CC BY
22
УДК 637.07:615.322 DOI: 10.21323/2071-2499-2018-2-34-38 Табл. 1. Ил. 5. Библ. 43.
обзор методов оценки лнтиОксидлнтных свойств растительных экстрактов
Котенкова Е.А.1, канд. техн. наук, Лукинова Е.А.1, Купаева Н.В.2
1 ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова
2 РХТУ им. Д.И. Менделеева
Ключевые слова: природные антиоксиданты, методы исследования, антиокислительная активность
Реферат
На основе анализа публикационной активности во всемирной базе данных N08! по запросам «антиоксиданты» и «природные антиоксиданты» выявлена тенденция к возросшему интересу изучения антиокислительной емкости и композиционного состава природных антиоксидантов и их смесей. Перспектива использования антиоксидантов очевидна в различных прикладных аспектах, в том числе в пищевой отрасли, как для придания функциональных свойств пищевым продуктам, так и для увеличения их сроков хранения за счет ингибирования окислительных процессов. В обзоре рассмотрена классификация методов оценки антиокислительной активности, освещены наиболее распространенные из них в общелабораторной практике.
the study of THE ANTioxiDANT cApAciTY and composmoN of plant extracts
Kotenkova E.A.', Lukinova E.A.1, Kupaeva N.V.2
1 Gorbatov Research Center for Food Systems
2 D. Mendeleev University of Chemical Technology of Russia
Key words: natural antioxidants, research methods, antioxidant activity
Summary
Analysis of publication activity in NCBI database at the request of «antioxidants» and «natural antioxidants» showed a trend to increase of interest in the field of study of antioxidant capacity and composition of natural antioxidants and their mixtures. The prospect of using antioxidants is obvious in various applied aspects, including in food industry as functional additive or component which can increase storage life due to the inhibition of oxidative processes. The review considers the classification of methods for evaluation of antioxidant activity, highlights the most common of them in analytical laboratory.
Введение
Анализ современной российской и зарубежной литературы свидетельствует об увеличении интереса ученых всего мира к веществам растительного происхождения, обладающим антиоксидантным эффектом. Только за последний год во всемирной биологической базе данных NCBI (National Center for Biotechnology Information) по запросу «антиоксиданты» опубликовано 78 040 работ, а за последние десять лет эта цифра составляет 460 000 работ. За это время стало известно о мно гих методах, позволя ющих определить антио ксидантный потенциал различных веществ [1].
На рисунке 1 представлена динамика роста числа публикаций по запросам «антиоксиданты» и «п|аиродн ые антиоксиданты». За период 199)5-2017 годов публикационная акаивннсть а данном
направлении выросла в 2,5 и 3,5 раза соответственно, что свидетельствует о росте заинтересованности научного сообщества в исследовании природных антиоксидантных веществ с перспективой их использования в различных прикладных аспектах [2].
Одним из таких прикладных направлений является использование антиок-сидантов в пищевой промышленности с целью ингибирования окислительных процессов, приводящих к порче продуктов питания, которые имеют ограниченные сроки хранения. Порча продуктов происходит под деПствием многих факторов, среди которых наибольший вклад вносят микробиологическое обсеменение и окисление л ипидов и белков. Вызвам-ные изменения снижают оргаколе птиче-ские показатели, приводят к частичной, а иногда и к полной потери качептва
и пищевой ценности продукта, в конечном итоге делают его непригодным и опасным для употребления [3, 4, 5, 6].
С древнейших времен люди применяли различные приемы для продления сроков хранения мясных продуктов, причем множество традиционных технологических подходов включало использование специй и трав богатых соединениями с высокими антиоксидантными свойствами [7].
На настоящий момент успешно применяются богатые антиоксидантами экстракты трав и специй (мелисса, гвоздика, розмарин, мускатный орех, кардамон, орегано, зеленый чай, шалфей, душица, чеснок и пр.), а также моно-вещества, например, кверцитин, дигидрокверцетин, рутин, производные галловой кислоты, токоферолы. Антиоксиданты вносят непосредственно в рецептуру продукта, или они могут входить в состав натуральной упаковки [8, 9, 10, 11].
