CC BY
35
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
значение так называемые непатогенных видов иер-синий остается неясным, несмотря на то, что они могут обладать некоторыми факторами патогенно-сти и выделяться из клинического материала. Цель работы заключалась в определении молекулярно-генетических характеристик бактерий рода Yersinia, циркулирующих на территории Якутии. Методы исследования — бактериологический, молекулярно-генетические. Установлено, что изоляция иерсиний на территории Якутии характеризуется цикличностью, при этом резервуарная роль принадлежит мышевидным грызунам. Циркулирующие штаммы Y. pseudotuberculosis серотипа О:1, содержат плаз-миду вирулентности pYV и хромосомный ген суперантигена YPMa/c. Также показана циркуляция штаммов Y. enterocolitica различных био- и сероти-пов, в том числе патогенных серотипа О:3 биотипа 4 и серотипа О:9 биотипа 2, содержащих гены плазми-ды вирулентности pYV, хромосомные гены: адгезии-инвазии ай, термостабильного энтеротоксина ystA. Установлено также, что циркулирующие в данном регионе штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А серо-типов 0:6,30; О:5; О:7,8, традиционно считающиеся непатогенными, содержат хромосомный ген термостабильного энтеротоксина ystB. Важной эпидемиологической особенностью иерсиниозов на территории Якутии является выделение от больных ОКЗ и грызунов нескольких культур Y. kristensenii, считающихся непатогенными. Ранее на основе gyrB-генотипирования нами установлено, что штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А на общем филогенетическом дереве иерсиний формируют собственную ветвь в подвиде Y. enterocolitica subsp. enterocolitica. Кроме того, внутри видов Y. frederiksenii, Y. kristensenii и Y. mollaretii показатель дивергенции был значительно выше по сравнению с остальными видами иерсиний. Предположительно это может указывать, с одной стороны, на присутствие новых видов, формирующихся под влиянием разных экологических условий, с другой — на ошибки в фенотипической идентификации. Таким образом, установлена циркуляция различных видов Yersinia в условиях вечной мерзлоты. Необходимы дальнейшие исследования для изучения патогенного потенциала иерсиний, циркулирующих на территории Якутии, и возможной роли непатогенных иерсиний в качестве этиологических агентов.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ГНОЙНЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ МЕНИНГИТОВ НЕМЕНИНГОКОККОВОЙ ЭТИОЛОГИИ В МОСКВЕ ЗА 2002-2010 гг.
Л.В. Спирихина1, И.М. Закроева1, И.С. Королева1, И.Н. Лыткина2, А.П. Пяева2
ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва; 2Территориальное Управление Роспотребнадзора по г. Москве
За период 2002—2010 гг. в Москве, на фоне снижения заболеваемости генерализованными формами менингококковой инфекции (ГФМИ), отмечалась тенденция роста случаев заболеваний гнойными бактериальными менингитами неменингококковой этиологии (НГБМ).
Этиологическая структура НГБМ за анализируемый период была относительно стабильной: основными возбудителями являлись Str. pneumoniaе
(58,5%) и H. influenzae тип b (25%), а второстепенными — Staph. aureus (7,5%), Str. группы В (4,6%) и L. monocitogenes (4,5%). Вместе с тем, несмотря на лидирующую позицию пневмококка, можно отметить, что в последние годы отмечается тенденция к снижению пневмококковых менингитов и тенденция к увеличению гемофильных (Hib) менингитов.
Одним из принципиальных отличий бактериальных менингитов различной этиологии являлась взаимосвязь с возрастом, которая выражалась типичным для каждого этиологического агента возрастным распределением. Так, заболевания НГБМ, вызванные пневмококками, листериями и стафилококками отмечались среди взрослых, процент которых в зависимости от этиологии НГБМ составил: 79% (Str. pn.), 83% (L. mon.) и 84% (Staph. aur.). В противоположность «взрослым», «детскими» менингитами, обусловленными H. influenzae тип b, заболевали дети < 1 года до 4 лет (88,9%), а при менингите, вызванном Str. гр. В — почти исключительно новорожденные (88%).
