,68±1,74*' §' в 0,83±0,03#' §' в 0,51±0,03 *
Примimка: * - досmовiрна рiзниця, пор1вняно з 1-ю групою тварин, * -р<0,05; -р<0,001; - досmовiрна рiзниця порiвняно з 2-ю групою тварин, # - р<0,05; § - досmовiрна рiзниця порвняно з 3-ю групою тварин, § - р<0,05; в- досmовiрна рiзниця порiвняно з 4-ю групою тварин, в.- р<0,05; а- досmовiрнa рiзниця порiвняно з 5-ю групою тварин, а.- р<0,05.
У тварин 2-1 групи на нашвтонких зрiзах в нейронах вщмпчаеться центральний i перифе-ршний хроматолiз, вакуолiзацiя нейроплазми. На ультраструктурному рiвнi св^ нейрони руй-нуються за рахунок колквацшного некрозу. Ядра Тх збтьшеш в об'ем^ св^, мембраннi органели зруйнован (рис. 1 а). У нейроплазмi виявляють-ся мieлiноподiбнi включення, гранули лтофус-цину, вакуолi. Поряд з деструктивно змшеними зустрiчаються темн «шкноморфш» нейрони з апоптичними ттьцями, а також нейрони з збе-реженою ультраструктурою. Проте останнi е по-одинокими. Такi морфологiчнi змши нейронiв пов'язанi з порушенням метаболiчних процесiв, оскiльки при низьких рiвнях iнсулiну вщбувають-ся порушення синтезу бтш у нейронах головного мозку i пошкодження нейрофiламентiв, що призводить до дiабетичноТ енцефалопати [3, 10] та з гiпоксiею, яка виникае в зв'язку з розвитком дiабетичноТ мiкроанпопатN (рис. 1 б, в). У каш-лярах м'язовоТ оболонки шлунку в просвiтi спо-стер1гаються еритроцитарш слад>ю, адгез1я тро-
мбоцитiв, лейкоцитiв (рис. 1 б, в). В деяких кат-лярах просвп" щiлиноподiбноТ форми за рахунок значного набряку ендтелюци^в (рис. 1 б). В ен-дотелiоцитах i перицитах вiдмiчаеться виражена вакуольна дистрофiя, яка проявляеться карюпн кнозом, кар^зисом, вакуолiзацiею цитоплазми, руйнуванням крист м^охондрш, структурних елементiв гранулярноТ ендоплазматичноТ атки i комплексу Гольдж1. В окремих каптярах такi змiни в ендотелюцитах е незворотного характеру, що призводить до руйнування стшки судин (рис. 1в). Базальна мембрана у каптярах значно потовщена, а перикаптярш простори розширенi i заповненi колагеновими волокнами, тобто, спо-стерiгаються явища каптяросклерозу. У цито-плазмi нейролемоци^в спостерiгаються лiзосо-ми, аутофагосоми. Аксоплазма безмiелiнових нервових волокон мiстить поодинок мпюхондри зi зруйнованими кристами та багато нейрофта-ментiв, що вказуе на затримку аксонного транспорту при ЦД.
10.
12.
nepMMeHTa^bHOMy ^KpoBOMy flia6eTÎ / O.S. WypaKiBCbKa, B.A. .TleBu^bKMH, B.A. MicbKiB [Ta iH.] // AKTya^bHi nurraHHfl MeflMMHoY HayKH Ta npamiKM - 36ipHMK HayKOBHX npa^. - 2015. - Bun. 82, T. 2, KHHra 2. - C. 124-132.
HeMinaw W.A. 3MiHM MOTopHo-eBaKyaTopHoÏ 4>yHK^Y w^yHKa Ta nopyweHHa i^yHK^M eHflOTe^iio y XBopHX Ha flia6eTMMHy racrpo-naTiio / W.A. HeMinaw, O.C. Xyx^iHa, O.B. AHflpycflK, I.B. KoBa^ioK // 3flo6yTKH KniHHHOÏ i eKcnepeMeHTa^bHOÏ MeflH^MHM. - 2010. -№ 1(12) - C. 105-107.
OHMCbKO P.M. flia6eTHMHa racTponaTifl (omafl fiiTepaTypM) / P.M. OHMCbKO // K^iHiMHa 4>i3io^orifl Ta 6ioxiMia. - 2013 - № 1. - C. 5765.
HlnanaK l.n. iHTeHCMBHa Tepania flia6eTMMHoro KeToa^flœy y XBopHX Ha iweMNHMM iHcy^bT / l.n. Ùl^anaK, O.A. Ta^ywKO // Oc-Tpbie h HeoT^owHbie cocToaHHa b npaKTHKe BpaMa. - 2015. - № 1. - C. 8-12.
Huilgol V. Acute effect of clonidine on gastric emptying in patients with diabetic gastropathy and controls / V. Huilgol, J. Evans, R. Hellman [et al.] // Aliment. Pharmacol. Ther. - 2002. - Vol. 16, № 5. - P. 945-950.
Idorn Th. Postprandial responses of incretin and pancreatic hormones in non-diabetic patients with end-stage renal disease / Th. Idorn, F.K. Knop, M. Jorgensenetal // Nephrology, dialysis, transplantation. - 2014. - Vol. 29, № 1. - P119-127. Jovanovic A. Stroke and diabetic ketoacidosis - some diagnostic and therapeutic considerations / A. Jovanovic, R.V. Stolic, D.V. Rasic [et al.] // Vasc. Health Risk Manag. - 2014. - Vol. 10. - P. 201-204.
