CC BY
1
© Коллектив авторов, 2024
Бязрова М.Г.1' 2, Смольников Е.В.1' 2, Литовкина А.О.1' 2, Амзаева Л.У.2, Сухова М.М.1, 3, Михайлов А.А.1, 3, Чернушевич Д. Д.1, 2, Феденко Е.С.1, Филатов А.В.1' 3, Елисютина О.Г. 11 2
Определение аллерген-специфических В-лимфоцитов у пациентов с аллергическими заболеваниями при отсутствии специфических IgE-антител
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства, 115522, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский университет дружбы народов им. П. Лумумбы» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 117198, г. Москва, Российская Федерация
3 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», 119234, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Диагностика аллергических заболеваний основана на данных анамнеза, проведении кожных и провокационных тестов, а также на определении уровня специфического IgE в сыворотке крови. В то же время описаны случаи, когда у пациентов определяются симптомы аллергического заболевания и при этом не удается выявить специфические IgE к аллергенам, например при локальном аллергическом рините (ЛАР). Изучение аллерген-специфических В-лимфоцитов у таких пациентов может помочь достоверно диагностировать гиперчувствительность.
Цель исследования - разработка и оптимизация метода детекции аллерген-специфических ^Е+-В-клеток в крови пациентов с аллергическими заболеваниями.
Материал и методы. В исследование были включены 6 взрослых пациентов с аллергией на пыльцу березы, 1 пациент с ЛАР и 5 взрослых здоровых добровольцев без аллергических заболеваний. Для разработки и оптимизации метода детекции аллерген-специфических IgE+-В-клеток использовали иммуноферментный анализ, тест на активацию базофилов, проточную цитофлуориметрию, а также специальные протоколы для окрашивания и анализа B-лимфоцитов.
Результаты. Установлено, что у пациентов с аллергией на пыльцу березы определяются аллерген-специфические ^Е+-В-лимфоциты в период палинации. У пациента с ЛАР также были идентифицированы специфические B-лимфоциты, что указывает на возможное участие этих клеток в развитии аллергических реакций даже при отсутствии специфического IgE в сыворотке крови и активации базофилов аллергеном Bet v 1 в цельной крови.
Заключение. Разработанные методы и подходы позволяют более точно диагностировать аллергические реакции, включая случаи, когда рутинные методы аллергологи-ческого обследования не позволяют обнаружить специфические IgE-антитела. Определение аллерген-специфических IgE+-0-клеток в крови пациентов открывает новые возможности для изучения патогенетических механизмов развития и диагностики аллергических заболеваний.
Ключевые слова: аллергия на пыльцу березы; аллерген-специфические В-лимфоциты; локальный аллергический ринит; иммуноглобулин Е
Статья получена 25.07.2024. Принята в печать 18.09.2024.
Для цитирования: Бязрова М.Г., Смольников Е.В., Литовкина А.О., Амзаева Л.У., Сухова М.М., Михайлов А. А., Чернушевич Д.Д., Феденко Е.С., Филатов А.В., Елисютина О.Г. Определение аллерген-специфических В-лимфоцитов у пациентов с аллергическими заболеваниями при отсутствии специфических IgE-антител. Иммунология. 2024; 45 (5): 604-614. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-5-604-614
Финансирование. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 23-15-00432 (https://rscf.ru/project/23-15-00432/).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Сбор и обработка материала - Бязрова М.Г., Смольников Е.В., Литовкина А.О., Амзаева Л.У, Чернушевич Д.Д., Сухова М.М., Михайлов А. А.; написание текста, редактирование - Бязрова М.Г., Смольников Е.В.; окончательный вариант и целостность текста - Филатов А.В., Феденко Е.С., Елисютина О.Г.
Для корреспонденции
Елисютина Ольга Гурьевна -доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник ФГБУ «ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России; заведующий кафедрой иммунологии Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4609-2591
Byazrova M.G.1, 2, Smolnikov E.V.1, 2, Litovkina A.O.1, 2, Amzayeva L.U.2, Sukhova M.M.1 3, Mikhailov A.A.1 3, Chernushevich D.D.1 2, Fedenko E.S.1, Filatov A.V.1' 3, Elisyutina O.G.1 2
Identification of allergen-specific B-lymphocytes in patients with allergic diseases in the absence of specific IgE antibodies
1 National Research Center - Institute of Immunology of the Federal Medical-Biological Agency, 115522, Moscow, Russian Federation
2 Peoples' Friendship University of Russia named after Patrice Lumumba, Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, 117198, Moscow, Russian Federation
3 M.V. Lomonosov Moscow State University, 119234, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. Allergy diagnostics are based on patient history, skin and provocation tests, and the determination of specific IgE levels in serum. However, there are cases where patients exhibit symptoms of an allergic disease without detectable specific IgE to allergens, such as in local allergic rhinitis (LAR). Studying allergen-specific B-lymphocytes in such patients may help to accurately diagnose hypersensitivity.
The aim of the study is to develop and optimize a method for detecting allergen-specific IgE+-B-cells in the blood of allergic patients.
Material and methods. The study included 6 adult patients with birch pollen allergy, 1 patient with LAR and 5 healthy adult volunteers without allergic diseases. Enzyme-linked immunosorbent assay, basophil activation test (BAT), flow cytometry, and special protocols for staining and analyzing B-lymphocytes were used to develop and optimize the detection method.
Results. It was found that patients with birch pollen allergy have detectable allergen-specific IgE+-B-lymphocytes during the pollen season. The patient with LAR also had identifiable specific B-lymphocytes, suggesting the potential involvement of these cells in the development of allergic reactions even in the absence of specific IgE in serum and basophil activation by Bet v 1 allergen in blood samples.
Conclusion. The developed methods and approaches allow for more accurate diagnosis of allergic reactions, including cases where routine allergological examination methods do not detect specific IgE antibodies. Identifying allergen-specific IgE+-B-cells in patients' blood opens new possibilities for studying the pathogenetic mechanisms of development and diagnosis of allergic diseases.
Keywords: allergy to birch pollen; allergen-specific B-lymphocytes; local allergic rhinitis; immunoglobulin E
Received 25.07.2024. Accepted 18.09.2024.
