CC BY
67
3. Кухтин М. Д. Мшробш бюптвки - явище юнування та захисту MiKpoopraHi3MiB / М. Д. Кухтин // Вет. мед. Украши, 2009. - № 10. - С. 20-21.
4. Романова Ю. М. Биопленки патогенных бактерий и их роль в хронизации инфекционного процесса. Поиск средств борьбы с биопленками / Ю. М. Романова, Л. В. Диденко, Э. Р. Толордава, А. Л. Гинцбург // Вестн. РАМН. - 2011. - №10. - С. 3139.
5. Свдашенко О. I. Бюптвка як особлива форма оргашзацп бактерш та И роль в шфекщйних процесах / О. I. Свдашенко, О. С. Воронкова, О. А. Орокваша, А. I. Вшшков // Вюник проблем бюлоги i медицини. - Выпуск № 3 (103) / том 2 / 2013. - С.36-40.
6. Stepanovic S. A modified microtiter-plate test for quantification of staphylococcal biofilm formation / S. Stepanovic, D. Vurovic, I. Duric, B. Savic // J. Microbiol. Methods. -2000. - Vol. 40. - P. 175-179.
7. Costerton J. W. Biofilm in implant infections: its production and regulation / Costerton J. W., Montanaro L., Aciola C.R // Int. J. Artif. Organs. - 2005. - № 28. - Р. 10621068.
8. Miller M. Quorum sensing in bacteria / M. Miller, B. Bassler // Annu Rev. Microbiol. - 2001. - Vol. 55. - P. 165-199.
Стаття надшшла до редакцИ 17.09.2015
УДК 619:615:5.
nepir Ж. М., к. вет. н., ст. н. с. (E-mail:[email protected]) Ккщв О. С., н. с., Кабанець А. С., м. н. с. ©
Державный науково-досл1дний контрольный институт ветеринарных npenapamie та кормових добавок, м. Львiв, Украгна
ВИЗНАЧЕННЯ КЛАСУ ГОСТРО1 ТОКСИЧНОСТ1 ПРЕПАРАТУ
«БРАВЕКТО» КЛАСИЧНИМ ТА АЛЬТЕРНАТИВНИМ ТЕСТАМИ
У стaттi наведено результати порiвняльного визначення пaрaмeтрiв гострог токсичностi препарату «Бравекто» за допомогою класичного та альтернативного (визначення класу гострог токсичностi) мeтодiв.
Принцип альтернативного (европейського) методу визначення гострог токсичностi грунтуешься на поетапнш процeдурi з використанням мШмальног кiлькостi тварин на кожному етат до^джень, що дозволяе зробити висновок щодо класифжацИ до^джуваног речовини з вiднeсeнням його до одного з розрядiв клайв токсичностi, як визначаються фжсованим DL50 порогових значень.
Установлено, що DL50 препарату «Бравекто» за класичним методом визначення пaрaмeтрiв гострог токсичностi складае 2666,7 мг/кг, а альтернативним — 2500 мг/кг при внутрШньошлунковому введены бшим щурам. Толерантна доза препарату, яка не спричиняла зaгибeлi бтих щурiв за одноразового введення становила 2000 мг/кг.
Альтернативний метод визначення класу гострог токсичностi згiдно OECD тест № 423:2001 1ДТ е eкономiчно вигiднiшим i гумантшим, бо при цьому не мае нeобхiдностi визначення летального результату i для до^ду використовуеться мiнiмaльнa юльюсть тварин. На до^дження за класичним методом було витрачено 48 лабораторних тварин, а за альтернативного — всього 6 тварин.
Ключов'1 слова: ОЕСД, 1СН, тест №423, класичний метод, альтернативний метод, гостра пероральна токсичтсть, передлетальний стан, фжсована доза, толерантна доза, бравекто, щури.
© Пери- Ж. М., Ккщв О. С., Кабанець А. С., 2015
172
УДК619:615:9.
Периг Ж. М., к. вет. н., ст. н. с., Кисцив О. С., н. с.,Кабанець А. С. , м. н.с.