В настоящий момент современные методологические подходы позволяют предварительно оценить антиокислительную емкость как моно-антиоксидан-тов, так и комплексных вытяжек, экстрактов и нативного растительного сырья, что предоставляет возможность научно обоснованно подойти к разработке пищевых смесей и добавок, улучшающих как вкусовые характеристики конечного продукта, так и ингибирующих окисление липидов и белков.
Классификация методов оценки антиокислительной активности
По данным Алам и др. (А1ат et а1.) в 2013 году было опубликовано в открытом доступе минимум 74 научные статьи на тему оценки антиоксидантной активности различных образцов, в которых встре-
30000
28000
26000
)S 24000
I-
р 22000
х
л 20000
X
18000
0
s 16000
ч
14000
0
0 12000
н
Ф 10000
s
& 8000
ЗС
6000
4000
2000
0
Рисунок 1. Динамика роста числа пебликаций по исследованию антиоксидантов 1995-2017 гг.
19951996199719981999 200020012002 2003 2004 2005 2006 2007 20082009 201020112012 2013 2014 2015 2016 2017 -Антиоксиданты -Природные антиоксиданты
Классификация методов определения АОА на in vitro и in vivo. Основной перечень
Таблица 1
In vitro
№ Название методики
1 DPPH (diphenil picrylhidrazil radical: с использованием свободного радикала 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил)
2 TEAC (trolox equivalent antioxidant capacity): определение эквивалента активности тролокса
3 TRAP (total radical-trapping parameter assay): исследование общей способности к улавливанию радикалов
4 FRAP (ferric reducing antioxidant power): метод основан на регистрации снижения концентрации, комплексного иона трехвалентного железа -TPTZ (2,4,6-3(2-пиридил)-1,3,5-триазин) при взаимодействии с антиоксидантом
5 ЦВА (циклическая вольтамперометрия): потенциодинамическоe электрохимическоe измерение
6 ORAC (oxygen radical absorbance capacity): поглощающая способность кислородных радикалов
7 ABTS: регистрация уменьшения интенсивности поглощения катионами ABTS (2,2'-Азино-бис (3-этилбензтиазолин-6-сульфоновой кислоты)) радикала
8 PFRAP (potassium ferricyanide reducing power): регистрация изменения оптической плотности при взаимодействии антиоксиданта с феррици-анидом калия
9 CUPRAC (cupric reducing antioxidant power): регистрация изменения оптической плотности в результате восстановлении Cu(II) до Cu(I) при взаимодействии с антиоксидантом
In vivo
№ Название методики
1 FRAP (ferric reducing antioxidant power): снижение концентрации, комплексного иона трехвалентного железа - TPTZ (2,4,6-3(2-пири-дил)-1,3,5-триазин)
2 GSH (восстановленный глутатион): взаимодействие восстановленного глутатиона (GSH) с 5,5'- дитио-бис(2-нитробензойной) кислотой
3 GSHPx (глутатионпероксидаза): преобразование NADPH в NADP+ под действием антиоксидантов
4 SOD (супероксиддисмутаза): восстановление пирогаллола под действием антиоксидантов
5 CAT (каталаза): уменьшение содержания перекиси водорода под действием антиоксидантов.
чалось около 407 методов. Количество новых методов ежегодно увеличивается в связи с быстро растущим техническим прогрессом [12]. Кроме того, важность выполняемых антиоксидантами функций привлекает внимание исследователей к анализу их количественного содержания и интенсивности их действия [13].
Практически все методы оценки антиокислительной активности веществ систематизированы по способу регистрации параметров, на основе которых определяется величина интенсивности их действия.
Методы исследования общей антиокислительной активности (АОА) различаются по типу источника окисления, окисляемого соединения и способа измерения окисленного соединения. В зависимости от способа регистрации методы измерения антиоксидантной активности подразделяют на методы оптической спектрометрии (флуориметрические, хемилюминесцентные, фотоколориметрические, спектральные), электрохимические (амперометрические, вольтампе-рометрические, потенциометрические), специфические (хроматографические, титриметрические, методы биохимического анализа), электронный парамагнитный резонанс. Некоторые методы применяются для выявления определенных отдельных веществ, проявляющих антиоксидантные свойства (например,
витамин Е, аскорбиновая кислота и т.д.), другие - для определения суммарной антиоксидантной активности всех веществ, присутствующих в исследуемом продукте. Следует отметить, что определение концентрации определенного соединения, обладающего антиокислительными свойствами, зачастую несет менее значимые результаты в сравнении с определением общей антиокислительной активности [14].
