CC BY
0
© Коллектив авторов, 2024
Свистушкин В.М.1, Никифорова Г.Н.1, Деханов А.С.1, Дагиль Ю.А.2' 3, Второва Ю.А.1, Гусева Н.А.4, Воробьева Н.В.5, Пинегин Б.В.2
Нейтрофильные внеклеточные ловушки в слизистой оболочке околоносовых пазух у пациентов с хроническим риносинуситом без полипов
1 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства, 115522, г. Москва, Российская Федерация
3 Общество с ограниченной ответственностью «НПО Петровакс Фарм», 142143, г. Подольск, село Покров, Российская Федерация
4 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация
5 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова», 119991, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Хронический риносинусит (ХРС) является одним из наиболее распространенных патологических процессов в структуре ЛОР-патологии. Хроническое течение этого заболевания проявляется стойким воспалением слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух, часто обусловленным наличием нескольких этиопатогенетичес-ких факторов, что существенно усложняет выбор тактики лечения. В последние годы накапливается все больше данных о роли нейтрофилов и, в частности, такого механизма иммунного ответа, как образование нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ), в формировании заболеваний верхних и нижних отделов дыхательных путей.
Цель - изучение воспалительных изменений, связанных с НВЛ и процессами НЕТоза, в слизистой оболочке околоносовых пазух у пациентов с ХРС без полипов.
Материал и методы. В исследование включены 60 пациентов с диагнозом ХРС без полипов и 15 пациентов группы сравнения без риносинусита с показаниями к хирургическому лечению по поводу другой ЛОР-патологии. У всех участников исследования проводилось изучение слизистой оболочки околоносовых пазух с использованием иммуно-гистохимического анализа.
Результаты. В представленной работе описаны результаты иммуногистохимичес-кого анализа распространения НВЛ и интактных нейтрофилов в слизистой оболочке полости носа и околоносовых пазух у пациентов с ХРС без полипов и здоровых доноров. В результате проведенного исследования было выявлено скопление НВЛ и нейтро-филов на стадии образования НВЛ (нетотические нейтрофилы) в гистологическом материале воспаленной слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с ХРС без полипов и их отсутствие у здоровых доноров (р < 0,001).
Заключение. Данные, полученные в представленной работе, могут способствовать расширению и переориентации существующей терапии ХРС без полипов с целью подавления активированных нейтрофилов, в частности НВЛ.
Ключевые слова: хронический риносинусит; нейтрофилы человека; нейтрофильные внеклеточные ловушки; НЕТоз
Статья получена 07.10.2024. Принята в печать 13.11.2024.
Для цитирования: Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Деханов А.С., Дагиль Ю.А., Второва Ю.А., Гусева Н.А., Воробьева Н.В., Пинегин Б.В. Нейтрофильные внеклеточные ловушки в слизистой оболочке околоносовых пазух у пациентов с хроническим риносинуситом без полипов. Иммунология. 2024; 45 (6): 731-741. Б01: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-6-731-741
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Ю.А. Дагиль является сотрудником ООО «НПО Петровакс Фарм».
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Воробьева Н.В.; сбор и обработка материала - Деханов А.С., Дагиль Ю.А., Воробьева Н.В.; статистическая обработка - Деханов А.С., Гусева Н.А.; написание текста - Воробьева Н.В., Деханов А.С.; редактирование - Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Пинегин Б.В.
Для корреспонденции
Деханов Артем Сергеевич -аспирант кафедры болезней уха, горла и носа, ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0549-898X
Svistushkin V.M.1, Nikiforova G.N.1, Dekhanov A.S.1, Dagil Yu.A.2 3, Vtorova Yu.A.1, Guseva N.A.4, Vorobjeva N.V.5, Pinegin B.V.
Neutrophil extracellular traps in the sinus mucosa in patients with chronic rhinosinusitis without polyps
1 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University), 119991, Moscow, Russian Federation
2 National Research Center - Institute of Immunology, Federal Medical-Biological Agency, 115522, Moscow, Russian Federation
3 Limited Liability Company RPC Petrovax Pharm, 142143, Podolsk, Pokrov village, Russian Federation
4 N.I. Pirogov Russian National Research Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation
5 M.V. Lomonosov Moscow State University, 119991, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. Chronic rhinosinusitis (CRS) is one of the most common pathological processes in the structure of ENT pathology. The chronic course of this disease is manifested by persistent inflammation of the mucous membrane of the nasal cavity and paranasal sinuses, often due to the presence of several etiopathogenetic factors, which significantly complicates the choice of treatment tactics. In recent years, more and more data have been accumulated on the role of neutrophils and, in particular, such an immune response mechanism as the release of neutrophil extracellular traps (NETs) in the development of diseases of the upper and lower respiratory tract.
Aim - to study inflammatory changes associated with NETs and the processes of NETosis in the mucous membrane of the paranasal sinuses in patients with CRS without polyps.
Material and methods. The study included 60 patients diagnosed with CRS and 15 patients of comparison group without rhinosinusitis who were recommended for surgical treatment because of another ENT pathology. All participants of the study were examined for the mucous membrane of the paranasal sinuses using immunohistochemical analysis.
Results. The presented work describes the results of immunohistochemical analysis of distribution of NETs and intact neutrophils and in the mucous membrane of the nasal cavity and paranasal sinuses in patients with CRS without polyps and healthy donors. The study revealed accumulation of NETotic and intact neutrophils in the histological material of the inflamed mucous membrane of the paranasal sinuses of patients with CRS without polyps and their absence in healthy donors (p < 0.001).
Conclusion. The data obtained in the presented study may contribute to the expansion and reorientation of existing therapy of CRS without polyps in order to suppress activated neutrophils, in particular, NETs.
Keywords: chronic rhinosinusitis; human neutrophils; neutrophil extracellular traps; NETosis
Received 07.10.2024. Accepted 13.11.2024.
For citation: Svistushkin V.M., Nikiforova G.N., Dekhanov A.S., Dagil Yu.A., Vtorova Yu.A., Guseva N.A., Vorobjeva N.V., Pinegin B.V. Neutrophil extracellular traps in the sinus mucosa in patients with chronic rhinosinusitis without polyps. Immunologiya. 2024; 45 (6): 731-41. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-6-731-741 (in Russian)
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. Dagil Yu.A. is an employee of RPC Petrovax Pharm LLC.