For citation: Byazrova M.G., Smolnikov E.V., Litovkina A.O., Amzayeva L.U., Sukhova M.M., Mikhailov A.A., Chernushevich D.D., Fedenko E.S., Filatov A.V., Elisyutina O.G. Identification of allergen-specific B-lymphocytes in patients with allergic diseases in the absence of specific IgE antibodies. Immunologiya. 2024; 45 (5): 604-14. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-5-604-614 (in Russian)
Funding. The study was supported by the grant of Russian Science Foundation (RSF) No. 23-15-00432 (https://rscf. ru/project/23-15-00432/).
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. Collection and processing of material - Byazrova M.G., Smolnikov E.V., Litovkina A.O., Amzaeva L.U., Sukhova M.M., Chernushevich D.D., Mikhailov A.A.; text writing, editing - Byazrova M.G., Smolnikov E.V.; final version and integrity of the text - Filatov A.V., Fedenko E.S., Elisyutina O.G.
For correspondence
Olga G. Elisyutina -MD, PhD, Leading Researcher of the NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Head of the Immunology Chair of Medical Institute,
RUDN University of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4609-2591
Введение
Аллергическими заболеваниями, связанными с иммуноглобулин Е -опосредованными реакциями, страдает около 20-30 % населения в развитых странах [1, 2]. К ^Е-ассоциированной аллергии относят аллергический ринит, аллергический конъюнктивит, бронхиальную астму, аллергодерматозы, пищевую аллергию, а также опасную для жизни анафилаксию. Преимущественной
причиной развития аллергических заболеваний в России является пыльца березы [3-5]. Главным аллергеном пыльцы березы является Bet v 1 - белок с молекулярной массой 17 кДа, который по своей структуре гомологичен ряду других аллергенов семейства PR-10 (Pathogenesis-Related protein 10). Белки этого семейства имеют сходную трехмерную структуру и могут вызывать перекрестные аллергические реакции у сенсибилизированных людей.
Уровень сывороточных аллерген-специфических IgE является важным показателем для определения напряженности иммунитета и тяжести заболевания, активно используется как в клинических, так и в научных исследованиях. Исследования показывают прямую зависимость между увеличением уровня аллерген-специфических IgE-антител у пациентов с аллергией на пыльцу березу и концентрацией пыльцы березы в воздухе в сезон цветения [6]. Кроме того, у пациентов с высоким уровнем Bet v 1-специфических антител высок риск развития орального аллергического синдрома (ОАС) [5].
Несмотря на важную роль в клинической практике, изучение антительного ответа не дает полного представления о формировании аллерген-специфических B-лимфоцитов. IgE-антитела секретируются плазматическими клетками, которые в основном находятся в тканях, таких как слизистая носа, желудочно-кишечный тракт (ЖКТ), костный мозг. Плазматические клетки являются сложнодоступным объектом для исследования. В связи с этим изучение формирования ответа на аллергены сфокусировано на другом звене В-клеточ-ного иммунитета - на активированных циркулирующих IgE+-клетках. После экспозиции аллергена на короткое время в крови пациента можно детектировать аллерген-специфические IgE+-клетки. При этом, несмотря на кажущуюся легкость поставленной задачи, исследователи сталкиваются с определенными трудностями. Одна из них заключается в низком проценте циркулирующих аллерген-специфических IgE+-клеток, другая - в вероятности получения ложноположительного сигнала.
В некоторых случаях определение аллерген-специфических IgE+-0-лимфоцитов может помочь достоверно диагностировать гиперчувствительность, например у пациентов с низким уровнем аллерген-специфических антител или с их полным отсутствием.
Традиционно постановка диагноза аллергического заболевания основывается на данных анамнеза и результатах специфического аллергологического обследования. Описаны случаи, когда у пациентов определяются симптомы аллергического заболевания, но при этом не удается выявить специфические IgE к аллергенам в сыворотке крови. Примерами таких состояний могут быть так называемый эндогенный подтип атопического дерматита (АтД), при котором средние значения общего IgE в сыворотке крови не превышают уровень 200 кЕд/л [7, 8], а также локальный аллергический ринит (ЛАР) -заболевание, характеризующееся локальной гиперпродукцией IgE против круглогодичных и сезонных аллергенов при отсутствии специфических IgE в сыворотке крови и при отрицательных результатах кожных проб с аллергенами [9-11]. Патофизиология возникновения ЛАР остается малоизученной. Одна из задач в исследовании патогенеза ЛАР - определение аллерген-специфических IgE в слизистой оболочке носа и крови пациентов.
Цель настоящего исследования - разработка и оптимизация метода детекции аллерген-специфи-
ческих ]^Е+-В-клеток в крови пациентов с аллергией на пыльцу березы. В нашем исследовании мы разработали протокол окрашивания ]^Е-продуцирующих лимфоцитов и с помощью проточной цитофлуоримет-рии оценили появление ]^Е-положительных клеток во время сезона пыления березы. Данный протокол может применяться как в научных исследованиях, так и в клинической практике, в сложных случаях, когда требуется подтвердить или исключить участие ]^Е-зависимой аллергии и разработать подходы к терапии, включая соблюдение элиминационных мероприятий и определение показаний к аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ).
Материал и методы
Участники исследования. Для разработки и оптимизации метода детекции аллерген-специфических 1§Е+-В-клеток в крови пациентов с аллергией на пыльцу березы была сформирована группа из 6 взрослых пациентов с аллергией на пыльцу березы, 1 пациент с ЛАР и 5 взрослых здоровых добровольцев без аллергических заболеваний. Исследование было проведено на базе ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России и кафедры иммунологии Медицинского института РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России в Москве. Исследование прошло предварительную этическую экспертизу и было одобрено Этическим комитетом Института иммунологии (протокол № 1 от 18.03.2024). Исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека в качестве испытуемого». Письменное информированное согласие было получено от каждого участника исследования перед выполнением каких-либо процедур исследования.
Пациенты соответствовали перечисленным ниже критериям включения/невключения.
Критерии включения:
1. Пациенты мужского и женского пола от 18 до 65 лет.
2. Пациенты с сенсибилизацией к аллергену пыльцы березы, подтвержденной кожными пробами или лабораторными тестами, имеющие клинические проявления в виде аллергического риноконъюнк-тивита, бронхиальной астмы или обострения АтД в сезон цветения деревьев.
Критерии невключения:
1. Применение системной терапии кортикостерои-дами, циклоспорином, биологическими препаратами за 6 мес до и в течение всего периода исследования.
2. Проведение АСИТ в течение 3 лет до проведения исследования.
Демографическая, клиническая и аллергологическая характеристика групп пациентов и здоровых добровольцев представлена в табл. 1.