Все известные методы определения АОА разделяют на in vitro и in vivo. Изучив научные статьи за последние 10 лет, был определен ряд наиболее распространённых методов оценки АОА, представленных в таблице 1.
Методы in vitro традиционно применяют для оценки антиокислительной емкости моно-антиоксидантов, комплексных вытяжек, экстрактов и нативного растительного или животного сырья, в то время как методы in vivo используются при изучении влияния антиоксидантов на живую систему и определяются в животных тканях, органах или жидкостях. Несмотря на данную классификацию, методы in vitro также могут применяться для суммарного изменения антиоксидат-ного статуса при in vivo исследованиях и наоборот, так как некоторые антиокси-данты входят в состав многих образцов природного происхождения [14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23].
Методы оценки АОА природных антиоксидантов in vitro
В зависимости от оснащения лаборатории линейка используемых методов может существенно меняться от различных вариаций спектрометрических до электрохимических. Далее кратко рассмотрены некоторые из них.
Метод DPPH был разработан Блуа (1958) для определения антиоксидант-ной активности с использованием стабильного свободного радикала а, а-дифенил-р-пикрилгидразила (DPPH; C1QH„NA, M = 394,33) и основан на
18 12 5 6' 11
измерении поглощающей способности антиоксидантов к свободному радикалу [14, 17, 25]. Молекула DPPH представляет собой радикал, характеризующийся стабильностью в различных средах в широком интервале температур, что объясняется максимальной делокализацией свободного электрона по всей молекуле, а также отсутствием атомов водорода в положениях, где может происходить изомеризация. Делокализация является причиной интенсивной фиолетовой окраски радикала в водно-спиртовых растворах (X =520 нм) [12, 19, 23]. Восстановле-
v макс ' ' '
ние молекулы DPPH образцом антиоксиданта (АН) сопровождается изменением окраски раствора и протекает по схеме (рисунок 2):
Метод ORAC (oxygen radical absorbance capacity - поглощающая способность кислородных радикалов) [27] основан на способности антиоксидантов перехватывать пероксильные радикалы, образующиеся при термическом разложении органических соединений, и измерении уменьшения флуоресценции р-фитоэри-трина (P-PE) (длины волн возбуждения и эмиссии 540 и 565 нм соответстве н-но) [12, 19, 24]. В качестве источника кислородных радикалов используют 2,2'-азо-бис-(2-амидинопропан) диги-дрохлорид (ААРН) по схеме (рисунок 3):
Наибольшей чувствительностью обладают методики, основанные на хемилю-минесценции. В некоторых методиках проводят хемилюминесцентные реакции участия пероксида водорода с перокси-дазой из корней хрена [29] и железом (II) [30]. Несмотря на это, наибольшее распространение получили методики, основанные на хемилюминесцентной реакции между люми нолом и 2,2'-азо-бис(2-ами-динпропаном) (АБАП) за счет нестабильности пероксида водорода [12, 24, 31]. При взаимодействии люминола с гидрок-сид-ионами образуется дианион, который
участвует в реакции с кислородом. Продуктом этой реакции является нестабильный дирадикал, который распадается с образованием азота и молекулы 3-ами-нофталевой кислоты в возбуждённом электронном состоянии. Возвращение молекулы в основное электронное состояние, при котором выделяется фотон, провоцируют свободные радикалы, полученные путем термической инициации молекул ААРН. Данный процесс представлен на рисунке 4.
Мерой количества радикалов принято считать интенсивность хемилю-минесценции. При введении в систему антиоксидантов количество радикалов уменьшается, что вызывает снижение интенсивности хемилюминесценции [24].
При хемилюминесцентном определении антиоксидантов используют параметры TRAP (total reactive antioxidant potential - общая потенциальная активность антиоксиданта) и метод TAR (total antioxidant reactivity - общая антиок-сидантная активность) [33]. Считается, что TRAP свидетельствует о количестве антиоксиданта в системе, а TAR - о его активности (скорости взаимодействия антиоксиданта с радикалами). Оба эти параметра были применены для анализа биологических объектов (сыворотка крови) и пищевых продуктов при исследовании неизвестных классов антиоксидантов, входящих в состав изучаемого объекта, а так же принципа их действия, концентрации и активности. [12, 19, 23, 24]. TRAP основан на измерении латентного периода - периода времени, в течение которого не наблюдается свечения хемилюминесценции, возникающего в результате добавления антиоксидан-та, а TAR - на снижении интенсивности хемилюминесценции при добавлении антиоксиданта в реакционную смесь. Полученные результаты выражаются в эквивалентах тролокса. Тролокс (6-ги-дрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-кар-боновая кислота) - водорастворимый аналог токоферола (витамин Е), в настоящее время принят за стандарт для оценки антиоксидантной активности и выражается в эквивалентных молях тролокса на массу о бразца (мкмоль/мг) [19, 24, 33].