Authors' contribution. Study concept and design - Svistushkin V.M., Nikiforova G.N., Vorobjeva N.V.; data collection and processing - Dekhanov A.S., Dagil Yu.A., Vorobjeva N.V.; statistical processing - Dekhanov A.S., Guseva N.A.; text writing - Vorobjeva N.V., Dekhanov A.S.; editing - Svistushkin V.M., Nikiforova G.N., Pinegin B.V.
For correspondence
Artem S. Dekhanov -Postgraduate student of the Department of Ear, Throat and Nose Diseases, I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0549-898X
Введение
Хронический риносинусит (ХРС) представляет собой заболевание, характеризующееся стойкими воспалительными изменениями слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух, сохраняющимися более 12 нед. Для подтверждения диагноза ХРС необходимо наличие характерных патоморфологических изменений, подтвержденных эндоскопическими или рентгено-
логическими методами, включая компьютерную томографию (КТ) [1, 2]. Этиология ХРС в настоящее время неясна, однако имеются убедительные доказательства того, что хронизации воспаления слизистой оболочки околоносовых пазух способствует нарушение регуляции врожденного и адаптивного иммунитета [3]. Характерной особенностью ХРС является снижение иммунного барьера, включающее повышение проницаемости
эпителия, что облегчает проникновение патогенов через эпителий слизистой оболочки, способствует привлечению иммунных клеток благодаря активации адгезионных молекул на эпителии и продукции ими воспалительных хемокинов [4].
ХРС на основании эндоскопических данных делится на два типа: ХРС без полипов и ХРС с полипами [5]. Было показано, что для слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с ХРС без полипов характерны значительная инфильтрация ней-трофилами и высокая экспрессия цитокинов Thl-типа (ИФН-а), активирующих цитотоксические и воспалительные реакции. Что касается слизистой оболочки околоносовых пазух при полипозном риносинусите, здесь наблюдается неоднозначная инфильтрация клетками, зависящая от территории: в западной популяции преобладает инфильтрация ткани эозинофилами и экспрессия цитокинов Th2-rarn (ИЛ-4, -5, -13), а в азиатской доминирует инфильтрация нейтрофилами [5]. Исследования показали, что основным цитокином, ответственными за привлечение нейтрофилов в ткани в обоих типах ХРС, является ИЛ-8 [6]. Таким образом, обнаружение инфильтрации слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с ХРС нейтрофилами, основными клетками, ответственными за воспаление, позволяет предположить, что нейтрофилы могут выступать в качестве основного патологического фактора при ХРС без полипов [2]. Однако роль нейтрофи-лов в патогенезе ХРС до конца не определена.
Нейтрофилы представляют собой клетки врожденного иммунитета, обеспечивающие первую линию защиты от патогенов в очаге воспаления. Будучи «профессиональными» фагоцитами, нейтрофилы содержат в своих гранулах огромный антимикробный «арсенал», позволяющий им уничтожать патогены внутрикле-точно в процессе фагоцитоза. Бактерицидные ферменты также могут высвобождаться из клеток во время дегра-нуляции. Наконец, существует еще один антимикробный механизм, который заключается в высвобождении нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ), состоящих из деконденсированного ядерного хроматина, «украшенного» бактерицидными белками гранул, ядра и цитоплазмы [7]. Поскольку при образовании НВЛ нейтрофилы утрачивают свою жизнеспособность, B.E. Steinberg и S. Grinstein в 2007 г. назвали такую форму клеточной гибели нейтрофилов НЕТозом (от англ. NETs -Neutrophil Extracellular Traps) [8]. Образование НВЛ может быть индуцировано большим количеством разнообразных физиологических стимулов, таких как бактерии, грибы, простейшие, вирусы, компоненты бактериальной клеточной стенки (липополисахариды), антитела и иммунные комплексы, цитокины и хемокины (ИЛ-8, ФНОа, ИЛ-1Р), микрокристаллы, кальциевые и калиевые ионофоры, а также фармакологическими стимулами (форбол-миристат-ацетат, ФМА) [9-14]. Механизм действия НВЛ на патогены связан с ограничением их распространения из очага воспаления, а в некоторых случаях с их уничтожением [7].
Однако впоследствии было обнаружено, что, помимо защитной функции, НВЛ играют важную роль в патогенезе аутоиммунных и воспалительных заболеваний [10, 12]. Кроме того, НВЛ могут оказывать прямое цито-токсическое действие на клетки хозяина. Так, цитоток-сический эффект НВЛ был показан на легочном эпителии и эндотелиальных клетках, а также была обнаружена корреляция между интенсивностью образования НВЛ и тяжестью таких заболеваний, как астма и хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) [15-17]. По аналогии можно предположить, что НВЛ также могут участвовать в патогенезе ХРС. Однако до настоящего времени не получено убедительных данных, указывающих на этиологическую роль НВЛ в развитии и поддержании ХРС.
Подавляющее большинство работ, посвященных ХРС, было выполнено на нейтрофилах, выделенных из назальных смывов и периферической крови. Однако крайне мало исследований проведено на срезах слизистой оболочки околоносовых пазух больных ХРС. В связи с этим наша работа, включившая большой объем экспериментального материала, является уникальным исследовательским трудом.
Ранее с использованием иммуноферментного анализа и окрашивания двуспиральной ДНК с использованием тест-системы Quant-IT Picogreen мы показали, что у пациентов с ХРС без полипов количество НВЛ в назальных смывах и венозной крови достоверно выше по сравнению с группой сравнения без ХРС (добровольцами) [18]. В настоящей работе исследовано распространение НВЛ и нейтрофилов на стадии образования НВЛ (нетотические нейтрофилы) в слизистой оболочке околоносовых пазух пациентов с ХРС без полипов и здоровых доноров с использованием иммуногистохи-мического анализа.
Материал и методы
Участники исследования. В ходе научно-исследовательской работы, проведенной на кафедре болезней уха, горла и носа ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский Университет) Минздрава России с 2020 по 2023 г., были обследованы 60 пациентов с диагнозом ХРС (диагнозы соответствовали международной классификации болезней МКБ 10 J32.0-J32.9) -основная группа и 15 пациентов без риносинусита с показаниями к хирургическому лечению по поводу другой патологии ЛОР-органов (группа сравнения).