Государственный научно-исследовательский контрольный институт ветеринарных препаратов и кормовых добавок, г. Львов, Украина ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЛАССА ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ПРЕПАРАТА БРАВЕКТО КЛАССИЧЕСКИМ И АЛЬТЕРНАТИВНЫМ ТЕСТАМИ
В статье приведены результаты сравнительного определения параметров острой токсичности препарата «Бравекто» с помощью классического и альтернативного (определение класса острой токсичности) методов. Принцип альтернативного (европейского) метода определения острой токсичности основывается на поэтапной процедуре с использованием минимального количества животных на каждом этапе исследований, позволяет сделать вывод о классификации исследуемого вещества с отнесением его к одному из разрядов классов токсичности, которые определяются фиксированным DL50 пороговых значений.
Установлено, что DL50 препарата «Бравекто» классическим методом определения параметров острой токсичности составляет 2666,7 мг/кг, а альтернативным - 2500 мг/кг при внутрижелудочном введении белым крысам. Толерантная доза, которая не вызвала гибели белых крыс при однократном введении составила 2000 мг/кг.
Альтернативный метод определения класса острой токсичности согласно OECD тест № 423 2001 ИДТ экономически выгодный и гуманный, так как при этом нет необходимости определения летального исхода и для опыта необходимо минимальное количество животных. Для исследования классическим методом было использовано 48 лабораторных животных, а за альтернативного - всего 6 животных.
Ключевые слова: ОЕСД, 1СН, тест № 423, классический метод, альтернативный метод, острая пероральная токсичность, передлетальное состояние, фиксированая доза, толерантная доза, бравекто, крысы.
UDC 619:615:5
Perih Zh. М., Candidate of Veterinary Sciences, senior scientific worker, Kistsiv О. S., scientific worker, Kabanets' А. S., junior scientific worker State Scientific Research Control Institute of Veterinary Medicinal Products and Feed
Additives, Lviv, Ukraine THE DETERMINATION OF ACUTE TOXICITY CLASS OF MEDICINAL PRODUCT BRAVECTO BY CLASSICAL AND ALTERNATIVE TESTS
The article presents the results of comparative determination of acute toxicity parameters of the medicinal product «Bravecto» by means of classical alternative methods (the determination of acute toxicity class).
The principle of alternative (European) method of acute toxicity determination is based on step-by-step procedure using minimal quantity of animals on each stage of tests that allows to make a conclusion concerning the classification of studied substance by referring to one of the classes of toxicity defined by fixed DL50 of threshold meaning.
It was determined that DL50 of medicinal product «Bravecto» by classical method of parameters of acute toxicity constitutes 2666,7 mg/kg, by alternative one - 2500 mg/kg under conditions of intragastric administration to white rats. Tolerant dose of the medicinal product without causing death to white rats by single administration was equal to 2000 mg/kg.
The alternative method of acute toxicity class determination according to OECD test № 423:2001 1ДТ is economically more profitable and human because there is no any necessity to determine the lethal result and minimal number of animals is used for tests.48 laboratory animals were used applying classical method and 6 animals for alternative one.
Key words: OECD, 1СН, test №423, classical method, alternative method, acute oral toxicity, fixed dose, tolerant dose, bravecto, rats.
173
Вступ. За мiжнародними вимогами випробування безпеки (токсичносп) рiзних речовин на живих системах (людини, тварин, екосистем) здшснюються вщповщно до гармотзованих методичних рекомендацш Оргатзацп економiчного сшвробггництва i розвитку (ОЕСД) та Мiжнародно! конференци з гармотзацп (1СН) [1].