Метод FRAP (ferric reducing / antioxidant power) измеряет способность антиоксидантов уменьшать содержание трехвалентного железа, основан на восстановлении комплекса трехвалентного железа и 2,3,5-трифенил-1,3,4-триаза-2-азониаци-клопента-1,4-диенового хлорида (TPTZ) до ферментативной формы при низких значениях рН. Реакция заключается в переносе электрона от молекулы антиоксиданта к молекуле окислителя по схеме:
Рисунок 3. Схема образования кислородных радикалов из ААРН [28]
но
31
нос f
Н jH
UN
а + н=м
лллс
нес' нО"
(аарн) (r)
,га р а
НО^ +Q HNT HNM
л a/"+ а/>-°-
Н:С СНз
v)
(RO-)
н^р CHj
(roo-;
Рисунок 4. Схема превращений люминола при хемилюминесцентной реакции [32] О HH¡ о jjttj О"
мм
J
ЧН
i ОГ
чг
jr
Q
Люминол
О
Дианион
пи, С"
И+, О
hn-i, О
Дианион
Дианион
»И) (?
Дианитн (Т1) возбуждённое состояние
п
Дианион (М) возбуждённое состояние
<Г
Дианион (S0) основное состояние
Рисунок 5. Схема превращений при FRAP реакции [34]
Снижение контролируется путем измерения изменения поглощения при 593 нм [12]. Окраска развивается медленно, поэтому сигнал измеряют, не дожидаясь установления равновесия, а затем рассчитывают величину АОА по градуиро-вочному графику [35, 36].
Альтернативные методы анализа комплексных смесей антиоксидантов
Удобным и простым методом определения содержание фенольных соединений является спектрофотометрический метод Фолина-Чокальтеу, основанный на окислительно-восстановительной реакции, в ходе которой восстанавливается фосфорномолибденовая и фос-форновольфрамовая кислоты, входящие в состав реактива Фолина-Чокальтеу [14] при взаимодействии с фенолами и полифенолами с образованием окрашенных в синий цвет комплексов. Измерение оптической плотности реакционной смеси производят при длине волны 765 нм, по результатам измерения строят калибровочный график по сток-раствору галловой кислоты. Конечный результат выражают в мг-экв. галловой кислоты на 1 г сухого веса исследуемого образца [37].
Для качественного анализа смеси антиоксидантов используются методы
высокоэффекивной жидкостной хроматографии, базирующиеся на разделении компонентов смеси, основанном на различии в равновесном распределении смеси между двумя несмешивающими-ся фазами, одна из которых неподвижна, а другая подвижна, и позволяют за короткий промежуток времени полностью разделять многокомпонентные смеси веществ. Поскольку многие фенолы имеют несколько максимумов поглощения, для их определения часто применяют одновременное сканирование по нескольким длинам волн -диодно-матричное детектирование [38, 39, 40]. Метод ВЭЖХ с диоднома-тричным детектированием работает преимущественно в низких пределах обнаружения и нашел применение для определения фенолов, содержащихся в пищевых продуктах и напитках. В последние годы используют метод ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием или сочетание диодно-ма-тричного и масс-спектрометрического детектирования с различными источниками ионизации для выявления фенолов, присутствующих в растительном сырье и продуктах питания. Последний метод особенно ценен при изучении ацилированных флавоноидных глико-
зидов, содержащихся в растениях, овощах, фруктах в малых количествах.
Метод ВЭЖХ с флуориметрическим и хемилюминесцентным детектированием применяют для выявления низких концентраций (1-10 нг/мл) полифенолов в растительных объектах [41] и биологических жидкостях человека [42].