Все исследования с биоматериалом проводили в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации 2000 г. и протоколом Конвенции Совета Европы о правах человека и биомедицине 1999 г. Образцы ткани были получены с добровольного согласия пациентов и доноров в ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет). Проведение исследовательской работы одобрено локальным этическим комитетом ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет) (протокол №02-20 от 05.02.2020).
В основную группу были включены пациенты с подтвержденным ХРС без полипов на основании жалоб, анамнеза, данных эндоскопии и КТ-диагностики. У пациентов данной группы частота обострений составляла не менее 3-4 раз в год, купирование которых проводилось с помощью комплексной: антибактериальной, мукоактивной, ирригационно-элиминационной, интраназальной стероидной (ИнГКС) терапии. После устранения признаков обострения ХРС пациенты основной группы включались в исследование не ранее чем через 1 мес.
В группу сравнения без риносинусита с показаниями к хирургическому лечению по поводу иной патологии ЛОР-органов были включены 15 человек без сопутствующих воспалительных заболеваний. Причинами хирургического вмешательства были искривление перегородки носа, увеличение носовых раковин, дополнительных соустий верхнечелюстной пазухи в отсутствие синусита.
У всех пациентов с ХРС после хирургического лечения (n = 60) забор гистологического материала (воспаленной слизистой оболочки) проводился интра-операционно. Взятие биоматериала осуществлялось из медиальной стенки верхнечелюстной пазухи при наличии воспалительных изменений, подтвержденных как эндоскопически, так и результатами компьютерной томографии (КТ). У пациентов без риносинусита (n = 15) проводился забор гистологического материала (слизистой оболочки без воспалительных изменений) интраоперационно, во время эндоскопического вмешательства на околоносовых пазухах. Взятие материала осуществлялось из медиальной стенки верхнечелюстной пазухи при отсутствии воспалительных изменений, подтвержденных как эндоскопически, так и результатами КТ, что соответствовало месту забора материала у пациентов из группы с ХРС.
Лабораторные исследования. Наличие и количество НВЛ/нетотических нейтрофилов оценивали с помощью трехцветного иммунофлуоресцентного окрашивания компонентов НВЛ, практически впервые использованного в системе in vivo на залитых в парафин образцах ткани слизистой оболочки пациентов с ХРС без полипов и здоровых доноров [19]. Биоптат для иммуногистохимического анализа готовили в соответствии с методикой Абед и Бринкманн [19], кратко описанной ниже.
Биоптат рассекали скальпелем на кусочки размером 20 х 30 х 3 мм. Образцы фиксировали в 2 % параформ-альдегиде, обезвоживали в последовательных разведениях этанола и заливали в парафин. После затвердевания парафина готовили срезы толщиной 3 мкм, которые переносили на поверхность предметного стекла и инкубировали в течение ночи при температуре 40 оС для лучшего сцепления парафина со стеклом. Стекла со срезами депарафинизировали в ксилоле и регидратировали в понижающих концентрациях этанола. Для предотвращения неспецифического связывания проводили инкубацию во влажной камере с блокирующим буфером при комнатной температуре в течение 1 ч.
После удаления блокирующего буфера наносили первичные антитела: моноклональные кроличьи антитела против нейтрофильной эластазы (НЭ, Sigmа, США) и моноклональные куриные антитела против гистона (Н2В, Abcam, США).
После инкубации во влажной камере в течение ночи при комнатной температуре предметные стекла трижды промывали трис-буферным физиологическим раствором (TBS) и наносили вторичные антитела в блокирующем буфере - поликлональные антитела осла против кроличьих антител, конъюгированные с Cy2 (Immuno-Research Lab., США), поликлональные антитела осла против куриных антител, конъюгированные с Cy3 (Jackson ImmunoResearch Lab., США). Инкубация продолжалась во влажной камере при комнатной температуре в течение 1 ч. На этой стадии ДНК окрашивали флуоресцентным красителем Hoechst 33342 (bisBenzimide, ПанЭко, РФ). Предметные стекла со срезами трижды промывали в ТВ S и 1 раз в дистиллированной воде, далее погружали в Mowiol 4-88.
Клетки анализировали с использованием флуоресцентного микроскопа Leica DM LB (Leica Microsystems, Германия), а фотографирование проводили с помощью камеры Leica DC300F (Leica Microsystems, Германия).
Дифференциацию интактных (неактивированных) нейтрофилов и НВЛ (нейтрофилов на стадии НЕТоза) проводили на основании следующего критерия. В неактивированных нейтрофилах гистон Н2В локализуется исключительно в ядрах, тогда как НЭ концентрируется в азурофильных гранулах, расположенных в цито-золе клетки. Следовательно, флуоресцентное свечение, полученное от этих белков после их связывания с моно-клональными антителами (первичные), а затем с поли-клональными антителами (вторичные), меченными флуоресцентными метками, не должно перекрываться. Однако при активации НЕТоза, конечным продуктом которого является деконденсированный ядерный хроматин с адгезированными к нему бактерицидными белками, в частности с гистонами и НЭ, флуоресцентное свечение от антител против НЭ, Н2В, а также ДНК частично перекрывается. Тогда красное (Н2В), зеленое (НЭ) и голубое (ДНК) свечение при наложении должно отображаться в виде беловатого цвета.
Для каждого образца ткани подсчитывали количество НВЛ/нетотических нейтрофилов и интактных ней-трофилов в каждом поле зрения, суммарные данные выражали в виде гистограмм.
Стастистическая обработка. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программного обеспечения R (версия 4.0.4). Количественные данные по нейтрофилам представляли в виде медианы и межквартильного размаха [Me (25, 75)]. Для определения достоверности межгрупповых различий использовали ^/-критерий Манна-Уитни. Различия величин оценивались как значимые при p < 0,05.
Результаты
В представленной работе впервые проведено масштабное иммуногистохимическое исследование образцов ткани с использованием большого объема экспериментального материала с целью морфологической оценки распределения нетотических и интактных ней-трофилов в слизистой оболочке околоносовых пазух у больных ХРС без полипов и у здоровых доноров.
В работе было проанализировано 60 образцов ткани слизистой оболочки околоносовых пазух, полученных от пациентов с ХРС без полипов вне обострения, и 15 образцов донорской ткани. В соответствии с демографическими параметрами (пол, возраст) группы были сравнимы между собой.