Метод гостро! токсичностi (ОЕСД, тест № 423:2001 1ДТ) - Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method (Гостра пероральна токсичнють - метод визначення класу токсичносп за впливом хiмiчно! продукцп на оргатзм людини) -Мiжнародний документ розроблений Оргатзащею Економiчного Спiвробiтництва та Розвитку (OECP/OECD). Це - поетапна процедура з використанням 3-х тварин одте! стал на кожному етат. Залежно вiд смертностi та /або передлетального стану тварин, висновок про гостру токсичнють дослщжувано! речовини проводиться в середньому у 2-4 етапи. Даний метод базусться на бюметричних ощнках з фшсованими дозами, яю розподiленi таким чином за часом застосування препарату, щоб була можливють оцiнювати речовину за ступенем небезпечносп та систематизувати результати дослiджень [2, 3, 4, 5].
Вщомо, що фармакологiчна група iнсектоакарацидних препаратiв проти блiх та клiщiв виробляеться, в основному, у формi iн'eкцiйних розчишв та засобiв зовнiшнього застосування. Фiрмою Intervet Internacional B. V., Нщерланди запропоновано препарат «Бравекто», для перорального застосування, виготовлений у формi таблеток. Бравекто належить до шсектоакарацидних препарата системно! ди. До складу препарату входить флураланер - iнсектоакарацид групи iзоксазолiну, активний у вiдношеннi блох [6].
Визначення токсичносп ветеринарних лiкарських засобiв починаеться з гострого дослщу, в якому отримують дат про величину смертельних доз, що визначають токсичну характеристику препарату в умовах короткотривало! ди на оргашзм [7].
Мета дослщжень полягала у визначенш гостро! токсичностi iнсектоакарацидного препарату «Бравекто» класичним методом та згщно з вимогами ОЕСД.
Матер1али i методи. Визначення параметрiв гостро! токсичносп препарату «Бравекто» вивчали на 60 бших щурах 3-4-мюячного вiку, масою 180-200 г. Препарат вводили бшим щурам внутрiшньошлунково, одноразово, за допомогою металевого зонда.
Встановлення середньосмертельно! дози препарату «Бравекто» класичним методом проводили в два етапи: попереднш та розширений. На попередньому етат дослщжень препарат вводили в дозах вщ 500 до 5000 мг/кг, з штервалом 1000 мг/кг i на кожну дозу було використано по 3 лабораторш тварини. В результат дослщжень встановлеш максимально переносима (DL0) та смертельна (DL100) дози. На розгорнутому етапi сформованi групи по 6 тварин в кожнш. Препарат вводили в дозах вщ 2000 до 3000 мг/кг, з штервалом 200 мг/кг маси тварин. DL50 вираховували за методикою Г. Кербера [8].
Згщно з альтернативним методом - тест № 423:2001 1ДТ (гостра пероральна токсичнють) рiвень початково! дози повинен бути таким, щоб з найбшьшою вiрогiднiстю викликати загибель деяких тварин, яким задають один iз чотирьох фшсованих рiвнiв доз - 5, 50, 300 та 2000 мг/кг маси тша. Виходячи з даних класичного методу дослщжень, препарат вводили в початковш дозi 2000 мг/кг, використавши для цього 3 тварини. Оскшьки загибелi пiсля введення препарату в дозi 2000 мг/кг не було встановлено, дослщ повторювали аналопчно. Клас токсичностi та величину середньосмертельних доз визначали згiдно з системою класифшацп небезпеки та маркування хiмiчно! продукц^! [4].
Результати дослщжень. За вивчення токсичносп класичним методом на попередньому етат дослщжень встановлена смертельна (DL100) - 3000 мг/кг та максимально переносима (DL0) дози препарата - 2000 мг/кг.
Результати заключного етапу дослщжень приведет в таблищ 1.
174
Показники смертности бших щурiв за перорального
Таблиця 1
Дози препарату, мг/кг 2000 2200 2400 2600 2800 3000
Вижило 6 5 4 2 1 0
Загинуло 0 1 2 4 5 6
Z 0,5 1,5 3,0 4,5 5,5
а 200 200 200 200 200
z а 100 300 600 900 1100
При обчисленш за Г. Кербером, DL50 препарату розраховували за формулою: DL50 = DLloo - / т) (1)
Згiдно формули, DL50 =3000 - (17500 : 6) = 2666,7 мг/кг.
