CC BY
92
УДК 615.322:582
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ТЕРПЕНОВЫХ ЛАКТОНОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВАХ, СОДЕРЖАЩИХ ЭКСТРАКТ ГИНКГО ДВУЛОПАСТНОГО Кисилёва А.Н., Стрелычева К.А., Коган Е.Г, Шаталова М.Э., Васильева О.В., Кордина О.В., Гершунина О.Ю.
Смоленский государственный медицинский университет, Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28
[email protected] - Коган Евгений Геннадьевич
Резюме. Были проанализированы два лекарственных препарата на основе экстракта гинкго двулопастного, по содержанию терпеновых лактонов. Оба образца имели сертификат качества, подтверждающий, что в их состав входит стандартизированный экстракт листьев гинкго двулопастного, содержащий не менее 6% терпеновых лактонов. Общее содержание терпеновых лактонов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с УФ-детекцией. Работа показала существенное различие в качестве препаратов, полученных на основе стандартизированного (EGb 761®) и нестандартизированного сухого экстракта листьев гинкго двулопастного. Ключевые слова: Гинкго двулопастного листьев экстракт, дитерпеновые лактоны, гинкголиды, билобалиды.
DETERMINATION OF TERPENE LACTONES IN MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING GINKGO BILOBA EXTRACT
Kisiliova A.N., Strelycheva K.A., Kogan E. G., Shatalova M.E., VasiVeva O. V., Kordina O. V., Gershynina O. Y.
Smolensk State Medical University, Russia, 214019, Smolensk, Krupskaya St., 28 Summary. Two drugs based on the extract of Ginkgo biloba, were analysed according to the content of terpene lactones. Both samples had a quality certificate, confirming the content of a standardized extract of Ginkgo biloba not less than 6 terpene lactones. The total content of terpene lactones was determined by high-performance liquid chromatography with UV detection. The study revealed a significant difference in the quality of drugs obtained on the basis of standardized (EGb 761®) and non-standardized dry extracts of Ginkgo biloba.
Key words: Ginkgo biloba leaf extract, diterpene lactones, ginkgolides, bilobalides.
Введение. Листья гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.) входят в Европейскую и Американскую фармакопеи, а также включены в Государственный реестр лекарственных средств РФ [2, 3, 5]. На основе субстанций из листьев гинкго двулопастного в Российской Федерации применяются такие препараты, как Танакан®, Билобил®, Мемоплант®, Витрум® Мемори, Гинкор Форт®, Гинкор гель®, однако они производятся за рубежом и являются дорогостоящими. Это обусловливает актуальность исследований в плане обоснования целесообразности создания импортозамещающих ноотропных
препаратов на основе листьев гинкго двулопастного. Для успешного решения данной проблемы необходимой является разработка методов стандартизации,
позволяющих объективно оценивать качество сырья и лекарственных препаратов данного растения.
Несмотря на то, что в данный момент в Российской Федерации появилась нормативная документация на сырье «Гинкго двулопастного листья» (Государственная Фармакопея 13 изд.), однако до сих пор в полной мере не решены вопросы стандартизации сырья и препаратов гинкго [3].
Гинкго - представитель класса Ginkgopsida (Гинкговые, гинкгоопсиды) отдела голосеменных, процветавший в мезозойскую эру, является одним из самых примитивных голосеменных растений современного растительного мира. В мезозойской эре этот род занимал огромный ареал, в настоящее время представлен одним видом.
Гинкго двулопастный - листопадное голосеменное, двудомное дерево высотой более 30 м и диаметром ствола более 3 м. Молодые деревья имеют пирамидальную крону, с ростом крона становится более раскидистой, густой и сильноветвистой. Боковые ветви отходят от ствола почти под прямым углом, иногда сближены, образуя подобие мутовок. Кора серая, шероховатая, у старых деревьев - с продольными трещинами. Листья гинкго располагаются на побегах двух типов: на удлиненных конечных, растущих быстро, и на укороченных, отличающихся замедленным ростом. На длинных побегах листья одиночные, сидят по спирали. На укороченных побегах 5-7 листьев образуют пучки на его верхушке. Осенью дерево сбрасывает листья, которые желтеют. Плоды напоминают костянку, семена обратнояйцевидной формы длиной 2-2,5 см [2].
Листья вееровидной или широко клиновидной формы, кожистые, с дихотомическим жилкованием. Черешок тонкий, упругий, длиной до 10 см. На верхушке листа имеется более или менее глубокий У-образный вырез, рассекающий пластинку на 2 симметричные половинки. Корзинки шаровидные, одиночные или по нескольку вместе. Гинкго является долговечным растением. Известны деревья, возраст которых превышает 1000 лет. Размножается оно семенами и черенками [2].
Лист гинкго двулопастного содержит две основные группы веществ, определяющих его биологическую активность и являющихся показателями подлинности сырья. Первую группу составляют терпеновые ди- и трилактоны (билобалиды и гинкголиды). Вторую группу представляют биофлавоноиды, при этом важным показателем качества сырья является соотношение флавоноидных агликонов кемпферола, кверцетина [4].
Целью работы явилось определение количественного и качественного содержания дитерпеновых лактонов гинкго двулопастного в 2 образцах: образец №1 (производитель Франция) и образец №2 (производитель Россия).
Методика. В исследования принимали участие два образца, в состав которых входит экстракт гинкго двулопастного.
Подготовка образцов для исследования. Содержимое капсул и растертые таблетки, содержащие около 0,3 грамма сухого экстракта, помещают в круглодонную колбу объемом 250 мл, прибавляют 80 мл смеси метанол-вода-соляная кислота (60:20:8). Экстракцию проводят на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1-1,5 часа. Экстракт охлаждают до комнатной температуры, надосадочную жидкость фильтруют через целлюлозный фильтр с размером пор до 0,45 мкм в мерную колбу объемом 100 мл. Объем экстракта доводят дистиллированной водой до 100 мл.