На основании наложения трех цветов (красного, зеленого и синего, обозначенных белыми стрелками), приводящего к беловатому свечению, мы обнаружили большое скопление нейтрофилов в состоянии НЕТоза в образцах тканей слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с ХРС (рис. 1А-Г). Также было показано наличие интактных нейтрофилов, не подвергшихся НЕТозу, при окрашивании которых все три цвета были пространственно разделены (обозначены красными стрелками).
Следует отметить, что нетотические нейтрофилы в ткани имели облакоподобную морфологию, тогда как при НЕТозе, индуцированном в системе in vitro таким фармакологическим активатором, как ФМА, обнаруживались более вытянутые в пространстве хроматиновые нити. Это может быть связано с пространственным ограничением, с которым нейтрофил, окруженный плотным слоем стромальных клеток, сталкивается в ткани.
В подавляющем большинстве образцов ткани НВЛ и интактные нейтрофилы локализовались в строме под утолщенным слоем клеток, представляющим собой пластинку слизистой оболочки (рис. 1Д). Полученные результаты подтверждают ранее опубликованные данные [20], что ХРС без полипов характеризуется распределением НВЛ в строме слизистой оболочки, тогда как полипозный риносинусит характеризуется распределением НВЛ в субэпителиальном пространстве и связан с наличием бактериальных биопленок.
Мы также проанализировали образцы тканей слизистой оболочки, полученные от здоровых доноров (рис. 2), в которых мы не обнаружили скопления нето-тических нейтрофилов или НВЛ. Однако в отдельных образцах наблюдались единичные неактивированные (интактные) нейтрофилы.
Нами было сопоставлено количество НВЛ/нетотиче-ских нейтрофилов в парафиновых срезах образцов слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с ХРС (n = 60) и здоровых доноров (n = 15). Результаты распределения представлены на рис. 3.
Обсуждение
В представленной работе с использованием иммуно-гистохимического метода впервые был проведен анализ большого количества образцов ткани слизистой обо-
лочки околоносовых пазух, полученных от пациентов с ХРС без полипов и здоровых доноров. Мы обнаружили значительное скопление НВЛ/нетотических нейтрофилов в гистологическом материале воспаленной слизистой пациентов с ХРС (см. рис. 1 и 3). Также было показано отсутствие скопления НВЛ в аналогичном материале здоровых доноров (см. рис. 2). Представленные результаты полностью подтверждают опубликованные ранее данные содержания НВЛ в крови и назальных смывах, полученные от пациентов с ХРС без полипов и доноров с помощью иммуноферментного анализа и окрашивания двуспиральной ДНК с использованием Quant-IT Picogreen [18].
Как уже упоминалось выше, именно у пациентов с ХРС без полипов наблюдается значительная инфильтрация слизистой оболочки околоносовых пазух нейтро-филами, что позволяет нам представить роль этих клеток как основного фактора патогенеза ХРС [2]. Помимо таких эффекторных функций, как фагоцитоз и деграну-ляция, обладают еще одним уникальным свойством -способностью выбрасывать ядерный деконденсиро-ванный хроматин или НВЛ в очаге воспаления с целью борьбы с патогенами [7]. Мы полагаем, что избыточное образование НВЛ при ХРС может быть ответом на инфекционный процесс, вызванный вирусной или бактериальной инфекцией, что приводит к сдерживанию распространения патогенов. В этом отношении образование НВЛ является функцией, полезной для хозяина.
Однако НВЛ могут вызывать также негативные эффекты в организме хозяина. Ранее было показано, что эпителий слизистой оболочки околоносовых пазух может вырабатывать хемокины в ответ на патогены, что способствует привлечению иммунных клеток в очаг воспаления и инициирует воспаление слизистой [4]. Как правило, хемокины СХС-семейства вызывают хемотаксис нейтрофилов, а хемокины СС-семейства - моноцитов и лимфоцитов [21]. Как недавно было показано в работе J.W. Hwang и соавт. [22], уровень хемокинов СХС-семейства, таких как GRO-a, ENA-78, GCP-2, ИЛ-8, CXCL2 и CXCL3, а также хемокинов СС-семейства -MCP-1, MIP-1a и эотаксина был повышен в эпителиальных клетках, стимулированных НВЛ или цитрул-линированным гистоном Н3. Подобного повышения не наблюдалось при инкубации клеток с супернатантами, полученными от нестимулированных нейтрофилов.
Таким образом, было продемонстрировано провос-палительное действие НВЛ на эпителиальные клетки, что способствовало дальнейшему привлечению нейтро-филов и других клеток благодаря секреции хемокинов. Аналогичное действие НВЛ оказывали на альвеолярные клетки линии А549 и бронхиальные эпителиальные клетки за счет активации образования в них ИЛ-8 и ИЛ-6, что приводило к усилению воспаления и стимуляции синтеза воспалительных медиаторов в эпителиальных клетках дыхательных путей [23]. Вместе с тем J. Hahn и соавт. [24] показали, что НВЛ способны расщеплять хемокины и приводить к разрешению воспаления после достижения ими критической плотности.
Гистон Н2В Совмещение
Рис. 1. Широкопольная флуоресцентная микроскопия парафиновых срезов слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с хроническим риносинуситом (ХРС) без полипов
На фотографиях показана область слизистой оболочки носовой пазухи, полученной от одного из 60 пациентов (n = 60) с ХРС без полипов и проанализированной с использованием иммуногистохимического метода. Окрашивание ДНК проводили с помощью Hoechst 33342 (А, голубое свечение). Нейтрофильную эластазу (НЭ) окрашивали с помощью первичных кроличьих антител кНЭ с последующим окрашиванием вторичными антителами осла против кроличьих антител, конъюгированных с Cy2 (Б, зеленое свечение). Гистон Н2В окрашивали с помощью первичных куриных антител против гистона Н2В с последующим окрашиванием вторичными антителами осла против куриных антител, конъюгированных с Cy3 (В, красное свечение). На (Г) представлено совмещение трех цветов. Белыми стрелками указаны нейтрофильные ловушки (НВЛ) и нетотические нейтрофилы, красными стрелками - интактные нейтрофилы. Объектив 20*. Можно видеть расположение НВЛ/нетотических нейтрофилов в строме под утолщенной пластинкой слизистой оболочки. На гистограмме (Е) представлено распределение НВЛ и интактных нейтрофилов в парафиновых срезах образцов слизистой оболочки носовых пазух пациентов с ХРС без полипов (n = 60).