Выводы
На основе проведенного анализа литературных источников были определены основные методы изучения анти-оксидантных свойств состава природных моно-соединений или их комплексных смесей, выявлены самые современные, точные и доступные. Согласно международным базам данных, например, Orac-DataBase, созданной в 2007 году USDA (United States Department of Agriculture), методы ORAC для определения антиокислительной емкости (единица измерения - цмоль тролокс-эквивалента/100 г) и Фолина-Чокальтеу для определения содержания общего количества фенольных соединений (единица измерения - мг галловой кислоты /100 g) остаются основными и наиболее распространенными в общелабораторной практике [43]. Однако в последнее время все большее распространение получают альтернативные флуориметрические и хемилюми-несцентные методы, обладающие также высокой чувствительностью, простотой постановки реакции и высокой производительностью.
© контакты:
Котенкова Елена Александровна a lazovlena92@yandex.ru Лукинова Екатерина Александровна a kate3584@mail.ru
Купаева Надежда Владимировна a nadezhdakupaeva@yandex.ru
список литературы; REFERENCES:
1. Электронный ресурс. щения 01.03.2018). - Режим доступа [https://www.ncbi.nlm.nih.gov]. (дата обра- Elektronnii resurs. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov (data obracheniya 01.03.2018)
2. Электронный ресурс. щения 01.03.2018). - Режим доступа [https://www.sciencedirect.com]. (дата обра- Elektronnii resurs. URL: https://www.sciencedirect.com (data obracheniya 01.03.2018)
3. Лисицын, А.Б. Окисление липидов: механизм, динамика, ингибирование / А.Б. Ли- Lisitsyn, A.B. Okislenie lipidov: mekhanizm, dinamika, ingibirovanie [Oxidation of lipids: the сицын, Е.К. Туниева, Н.А. Горбунова // Все о мясе.— 2015.- № 1. — С. 10-14. mechanism, dynamics, inhibition] / A.B. Lisitsyn, E.K. Tunieva, N.A. Gorbunova // Vsyo o
myase.- 2015.- № 1. - P. 10-14.
4. Huis in't Veld, J.H. Microbial and biochemical spoilage of foods: an overview / J.H. Huis in't Veld // Int J Food Microbiol.- 1996. - V. 33.- № 1. - Р. 1-18.
5. Turgut, S.S. Antioxidant activity of pomegranate peel extract on lipid and protein oxidation in beef meatballs during frozen storage / S.S. Turgut, F. I§ikg, A. Soyer // Meat Sci.- 2017. -V. 129. - P. 111-119.
6. Citta, A. Oxidative changes in lipids, proteins, and antioxidants in yogurt during the shelf life / A. Citta, A. Folda, V. Scalcon, G. Scutari, A. Bindoli, M. Bellamio, E. Feller, M.P. Rigobello // Food Sci Nutr.- 2017. - V. 5.- № 6. - Р. 1079-1087.
7. Лукинова, Е.А. Антимикробные вещества: альтернативный подход к продлению сро- Lukinova, Е.А. Antimikrobnyye veshchestva: al'ternativnyy podkhod k prodleniyu srokov ков хранения / Е.А. Лукинова, Е.А. Котенкова, А.Н. Макаренко // Теория и практика khraneniya [Antimicrobial substances: an alternative approach to the extension of shelf переработки мяса.- 2017. - Т. 2.- № 3. - С. 4-20. life] / Е.А. Lukinova, Е.А. Kotenkova, A.N. Makarenko // Theory and Practice of Meat Processing.- 2017. - V. 2.- № 3. - P. 4-20.
8. Panzella, L. Natural Phenol Polymers: Recent Advances in Food and Health Applications / L. Panzella, A. Napolitano // Antioxidants (Basel).— 2017. — V. 6.— № 2. — Article ID30.
9. Gottardi, D. Beneficial Effects of Spices in Food Preservation and Safety / D. Gottardi, D. Bukvicki, S. Prasad, A.K. Tyagi // Front Microbiol.— 2016. — V. 7. — Article ID1394.
10. Finley, J.W. Antioxidants in foods: state of the science important to the food industry / J.W. Finley, A.N. Kong, K.J. Hintze, E.H. Jeffery, L.L. Ji, X.G. Lei // J Agric Food Chem.— 2011. — V. 59.— № 13. — P. 6837-6846.