Также в исследование была включена пациентка с ЛАР с типичными клиническими проявлениями, но
Таблица 1. Демографическая, клиническая и аллергологическая характеристика исследуемых групп пациентов и здоровых добровольцев (п = 11)
Показатель Пациенты с аллергией на пыльцу березы (n = 6) Здоровые добровольцы (П = 5)
Возраст, годы, Ы±8П 27,8 ± 3,1 22 ± 6,4
Мужской пол 3 (50) 4 (80 %)
Женский пол 3 (50) 1 (20 %)
Аллергический ринит, п (%) 6 (100) 0
Бронхиальная астма + аллергический ринит, п (%) 3 (50) 0
Бронхиальная астма + аллергический ринит + атопический дерматит, п (%) 2 (33,3) 0
Сенсибилизация к аллергенам, n (%)
Пыльца деревьев 6 (100) 0
Пыльцы злаковых трав 5 (83,3) 0
Пыльца сорных трав 2 (33,3) 0
Эпидермальные аллергены 1 (16,6) 0
Клещи домашней пыли 2 (33,3) 0
Bet v 1 5 (83,3) 0
с отрицательными результатами кожных проб и отсутствием специфических ^Е в сыворотке крови. Диагноз ЛАР установлен на основании данных анамнеза, объективной оценки симптомов аллергического ринита с использованием Визуальной аналоговой шкалы (ВАШ) [12], результатов назального провокационного теста с аллергеном экстракта пыльцы березы с оценкой назальной пиковой скорости вдоха, общей оценкой назальных симптомов и результатов риноцитограммы. В табл. 2 представлены данные анамнеза, основные
симптомы заболевания и результаты провокационного теста с аллергеном из экстракта пыльцы березы пациентки с ЛАР.
Описание медицинского вмешательства. Венозную кровь пациентов собирали в пробирки объемом 4,5 мл c нейтральной средой S Monovette® (Sarstedt AG&Co, Германия), центрифугировали в течение 10 мин на скорости 2000g, затем аликвотировали сыворотку в пластиковые пробирки. Образцы сыворотки хранились при температуре -20 °C до момента анализа. Мононуклеар-
Показатель Значение
Возраст, годы 45
Пол Женский
Анамнез заболевания Клиническая картина аллергического ринита в весенний сезон цветения (период апрель-май)
Визуальная аналоговая шкала (ВАШ) за прошлый весенний сезон палинации, см 8,5
Кожное тестирование с аллергеном пыльцы березы Отрицательный
Специфические IgE к rBet v 1, v 2, v 4 (ImmunoCAP, Thermo Fisher Scientific, США) < 0,35 кЕд/л (класс 0)
Назальный провокационный тест с аллергенами пыльцы березы (экстракт)
Исходно
ВАШ, см 3
Назальная пиковая скорость вдоха (РЖР), мл 150
Общая оценка назальных симптомов (ТЖ88), баллы 1
Риноцитограмма Эозинофилы не обнаружены
Контроль
ВАШ, см 3
Назальная пиковая скорость вдоха (РЖР), мл 140
Общая оценка назальных симптомов (ТЖ88), баллы 1
Риноцитограмма Эозинофилы не обнаружены
Тест с экстрактом аллергена пыльцы березы в разведении 1 : 2
ВАШ, см 6,7
Назальная пиковая скорость вдоха (РЖР), мл 90
Общая оценка назальных симптомов (ТЖ88), баллы 8
Таблица 2. Клиническая и аллергологическая характеристика пациентки с локальным аллергическим ринитом
ные клетки выделяли из периферической крови, собранной в вакутейнерные пробирки с К3-ЭДТА (Sarstedt AG&Co, Германия). Кровь разбавляли 1 : 1 с помощью PBS, после чего наслаивали на 2,7 мл фиколла плотностью р = 1,077 г/см3 («Панэко», Россия) и центрифугировали в течение 40 мин при 400 g.
Получение конъюгата Bet v 1 с фикоэритрином. Для его получения использовали гетерофункциональ-ный линкер TCO-PEG4-NHS для мечения Bet v 1 и MTZ-PEG5-NHS для мечения фикоэритрина (PE). Белок Bet v 1 переводили в бикарбонатный буфер с помощью гель-фильтрации. Затем добавляли TCO-PEG4-NHS и инкубировали 1 ч при перемешивании. После этого белок отделяли от свободного TCO-PEG4-NHS путем гель-фильтрации на колонке с сефарозой G-25, уравновешенной PBS (pH = 7,5). К раствору PE в бикарбонат-ном буфере добавляли MTZ-PEG5-NHS, после этого инкубировали 1 ч на ротаторе. PE отделяли от несвя-завшегося MTZ-PEG5-NHS путем гель-фильтрации на колонке с сефарозой G-25, уравновешенной PBS (pH = 7,5). Растворы Bet v 1-TCO-PEG4-NHS и PE-MTZ-PEG5-NHS смешивали и инкубировали в течение ночи при комнатной температуре.
Выделение и окрашивание мононуклеаров периферической крови (МНПК). Мононуклеарные клетки собирали и промывали раствором PBS с добавлением 2 мМ ЭДТА, центрифугируя при 300g в течение 10 мин. Для определения аллерген-специфичных IgE+-В-лимфоцитов МНПК окрашивали следующим набором антител: CD19-PE (клон LT 19), CD27-PECy5.5 (клон LT27), CD38-PECy7 (клон LT38) и IgD-FITC (клон MA2), CD19-FITC, CD23-PerCP-Cy5 (клон EBVCS-5, Biolegend, США), CD27-PE-Cy5.5, CD38-PE-Cy7, anti-IgE-APC (Omalizumab). IgE+-B-лимфоциты определяли по фенотипу CD19+CD27++CD38++IgDCD23IgE+. Последовательное гейтирование проводили по боковому (SSC) и прямому (FSC) светорассеянию, выделяя субпопуляцию лимфоцитов крови. После этого определяли единичные события по FSC-A и FSC-H и выделяли субпопуляцию CD19+CD23- лимфоцитов. Переключенные В-лимфоциты определяли как CD19+CD23IgD-. Плазмабласты гейтировали по двум антигенам - CD27 и CD38. IgE+-B-лимфоциты выделяли из субпопуляции CD19+CD23IgDCD27++CD38++-клеток с помощью антитела Omalizumab. Флуоресценцию клеток регистрировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США), оснащенного тремя диодными лазерами 488, 561 и 633 нм.