Гистон Н2В Совмещение
0 -
Интактные Нетотические
нейтрофилы нейтрофилы и НВЛ
Рис. 2. Широкопольная флуоресцентная микроскопия парафиновых срезов слизистой оболочки околоносовых пазух доноров На фотографиях (А—Г) показана область слизистой оболочки околоносовой пазухи одного из 15 доноров (п = 15), в которой полностью отсутствуют нейтрофильные ловушки (НВЛ). Можно видеть небольшое количество интактных нейтрофилов (указаны красными стрелками). Окрашивание антителами соответствует показанному на рис. 1. Объектив 20х. На гистограмме (Д) представлено распределение НВЛ и интактных нейтрофилов в парафиновых срезах образцов слизистой оболочки носовых пазух доноров (п = 15).
о -
с а.
н us
<v
я t
X
s и
60 -
40 -
J
20 -
0 -
• • i • • • i* • •
Группа пациентов без ХРС
Группа пациентов с ХРС без полипов
Рис. 3. Распределение НВЛ/нетотических нейтрофилов в образцах парафиновых срезов слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с ХРС без полипов и здоровых доноров Медиана [МКИ] количества НВЛ/нетотических нейтрофилов в образцах парафиновых срезов слизистой оболочки околоносовых пазух у пациентов без ХРС составила 1 [0; 3], тогда как у пациентов с ХРС - 49,5 1 [44; 55]. Межгрупповое сравнение показало наличие статистически значимой разницы между числом нетотических нейтрофилов и НВЛ в гистологическом материале пациентов с ХРС (п = 60) и у пациентов безриносинусита (п = 15); *** - р < 0,001.
Известно также, что НВЛ могут оказывать прямое цитотоксическое действие на окружающие ткани. НВЛ усиливали симптомы бронхиальной астмы [25] и ХОБЛ [26] за счет повреждения эпителия дыхательных путей. Таким образом, подавление образования НВЛ может быть привлекательной стратегией для устранения их провоспалительных и цитотоксических эффектов, особенно при ХРС.
В недавно опубликованной нами работе [18] был показан положительный эффект азоксимера бромида («Полиоксидоний»), единственного иммунокорректора с детоксицирующими свойствами, обладающего противовоспалительным действием, на образование НВЛ у пациентов с ХРС без полипов. Результаты показали наличие статистически значимой разницы между количеством НВЛ до и после лечения азоксимера бромидом как в назальных смывах, так и в венозной крови у пациентов с ХРС. В настоящей работе также было изучено действие азоксимера бромида у нескольких пациентов с ХРС, принимавших препарат в предоперационном периоде. Мы получили благоприятную картину распределения НВЛ в образцах слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов. Однако из-за небольшого размера выборки результаты не являются статистически значимыми и не были представлены наглядно. Необходимы дальнейшие исследования для подтверждения противовоспалительного эффекта азоксимера бромида при ХРС.
Заключение
Таким образом, в представленной работе впервые на большом экспериментальном материале с использованием иммуногистохимического анализа и трехцветного иммунофлуоресцентного окрашивания показано скопление НВЛ/нетотических нейтрофилов в образцах ткани слизистой оболочки околоносовых пазух у пациентов с ХРС без полипов и их отсутствие в аналогичной ткани у здоровых доноров. Полученные результаты могут иметь важное значение для диагностики заболеваний верхних дыхательных путей, а также способствовать расширению существующей терапии хронического риносинусита без полипов с целью подавления активированных нейтрофилов, в частности НВЛ.
***
■ Литература
1. Вишняков В.В., Арефьева Н.А., Иванченко О. А. Хронический риносинусит. Патогенез, диагностика и принципы лечения. Клинические рекомендации. Под. ред. Лопатина А.С. Москва : Практическая медицина, 2014. 64 с. ISBN 978-5-98811-288-4.
2. Fokkens W.J., Lund V.J., Hopkins C., Hellings P.W., Kern R., Reitsma S., Toppila-Salmi S., Bernal-Sprekelsen M., Mullol J., Alobid I., Terezinha Anselmo-Lima W., Bachert C., Baroody F., von Buchwald C., Cervin A., Cohen N., Constantinidis J., De Gabory L., Desrosiers M., Diamant Z., Douglas R.G., Gevaert P.H., Hafner A., Harvey R.J., Joos G.F., Kalogjera L., Knill A., Kocks J.H. et al. European Position Paper on Rhinosinusitis and Nasal Polyps 2020. Rhinology. 2020; 58 (Suppl S29): 1-464. DOI: https://doi.org/10.4193/Rhin20.600
3. Hamilos D.L. Drivers of chronic rhinosinusitis: Inflammation versus infection. J. Allergy Clin. Immunol. 2015; 136 (6): 1454-59. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2015.10.011
4. Schleimer R.P., Freeland H.S., Peters S.P., Brown K.E., Derse C.P. An assessment of the effects of glucocorticoids on degranulation, chemo-taxis, binding to vascular endothelium and formation of leukotriene B4 by purified human neutrophils. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1989; 250 (2): 598605. PMID: 2547940.