список ЛИТЕРАТУРЫ: REFERENCES:
11. Gallego, M.G. Gelatine-Based Antioxidant Packaging Containing Caesalpinia decapetala and Tara as a Coating for Ground Beef Patties / M.G. Gallego, M.H. Gordon, F. Segovia, M.P. Almajano Pablos // Antioxidants (Basel).- 2016. - V. 5.- № 2. - Article ID10.
12. Alam, M.N. Review on in vivo and in vitro methods evaluation of antioxidant activity / M.N. Alam, N.J. Bristi, M. Rafiquzzaman // Saudi Pharmaceutical Journal.- 2013. - V. 21. -P. 143-152.
13. Лукинова, Е.А. Сравнительный анализ содержания фенольных соединений в расти- Lukinova, E.A. Sravnitel'nyy analiz soderzhaniya fenol'nykh soedineniy v rastitel'nom syfye тельном сырье / Е.А. Лукинова, Е.А. Котенкова // Международная научно-практи- [Comparative analysis of the content of phenolic compounds in plant raw materials] / ческая конференция, посвященная памяти В.М. Горбатова, 2017. - Т. 1. - С. 218-219. E.A. Lukinova, E.A. Kotenkova // Mezhdunarodnaya nauchno-prakticheskaya konferentsiya,
posvyashchennaya pamyati V.M. Gorbatova, 2017. - V. 1. - P. 218-219.
14. Бельтюкова, С.В. Антиоксиданты в пищевых продуктах и методы их определения / Bel'tyukova, S.V. Antioksidanty v pishchevykh produktakh i metody ikh opredeleniya [Anti-С.В. Бельтюкова, А.А. Степанова, Е.О. Ливенцова // Весник ОНУ. Химия.- 2014. - oxidants in food products and methods of their determination] / S.V. Bel'tyukova A.A. Ste-Т. 19.- № 4 (52). - С. 16-31. panova, E.O. Liventsova // Vesnik ONU. Khimiya.- 2014. - V. 19.- № 4 (52). - P. 16-31.
15. Pisoschi, A.M. Antioxidant Capacity Determination in Plants and Plant-Derived Products: A Review / A.M. Pisoschi, A. Pop, C. Cimpeanu, G. Predoi // Oxidative Medicine and Cellular Longevity.- 2016. - P. 1-37.
16. Ozsurekci, Y. Oxidative Stress Related Diseases in Newborns Oxidative / Y. Ozsurekci, K. Aykac // Medicine and Cellular Longevity.- 2016. - P. 1-10.
17. Макарова, Н.В. Исследование антиоксидантной активности по методу DPPH полу- Makarova, N.V. Issledovanie antioksidantnoy aktivnosti po metodu DPPH polufabrikatov фабрикатов производства соков / Н.В. Макарова, А.В. Зюзина // Техника и техноло- proizvodstva sokov [Investigation of antioxidant activity of juice production semis with DPPH гия пищевых производств.- 2011.- № 3. - С. 1-4. method] / N.V. Makarova, A.V. Zyuzina // Tekhnika i tekhnologiya pishchevykh proizvodstv.-
2011.- № 3. - P. 1-4.
18. Kedare, S.B. Genesis and development of DPPH method of antioxidant assay / S.B. Kedare, R.P. Singh // J Food Sci Technol.- 2011.- № 48 (4). - P. 412-422.
19. Miled, H.B. Variability of antioxidant and biological activities of Rhus tripartitum related to phenolic compounds / H.B. Miled, M. Saada, I. Jallali // Excli J.- 2017.- № 16. - Р. 439-447.
20. Litescu, S.C. The Use of Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) and Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC) Assays in the Assessment of Beverages' Antioxidant Properties / S.C. Litescu, S.A.V. Eremia, A. Tache, I. Vasilescu, G. - L. Radu // National Institute for Biological Sciences.- 2014.- № 25. - P. 245-251.
21. Ou, B. Analysis of Antioxidant Activities of Common Vegetables Employing Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) and Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) Assays: A Comparative Study / B. Ou, D. Huang, M. Hampsch-Woodill, J.A. Flanagan, E.K. Deemer // J. Agric. Food Chem.- 2002.- № 50. - P. 3122-3128.
22. Cao, G. Measurement of Oxygen Radical Absorbance Capacity in Biological Samples / G. Cao, R.L. Prior // Total antioxidant activity.- 1999. - P. 50-62.