Средний показатель летальности по группе НГБМ составлял 12,5%. Максимальные показатели отмечались при менингитах пневмококковой и ли-стериозной этиологии — 27,1 и 27,3%. Гемофильные менингиты характеризовались наименьшим показателем летальности — 2,7%.
Сезонная динамика случаев неменингококковых менингитов в Москве не имела выраженного характера и в целом носила волнообразный характер с небольшой амплитудой повышения и снижения числа заболеваний.
Анализируя роль социального статуса в формировании общей заболеваемости ГБМ неменингокок-ковой этиологии среди населения Москвы можно отметить преобладание неорганизованных лиц, которые вне зависимости от этиологии ГБМ составили в среднем 80% от числа всех заболевших.
НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА КИШЕЧНИКА КАК РЕЗЕРВУАР ГЕНОВ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ
Л.В. Сужаева, М.А. Макарова, И.В. Овсянникова
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
Широкое распространение микроорганизмов, устойчивых к антибактериальным препаратам, не только среди признанных возбудителей ОКИ, но и среди микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору человека и животных, требует изучения механизмов возникновения и распространения резистентности, а также внедрения эффективной системы контроля, ограничивающей циркуляцию устойчивых штаммов. Эшерихии являются постоянными обитателями кишечника человека и животных и могут служить постоянным резервуаром детерминант резистентности, расположенных на хромосоме или в составе мобильных генетических элементов. В этих условиях попадающий в организм возбудитель ОКИ, изначально чувствительный к антибиотикам, может приобрести гены резистентности, что приведет к формированию устойчивого штамма. Это значительно осложняет проведение адекватной антимикробной терапии, а также способствует дальнейшему распространению возникшего резистентного штамма возбудителя.
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
При изучении чувствительности к антибиотикам 352 штаммов E. coli, выделенных из кишечника здоровых лиц, устойчивыми к одному или нескольким препаратам оказались 47,2% штаммов. Отмечена резистентность к антибактериальным препаратам различных групп: бета-лактамам, аминогликози-дам, хинолонам и фторхинолонам, тетрациклинам, нитрофуранам, ко-тримоксазолу и лорамфениколу. Частота выявления устойчивых штаммов варьировала от 0,9% (нитрофураны) до 38,6% (ампициллин). Все штаммы оставались чувствительными к карба-пенемам (меропенему), амикацину и фосфомицину. Резистентность к цефалоспоринам расширенного спектра выявлена у 9,7% штаммов, и была обусловлена продукцией бета-лактамаз расширенного спектра, преимущественно СТХ-М класса. Среди изученных штаммов выявлена устойчивость к препаратам группы хинолонов: доля штаммов, резистентных к не-фторированным хинолонам (налидиксовой кислоте) составляла 11,9%, устойчивых к фторхинолонам (ци-профлоксацин) — 2,3%. Таким образом, у значительной части эшерихий — представителей нормальной микрофлоры кишечника, выделенных от здоровых лиц, была обнаружена устойчивость к препаратам, используемым при лечении острых кишечных инфекций (хинолоны и цефалоспорины).
Наличие резистентных штаммов эшерихий в составе нормальной микрофлоры кишечника человека является нежелательным, но практически неизбежным следствием широкого использования антибактериальных препаратов в медицине и сельском хозяйстве.