5. Meltzer E.O., Hamilos D.L., Hadley J.A., Lanza D.C., Marple B.F., Nicklas R.A., Bachert C., Baraniuk J., Baroody F.M., Benninger M.S., Brook I., Chowdhury B.A., Druce H.M., Durham S., Ferguson B., Gwalt-ney J.M., Kaliner M., Kennedy D.W., Lund V., Naclerio R., Pawankar R., Piccirillo J.F., Rohane P., Simon R., Slavin R.G., Togias A., Wald E.R.,
Zinreich S.J.; American Academy of Allergy, Asthma and Immunology (AAAAI); American Academy of Otolaryngic Allergy (AAOA); American Academy of Otolaryngology - Head and Neck Surgery (AAO-HNS); American College of Allergy, Asthma and Immunology (ACAAI); American Rhinologic Society (ARS). Rhinosinusitis: establishing definitions for clinical research and patient care. J. Allergy Clin. Immunol. 2004; 114 (6 Suppl): 155-212. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jaci. 2004.09.029
6. Ural A., Tezer M.S., Yücel A., Atilla H., Ileri F. Interleukin-4, inter-leukin-8 and E-selectin levels in intranasal polyposis patients with and without allergy: a comparative study. J. Int. Med. Res. 2006; 34 (5): 520-4. DOI: https://doi.org/10.1177/147323000603400509
7. Brinkmann V., Reichard U., Goosmann C., Fauler B., Uhlemann Y., Weiss D.S., Weinrauch Y., Zychlinsky A. Neutrophil extracellular traps kill bacteria. Science. 2004; 303 (5663): 1532-35. DOI: https://doi. org/10.1126/science.1092385
8. Steinberg B.E., Grinstein S. Unconventional roles of the NADPH oxidase: signaling, ion homeostasis, and cell death. Sci. STKE. 2007; 2007 (379): pe11. DOI: https://doi.org/10.1126/stke.3792007pe11
9. Воробьева Н.В., Черняк Б.В. НЕТоз: молекулярные механизмы, роль в физиологии и патологии. Биохимия. 2020; 85 (10): 1383-97. DOI: https://doi.org/10.31857/S0320972520100061
10. Воробьева Н.В. Нейтрофильные внеклеточные ловушки: новые аспекты. Вестник Московского университета. Серия 16. Биология. 2020; 75 (4): 210-25. DOI: https://doi.org/10.3103/S0096392520040112
11. Vorobjeva N.V., Chelombitko M.A., Sud'ina G.F., Zinovkin R.A., Chernyak B.V. Role of Mitochondria in the Regulation of Effector Functions of Granulocytes. Cells. 2023; 12 (18): 2210. DOI: https://doi. org/10.3390/cells12182210
12. Pinegin B., Vorobjeva N., Pinegin V. Neutrophil extracellular traps and their role in the development of chronic inflammation and autoimmunity. Autoimmun. Rev. 2015; 14 (7): 633-40. DOI: https://doi. org/10.1016/j.autrev.2015.03.002
13. Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Воробьева Н.В., Деха-нов А.С., Дагиль Ю.А., Бредова О.Ю., Еремеева К.В. Нейтрофильные внеклеточные ловушки в патогенезе хронического риносинусита. Вестник оториноларингологии. 2021; 86 (6): 105-12. DOI: https://doi.org/ 10.17116/otorino202186061105
14. Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Воробьева Н.В., Деха-нов А.С. Внеклеточные ловушки как важная часть патогенеза при хроническом риносинусите. Consilium medicum. 2021; 23 (9): 395-99. DOI: https://doi.org/10.26442/20751753.202L9.201025
15. Saffarzadeh M., Juenemann C., Queisser M.A., Lochnit G., Bar-reto G., Galuska S.P., Lohmeyer J., Preissner K.T. Neutrophil extracellular traps directly induce epithelial and endothelial cell death: a predominant role of histones. PLoS One. 2012; 7 (2): e32366. DOI: https://doi. org/10.1371/journal.pone.0032366
16. Porto B.N., Stein R.T. Neutrophil Extracellular Traps in Pulmonary Diseases: Too Much of a Good Thing? Front. Immunol. 2016; 7: 311. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2016.00311
17. Pedersen F., Marwitz S., Holz O., Kirsten A., Bahmer T., Waschki B., Magnussen H., Rabe K.F., Goldmann T., Uddin M., Watz H. Neutrophil extracellular trap formation and extracellular DNA in sputum of stable COPD patients. Respir. Med. 2015; 109 (10): 1360-2. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.rmed.2015.08.008
18. Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Пинегин Б.В., Воробьева Н.В., Деханов А.С., Дагиль Ю.А., Миронова А.Р. Нейтрофильные внеклеточные ловушки как важная часть патогенеза хронического риносинусита без полипов. Consilium Medicum. 2024; 26 (9): 587-93. DOI: https://doi.org/10.26442/20751753.2024.9.202834
19. Abu Abed U., Brinkmann V. Immunofluorescence Labelling of Human and Murine Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embed-
ded Tissue. J. Vis. Exp. 2019; 151: e60115. DOI: https://doi.org/10.3791/ 60115
20. Delemarre T., Holtappels G., De Ruyck N., Zhang N., Nau-wynck H., Bachert C., Gevaert E. A substantial neutrophilic inflammation as regular part of severe type 2 chronic rhinosinusitis with nasal polyps. J. Allergy Clin. Immunol. 2021; 147 (1): 179-88.e2. DOI: https://doi. org/10.1016/j.jaci.2020.08.036
21. Palomino D.C., Marti L.C. Chemokines and immunity. Einstein (Sao Paulo). 2015; 13 (3): 469-73. DOI: https://doi.org/10.1590/S1679-45082015RB3438
22. Hwang J.W., Kim J.H., Kim H.J., Choi I.H., Han H.M., Lee K.J., Kim T.H., Lee S.H. Neutrophil extracellular traps in nasal secretions of patients with stable and exacerbated chronic rhinosinusitis and their contribution to induce chemokine secretion and strengthen the epithelial barrier. Clin. Exp. Allergy. 2019; 49 (10): 1306-20. DOI: https://doi.org/10.1111/ cea.13448
23. Sabbione F., Keitelman I.A., Iula L., Ferrero M., Giordan M.N., Baldi P., Rumbo M., Jancic C., Trevani A.S. Neutrophil Extracellular Traps Stimulate Proinflammatory Responses in Human Airway Epithelial Cells. J. Innate Immun. 2017; 9 (4): 387-402. DOI: https://doi. org/10.1159/000460293
24. Hahn J., Schauer C., Czegley C., Kling L, Petru L., Schmid B., Weidner D., Reinwald C., Biermann M.H.C., Blunder S., Ernst J., Lesner A., Bäuerle T., Palmisano R., Christiansen S., Herrmann M., Bozec A., Gruber R., Schett G., Hoffmann M.H. Aggregated neutrophil extracellular traps resolve inflammation by proteolysis of cytokines and chemokines and protection from antiproteases. FASEB J. 2019; 33 (1): 1401-14. DOI: https://doi.org/10.1096/fj.201800752R