Отже, зпдно з класифшащею хiмiчних речовин за ступенем небезпечносп, препарат «Бравекто» належить до III класу — помiрно токсичнi речовини [9].
початкова доза 2000 мг/кг
3 тварини 2000 мг/кг
0-1
Дози, мг/кг
25
I
30
50
50 200 I______.!_____I
200
300 500
3 тварини 2000 мг/кг
к
0-1
УГС* 1 —1— 2 3 4 5 5 або не
■ 1 1 [ класифшуеться
1000
2000
2500
5000
Рис. Схема проведення дослщження препарату «Бравекто»
- - дослщ;
------ - шляхи можливого розвитку дослщу;
0, 1, 2, 3 - кшькють тварин, як загинули;
I
5
да
175
*УГС - Узгоджена на глобальному piBHi система класифшацп небезпеки та маркування xiMi4HOi продукци.
За вивчення токсичносп альтернативним методом, на першому етат дослiджень, пiсля введення препарату в дозi 2000 мг/кг дослщним тваринам, загибелi дослiдних тварин не вщзначали. На наступному етат дослщжень, трьом тваринам повторно вводили препарат у дозi 2000 мг/кг. Оскшьки загибелi тварин не фшсували, згiдно з першими двома рiвнями (рис.), препарат належить до 5 категорп токсичностi (клас 5, DL50 > 2000-5000), а величина середньосмертельно! дози складае 2500 мг/кг.
Таким чином, для визначення класу токсичносп та величини ЛД50 препарату «Бравекто» було затрачено всього 6 лабораторних тварин. Перевага даного методу визначення класу токсичносп полягае в тому, що для дослщу використовуеться мшмальна кiлькiсть тварин i при цьому немае необхщносп визначення летального результату.
Отже, згщно з класифiкацiею речовин за токсичшстю, при внутрiшньошлунковому введенш препарат належить до V категорп (клас 5, DL50 > 2000-5000),. а DL50 складае 2500 мг/кг.
Висновки.
1. За класичного методу дослщжень DL50 препарату «Бравекто» при внутршньошлунковому введеннi складае 2666,7 мг/кг i препарат належить до III класу токсичносп - помiрно токсичнi речовини, зпдно з ГОСТу 12.1.007-76.
2. За альтернативного методу дослщжень DL50 препарату «Бравекто» при внутршньошлунковому введенш складае 2500 мг/кг i препарат належить до 5 категорп токсичносп (клас 5, DL50 > 2000-5000), зпдно з СГС - узгоджено! на глобальному рiвнi системи класифшацп та маркування.
3. Альтернативний метод дослщжень згщно з OECD тест № 423:2001 1ДТ е економiчно вигщшшим i гуманнiшим, нiж класичний, бо при цьому не мае необхщносп визначення летального результату. Для визначення класу токсичносп та середньосмертельно! дози препарату «Бравекто» за класичним методом було витрачено 48 лабораторних тварин, а за альтернативного - всього 6 тварин.
Перспективи подальших дослщжень. З метою збереження тварин та дотримання бюетичних вимог згщно европейських стандарта заплановано проведення дослщжень iз визначення гостро! токсичносп ветеринарних лшарських засобiв методом «Acute Oral Toxiti-Up-and-Down-Procedure (UDP)» OECD, Тест № 425.
Лггература
1. Organisation for Economic Cooperation and Development (OECD) series on Principles of Good Laboratory Practice and compliance monitoring. Number 1. OECD Principles of Good Laboratory Practice (as reused in 1997). OECD Environmental Health and Safety Publications, Environment Directorate: ENV/MC/CHEM (98).17 - Paris: OECD, 1998.
2. OECD Test № 423 «Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method».
3. Roll R. New Perspectives in Acute Toxicity Testing of Chemicals / R. Roll, Th. Höfer-Bosse, D. Kayser //Toxicol. Lett. Suppl. - 1986. - P. 31.
