Новый вариант спектрофотометрического определения дротаверина Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

дисс. на соискание ученой степени канд. мед. наук. - Иркутск, 2010. - 22 с.

3. Насонов Е.Л. Ревматоидный артрит как общемедицинская проблема // Терапевтический архив. - 2004. - №5. - С.7-11.

4. Arnett F.C., Edworthy S.M., Bloch D.A., et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. - 1988. - Vol. 31.

№3. - P.315-324.

5. Boers M., Cronen A.A., Dijkans B.A. Renal finding in rheumatoid arthritis clinical aspects of 132 autopsiees // Ann. Rheum. Dis. - 1987. - Vol. 16. - S.

6. Nagata-Sakurai M., Inaba M., Goto H. Inflammation and bone resorbtion as independent factors of accelerated arterial wall thickening in patients with rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. - 2003. - Vol. 48. - S.3061-3067.

Информация об авторах: 664003, Иркутск, ул. Красного восстания, 1, ИГМУ, кафедра госпитальной терапии, тел. (3952) 40-79-26, е-таП: [email protected], Фатахова Олеся Анатольевна - аспирант;

Орлова Галина Михайловна - заведующая кафедрой госпитальной терапии ИГМУ, д.м.н., профессор

© ИЛЛАРИОНОВА Е.А., СЫРОВАТСКИЙ И.П., ИНОЗЕМЦЕВ П.О. - 2011 УДК 543.42.062

НОВЫЙ ВАРИАНТ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДРОТАВЕРИНА

Елена Анатольевна Илларионова, Игорь Петрович Сыроватский, Павел Олегович Иноземцев (Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, зав. - д.х.н., проф. Е.А. Илларионова)

Резюме. Разработана унифицированная методика спектрофотометрического определения дротаверина в субстанции, отличающаяся использованием в качестве образца сравнения калия дихромата. Обоснованы оптимальные условия определения: растворитель - 0,1М раствор кислоты хлористоводородной, аналитическая длина волны - 353 нм. Определены коэффициенты пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило 0,004.

Ключевые слова: спектрофотометрия, внешний образец сравнения, коэффициент пересчета, дротаверин, калия дихромат.

NEW VARIANT AN SPECTROPHOTOMETRIC DETERMINATION OF DROTAVERIN

E.A. Illarionova, I.P. Syrovatskii, P.O. Inozemcev (Irkutsk State Medical University)

Summary. A unified procedure was developed for the spectrophotometric determination of drotaverine in the medicinally substance and using potassium dichromate as reference sample. The best conditions for substance the determination have been found as follows: 0,1M HCl as a solvent and an analytical wavelength of 353 nm. The scaling factors have been determined. The relative standard deviations of the results obtained with the proposed are less than 0,005 for the substance.

Key words: spectrofotometric determination, external sample of the comparison, factor of the recalculation, drotaverine, potassium dichromate.

Проблема повышения эффективности и точности анализа, оценка экологической безопасности имеющихся и предлагаемых методов анализа всегда стояла перед исследователями, работающими в области фармацевтического анализа. Спектрофотометрия в видимой и УФ области спектра относится к числу методов, получивших наибольшее распространение в анализе лекарственных средств.

Лекарственные средства, выпускаемые фармацевтической промышленностью и хорошо себя зарекомендовавшие, требуют совершенствования методов анализа. Объектом исследования является производное изохинолина - дротаверин, обладающий спазмолитической активностью [6]. Рекомендованный нормативной документацией для количественной оценки субстанции дротаверина метод спектрофотометрии требует использования достаточно токсичных веществ (ледяной уксусной кислоты, муравьиной кислоты, уксусного ангидрида, ацетата окисной ртути) [1].

Целью настоящего исследования является разработка методики спектрофотометрического определения дротаверина в субстанции с использованием оптического образца сравнения.

Материалы и методы

В работе использовали: субстанцию дротаверина, отвечающую требованиям нормативного документа, калия дихромат (чда), 0,1М раствор натрия гидроксида, приготовленного из фиксанала, 0,1М раствор кислоты хлористоводородной, приготовленного из фиксанала, спирт этиловый 95%.

Электронные спектры регистрировали на спектрофотометре Specord UV VIS. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометрах СФ-2б и СФ-4б в кюветах 1 см на фоне растворителя. Величину рН контролировали с помощью универсального ионометра ЭВ - 74.

Результаты исследований обработаны статистически с использованием пакета программ Microsoft Excel для Windows XP. Проверка распределения, которому подчиняются результаты исследования, дала возможность использовать для анализа критерий Стьюдента. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

Результаты и обсуждение

Дротаверин [1(3,4-диэтоксибензилиден)-б,7-диэток-си-1,2,3,4-тетрагидроизохинолина гидрохлорид] является производным изохинолина и обладает способностью поглощать в ультрафиолетовой области спектра, что обусловлено п^п'- электронными переходами. Поэтому нами были изучены спектральные характеристики изучаемого лекарственного вещества в области от 220 до 400 нм в интервале рН 1,1-12,5. Спектр 0,001% раствора дротаверина представлен на рисунке 1.