25. Pham D.L., Ban G.Y., Kim S.H., Shin Y.S., Ye Y.M., Chwae Y.J., Park H.S. Neutrophil autophagy and extracellular DNA traps contribute to airway inflammation in severe asthma. Clin. Exp. Allergy. 2017; 47 (1): 57-70. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.12859
26. Grabcanovic-Musija F., Obermayer A., Stoiber W., Krautgart-ner W.D., Steinbacher P., Winterberg N., Bathke A.C., Klappacher M., Stud-nicka M. Neutrophil extracellular trap (NET) formation characterises stable and exacerbated COPD and correlates with airflow limitation. Respir. Res. 2015; 16 (1): 59. DOI: https://doi.org/10.1186/s12931-015-0221-7
■ References
1. Vishnjakov V.V., Aref'eva N.A., Ivanchenko O.A. Chronic rhinosinusitis. Pathogenesis, diagnosis and principles oftreatment. Clinical recommendations. Lopatin A.S. eds. Moscow: Practical medicine, 2014. 64 p. ISBN 978-5-98811-288-4. (in Russian)
2. Fokkens W.J., Lund V.J., Hopkins C., Hellings P.W., Kern R., Reitsma S., Toppila-Salmi S., Bernal-Sprekelsen M., Mullol J., Alobid I., Terezinha Anselmo-Lima W., Bachert C., Baroody F., von Buchwald C., Cervin A., Cohen N., Constantinidis J., De Gabory L., Desrosiers M., Diamant Z., Douglas R.G., Gevaert P.H., Hafner A., Harvey R.J., Joos G.F., Kalogjera L., Knill A., Kocks J.H., et al. European Position Paper on Rhinosinusitis and Nasal Polyps 2020. Rhinology. 2020; 58 (Suppl S29): 1-464. DOI: https://doi.org/10.4193/Rhin20.600
3. Hamilos D.L. Drivers of chronic rhinosinusitis: Inflammation versus infection. J Allergy Clin Immunol. 2015; 136 (6): 1454-59. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2015.10.011
4. Schleimer R.P., Freeland H.S., Peters S.P., Brown K.E., Derse C.P. An assessment of the effects of glucocorticoids on degranulation, chemo-taxis, binding to vascular endothelium and formation of leukotriene B4 by purified human neutrophils. J Pharmacol Exp Ther. 1989; 250 (2): 598605. PMID: 2547940.
5. Meltzer E.O., Hamilos D.L., Hadley J.A., Lanza D.C., Marple B.F., Nicklas R.A., Bachert C., Baraniuk J., Baroody F.M., Benninger M.S., Brook I., Chowdhury B.A., Druce H.M., Durham S., Ferguson B., Gwalt-ney J.M., Kaliner M., Kennedy D.W., Lund V., Naclerio R., Pawankar R., Piccirillo J.F., Rohane P., Simon R., Slavin R.G., Togias A., Wald E.R., Zinreich S.J.; American Academy of Allergy, Asthma and Immunology (AAAAI); American Academy of Otolaryngic Allergy (AAOA); American Academy of Otolaryngology--Head and Neck Surgery (AAO-HNS); American College of Allergy, Asthma and Immunology (ACAAI); American Rhinologic Society (ARS). Rhinosinusitis: establishing definitions for clinical research and patient care. J Allergy Clin Immunol. 2004; 114 (6 Suppl): 155-212. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2004.09.029
6. Ural A., Tezer M.S., Yücel A., Atilla H., Ileri F. Interleukin-4, inter-leukin-8 and E-selectin levels in intranasal polyposis patients with and without allergy: a comparative study. J Int Med Res. 2006; 34 (5): 520-4. DOI: https://doi.org/10.1177/147323000603400509
7. Brinkmann V., Reichard U., Goosmann C., Fauler B., Uhlemann Y., Weiss D.S., Weinrauch Y., Zychlinsky A. Neutrophil extracellular traps kill bacteria. Science. 2004; 303 (5663): 1532-35. DOI: https://doi. org/10.1126/science.1092385
8. Steinberg B.E., Grinstein S. Unconventional roles of the NADPH oxidase: signaling, ion homeostasis, and cell death. Sci. STKE. 2007; 2007 (379): pe11. DOI: https://doi.org/10.1126/stke.3792007pe11
9. Vorobjeva N.V., Chernyak B.V. NETosis: Molecular Mechanisms, Role in Physiology and Pathology. Biochemistry (Mosc). 2020; 85 (10): 1178-90. DOI: https://doi.org/10.1134/S0006297920100065 (in Russian)
10. Vorobjeva N.V. Neutrophil Extracellular Traps: New Aspects. Moscow Univ Biol Sci Bull. 2020; 75 (4): 173-88. DOI: https://doi. org/10.3103/S0096392520040112 (in Russian)
11. Vorobjeva N.V., Chelombitko M.A., Sud'ina G.F., Zinovkin R.A., Chernyak B.V. Role of Mitochondria in the Regulation of Effector Functions of Granulocytes. Cells. 2023; 12 (18): 2210. DOI: https://doi. org/10.3390/cells12182210
12. Pinegin B., Vorobjeva N., Pinegin V. Neutrophil extracellular traps and their role in the development of chronic inflammation and autoimmunity. Autoimmun Rev. 2015; 14 (7): 633-40. DOI: https://doi. org/10.1016/j.autrev. 2015.03.002
13. Svistushkin V.M., Nikiforova G.N., Vorobjeva N.V., Dekhanov A.S., Dagil Yu.A., Bredova O.Yu., Eremeeva K.V. Neutrophil extracellular traps in the pathogenesis of chronic rhinosinusitis. Russian Bulletin of Otorhinolaryngology. 2021; 86 (6): 105-12. DOI: https://doi. org/10.17116/otorino202186061105 (in Russian)
14. Svistushkin V.M., Nikiforova G.N., Vorobyeva N.V., Dekhanov A.S. Extracellular traps as an important part of the pathogenesis
in chronic rhinosinusitis. Consilium Medicum. 2021; 23 (9): 395-99. DOI: https://doi.Org/10.26442/20751753.2021.9.201025 (in Russian)
15. Saffarzadeh M., Juenemann C., Queisser M.A., Lochnit G., Barreto G., Galuska S.R, Lohmeyer J., Preissner K.T. Neutrophil extracellular traps directly induce epithelial and endothelial cell death: a predominant role of histones. PLoS One. 2012; 7 (2): e32366. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032366
16. Porto B.N., Stein R.T. Neutrophil Extracellular Traps in Pulmonary Diseases: Too Much of a Good Thing? Front Immunol. 2016; 7: 311. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2016.00311
17. Pedersen F., Marwitz S., Holz O., Kirsten A., Bahmer T., Waschki B., Magnussen H., Rabe K.F., Goldmann T., Uddin M., Watz H. Neutrophil extracellular trap formation and extracellular DNA in sputum of stable COPD patients. Respir Med. 2015; 109 (10): 1360-2. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.rmed.2015.08.008
