CC BY
81УДК 582.282.123.4
введение
необычные варианты
Aspergillus spp в культуре
рябинин и.А.* (аспирант), чилина г.А. (зав. лаб.), Богомолова т.с. (зав. лаб.), михайлова Ю.В. (н.с.)
Северо-западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова: НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина и кафедра медицинской микробиологии, Санкт-Петербург, Россия
© Коллектив авторов, 2014
Работа посвящена изучению штаммов 7 видов аспергил-лов в культуре (Aspergillus niger, A. flavus, A. awamori, A. ustus, A. calidoustus, A. sydowii и A. nidulans). Штаммы клинического происхождения предварительно идентифицировали методами парциального ДНК-сиквенирования и MALDI-TOF-масс-спектрометрии белкового экстракта. Для выращивания штаммов использовали следующие агаризованные питательные среды: агар Сабуро с 2% глюкозы, агар Чапека (классическую и с добавлением дрожжевого экстракта), картофельно-глюкозный агар, картофельно-морковный агар, среду с бенгальским розовым. В результате получены 13 необычных культуральных вариантов, которые следует учитывать впредь в лабораторных и клинических исследованиях.
Ключевые слова: аспергиллы, изменчивость, колония
unusual variants of Aspergillus spp. in culture
Ryabinin I.A. (postgraduate student), chilina G.A. (head of the laboratory), Bogomolova T.s. (head of the laboratory), Mihaylova J.v. (scientific collaborator)
North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov: Kashkin Research Institute of Medical Mycology and Chair of Medical Microbiology, Saint Petersburg, Russia
© Collective of authors, 2014
This work is dedicated to the study in culture of strains belonging to 7Aspergillus species (Aspergillus niger, A. flavus, A. awamori, A. ustus, A. calidoustus, A. sydowii and A. nidulans). Strains of clinical origin were previously identified by 2 methods: partial DNA sequencing and MALDI-TOF-mass-spectrometry of protein extract. For the cultivation of strains following agarized nutrient media were used: Sabouraud agar with 2% dextrose; Czapek agar (classical and with addition of yeast extract), potato-dextrose agar, potato-carrot agar and Rose Bengal medium. In result of this study 13 unusual cultural variants were obtained, hence there is a necessity in future take into account the received data about them in clinical and laboratory conditions.
Key wards: aspergilli, mutability, colony
Контактное лицо: Рябинин Игорь Андреевич, Тел.: (812) 303-51-40
Спонтанная и индуцированная морфологическая изменчивость возбудителей микозов -важный аспект, который необходимо учитывать при видовой идентификации изолятов и в физиологических исследованиях. При возрастающей в настоящее время тенденции к использованию молекулярно-генетиче-ских методов исследования возбудителей аспергил-леза интерес к морфологическим методам ослабевает. Несмотря на ограниченную точность, изучение макро- и микроморфологии грибов, в частности аспергиллов, является базовой методикой видовой идентификации, доступной в подавляющем большинстве лабораторий. В связи с этим для диагностики аспергиллеза микологу необходимо располагать сведениями о полиморфизме возбудителей этого заболевания.
В определителях аспергиллов (классических и современных) морфологические описания приведены, главным образом, на основе типичных штаммов, выращенных на 1-3 питательных средах. Сведения о некоторых штаммовых вариациях показаны фрагментарно и без подробного иллюстративного сопровождения.
Богатый иллюстративный материал, полученный на основе исследования коллекционных штаммов аспергиллов на различных питательных средах и при разных температурах инкубации, представлен в работах сотрудников Centraalbureau voor Schimmelcultures (Утрехт, Нидерланды) [1, 2]. Однако основное внимание они уделяют видоспецифиче-ским характеристикам, но не изменчивости внутри видов.
Данные о проявлении действия миковирусов в гигантских колониях Aspergillus fumigatus, A. niger и A. elavatus, в зависимости от состава питательной среды, приведены в труде Журавлевой Н.П. и соавторов [3].
Изменчивость A. fumigatus на среде Чапека с дрожжевым экстрактом и связь морфологических признаков с результатами анализа MALDI-TOF-масс-спектров белкового экстракта исследовали Рябинин И.А. и Чилина Г.А.[4].