Спектр поглощения дротаверина при рН 1,1 характеризуется тремя максимумами поглощения при длинах волн 241±2 нм, 302±2 нм и 353±2 нм и тремя минимумами при 223±2 нм, 2б2±2 и 322±2 нм.

Стабильность приготовленных для количественного определения растворов имеет большое значение в спектрофотометрическом анализе. Поэтому авторами

340

Длина волны

Рис. 1. УФ спектр 0,001% раствора дротаверина.

была исследована зависимость оптических характеристик дротаверина в различных растворителях от времени хранения. Как показали исследования, существенных изменений с растворами при хранении не происходит (рис. 2).

В качестве растворителя был выбран 0,1М раствор хлористоводородной кислоты, т.к. этот же растворитель используется для приготовления раствора внешнего образцов сравнения, что позволяет упростить работу провизора-аналитика.

Для количественного определения дротаверина спектрофотометрическим методом необходимо было выбрать образец сравнения [3,4]. Исходя из установленной ранее зависимости, согласно которой

где Е - удельный показатель поглощения внешнего образца сравнения, Е - удельный показатель поглощения определяемого (исследуемого) вещества.

Данные удельные показатели поглощения рассчитывают при аналитической длине волны, соответствующей максимуму поглощения определяемого вещества. Результаты расчета коэффициента пересчета представлены в таблице 1.

Для определения удельного показателя поглощения образца сравнения лекарственного вещества дротаве-рина использовали промышленную серию дротаверина, дополнительно очищенную путём перекристаллизации из этилового спирта.

Разработанные оптимальные условия спектрофотометрического определения дротаверина были использованы для количественного определения дротаверина в субстанции.

Таблица 1

Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического определения дротаверина по внешнему образцу сравнения калия дихромату

Метрологические характеристики (п = 10, р=95%)

Внешний образец сравнения К Б2 Б 5- Л' ДХ Е% Б Г

Калия дихромат 0,434 0,000522 0,0229 0,0072 0,0163 3.762 0,053

Рис. 2. Зависимость оптической плотности растворов дротаверина от времени хранения.

в качестве внешних образцов сравнения могут применяться вещества, для которых интервал между аналитической длиной волны и максимумом (или минимумом) поглощения этого образца сравнения не превышает половины полуширины его полосы поглощения, в качестве внешнего образца сравнения для анализа дротаве-рина выбран калия дихромат [2]. Аналитическая длина волны дротаверина (353 нм) входит в интервал, оптимальный для калия дихромата (340,5-359,5нм). Это дает основание предполагать, что калия дихромат является оптимальным внешним образцом сравнения для спектрофотометрического определения дротаверина при использовании в качестве растворителя 0,1М раствор кислоты хлористоводородной. Калия дихромат выпускаются серийно промышленностью категории (чда), на него имеется ГОСТ 4220-75, регламентирующий его качество. Раствор калия дихромата в 0,1М растворе кислоты хлористоводородной устойчив при хранении длительное время [2].

Для разработки методики спектрофотометрического определения дротаверина по калию дихромату необходимо было определить коэффициенты пересчета, которые находятся по формуле:

К р =

пер

Методика количественного определения дротаверина в субстанции спектрофотометрическим методом: точную навеску субстанции дротаверина (0,1000 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл с помощью 20 мл воды очищенной, растворяют и доводят водой до метки, перемешивают. Аликвотную часть раствора 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки 0,1М раствором кислоты хлористоводородной, перемешивают. Измеряют оптическую плотность приготовленного раствора на спектрофотометре при длине волны 353 нм в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 0,1М раствор кислоты хлористоводородной. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора внешнего образца сравнения - калия дихромата.

Методика приготовления раствора внешнего образца сравнения: точную навеску калия дихромата (0,1000 г) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл с помощью 20 мл воды очищенной, растворяют и доводят водой до метки, перемешивают. Аликвотную часть раствора 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки 0,1М раствором кислоты хлористоводородной, перемешивают.

Содержание дротаверина в субстанции находят по формуле:

100 . 100 . а • К

пер

100

А »50»50» а

где А и А - оптические плотности определяемого вещества и внешнего образца сравнения соответственно; а и а - точные навески определяемого вещества и внешнего образца сравнения соответственно; К - коэффициент пересчета, для калия дихромата (0,434).

Результаты количественного определения дротаве-рина в субстанции приведены в таблице 2.

Относительная ошибка количественного определения дротаверина по разработанной методике не превышает 0,28%. Сопоставляя полученную по разработанной методике относительную ошибку с относительной ошибкой химического титриметрического метода (аци-диметрии в неводной среде), которая широко известна [5], можно сделать вывод, что предложенная методика количественного определения с использованием внеш-

Е

Е

ос

Таблица 2

Результаты количественного определения дротаверина в субстанции спектрофотометрическим методом с использованием внешнего образца сравнения калия дихромата

него образца сравнения отличается достаточной точностью. К достоинствам разработанной методики можно отнести ее экологичность, простоту в выполнении и достаточную воспроизводимость.