18. Svistushkin V.M., Nikiforova G.N., Pinegin B.V., Vorobjeva N.V., Dekhanov A.S., Dagil Yu.A., Mironova A.R. Neutrophil extracellular traps as an important part of the pathogenesis of chronic rhinosinusitis without polyps. Consilium Medicum. 2024; 26 (9). DOI: https://doi.org/10.26442/ 20751753.2024.9.202834 (in Russian)
19. Abu Abed U., Brinkmann V. Immunofluorescence Labelling of Human and Murine Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Tissue. J Vis Exp. 2019; 151: e60115. DOI: https://doi.org/10.3791/ 60115
20. Delemarre T., Holtappels G., De Ruyck N., Zhang N., Nau-wynck H., Bachert C., Gevaert E. A substantial neutrophilic inflammation as regular part of severe type 2 chronic rhinosinusitis with nasal polyps. J Allergy Clin Immunol. 2021; 147 (1): 179-88.e2. DOI: https://doi. org/10.1016/j.jaci.2020.08.036
■ Сведения об авторах
Свистушкин Валерий Михайлович - д-р мед. наук, проф., зав. каф. болезней уха, горла и носа ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация
E mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-7414-1293
Никифорова Галина Николаевна - д-р мед. наук, проф. каф. болезней уха, горла и носа, ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8617-0179
Деханов Артем Сергеевич - аспирант каф. болезней уха, горла и носа, ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0549-898X
Дагиль Юлия Алексеевна - канд. биол. наук, руководитель группы биохимических методов исследования, ООО «НПО Петровакс Фарм»; науч. сотр. лаб. клинической иммунологии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9320-0789
21. Palomino D.C., Marti L.C. Chemokines and immunity. Einstein (Sao Paulo). 2015; 13 (3): 469-73. DOI: https://doi.org/10.1590/S1679-45082015RB3438
22. Hwang J.W., Kim J.H., Kim H.J., Choi I.H., Han H.M., Lee K.J., Kim T.H., Lee S.H. Neutrophil extracellular traps in nasal secretions of patients with stable and exacerbated chronic rhinosinusitis and their contribution to induce chemokine secretion and strengthen the epithelial barrier. Clin Exp Allergy. 2019; 49 (10): 1306-20. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.13448
23. Sabbione F., Keitelman I.A., Iula L., Ferrero M., Giordano M.N., Baldi P., Rumbo M., Jancic C., Trevani A.S. Neutrophil Extracellular Traps Stimulate Proinflammatory Responses in Human Airway Epithelial Cells. J Innate Immun. 2017; 9 (4): 387-402. DOI: https://doi. org/10.1159/000460293
24. Hahn J., Schauer C., Czegley C., Kling L, Petru L., Schmid B., Weidner D., Reinwald C., Biermann M.H.C., Blunder S., Ernst J., Lesner A., Bäuerle T., Palmisano R., Christiansen S., Herrmann M., Bozec A., Gruber R., Schett G., Hoffmann M.H. Aggregated neutrophil extracellular traps resolve inflammation by proteolysis of cytokines and chemokines and protection from antiproteases. FASEB J. 2019; 33 (1): 1401-14. DOI: https://doi.org/10.1096/fj.201800752R
25. Pham D.L., Ban G.Y., Kim S.H., Shin Y.S., Ye Y.M., Chwae Y.J., Park H.S. Neutrophil autophagy and extracellular DNA traps contribute to airway inflammation in severe asthma. Clin Exp Allergy. 2017; 47 (1): 57-70. DOI: https://doi.org/10.1111/cea.12859
26. Grabcanovic-Musija F., Obermayer A., Stoiber W., Krautgart-ner W.D., Steinbacher P., Winterberg N., Bathke A.C., Klappacher M., Studnicka M. Neutrophil extracellular trap (NET) formation characterises stable and exacerbated COPD and correlates with airflow limitation. Respir Res. 2015; 16 (1): 59. DOI: https://doi.org/10.1186/s12931-015-0221-7
■ Authors' information
Valery M. Svistushkin - MD, PhD, Prof., Head of the Ear, Throat and Nose Diseases Chair, I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation E mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-7414-1293
Galina N. Nikiforova - MD, PhD, Prof. of the Ear, Throat and Nose Diseases Chair, I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8617-0179
Artem S. Dekhanov - Postgraduate Student of the Ear, Throat and Nose Diseases Chair, I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation E -mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0549-898X
Yulia A. Dagil - PhD, Head of the Biochemical Research Methods Group, RPC Petrovax Pharm LLC; Researcher of Clinical Immunology Lab. of NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9320-0789
Второва Юлия Андреевна - студент ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0009-0007-3503-6010
Гусева Наталья Александровна - канд. мед. наук, доцент каф. поликлинической и неотложной педиатрии, ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5659-7382
Воробьева Нина Викторовна - канд. биол. наук, ст. науч. сотр. каф. иммунологии биологического факультета ФГБОУ ВО МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-5233-9338
Пинегин Борис Владимирович - д-р мед. наук, проф., зав. отд. клинической иммунологии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва, Российская Федерация
E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-8329-212X
Yulia A. Vtorova - Student, I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0009-0007-3503-6010
Natalia A. Guseva - PhD, Associate Prof. of the Polyclinic and Emergency Pediatrics Chair, N.I. Pirogov RNRMU of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5659-7382
Nina V. Vorobjeva - PhD, Senior Researcher of the Immunology Chair, Faculty of Biology, M.V. Lomonosov MSU, Moscow, Russian Federation E -mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-5233-9338
Boris V. Pinegin - MD, PhD, Prof., Head of Clinical Immunology Dept. of NRC Institute of Immunology, FMBA of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] http://orcid.org/0000-0002-8329-212X