Определение IgE методом иммуноферментного анализа (ELISA) и ImmunoCAP. Для определения Bet v 1-специфических IgE-антител методом иммуноферментного анализа (ИФА) 96-луночные планшеты с высокой сорбционной емкостью (Greiner, Германия) сорбировали рекомбинантным белком Bet v 1 в концентрации 5 мкг/мл в течение ночи при 4 °C. Затем планшеты обрабатывали блокирующим буфером для ИФА («Хема», Россия). Сыворотки разводили в 10 и 50 раз и инкубировали в течение 6 ч в планше-
тах для ИФА, после чего 3 раза промывали раствором PBS с 0,25 M Твин20. Для определения IgE-антител использовали клон BE5, конъюгированный с перокси-дазой хрена, и инкубировали в течение 1 ч, после чего планшеты 5 раз промывали PBS с 0,25 M Твин20. Реакцию проявляли добавлением раствора хромогена TMB («Хема», Россия) и останавливали через 20 мин с помощью 1Н HCl. Оптическую плотность при 450 нм измеряли с использованием планшетного ридера iMark (BioRad, США).
Для определения Bet v 1-специфических IgE-антител методом ImmunoCAP использовали стандартный протокол от производителя.
Тест на активацию базофилов (БАТ). Процент активированных базофилов в образцах цельной крови оценивали с помощью набора Allergenicity Kit (Beckman Coulter, США) согласно протоколу производителя. Образцы крови собирали в пробирки S Monovette® (Sarstedt AG&Co, Германия) с К3-ЭДТА объемом 1,6 мл; после этого для теста БАТ использовали 800 мкл крови. Мы провели БАТ с очищенным рекомбинант-ным аллергенами Bet v 1 в трех концентрациях каждого аллергена: 1, 10 и 100 нг/мл. Для каждого пациента был проведен положительный контроль аллергенно-сти, содержащий антитела против IgE (0,01 мг/мл) и отрицательный контроль (PBS). Проточную цитомет-рию проводили с использованием прибора BD FACS Canto II (BD Biosciences, США). Результаты анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo™ v10.6.2 (Tree Star, США). Результаты БАТ представлены в виде процента активированных базофилов с фенотипом CRTH2+CD203c+CD3-.
Статистическая обработка данных. Данные проточной цитометрии анализировали с помощью программы FlowJo™ v10.6.2 (Tree Star, США). Для построения графиков и статистического анализа использовали программное обеспечение GraphPad Prism версии 8.4.3 (GraphPad, США).
Результаты
Создание панели для определения Bet v 1-специфических В-лимфоцитов
Методика определения общей популяции IgE+-B-лимфоцитов была разработана нами ранее и проверена на образцах крови пациентов с аллергией на пыльцу березы [13, 14]. Для этого МНПК окрашивали следующими конъюгатами антител: CD19-FITC, CD23-PerCP, CD27-PE-Cy5.5, CD38-PE-Cy7, Omalizumab-APC - для определения аллерген-специфических В-лимфоцитов. Процент аллерген-специфических В-клеток крайне мал, поэтому для конъюгации мы использовали PE, обладающий яркой красной флуоресценцией. С помощью метода Click-Chemistry нами был получен конъюгат Bet v 1 с PE.
Для тестирования полученного конъюгата использовали иммунопреципитацию на сефарозе с белком G с МкАт BV16, специфичными к Bet v 1. Для этого МкАт
MFI (PE)
Рис. 1. Тестирование конъюгата Bet v 1-PE методами флуоресцентной микроскопии (А) и проточной цитофлуориметрии (Б) На рис. 1Б представлены гистограммы для окрашивания конъюгатом Bet v 1-PE в разведении 1 : 400.
BV16 сорбировали на сефарозу с белком G, после чего вносили конъюгат Bet v 1 с PE (рис. 1А, левая панель). В качестве контроля использовали антитело с другой специфичностью (рис. 1А, правая панель).
Полученный конъюгат специфично распознавался МкАт BV16 и не давал дополнительного фона, что было важно для дальнейшей работы. Для определения титра конъюгат Bet v 1-PE тестировали методом проточной цитофлуориметрии. Фиксированные и пермеабилизо-ванные клетки линий CB1 и Bip1 окрашивали конъюгатом Bet v 1-PE начиная с разведения 1 : 50 и заканчивая 1 : 800. В качестве контроля специфичности использовали конъюгат HBsAg с PE. Наилучший результат окрашивания клеток наблюдали при разведении конъюгата 1 : 400, которое использовали в дальнейших экспериментах (рис. 1Б).
Характеристика Bet v 1-специфических IgE+'В-лимфоцитов у пациентов с аллергией на пыльцу березы
Для сравнения результатов, полученных для пациента с подозрением на ЛАР, мы включили в исследование 5 здоровых добровольцев и 6 пациентов с аллергией на пыльцу березы. Для всех участников исследования забор крови проводили в сезон палинации березы (начало мая) и после сезона палинации (середина-конец июля, рис. 2 А).
Мы провели исследование сывороточных Bet v 1-специфичных антител методом ИФА. Результаты теста подтвердили данные, полученные ранее методом Immu-noCAP: у пациента с подозрением на ЛАР уровень Bet v 1-специфических IgE-антител был сопоставим с соответствующими показателями в образцах сыворо-
Э
Май
>
Июль >
Измеренение Bet v 1-специфичных IgE
э
Q
О
0,1
0,01
Bet v 1-специфическм IgE
I
и
ЗД АБ ЛАР
э
ф
80
60
о 40
S3 20
Здоровые добровольцы
100 10 1
Bet v 1, нг/мл
Пациенты с аллергией на пыльцу березы
ф
50
Г"^-^Г"^-"-г
100 10 1
Bet v 1, нг/мл
ф
о 80
аз 80
60
о 40
S3 20
Пациент с ЛАР
100 10 1
Bet v 1, нг/мл
100
ф
10 -
ЛАР 1
а
ЗД АБ Bet v 1, нг/мл
Здоровый донор
104
Май 103 0*
-103
Июль
Пациент с аллергией на пыльцу березы
104
Пациент с ЛАР
103 -0j
-10
104
1030 i
Omalizumab-APC
-10
|3 J
Рис. 2. Характеристика Bet v 1-специфичного ответа у пациентов с аллергией на пыльцу березы (АБ), здоровых добровольцев (ЗД) и пациента с локальным аллергическим ринитом (ЛАР)
А — схема эксперимента; Б — определение сывороточных Bet v 1-специфичных IgE-антител методом ИФА; В — определение процента активированных базофилов в тесте с аллергеном Bet v 1 ; Г — определение Bet v 1+IgE+ В-лимфоцитов с помощью проточной цитометрии.