4. Neue Wege zur Bestimmung der akuten Toxizität von Chemikalien/ R. Roll, M. Riebschläger, U. Mischke, D. Kayser //Bundesgesundheitsblatt. - 1989. - Vol. 32. -P. 336-341.
5. OECD. Guidance Document on Acute Oral Toxicity / Environmental Health and Safety Monograph Series on Testing and Assessment. - 2000. - Vol. 24.
176
6. Хмельницький Г. О. Ветеринарна фармаколопя / Г. О. Хмельницький, В. С. Хоменко, О. I. Канюка. - Харшв, 1994. - 479 с.
7. Лгтвшова Н. В. Доклшчт до^дження лшарських засобiв: Методичш рекомендацп / Н. В. Лггвшова, М. А. Фшоненко-Патрушева, С. Б. Французова, В. В. Храпак. - К, 2001. - 527 с.
8. Беленький М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М. Л. Беленький. - Л, 1963. - 152 с.
9. ГОСТ 12.1.007-76. ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. - Введ.01.01.77. - проверен 01.10.81; Изменен №1; переиздан 01.12.81. - М.: Изд-во стандартов, 1982. - С.6.
Стаття надшшла до редакцИ 10.09.2015
УДК 636.09:577.1:616.98:636.7
Петренко О. С., к. вет. н. ©
Державный науково-досл1дний институт з лабораторног д1агностики та ветеринарно-самтарног експертизи, м. Кигв
ФУНКЦЮНАЛЬНИЙ СТАН ПЕЧ1НКИ I НИРОК У СОБАК, УРАЖЕНИХ Р1ЗНИМИ СЕРОВАРАМИ ЛЕПТОСП1Р
Бгохгмгчне дослгдження сироваток кровI собак, якг характеризувалася наявтстю специфгчних антиты проти ргзних сероваргв лептостр у дгагностичних титрах, дозволило оцтити функцгональний стан печтки та нирок, патолог1я яких може негативно впливати на переб1г та прогноз лептострозу. Встановлено, що за ураження собак сероваром Icterohaemorragiae 1:100-1:400 +++ Iстотт змти функционального стану печтки I нирок вгдсутт. У тварин, уражених сероваром Сатсо1а 1:100-1:400 +++, дгагностовано патологию печтки, на що вказують гтерпротегнемгя, гтоальбумтемгя, диспротегнемгя, г1перферментем1я АлАТ та зменшення коефгцгента де Р1т1са. За змшаног тфекцИ (серовари Icterohaemorragiae 1:100-1:3200 +++, Сатсо1а 1:100-1:800 +++ та Grippotyphosa 1:100 +++) встановлеш змти, характеры для гепато-ренального синдрому: гтоальбумтемгя, виражена диспротегнемгя, г1перферментем1я АлАТ та АсАТ; г1перкреатинтем1я та зростання концентрацИмолекул середньог маси.
Ключов1 слова: лептостроз, серовар, собаки, реакция мжроаглютинацп, титр, функцгональний стан, печтка, нирки, метаболизм, диагностика.
УДК 636.09:577.1:616.98:636.7
Петренко А. С., к. вет. н.
Государственный научно-исследовательский институт лабораторной диагностики и ветеринарно-санитарной экспертизы, г. Киев
ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ И ПОЧЕК У СОБАК, ПОРАЖЕННЫХ РАЗЛИЧНЫМИ СЕРОВАРАМИ ЛЕПТОСПИР
Биохимическое исследование сывороток крови собак, которые характеризовались наличием специфических антител против различных сероваров лептоспир, позволило оценить функциональное состояние печени и почек, патология которых может негативно влиять на течение и прогноз лептоспироза. Установлено, что при поражении собак сероваром Icterohaemorragiae 1:1001:400 + + + существенные изменения функционального состояния печени и почек отсутствуют. У животных, пораженных сероваром Сатсо1а 1:100-1:400 +++, диагностировано патологию печени, на что указывают гиперпротеинемия,
© Петренко О. С., 2015
177