Juan P. Structural and Ultrastructural Analysis of Cerebral Cortex, Cerebellum and Hypothalamus from Diabetic Rats / P. Juan, Hernandez-Fonseca, Jaimar Rincon [et al.] // Experimental Diabetes Research. - 2009. - Vol. 2009. - P. 1-12. Lizard venom offers hope for Parkinson\'s disease patients [E^eK-TpoHHHw pecypc] // PhysOrg - 2010. - Pe«HM gocTyny go pecyp-cy: http://phys.org/news/2010-08-lizard-venom-parkinson-disease-patients.html.
Tatsuhito Himeno. Beneficial Effects of Exendin-4 on Experimental Polyneuropathy in Diabetic Mice / Himeno Tatsuhito, Hideki Kamiya, Keiko Naruse, Norio Harada, Nobuaki Ozaki // Diabetes. - 2011. - Vol. 60 (9). - P. 2397-2406.
ного гастропарезу, за даними наших дослщжень, е комплексне застосування шсулшу i ексенати-ду, яке забезпечуе у хворих тварин нормалiза-цш глiкемiчного профтю упродовж доби без ри-зику розвитку ппер- i гiпоглiкемiчних сташв. Така комплексна тератя призводила до вщновлення структурних елемен^в мiжм'язового нервового сплетення, штерсти^альних кл^ин Кахаля та гладких мюци^в м'язовоТ оболонки шлунку, а як наслщок - до нормалiзацiТ моторно-евакуаторноТ функцiТ шлунка, що свщчить про адекватнiсть запропонованоТ терапп.
Перспективи подальших дослiджень
Перспективними е дослiдження застосування розробленоТ нами терапiТ експериментального дiабетичного гастропарезу в клiнiчних умовах.
Лпература
1. Ахметов А.С. Влияние терапии эксенатидом на различные показатели метаболизма и факторы риска диабетических осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа / А.С. Ахметов // Русский медицинский журнал. - 2008. - №28. - С. 1862. - Режим доступа http://www.rmj.ru/articles/endokrinologiya/Vliyanie_terapii_eksenat
idom_na_razlichnye_pokazateli_metabolizma_i_faktory_riska_d
iabeticheskih_osloghneniy_u_bolynyh_saharnym_diabetom_2_ti
pa/#ixzz4GRaUW3eV).
2. Аметов А. С. Клинические аспекты эффективности инкретино-вой терапии (WNT-патогенетический путь и полиморфизм гена TCF7L2) / А. С. Аметов, Л. Л. Камынина, З. Г. Ахмедова // Рос. мед. журнал. - 2016. - Том 22, № 1. - С. 47-51.
3. Журамвська О.Я. Вираженють процеав апоптозу в крупноклн тинних ядрах ппотапамуса щурiв рiзних вкових груп при екс-
Реферат
ОПТИМИЗАЦИЯ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ДИАБЕТИЧЕСКОГО ГАСТРОПАРЕЗА Костицкая И.А.
Ключевые слова: желудок, межмышечные сплетения, клетки Кахаля, стрептозотоцинового сахарный диабет, эксенатид, гларгин.
Работа посвящена вопросам изучения морфофункциональных изменений мышечной оболочки желудка при экспериментальном сахарном диабете и его коррекции. Установлено, что на пятьдесят шестой день протекания стрептозотоцинового сахарного диабета в желудке наблюдаются морфологические признаки диабетического гастропареза. Наиболее оптимальным лечением диабетического гастропареза, по данным наших исследований, является комплексное применение инсулина и эксе-натида, которое обеспечивает у больных животных нормализацию гликемического профиля в течение суток без риска развития гипер- и гипогликемических состояний. Такая комплексная терапия приводила к восстановлению структурных элементов межмышечного нервного сплетения, интерстициальных клеток Кахаля и гладких миоцитов мышечной оболочки желудка, а как следствие - к нормализации моторной функции желудка, что свидетельствует об адекватности предложенной терапии.
Summary
OPTIMIZATION OF INTEGRATED THERAPY OF MORPHOLOGICAL SIGNS OF DIABETIC GASTROPARESIS Kostitska I.O.
Key words: stomach, intermuscular plexus, interstitial cells of Cajal, streptozotocin-induceddiabetes mellitus, exenatide, glargine.
The research work is devoted to the study of morpho-functional changes in the muscular membrane of the stomach in experimental diabetes mellitus and its correction. Morphological signs of diabetic gastropare-sis in the stomach of animals were registered on the 56th day of the development of streptozotocin-induced diabetes mellitus. According to the results of our research, a combination of insulin and exenatide that provides normalization of glycemic profile throughout the day without intensifying the risk of hyper- and hypoglycemia is the most optimal treatment of diabetic gastroparesis. Such combination therapy results in the restoration of structural elements of the myenteric plexus, the interstitial cells of Cajal and smooth myocytes of the muscular membrane of the stomach and, consequently, normalizes the motor-evacuation function of the stomach proving the adequacy of the therapy proposed.