•к*
« 100
а 100
« 100
0
0
0
ток здоровых добровольцев (рис. 2Б). После снижения концентрации аллергена в воздухе уровень Bet v 1-спе-цифических IgE-антител снижался у пациентов с аллергией на пыльцу березы, но не изменялся в образцах сыворотки пациента с ЛАР.
Для подтверждения полученных результатов мы провели тест на активацию базофилов после сезона палинации березы. Для этого у 6 пациентов с аллергией на пыльцу березы, у 5 здоровых добровольцев и у пациента с ЛАР проводили забор крови. Базофилы в цельной крови активировали с помощью трех доз аллергена Bet v 1 (100, 10 и 1 нг/мл) и измеряли процент активированных базофилов (CRTH2+CD203c+CD3) с помощью проточной цитофлуориметрии. У пациентов с аллергией на пыльцу березы обнаружен высокий процент активированных базофилов (рис. 2В) в тесте с 100 и 10 нг/мл рекомбинантного аллергена Bet v 1 (медиана: 77,5 и 32,5 %, соответственно). В образцах от пациента с ЛАР и здоровых добровольцев процент активированных базофилов был низким даже при добавлении максимальной концентрации аллергена (пациент с ЛАР -1,21 %, здоровые добровольцы - 2,2 %).
В образцах от пациента с ЛАР мы определили Bet v 1-специфические IgE-антитела. Известно, что вероятность появления данной субпопуляции в крови донора увеличивается при наибольшей концентрации аллергена в воздухе, поэтому первый забор крови мы проводили в мае, основываясь на данных о концентрации пыльцы березы в воздухе. При окрашивании МНПК донора с ЛАР описанным ранее набором антител с конъюгатом Bet v 1-PE нам удалось выделить субпопуляцию клеток CD19+CD23IgDBet v 1+IgE+, которая составила 0,42 % от CD19+CD23IgD- клеток (рис. 2Г). Большая часть клеток (78 %) в популяции CD19+CD23-IgD-Bet v 1+IgE+ являлись плазмабластами, т. е. несли на поверхности молекулы CD27 и CD38. При этом в образцах от здоровых добровольцев данная субпопуляция не обнаруживалась, в отличие от образцов, полученных от пациентов с аллергией на пыльцу березы.
Нельзя не отметить, что не у всех пациентов удалось четко определить популяцию аллерген-специфических В-лимфоцитов, что скорее всего связано с недостаточной сенсибилизацией или неудачным выбором времени для забора крови. Для подтверждения полученного результата мы проанализировали образец крови пациента с ЛАР после сезона палинации березы. Субпопуляцию В-лимфоцитов с фенотипом Bet v 1+IgE+ обнаружить не удалось, как и в образцах от пациентов с аллергией на пыльцу березы.
Обсуждение
Несмотря на широкий спектр доступных методов определения IgE, диагностировать гиперчувствительность I типа не всегда возможно. В случае ЛАР, характеризующегося отсутствием сывороточных IgE-антител, единственным возможным критерием оценки состояния пациента является назальный провокационный
тест. В некоторых случаях для подтверждения используют определение локальных аллерген-специфических антител в слизистой носа. Тем не менее механизм возникновения ЛАР остается малоизученным.
Согласно немногочисленным исследованиям, патогенетические механизмы ЛАР запускаются в слизистой носа немедленным IgE-опосредованным ответом тучных клеток с последующим рекрутированием эозино-филов, базофилов и Т2-хелперов. При этом профиль цитокинов у пациентов с ЛАР по составу не отличается от профиля цитокинов пациентов с аллергией и включает в себя ИЛ-4, ИЛ-5, TSLP, ИЛ-25 и ИЛ-33 [15, 16]. Информативным методом аллергодиагностики у таких пациентов может быть БАТ, который имеет высокую чувствительность и специфичность, что обеспечивает его применение у пациентов с поливалентной сенсибилизацией, когда стандартные кожные пробы или специфические IgE-тесты могут быть недостаточно чувствительны [17-19].
БАТ также характеризуется безопасностью, так как, в отличие от провокационных тестов, не требует введения аллергена непосредственно в организм пациента, что минимизирует риск возникновения тяжелых аллергических реакций. В нашем исследовании мы анализировали образцы крови пациента с ЛАР в БАТ, но не обнаружили повышения экспрессии на базо-филах активационных маркеров CD63 и CD203c. Образцы сыворотки пациента анализировали с помощью методов ImmunoCAP и ИФА, но определить Bet v 1-специфические IgE-антитела не удалось. Таким образом, одним из ограничений использования БАТ может являться низкий уровень аллерген-специфических IgE-антител.
Большое внимание в исследовании патогенеза ЛАР уделяется IgE-продуцирующим В-лимфоцитам. Основная функция В-лимфоцитов - секреция высокоспецифичных антител против патогенов. Кроме про-тективной функции, В-клетки зачастую могут играть ключевую роль в развитии реакций гиперчувствительности, например аллергических и аутоиммунных реакций [20, 21]. Определение IgE+-В-клеток в тканях - сложная и нетривиальная задача. В некоторых исследованиях для детекции используют метод конфокальной микроскопии, в других - проточную цитофлуориметрию.
Плазматические клетки были обнаружены у пациентов с ЛАР в слизистой носа. Нам удалось найти пациента с ЛАР, сенсибилизированного к аллергенам пыльцы березы. Несмотря на то, что определить сывороточные аллерген-специфические антитела у пациентов с ЛАР невозможно, мы предположили, что при сильной и продолжительной сенсибилизации можно будет детектировать аллерген-специфические IgE+-0-лимфоциты.
В сезон палинации березы в крови пациента нам удалось обнаружить Bet v 1+IgE+CD27++CD38++-В-лим-фоциты, которые по фенотипу соответствовали активированным плазмабластам. Для подтверждения полученного результата образцы крови пациента дополнительно
анализировали через 2 мес после завершения сезона палинации березы. При повторном исследовании субпопуляция Bet v 1+^Е+СВ27++СБ38++-В-клеток в образцах МНПК не обнаруживалась.