23. Valos, A.D. Extending Applicability of the Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC-Fluorescein) Assay / A.D. Valos, C. G. Mez-Cordoveas, B. Bartolome // J. Agric. Food Chem.-2004.- № 52. - P. 48-54.
24. Алексеев, А.В. Определение антиоксидантов методом активированной хемилю- Alekseev, A.V. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoy khemilyuminestsentsii s минесценции с использованием 2,2'-азо-бис(2-амидинопропана) / А.В. Алексеев, ispol'zovaniem 2,2'-azo-bis(2-amidinopropana) [Determination of аntioxidants by sensitized Е.В. Проскурнина, Ю.А. Владимиров // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия.- 2012.- chemiluminescence using 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane)] / A.V. Alekseev, E.V. Proskurnina, № 3. - С. 187-193. Yu.A. Vladimirov // Vestn. Mosk. Un-ta. Ser. 2. Khimiya.- 2012.- № 3. - P. 187-193.
25. Kljusuric, J.G. Near-Infrared Spectroscopic Analysis of Total Phenolic Content and Antioxidant Activity of Berry Fruits / J.G. Kljusuric, K. Mihalev, I. Becic, I. Polovic, M. Georgieva, S. Djakovic, Z. Kurtanjek // Food Technol Biotechnol.- 2016.- № 54 (2). - P. 236-242.
26. Dumbrava, D.G. Antioxidant activity of some fresh vegetables and fruits juices / D.G. Dumbrava, N.G. Hadaruga, C. Moldovan, D.N. Raba, M.V. Popa, B. Radoi // Journal of Agroalimen-tary Processes and Technologies.- 2011.-№ 17 (2). - P. 163-168.
27. Cao, G. Oxygen-radical absorbance capacity assay for antioxidants / G. Cao, H.M. Alessio, R.G. Cutler // Free Radic Biol Med.- 1993.- № 14. - P. 303-11.
28. Белая, Н.И. Исследование активированной люминолом хемилюминесценции Belaia, N.I. Issledovanie aktivirovannoy lyuminolom khemilyuminestsentsii v reaktsiyakh в реакциях пероксирадикалов 2,2'-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорида peroksiradikalov 2,2'-azobis(2-amidinopropan) digidrokhlorida s gidroksibenzolami v ne-с гидроксибензолами в нейтральных средах / Н.И. Белая, А.В. Белый, К.В. Глушен- ytral'nykh sredakh [Study of luminol-activated chemiluminescence in reactions of peroxyl ко // Вестник новгородского государственного университета.- 2015.- № 6 (89). - radicals of 2,2-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride with hydroxybenzenes in a neutral С. 38-43. medium] / N.I. Belaia, A.V. Belyi, K.V. Glushenko // Vestnik novgorodskogo gosudarstvenno-
go universiteta.- 2015.- № 6 (89). - P. 38-43.
29. Georgetti, S. R. Evaluation of the antioxidant activity of different flavonoids by the chemiluminescence method / S. R. Georgetti, R. Casagrande, V. M. Di Mambro, A. E. Azzolini, M. J. Fonseca // AAPS PharmSci.- 2003.- № 5. - P. 86-87.
30. Cheng, Z. Determination of antioxidant activity of phenolic antioxidants in a Fenton-type reaction system by chemiluminescence assay / Z. Cheng, G. Yan, Y. Li, W. Chang // Anal Bioanal Chem.- 2003.- № 375 (3). - P. 376-80.
31. Lissi, EA Evaluation of total antioxidant potential (TRAP) and total antioxidant reactivity from luminol-enhanced chemiluminescence measurements / EA Lissi, M. Salim-Hanna, C. Pascual, M.D. Del Castillo // Free Radic Biol Med.- 1995.- № 18 (2). - P. 153-158.
32. Zaikov, G.E. Analytical chemistry from laboratory to process line / G.E. Zaikov, A.K. Haghi // Canada: Apple Academic Press, 2016.- 310 р.
33. Slavikova, H. Total antioxidant capacity of serum increased in early but not late period after intestinal ischemia in rats // H. Slavikova, A. Lojek, J. Hamar, M. Duskova, L. Kubala, J. Vondracek, M. Ciz // Free Rad. Biol. Med.- 1998.- № 25. - P. 9-18.