Качественный состав
анализируемых объектов определялся методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) по интенсивности характерного свечения пятен при воздействии УФ-излучения.
Качественный и количественный состав терпеновых лактонов определялся методом ВЭЖХ на колонке Kromosil С18, 5 мкм, 250 мм х 4,6 мм ID производства НПФ АП ЛЮМЭКС (Россия). Используется градиентное элюирование с подвижной фазой метанол -ортофосфорная кислота, pH 2,6 (53:47) при скорости потока 1,2 мл/мин, температуре 25°С, с УФ-детекцией при 370 нм. Объем вводимой пробы 10 мкл. Применялся хроматограф Agilent 1100, состоящий из четырехканального градиентного насоса с дегазатором, автосамплера, термостата и диодно-матричного детектора. Сбор и обработка хроматограмм осуществлялась с помощью программ «ChemStation B.01.03» и «ACD/SpecManager 10.05».
Результаты исследования и их обсуждение. Из двух анализируемых образцов только образец №1 содержит стандартизированный экстракт листьев гинкго двулопастного марки EGb 761® (далее - EGb 761®), в отношении которого накоплена наибольшая международная доказательная база эффективности при
хроническом нарушении мозгового кровообращения [1].
Качественное обнаружение
терпеновых лактонов проводили методом
тонкослойной хроматографии (ТСХ) (рис. 1).
Рис. 1. Идентификация подлинности препаратов методом ТСХ
Образец №2 имеет
хроматографический профиль, подобный образцу №1 и EGb761® (рис. 1). Однако, интенсивность пятен в образце №2 меньше. Следовательно, существует высокая вероятность того, что партия образца №2 была изготовлена из экстракта
гинкго двулопастного, который по качеству отличается от EGb 761®.
На хроматограммах (рис. 2-4) исследуемых образцов обнаружено четыре пика индивидуальных веществ:
гинкголиды А,В,С , билобалиды.
Рис. 2. Хроматограмма EGb 761® Рис. 3. Хроматограмма образца №1
Рис. 4. Хроматограмма образца №2 В ходе проведенного количественного определения основных групп биологически
активных веществ в исследуемых образцах представленные в таблице 1.
нами были получены следующие результаты,
Таблица 1. Результаты количественного определения терпеновых лактонов методом ВЭЖХ
Требование НД Образец №1 Образец №2
Гинкголиды A+B+C 1,12 - 1,36 мг/ед* 1,28 мг 1,40 мг
Билобалиды 1,04 - 1,28 мг/ед* 1,13 мг 0,73 мг
Терпеновые лактоны 2,16 - 2,64 мг/ед* 2,40 мг 2,13 мг
*Терпеновых лактонов в EGb 761® должно быть:
• от 5,4% до 6,6% терпеновых лактонов
• от 2,8% до 3,4% Гинкголиды A+B+C
• от 2,6% до 3,2% Билобалиды
Исходя из того, что каждый образец
содержит 40 мг/ед (в соответствии с указанием в инструкции), то содержание терпеновых лактонов в каждой из единиц должно быть
• от 2,16 до 2,64 мг терпеновых лактонов (ориентировочно 2,40 мг)
• от 1,12 до 1,36 мг Гинкголиды A+B+C (ориентировочно 1,24 мг)
• от 1,04 до 1,28 мг Билобалиды (ориентировочно 1,16 мг)
Как показали полученные результаты, анализируемая партия образца №2 не соответствует требованиям НТД по содержанию суммы Гинкголидов А+В+С, Билобалидов и терпеновых лактонов.
Фактически, терпеновые лактоны состоят на 50% из Гинкголидов А+В+С и 50% - из Билобалидов. В образце №2 экстракт гинкго двулопастного содержит
приблизительно 66% Гинкголидов А+В+С и 34% Билобалидов. В очередной раз выдвинутая гипотеза подтверждается: партия
образца №2 была изготовлена из экстракта гинкго двулопастного, который по качеству отличается от EGb 761®, вопреки тому, что указано в инструкции по применению.
Заключение. На основании проведенного исследования, мы можем сказать, что: анализируемый образец №2 содержит 40 мг экстракта гинкго двулопастного, но есть высокая вероятность того, что используемый экстракт не является стандартизированным экстрактом листьев гинкго двулопастного марки EGb 761®.
В заключение нужно отметить: очевидно, что сертификаты качества, предоставляемые производителями или поставщиками стандартизированных
экстрактов гинкго двулопастного, не являются достаточными, для того, чтобы подтвердить качество готового продукта. Полученные нами результаты наглядно показывают необходимость обязательной проверки предлагаемого сырья перед его применением в производстве
лекарственных препаратов.
Литература
1. Камчатнов П.Р., Евзельман М.А. Хроническая ишемия головного мозга. Путеводитель врачебных назначений. Терапевтический справочник, т.1. - Бионика Медиа, 2014. - С. 121-122.
2. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов.). 2-е изд., перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт»; ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2007. - 1239 с.
3. Куркина А.В. Флавоноиды фармакопейных растений: Монография. - Самара: ООО «Офорт»; ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России, 2012. - 290. - 9 с.
4. Эллер К.И., Балусова А.С., Комарова Е.Л. // Рынок БАД. - 2005. - №4 (24). - С. 29-30
5. Crane P. Ginkgo: the tree that time forgot. - New Haven and London: // Yale University Press. - 2013. - P. 350.