Исследование антитело-секретирующих клеток у пациентов с ЛАР - важное и перспективное направление в изучении механизмов гиперчувствительности. Проведенное исследование показало возможность определения циркулирующих ^Е+-плазмабластов у пациента с ЛАР. Кроме того, проведенное нами исследование показывает, что у пациентов с клиническим проявлением аллергии и при отсутствии сывороточных IgE-антител обнаруживаются циркулирующие аллерген-специфические IgE+-B-лимфоциты. Снижение концентрации аллергена в воздухе приводило к полному исчезновению аллерген-специфических ^Е+-В-лимфо-
■ Литература
1. Meza-Lopez С., Bedolla-Barajas M., Morales Romero J., Jimenez-Carrillo C.E., Bedolla-Pulido T.R., Santos-Valencia E.A. Prevalence of allergic diseases and their symptoms in schoolchildren according to the birth mode. Bol. Med. Hosp. Infant. Mex. 2021; 78 (2): 130-5. DOI: https:// doi.org/10.24875/bmhim.20000114
2. Licari A., Magri P., De Silvestri A., Giannetti A., Indolfi C., Mori F., Marseglia G. L., Peroni D. Epidemiology of Allergic Rhinitis in Children: A Systematic Review and Meta-Analysis. J. Allergy Clin. Immunol. Pract. 2023; 11 (8): 2547-56. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaip.2023.05.016
3. Moverare R., Petays T., Vartiainen E., Haahtela T. IgE reactivity pattern to timothy and birch pollen allergens in Finnish and Russian Karelia. Int. Arch. Allergy Immunol. 2005; 136: 33-8. DOI: https://doi. org/10.1159/000082582
4. Николаева И.А., Кулага О.С., Авоян Г.Э., Смирнов В.В., Топтыгин А.Ю., Павленко М.К., Гороховец Н.В., Андреев И.В., Селезнев А.С., Мартынов А.И. Изучение аллергенов березы бородавчатой, выделенных из пыльцы, собранной в период с 2008 по 2015 г. Иммунология. 2019; 40 (6): 50-6. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16007
5. Elisyutina O., Fedenko E., Campana R., Litovkina A., Ilina N., Kudlay D., Egorenkov E., Smirnov V., Valenta R., Lupinek C., Khaitov M. Bet v 1-specific IgE levels and PR-10 reactivity discriminate silent sensi-tization from phenotypes of birch allergy. Allergy. 2019; 74 (12): 2525-8. DOI: https://doi.org/10.1111/all.1393
6. Pointner L., Bethanis A., Thaler M., Traidl-Hoffmann C., Gilles S., Ferreira F., Aglas L. Initiating pollen sensitization - complex source, complex mechanisms. Clin. Transl. Allergy. 2020; 10: 36. DOI: https://doi. org/10.1186/s13601-020-00341-y
7. Schmid-Grendelmeier P., Simon D., Simon H.U., Akdis C.A., WUthrich B. Epidemiology, clinical features, and immunology of the «intrinsic» (non-IgE-mediated) type of atopic dermatitis (constitutional dermatitis). Allergy. 2001; 56 (9): 841-9. DOI: https://doi.org/10.1034/ j.1398-9995.2001.00144.x
8. Tokura Y., Hayano S. Subtypes of atopic dermatitis: From phe-notype to endotype. Allergol. Int. 2022; 71 (1): 14-24. DOI: https://doi. org/10.1016/j.alit.2021.07.003
9. Rondon C., Campo P., Togias A., Fokkens W. J., Durham S. R., Powe D. G., Mullol J., Blanca M. Local allergic rhinitis: concept, patho-physiology, and management. J. Allergy Clin. Immunol. 2012; 129 (6): 1460-7. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2012.02.032
10. Campo P., Eguiluz-Gracia I., Bogas G., Salas M., Plaza Seron C., Perez N., Mayorga C., Torres M. J., Shamji M. H., Rondon C. Local allergic rhinitis: Implications for management. Clin. Exp. Allergy. 2019; 49 (1): 6-16. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.13192
11. Melone G., Giorgis V., Di Pino M., Pelaia C., Nappi E., Heffler E., Landi M., Gelardi M., Paoletti G. Local Allergic Rhinitis: Lights and Shadows of a Mysterious Entity. Int. Arch. Allergy Immunol. 2023; 184 (1): 12-20. DOI: https://doi.org/10.1159/000526604
цитов из крови пациента. Полученные результаты важны для установления механизмов развития ЛАР и дальнейшего исследования патологий В-клеточного звена иммунитета.
Заключение
Таким образом, исследование аллерген-специфических ^Е+-В-лимфоцитов необходимо в тех случаях, когда стандартные методы не позволяют достоверно диагностировать IgE-опосредованное аллергическое заболевание, например при ЛАР. Определение аллерген-специфических ^Е+-В-клеток в крови пациентов открывает новые возможности для изучения патогенетических механизмов развития и диагностики аллергических заболеваний.
