CC BY
86
0.0. Зайцева, профессор А.Г. Мешандин, доцент С.П. Ашихмин, доцент П.Г. Распутин НОВЫЙ МЕТОД ФИКСАЦИИ АНАТОМИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
Кировская государственная медицинская академия
Известно, что после наступления биологической смерти начинаются естественные процессы разложения мягких тканей, которые протекают по типу ранних и поздних трупных изменений. Потребность сохранения тела человека после смерти диктуется многообразными потребностями: гигиеническими, эстетическими, социальными, психологическими и рели-
гиозными. Погребальные обряды известны с давних времен. В древнем Риме профессиональные бальзамировщики натирали тело умершего кедровым маслом, солью и медом, которые, по словам Плиния, "на века сохраняют тела умерших нетронутыми тлением". Древние персы, сирийцы и вавилоняне погружали мертвых в кувшины с медом или воском. Методы бальзамирования, использовавшиеся древними египтянами, всегда включали натриевую соду, смолу деревьев и битум. В арабском способе бальзамирования тело умершего натирали порошком, состоящим из ароматических веществ, квасцов и соли, после чего тело обертывали спарадрапом, пропитанным воском и терпентином.
В начале XVIII столетия в России был создан первый естественнонаучный музей, так называемая кунсткамера. Для консервации экспонируемых препаратов употребляли спирт, настоянный на черном перце и разбавленный до 750 .
На протяжении всего XIX века было предложено множество различных способов, основанных на бальзамировании сулемой, мышьяком, хлористым цинком, глицерином, карболовой кислотой и, наконец, формалином, который быстро завоевал известность и получил всеобщее признание.
В современном мире необходимо не только сохранение тел умерших, но и сохранение различных тканей, изъятых из трупа, для проведения дальнейших исследований. Применяемые в настоящее время растворы для фиксации в своем составе имеют формалин в различных концентрациях, который обладает сильной бактерицидной способностью, дубящим эффектом, относительной дешевизной, удобством хранения и транспортировки. Наряду с перечисленными преимуществами формалин имеет и ряд недостатков:
- угнетает обмен веществ, в первую очередь витамина С, и инактивирует ферменты в органах и тканях человека, работающего с данным раствором;
- летуч, имеет резкий запах, пары которого вызывают раздражение слизистых оболочек, сухость при непосредственном контакте с ним в практике;
- обладает мутагенным свойством;
- биологические объекты, зафиксированные формалином, теряют подвижность и эластичность, меняют прижизненную окраску из-за перехода гемоглобина крови в метгемоглобин;
- при длительном хранении в растворе, содержащем один формалин, органы покрываются плесенью;
- токсичен;
- формалин следует хранить в защищающих от света коричневых склянках и при температуре не ниже 90, иначе постепенно образуется белый осадок.
Другим, часто используемым консервирующим средством, в настоящее время является 40-70% спирт, обладающий хорошим бактерицидным действием и сохраняющий естественный цвет органов и тканей. Однако спирт относится к дорогостоящим консерван-
там и нередко используется не по назначению.
В 1996 году, 128 лет спустя после открытия формалина, стали применять тромболитик СОМРЬиСАЭ, который обладает огромным восстанавливающим действием на трупы, находящиеся в сильной стадии гнилостного разложения. Он полностью исключает применение формалина, превосходит по своим действиям его 10%-ный раствор, повышает качество биологического материала, является экологически чистым продуктом, но авторы не раскрывают его состав, и поэтому СОМРЬиСАБ не может быть использован нами на данном этапе.
В последнее время активно, особенно в Германии, используется метод пластинации для предохранения скоропортящихся биологических образцов, особенно мягких - таких, как сердце, печень, легкие, почки, мозг. Для пластинации применяется полимерная смола под общим названием БИОДАР, а сам метод выполняется в несколько этапов: фиксации, дегидратации, форсированного пропитывания и консервации. Пластинация не исключает применение формальдегида и требует специального технического оборудования.
С нашей точки зрения оптимальное сохранение трупного материала должен обеспечить консервант, обладающий способностью ингибировать ферментную активность протеаз не только клеток консервируемых объектов для предотвращения аутолиза, но ферментных систем микроорганизмов для предупреждения бактериальной инвазии. При рассмотрении данной задачи с такой точки зрения появляется неочевидный путь ее решения - ингибирование ферментных систем микроорганизмов и самих ферментов. Известно, что в биотехнологии подобное ингибирование активности ферментов осуществляется при помощи катионов тяжелых металлов - таких, как Н^, Си и т.д., либо анионов, например, с использованием цианидов, азидов и т.д.
Исходя из этого нами проведено сравнительное исследование различных консервирующих растворов, включая фиксирующие жидкости с ингибиторами ферментных клеточных систем.