ЭУКАРИОТИЧЕСКИЕ МИШЕНИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ ГЛЮКОЗИЛТРАНСФЕРАЗЫ LEGIONELLA PNEUMOPHILA
Д.И. Тартаковская
ФГБУ «НИИЭМим. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития России, Москва
Legionella pneumophila — грамотрицательная бактерия и возбудитель легочного заболевания человека — легионеллеза (болезни легионеров). L. pneumophila является внутриклеточным патогеном и адаптирует внутреннюю среду эукариотиче-ской клетки для своей жизнедеятельности путем синтеза многочисленных бактериальных токсических белков — эффекторов, транспортируемых в цитоплазму клетки мишени при помощи так называемой «системы секреции 4 типа». Одним из наиболее изученных эффекторов L. pneumophila является впервые описанная нами глюкозилтранс-фераза Lgt1, останавливающая синтез белка в эука-риотической клетке и обладающая, в связи с этим, цитотоксической активностью. Ранее нами было установлено, что данный фермент модифицирует два субстрата, принимающих участие в трансляционных процессах эукариотических клеток — фактор элонгации 1А (eEF1A) и структурно-родственный ему белок Hbs1. В связи с этим мы поставили задачу выяснить, глюкозилирование какого белка — eEF1A или Hbs1 приводит к гибели клетки мишени. Для решения этой задачи нами были сконструированы два генетически-измененных штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Один содержал му-тантный, неподверженный модификации вариант фактора элонгации 1А, тогда как другой не содер-
жал белка Hbs1. Оба штамма, а также контрольный штамм S. cerevisiae дикого типа, были трансформированы плазмидой, содержащей ген глюкозил-трансферазы Lgt1 легионелл. Индукция гена lgt1 приводила к гибели как штамма дрожжей дикого типа, так и штамма, не продуцирующего Hbs1. В тоже же время штамм S. cerevisiae, содержащий неглюкозилируемый вариант eEF1A оставался жизнеспособным. Таким образом, проведенная группа экспериментов свидетельствует о том, что модификация фактора элонгации 1А играет основную роль в токсическом действии Lgt1 на эукариотические клетки.
ОСОБЕННОСТИ ВОССТАНОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ БИОПЛЕНОК ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИБИОТИКОВ
В.В. Тец, Н.К. Артеменко, Н.В. Заславская, Г.В. Тец
ГБОУ ВПО Минздравсоцразвития РФ: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург
Бактериальные биопленки формируются в ходе различных инфекций. Свойства биопленок значительно изменяются на фоне приема антибиотиков. Восстановление биопленок после отмены антибиотиков, остаются неизученными, что стало объектом настоящей работы.
Методы. Использованы Staphylococcus aureus VT-209, Escherichia coli ATCC 25922. Жизнеспособность бактерий оценивали, определяя число ко-лониеобразующих единиц (КОЕ). Биопленки получали в 96 луночных планшетах. Бактерии биопленок отделяли от матрикса трехкратным центрифугированием. Оптическую плотность клеточной части бактериальных биопленок определяли спектрофотометрически (SmartSpec Plus, Bio-Rad). Антибиотики — Левофлоксацин (Sigma), азитро-мицин (Pfizer).
Результаты. Инкубация в присутствии антибиотиков приводила к определенным изменениям свойств биопленок. Биомасса биопленки, отражающая количество клеток и внеклеточного ма-трикса, после воздействия антибиотиков изменялось у всех исследованных штаммов. В биопленках E coli снижение биомассы было незначительно, и мало отличалось после воздействия левофлокса-цина или азитромицина. В биопленках S. aureus ле-вофлоксацин и азитромицин вызывали значительное снижение биомассы. Полученные результаты, свидетельствуют, что обработка сформированных биопленок левофлоксацином и азитромицином не приводит к гибели биопленки, но вызывает изменения ее свойств, проявляющееся снижением биомассы, числа КОЕ и количества клеток, выявляемых спектрофотометрически. Инкубация биопленок в течение 168 часов после воздействия антибиотиков показала, что большая часть изменений биопленки исчезает, и исследованные показатели соответствуют контрольным пробам. Стойко сохраняется только снижение биомассы клеток, возникающее в биопленках стафилококка и кишечной палочки.
Обсуждение. Азитромицин и левофлоксацин в количестве 10 МПК не вызывают гибель биопленок испытанных штаммов. Возникающие при этом изменения имеют схожий характер у неродственных