12. Bousquet P.J., Combescure C., Neukirch F., Klossek J.M., Mechin H., Daures J.P. Visual analog scales can assess the severity of rhinitis graded according to ARIA guidelines. Allergy. 2007; 62 (4): 367-72. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1398-9995.2006.01276.x
13. Eckl-Dorna J., Villazala-Merino S., Campion N. J., Byazrova M., Filatov A., Kudlay D., Karsonova A., Riabova K., Khaitov M., Karau-lov A., Niederberger-Leppin V., Valenta R. Tracing IgE-Producing Cells in Allergic Patients. Cells. 2019; 8 (9): 994. DOI: https://doi.org/10.3390/ cells8090994
14. Zghaebi M., Byazrova M., Flicker S., Villazala-Merino S., Campion N.J., Stanek V., Tu A., Breiteneder H., Filatov A., Khaitov M., Nie-derberger-Leppin V., Eckl-Dorna J., Valenta R. Tracing Human IgE B Cell Antigen Receptor-Bearing Cells With a Monoclonal Anti-Human IgE Antibody That Specifically Recognizes Non-Receptor-Bound IgE. Front. Immunol. 2021; 12: 803236. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2021. 803236
15. Forester J.P., Calabria C.W. Local production of IgE in the respiratory mucosa and the concept of entopy: does allergy exist in nonallergic rhinitis? Ann. Allergy Asthma Immunol. 2010; 105 (4): 249-55; quiz 2568. DOI: https://doi.org/10.1016j.anai.2010.02.001
16. Fear D. J., McCloskey N., O'Connor B., Felsenfeld G., Gould H.J. Transcription of Ig germline genes in single human B cells and the role of cytokines in isotype determination. J. Immunol. 2004; 173 (7): 4529-38. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.173.7.4529
17. Gomez E., Campo P., Rondon C., Barrionuevo E., Blanca-Lopez N., Torres M. J., Herrera R., Galindo L., Mayorga C., Blanca M. Role of the basophil activation test in the diagnosis of local allergic rhinitis. J. Allergy Clin. Immunol. 2013; 132 (4): 975-6.e1-5. DOI: https://doi. org/10.1016/j.jaci.2013.07.016
18. Litovkina A., Byazrova M., Smolnikov E., Nikonova A., Eli-syutina O., Fedenko E., Ilina N., Akinfenwa O., Campana R., Kudlay D., Valenta R., Khaitov M. Allergic sensitization to Mal d 1 without detectable specific serum IgE. Pediatr. Allergy Immunol. 2022; 33 (12): e13891. DOI: https://doi.org/10.1111/pai.13891
19. Литовкина А.О., Бязрова М.Г., Смольников Е.В., Апле-вич О.В., Феденко Е.С. Особенности молекулярного профиля сенсибилизации у пациентов с аллергией на пыльцу березы и перекрестной пищевой аллергией к PR-10 белкам. Российский Аллергологический Журнал. 2023; 20 (4): 464-75. DOI: https://doi.org/10.36691/RJA16901
20. Лушова А.А., Жеремян Э.А., Астахова Е.А., Спиридонова А.Б., Бязрова М.Г., Филатов А.В. Субпопуляции В-лимфоцитов: функции и молекулярные маркеры. Иммунология. 2019; 40 (6): 63-76. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16009
21. Бязрова М.Г., Порошина А.С., Сухова М.М., Фролов Е.А., Шилкина А.Б., Латышева Е.А., Латышева Т.В., Филатов А.В. Продукция цитокинов наивными В-лимфоцитами и В-клетками памяти при стимуляции in vitro. Иммунология. 2023; 44 (5): 575-85. DOI: https:// doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-5-575-585
■ References
1. Meza-Lopez C., Bedolla-Barajas M., Morales Romero J., Jimenez-Carrillo C.E., Bedolla-Pulido T.R., Santos-Valencia E.A. Prevalence of allergic diseases and their symptoms in schoolchildren according to the birth mode. Bol Med Hosp Infant Mex. 2021; 78 (2): 130-5. DOI: https:// doi.org/10.24875/bmhim.20000114
2. Licari A., Magri P., De Silvestri A., Giannetti A., Indolfi C., Mori F., Marseglia G. L., Peroni D. Epidemiology of Allergic Rhinitis in Children: A Systematic Review and Meta-Analysis. J Allergy Clin Immunol Pract. 2023; 11 (8): 2547-56. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaip.2023.05.016
3. Moverare R., Petays T., Vartiainen E., Haahtela T. IgE reactivity pattern to timothy and birch pollen allergens in Finnish and Russian Karelia. Int Arch Allergy Immunol. 2005; 136: 33-8. DOI: https://doi. org/10.1159/000082582
4. Nikolaeva I.A., Kulaga O.S., Avoyan G.E., Smirnov V.V., Topty-gin A.Yu., Pavlenko M.K., Gorokhovets N.V., Andreev I.V., Seleznev A.S., Martynov A.I. Studies of birch wart allergens obtained from pollen collected from 2008 to 2015 years. Immunologiya. 2019; 40 (6): 50-6. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16007 (in Russian)
5. Elisyutina O., Fedenko E., Campana R., Litovkina A., Ilina N., Kudlay D., Egorenkov E., Smirnov V., Valenta R., Lupinek C., Khaitov M. Bet v 1-specific IgE levels and PR-10 reactivity discriminate silent sensi-tization from phenotypes of birch allergy. Allergy. 2019; 74 (12): 2525-8. DOI: https://doi.org/10.1111/all.1393
6. Pointner L., Bethanis A., Thaler M., Traidl-Hoffmann C., Gilles S., Ferreira F., Aglas L. Initiating pollen sensitization - complex source, complex mechanisms. Clin Transl Allergy. 2020; 10: 36. DOI: https://doi. org/10.1186/s13601-020-00341-y
7. Schmid-Grendelmeier P., Simon D., Simon H. U., Akdis C. A., Wuthrich B. Epidemiology, clinical features, and immunology of the «intrinsic» (non-IgE-mediated) type of atopic dermatitis (constitutional dermatitis). Allergy. 2001; 56 (9): 841-9. DOI: https://doi.org/10.1034/ j.1398-9995.2001.00144.x
8. Tokura Y., Hayano S. Subtypes of atopic dermatitis: From phe-notype to endotype. Allergol Int. 2022; 71 (1): 14-24. DOI: https://doi. org/10.1016/j.alit.2021.07.003
9. Rondon C., Campo P., Togias A., Fokkens W. J., Durham S. R., Powe D. G., Mullol J., Blanca M. Local allergic rhinitis: concept, patho-physiology, and management. J Allergy Clin Immunol. 2012; 129 (6): 1460-7. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2012.02.032
10. Campo P., Eguiluz-Gracia I., Bogas G., Salas M., Plaza Seron C., Perez N., Mayorga C., Torres M. J., Shamji M. H., Rondon C. Local allergic rhinitis: Implications for management. Clin Exp Allergy. 2019; 49 (1): 6-16. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.13192
11. Melone G., Giorgis V., Di Pino M., Pelaia C., Nappi E., Heffler E., Landi M., Gelardi M., Paoletti G. Local Allergic Rhinitis: Lights and Shadows of a Mysterious Entity. Int Arch Allergy Immunol. 2023; 184 (1): 12-20. DOI: https://doi.org/10.1159/000526604
Сведения об авторах
Бязрова Мария Георгиевна - науч. сотр. лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; ассистент каф. иммунологии Мединститута ФГАОУ ВО РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9858-7596
Смольников Евгений Валентинович - науч. сотр. отд. иммунопатологии взрослых ФГБУ «ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России; ст. преподаватель каф. иммунологии Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1302-4178
12. Bousquet P.J., Combescure C., Neukirch F., Klossek J.M., Mechin H., Daures J.P. Visual analog scales can assess the severity of rhinitis graded according to ARIA guidelines. Allergy. 2007; 62 (4): 367-72. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1398-9995.2006.01276.x