Внешний образец сравнения Метрологические характеристики (n = 10, р=95%)

Х S2 S 5- Д' ДХ Е% S r

Калия дихромат 99,97 0,1519 0,3898 0,1233 0,2786 0,279 0,004

ЛИТЕРАТУРА

1. Дротаверин. ФСП 42-0097022600. 2000. - 7 с.

2. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Плетенёва Т.В. Модифицированный метод сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств // Вестник РУДН. Сер. Медицина. - 2003. - Т. 24. №5. - С.66-70.

3. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Иноземцев П.О. Спектрофотометрическое определение бендазола // Сибирский медицинский журнал. - Иркутск, 2009. - №8. -

С.42-44.

4. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Иноземцев П.О. Биофармацевтическое исследование таблеток бендазола // Сибирский медицинский журнал. - Иркутск, 2010. - №5. -С.35-37.

5. Основы аналитической химии / Под ред. Ю. А. Золотова - М.: Высшая школа, 1999. - 351 с.

6. Энциклопедия лекарств / Под ред. Г.Л. Вышковского. -М.: РЛС-2008, 2007. - Изд. 16. - С.320.

Информация об авторах: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ кафедра фармацевтической и токсикологической химии, тел. (3952) 24-34-47, е-таП: [email protected], [email protected], Илларионова Елена Анатольевна - заведующая кафедрой, профессор, д.х.н.; Сыроватский Игорь Петрович - доцент, к.фарм.н.;

Иноземцев Павел Олегович - интерн.

© НАГОРНОВА К.А., БУГРОВА О.В., БЕЛЯЕВА О.Н., ОВЧИННИКОВА Н.А. - 2011 УДК: 616.5-002.525.2: 616.61-002.26

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОЦЕНКИ ПРОФИБРОГЕННЫХ ЦИТОКИНОВ И КОЛЛАГЕНА IV ТИПА У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ

Ксения Александровна Нагорнова1, Ольга Викторовна Бугрова1, Ольга Николаевна Беляева2,

Наталья Анатольевна Овчинникова3 ^Оренбургская государственная медицинская академия, ректор - д.м.н., проф. В.М. Боев, кафедра факультетской терапии и эндокринологии, зав. - д.м.н., проф. Р.И. Сайфутдинов; 2Оренбургская областная клиническая больница, гл. врач - к.м.н. А.М. Чевычалов, ревматологическое отделение, зав. - О.Н. Беляева; 3Клиника промышленной медицины, гл. врач - С.М. Подлужный, клинико-диагностическая лаборатория, зав.-

И.А. Александрова)

Резюме. У 80 больных системной красной волчанкой (СКВ) определили содержание моноцитарного хемотакси-ческого протеина-1 в сыворотке и моче, трансформирующего фактора роста и коллагена IV типа в моче методом иммуноферментного анализа для оценки их прогностической значимости в прогрессировании поражения почек. Отмечалось повышение уровней всех факторов и коллагена IV типа в моче, особенно при наличии активного вол-чаночного нефрита с нефротическим синдромом, снижении функции почек. Повышение коллагена IV типа в моче ассоциировалось с неблагоприятным течением СКВ.

Ключевые слова: системная красная волчанка, волчаночный нефрит, моноцитарный хемотаксический протеин-1, профиброгенные цитокины, прогноз.

PROGNOSTIC VALUE OF ESTIMATION PROFIBROGENIC CYTOKINES AND COLLAGEN OF IV TYPE AT PATIENTS OF THE SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS

K.A. Nagornova1, O.V. Bugrova1, O.N. Belyaeva2, N.A. Ovchinnikova3 ('Orenburg State Medical Academy; 2Orenburg Clinical Regional Hospital; 3Clinic of industrial medicine)

Summary. In 80 patients with systemic lupus erythematosus (SLE) have identified monocyte chemoattractant protein -1 (MCP-1) in serum and urine, transforming growth factor (TGF-^1) and type IV collagen in urine using enzyme immunoassay to assess their prognostic significance in the progression of renal disease. There was an increase in the level of MCP-1 in serum and urine, TgF-^1 and type IV collagen in urine, especially at presence of active lupus nephrirtis with the nephrotic syndrome, reduced kidney function. Increased type IV collagen in urine is associated with an unfavorable course of SLE with reduced kidney function

Key words: systemic lupus erythematosus, lupus nephrirtis, monocyte chemoattractant protein-1, profibrogenic factors, prognosis. ______________________________________________________________________________________

Системная красная волчанка (СКВ) представляет собой системное аутоиммунное заболевание, протекающее с прогрессирующим поражением жизненно важных органов, прежде всего почек [4]. Ухудшение почечной функции в значительной степени определяется наличием тубулоинтерстициального воспаления, инициируемого в том числе моноцитарным хемотаксическим протеином-1 (МСР-1), который стимулирует секрецию

основного профиброгенного цитокина - трансформирующего фактора роста (TGF-pl), что ведет к синтезу экстрацеллюлярного матрикса коллагена IV типа, и, как следствие, развитию гломерулосклероза и тубулоинтер-стициального фиброза [3]. В единичных работах показано, что уровни МСР-1 и TGF-pl у больных СКВ коррелируют с активностью волчаночного нефрита (ВН), тяжестью морфологических изменений в почечной