Zain M.E. и др. (2009) изучили морфологию и некоторые биологические свойства Aspergillus terreus и 2-х видов пенициллов на 7 различных питательных средах. Авторы оценивали массу мицелия (сухую и влажную), диаметр и пигментацию колоний, удельную продукцию спор (на 1 см2 колонии), а также продукцию 14 вторичных низкомолекулярных метаболитов, включая микотоксины.
Krishnan P.S., Bajaj V. и Damle S.P. (1954) продемонстрировали различные ростовые характеристики у A. niger на среде Кури (для получении лимонной кислоты) в зависимости от способа получения и обработки инокулюма спор.
Karnataka J. в своей работе (1993) изучал ростовые характеристики A. tamarii. Автор использовал из-
вестные питательные среды (агар с бенгальским розовым, картофельно-глюкозный агар, питательный агар), а также некоторые оригинальные на основе агара с 2% сахарозы и одной из трех добавок: сухой навоз, экстракт из личинок тутового шелкопряда, экстракт из испражнений тутового шелкопряда. Последние 3 среды автор предложил для диагностики аспергиллеза домашнего тутового шелкопряда (Bombyx mori L.). Наиболее интенсивный рост наблюдали на среде с экстрактом личинок и сахарозой.
Характеристики колоний A. niger изучали Gupta M., Manisha K. и Grover R. (2012). Посевы делали на картофельно-глюкозный агар (классический и с добавками сахарозы и пептона), среду Чапека (в том числе - с добавкой дрожжевого экстракта), лигно-целлюлозный агар.
Ультраструктуру конидий A. fumigatus, в зависимости от состава питательной среды, анализировали Lopes L. и соавторы (2007).
В большинстве указанных работ морфологическая изменчивость аспергиллов, очевидно, имела адаптивный характер в связи с приспособлением к составу питательной среды или иным условиям (в том числе - в форме активации миковируса). Но, наряду с адаптивной изменчивостью, не меньший интерес вызывает изменчивость спонтанная, которая может отражать как индивидуальные особенности морфогенеза у конкретного штамма, так и влияние внешних факторов, которые не всегда удается контролировать в работе (сезонные особенности роста, изменения в составе питательной среды при хранении и прочее).
Цель нашей работы - представить данные о необычных культуральных вариантах Aspergillus spp. на различных питательных средах, выявленных при сплошном исследовании коллекции штаммов.
материалы и методы1
Использовали штаммы Aspergillus spp. клинического происхождения, депонированные в Российской коллекции патогенных грибов и выделенные в НИЛ микологического мониторинга и биологии грибов. В статье помещены наблюдения над 13 штаммами, проявившими необычную морфологию колоний, которые были отобраны из рабочей коллекции при изучении морфологических свойств около 60 штаммов различных видов на плотных питательных средах. Все исследованные штаммы прошли видовую идентификацию по морфологическим признакам, а также методом MALDI-TOF-масс-спектрометрии белкового экстракта согласно протоколу, опубликованному ранее [5]. Кроме того, некоторые штаммы были идентифицированы методом ДНК-сиквенирования по Сэнджеру (Genetic Analyzer 3500, Applied Biosystems, США; в скобках указан ло-кус): A. niger РКПГ F-1249 (D1/D2 - регионы, кодирующие рибосомальную РНК большой субъединицы, ген ß-тубулина); A. niger/awamori РКПГ F-1446 (ß-тубулин); A. awamori РКПГ F-1444 (ß-тубулин);
A. sydowii РКПГ F-1510 (р-тубулин); A. calidoustus (р-тубулин). Штамм F-1446 по результатам сиквени-рования занимает промежуточное положение между двумя видами, но для краткости далее мы обозначаем его A. niger РКПГ F-1446.
Из спор изучаемых штаммов готовили суспензии концентрацией около 107 КОЕ/мл, которые засевали на плотные питательные среды методом одноточечного и трехточечного посева. Инкубацию проводили при 30 °С, сроки инкубации у разных культур подбирали индивидуально - в зависимости от интенсивности развития колоний, они приведены ниже в разделе «результаты исследования». Данная температура инкубации выбрана нами, поскольку она является универсальной для роста, спорообразования и синтеза пигментов у всех представителей рода Aspergillus.