34. Электронный ресурс. - Режим доступа [https://www.intechopen.com]. (дата обра- Elektronnii resurs. URL: https://www.intechopen.com (data obracheniya 07.03.2018) щения 07.03.2018).
35. Наумова, Н.Л. Современный взгляд на проблему исследования антиоксидантной Naumova, N.L. Sovremennyy vzglyad na problemu issledovaniya antioksidantnoy aktivnosti активности пищевых продуктов / Н.Л. Наумова // Обзорные статьи.- 2014. - Т. 2.- pishchevykh produktov [Modern look on the problem of antioxidant activity of food prod-№ 1. - C. 5-8. ucts] / N.L. Naumova // Obzornye stat'i.- 2014. - V. 2.- № 1. - P. 5-8.
36. Zhou, Y. Total Antioxidant Capacity of Serum Determined Using the Potassium Permanganate Agar Method Based on Serum Diffusion in Agar / Y. Zhou, M. Zhang, H. Liu // Bioinorg Chem Appl.- 2015. - P. 1-7.
37. Коннова, С.А. Методы выделения и анализа флавоноидов высших растений и иссле- Konnova, S.A. Metody vydeleniya i analiza flavonoidov vysshikh rasteniy i issledovaniya ikh дования их активности в отношении ризобактерий. Учебно-методическое пособие / aktivnosti v otnoshenii rizobakteriy. Uchebno-metodicheskoe posobie [Methods for isolation С.А. Коннова, М.В. Каневский, З.О. Алиева, Е.П. Шувалова // Саратов: Изд-во Сарат. and analysis of flavonoids of higher plants and studies of their activity against rhizobacteria. ун-та, 2015.- 31 с. Teaching aid] / S.A. Konnova, M.V. Kanevskiy, Z.O. Alieva, E.P. Shuvalova // Saratov: Izd-vo
Sarat. un-ta, 2015.- 31 p.
38. Wang, L.H. General method for determination flavonoids in medical plants and raw cosmetic using HPLS with a photodiodearraydetector / L.H. Wang, W.H. Li // Химико-фарм. журн.- 2007. - Т. 41.- № 4. - С. 46-51.
39. Алексеева, М.А. Определение полифенольных компонентов хмеля с помощью Alekseeva, M.A. Opredelenie polifenol'nykh komponentov khmelya s pomoshch'yu obrash-обращенно-фазовой ВЭЖХ / М.А. Алексеева, К.И. Эллер, А.П. Арзамасцев // Хими- chenno - fazovoy VEZhKh [Determining polyphenolic components of common hop by ко-фарм. журн.- 2004. - Т. 38.- № 12. - С. 39-41. reversed-phase HPLC] / M.A. Alekseeva, K.I. Eller, A.P. Arzamastsev // Khimiko-farm.
zhurn.- 2004. - V. 38.- № 12. - P. 39-41.
40. Кочетова, М.В. Определение биологически активных фенолов и полифенолов Kochetova, M.V. Opredelenie biologicheski aktivnykh fenolov i polifenolov v razlichnykh в различных объектах методами хроматографии / М.В. Кочетова, Е.Н. Семенистая, ob''ektakh metodami khromatografii [Determination of biologically active phenols and poly-О.Г. Ларионов, А.А. Ревина // Успехи химии.- 2007. - Т. 76.- № 1. - С. 89-100. phenols in various objects by chromatographic techniques] / E.N. Semenistaya, O.G. Larion-
ov, A.A. Revina // Uspekhi khimii.- 2007. - T. 76.- № 1. - P. 89-100.
41. Papagiannopoulos, M. Automated sample preparation by pressurized liquid extraction-solid-phase extraction for the liquid chromatographic-mass pectrometric investigation of polyphenols in the brewing process. / M. Papagiannopoulos, B. Zimmermann // J. Chromatogr. A.- 2002. - V. 976. - P. 345-348.
42. Tsuchiya, H. Nanoscale analysis of pharmacologically active catechins in body fluids by HPLC using borate complex extraction pretreatment / H. Tsuchiya, M. Sato, H. Kato, H. Kureshiro, N. Takagi // Talanta. - V. 46. - P. 717-726.
43. Электронный ресурс. - Режим доступа [http://oracdatabase.com]. (дата обращения Elektronnii resurs. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov (data obracheniya 01.03.2018) 07.03.2018).