13. Eckl-Dorna J., Villazala-Merino S., Campion N. J., Byazrova M., Filatov A., Kudlay D., Karsonova A., Riabova K., Khaitov M., Karau-lov A., Niederberger-Leppin V., Valenta R. Tracing IgE-Producing Cells in Allergic Patients. Cells. 2019; 8 (9): 994. DOI: https://doi.org/10.3390/ cells8090994
14. Zghaebi M., Byazrova M., Flicker S., Villazala-Merino S., Campion N. J., Stanek V., Tu A., Breiteneder H., Filatov A., Khaitov M., Nie-derberger-Leppin V., Eckl-Dorna J., Valenta R. Tracing Human IgE B Cell Antigen Receptor-Bearing Cells With a Monoclonal Anti-Human IgE Antibody That Specifically Recognizes Non-Receptor-Bound IgE. Front Immunol. 2021; 12: 803236. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.803236
15. Forester J.P., Calabria C.W. Local production of IgE in the respiratory mucosa and the concept of entopy: does allergy exist in nonaller-gic rhinitis? Ann Allergy Asthma Immunol. 2010; 105 (4): 249-55; quiz 256-8. DOI: https://doi.org/10.1016Zj.anai.2010.02.001
16. Fear D. J., McCloskey N., O'Connor B., Felsenfeld G., Gould H.J. Transcription of Ig germline genes in single human B cells and the role of cytokines in isotype determination. J Immunol. 2004; 173 (7): 4529-38. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.173.7.4529
17. Gomez E., Campo P., Rondon C., Barrionuevo E., Blanca-Lopez N., Torres M. J., Herrera R., Galindo L., Mayorga C., Blanca M. Role of the basophil activation test in the diagnosis of local allergic rhinitis. J Allergy Clin Immunol. 2013; 132 (4): 975-6.e1-5. DOI: https://doi. org/10.1016/j.jaci.2013.07.016
18. Litovkina A., Byazrova M., Smolnikov E., Nikonova A., Eli-syutina O., Fedenko E., Ilina N., Akinfenwa O., Campana R., Kudlay D., Valenta R., Khaitov M. Allergic sensitization to Mal d 1 without detectable specific serum IgE. Pediatr Allergy Immunol. 2022; 33 (12): e13891. DOI: https://doi.org/10.1111/pai.13891
19. Litovkina A.O., Byazrova M.G., Smolnikov E.V., Aplevich O.V., Fedenko E.S. Characteristics of the molecular sensitization profiles in patients with birch pollen allergy and cross-reactive food allergy to PR-10 proteins. Russian Journal of Allergy. 2023; 20 (4): 464-75. DOI: https:// doi.org/10.36691/RJA16901 (in Russian)
20. Lushova A.A., Zheremyan E.A., Astakhova E.A., Spirido-nova A.B., Byazrova M.G., Filatov A.V. B-lymphocyte subsets: functions and molecular markers. Immunologiya. 2019; 40 (6): 63-76. DOI: https:// doi.org/10.24411/0206-4952-2019-16009 (in Russian)
21. Byazrova M.G., Poroshina A.S., Sukhova M.M., Frolov E.A., Shilkina A.B., Latysheva E.A., Latysheva T.V., Filatov A.V. Production of cytokines by in vitro stimulated naive B lymphocytes and memory B cells. Immunologiya. 2023; 44 (5): 575-85. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-5-575-585 (in Russian)
Authors' information
Maria G. Byazrova - Researcher of the Immunochemis-try Lab., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Assistant of the Immunology Chair of the Medical Institute of RUDN named after P. Lumumba, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9858-7596
Eugeniy V. Smolnikov - Researcher of the Skin Allergology and Immunopathology Dept., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Senior Lecturer of the Immunology Chair of the Medical Institute of RUDN named after P. Lumumba, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1302-4178
Литовкина Алла Олеговна - науч. сотр. отд. аллергологии и иммунопатологии кожи ФГБУ «ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России; ассистент каф. иммунологии Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5021-9276
Амзаева Линда Усмановна - аспирант каф. иммунологии Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0009-0003-7139-7738
Сухова Мария Михайловна - мл. науч. сотр. лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; аспирант каф. иммунологии биол. факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4572-1878
Михайлов Артем Андреевич - лаборант лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; студент каф. иммунологии биол. факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8356-8077
Чернушевич Дарья Дмитриевна - аспирант ФГБУ ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России; стажер-исследователь каф. иммунологии Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: chernushе[email protected] https://orcid.org/0000-0003-0006-2773
Феденко Елена Сергеевна - д-р мед. наук, проф., зав. отд. аллергологии и иммунопатологии кожи ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-3358-5087
Филатов Александр Васильевич - д-р биол. наук, проф., зав. лаб. иммунохимии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России; проф. каф. иммунологии биол. факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6460-9427
Елисютина Ольга Гурьевна - д-р мед. наук, вед. науч. сотр. ФГБУ ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России, зав. каф. иммунологии Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН им. П. Лумумбы Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4609-2591
Alla O. Litovkina - Researcher of the Skin Allergology and Immunopathology Dept., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Assistant of the Immunology Chair of the Medical Institute of RUDN named after P. Lumumba, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5021-9276
Linda U. Amzaeva - Post Graduate Student of the Immunology Chair of the Medical Institute of RUDN named after P. Lumumba, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0009-0003-7139-7738
Maria M. Sukhova - Senior Researcher at the Laboratory of Immunochemistry, NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; PhD Student of the Immunology Chair of Biology Faculty, M.V. Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4572-1878
Artem A. Mikhailov - Technician at the Lab. of Immunochemistry, NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Student of the Immunology Chair of Biology Faculty, M.V Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8356-8077
Daria D. Chernushevich - Post Graduate Student, NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia; Assistant of the Immunology Chair of the Medical Institute of RUDN named after P. Lumumba, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0006-2773
Elena S. Fedenko - MD, PhD, Prof., Head of the Skin Allergology and Immunopathology Dept., NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-3358-5087
Alexander V. Filatov - Dr.Sci., PhD, Prof., Head of the Immunochemistry Lab., NRC Institute of Immunology FMBA of Russia; Prof. of the Immunology Chair of Biology Faculty, M.V. Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russian Federation e-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6460-9427
Olga G. Elisyutina - MD, PhD, Leader Researcher, NRC Institute of Immunology FMBA of Russia; Head of the Immunology Chair of the Medical Institute of RUDN named after P. Lumumba, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4609-2591