Материалы и методы
Исследовался трупный секционный материал некоторых человеческих органов (печень, почка, сердце, легкое), фиксация которых осуществлялась не позднее суток после смерти. При консервации использовали следующие растворы: 10% формалин, физиологический раствор с содержанием Си+2, физиологический раствор с содержанием Сг+3, физиологический раствор с содержанием ^+2, физиологический раствор с содержанием азидных производных в следующем процентном содержании: 0,05%, 0,1%, 0,3%,
0,5% растворы.
При оценке качества консервации учитывались: изменения консистенции, прочности и цвета тканей, сохранность гистологических структур и рост микроорганизмов в консерванте.
Сроки консервации в данных растворах - 30, 60,90 и 120 дней без замены растворов.
Органы в физиологическом растворе с азидными производными сохранили прижизненную окраску, форму и консистенцию, а ткань легкого не утрачивала своей воздушности на протяжении указанных сроков фиксации.
Органы из раствора, содержащего Си+2, имели плотную консистенцию, грязно-серый цвет с голубым оттенком, умеренную прочность при механическом воздействии уже на 7 -й день фиксации. Через 120 дней других изменений с органами не произошло.
Органы из раствора, содержащего Сг+3, имели плотную консистенцию, серо-фиолетовую окраску, непрочность при механическом воздействии. На поверхности раствора наблюдали рост плесени на 14-й день, которая сохранялась и на более поздних сроках фиксации. Органы незначительно уменьшились в размерах.
Органы из раствора, содержащего ^+2, имели обычную плотность, бледно-коричневую окраску с розовым оттенком, на поверхности раствора наблюдали рост плесени на 14-й день. К 40-му дню плесень практически отсутствовала, но раствор оставался мутным и через 3 месяца фиксации.
Органы из раствора 10% формалина имели очень плотную консистенцию, грязно-бурый цвет уже к концу первого дня фиксации и оставались таковыми и через 120 дней.
При микроскопическом исследовании тканей, окрашенных гематоксилином-эозином, консервируемых в растворе 10% формалина, целостность клеточных структур сохранялась на протяжении всего срока фиксации. Ткани из растворов азидных производных имели поврежденную клеточную стенку через 60 дней фиксации, вследствие отсутствия дубящего эффекта азидных производных.
При проведении микробиологических посевов стандартных культур кишечной палочки, протея и золотистого стафилококка на среды Эндо, Плоскирева, ЖСА, МПА подтвердилось наличие дезинфицирующих способностей растворов азидных производных даже при пятикратном их разведении в стерильном физиологическом растворе. Учет результатов проводили ежедневно, предварительно выдерживая чашки с посевами в термостате при температуре 370.
Заключение
В результате проведенных исследований установлено, что азидные производные обладают достаточными антибактериальными свойствами, обусловленными воздействием анионов и катионов тяжелых металлов на кофакторы ферментов протеаз клеток фиксируемых органов с образованием устойчивых комплексов. Противомикробное же действие формалина объясняется тем, что он присоединяется к аминогруппам белков и вызывает их денатурацию и уже через 6 часов у консервируемых органов возникает изменение окраски ткани [Уокер Д.Ф., 1957 (5)].
Кроме того, в отличие от формалина, растворы
азидных производных не летучи, при непосредственном контакте с кожей рук не оказывают дубящего эффекта.
Азидные производные экономически выгоднее в несколько раз растворов 10% формалина и могут транспортироваться также в сухом виде, не имея температурных ограничений.
Результаты исследований также представляют определенный интерес в решении проблемы конверсии оборонной промышленности, в которой азидные производные достаточно интенсивно используются.
Список литературы:
1. Привес М.Г. Методы консервирования анатомических препаратов. - Л.: Медгиз.1956.
2. Вишневский Б.Н., Жиров Е.В. Анатомические коллекции кунсткамеры. - Л., 1934.
3. Кузнецов Л.Е., Хохлов В.В., Фадеев С.П., Ши-геев В.Б.. Бальзамирование и реставрация трупов: Руководство.- Москва, 1999. - 496 с.
4. Неницеску К. Общая химия. Издательство "Мир". - Москва, 1968.
5. Уокер Д.Ф. Формальдегид. - М.: ГСНТИ, 1957, -с.608.
6. Бектемирова Р.М., Меркурьева РВ.. Отдаленные эффекты формальдегида // Г игиена и Санитария.
- 1990, - №4. - С. 36 - 39.
Summary
O.O. Zaitseva, A.G. Meshandin, S.P. Ashikhmin, P.G.
Rasputin NEW METHOD OF FIXATION OF ANATOMICAL MATERIALS
Kirov State Medical Academy
Methods of cadaveric tissues conservation were analysed in historical aspect. Separate cadaveric organs and whole dead bodies were studied. Causes of destruction of dead bodies tissues were analysed. Main attention was paid to activity of different enzymes including proteolytic enzymes and systems of destruction of microorganisms. The study was performed in order to substitute formaldehyde and concervation materials made on its basis. New conservation preparations of non-organic nature were developed. These preparations reliably inhibit enzyme systems of microorganisms. They are thought to be much more effective in the conditions of conservation of dead bodies tissues and some human organs.