Для посева использовали плотные питательные среды: агар Сабуро с 2% глюкозы, классический агар Чапека, агар Чапека с дрожжевым экстрактом, кар-тофельно-глюкозный агар, картофельно-морковный агар, среду с бенгальским розовым (HiMedia, Индия).
Помимо культур, полученных специально, в исследование также включили описания и фотографии колоний из посевов патологического материала на среде Сабуро, выращенных при 37 °С и 28 °С.
Фотосъемку колоний осуществляли камерой Presto T55 (Rekam, Италия). Изображения обрабатывали с помощью графических редакторов XnView 2.04 и GIMP 2.8.6.
результаты исследования
Атипичный вариант A. niger на среде с бенгальским розовым.
Агар с бенгальским розовым - питательная среда, применяемая в санитарной микологии (например, для исследования пищевых продуктов) в зарубежной практике. Доступна она и на отечественном рынке, но регламентирующих документов по ее целевому использованию нет. Отличительная особенность среды - способность ограничивать распространение колоний у грибов, обычно проявляющих неограниченный рост, в том числе - многих аспергиллов, что удобно для подсчета колоний при количественном анализе. Типичная форма роста A. niger на среде с бенгальским розовым проявляется образованием, спустя 72 ч инкубации при температуре 30 °С, компактных колоний («1,5 см), покрытых конидиальны-ми головками темно-зеленого цвета с ободком золотисто-желтого воздушного мицелия с молодыми конидиеносцами по периферии (Рис. 1А).
l. J
наиболее интенсивное спороношение с образованием черных головок, на остальном протяжении колонии конидиеносцы располагались более разреженно поясом, ближе к центру, более дальние участки были стерильными (Рис. 1В).
Атипичные варианты А. niger и А. ам>ашоН на среде Сабуро.
Штаммы А. niger РКПГ Б-1445 (Рис. 1Ж) и А. ам/атоп РКПГ Б-1444 (Рис. 1З) на среде Сабуро, спустя 7 суток инкубации, образуют гигантские колонии с распространением в центре белого тонкого воздушного мицелия в форме облака, оплетающего конидиеносцы. У А. ам/атоп он приобретает серый оттенок и при пересеве на другие среды формируется слабо в центре колонии или не образуется вовсе. У штамма А. niger, напротив, ватообразная масса белого мицелия стойко формировалась на Сусло-агаре, среде Чапека и картофельно-морковном агаре, но не столь интенсивно, как на среде Сабуро.
Рис. 1. А - Aspergillus niger РКПГ F-1249 на среде с бенгальским розовым; Б, В - A. niger РКПГ F-1446 на среде с бенгальским розовым на разных сроках инкубации; Г -A. calidoustus на среде Сабуро; Д - A. calidoustus на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом; Е - A. calidoustus на картофельно-морковном агаре; Ж - A. niger РКПГ F-1445 на среде Сабуро; З - A. awamori РКПГ F-1444 на среде Сабуро; И - A. niger РКПГ F-1446 на среде Чапека; К - A. ustus на среде Чапека с дрожжевым экстрактом; Л - A. flavus на среде Сабуро; M - A. sydowii РКПГ F-1510 на среде Сабуро. Сроки инкубации указаны в тексте
Необычно проявил себя на данной среде штамм A. niger РКПГ F-1446. После одноточечного посева, спустя 7 суток, видимого роста не наблюдали, а на 12-е сутки сформировалась колония диаметром «4,5 см (Рис. 1Б), покрытая на большем протяжении высокой сетью воздушного мицелия ватной консистенции, бело-коричневатого цвета. Но край колонии на протяжении почти половины ее окружности, напротив, покрывал уплощенный субстратный мицелий с отчетливыми радиальными бороздами. Спустя еще 2 суток на поверхности колонии появились кониди-альные головки. Единичные крупные черные кони-диальные головки наблюдали в центре, а наиболее сильное спороношение происходило в зоне, покрытой уплощенным мицелием - там формировались более типичные для данной среды темно-зеленые головки и желтоватые молодые. Далее рост колонии равномерно увеличился по всему контуру и приобрел зональность. На 17-е сутки со стороны сектора, исходно покрытого плоским мицелием, отмечали
i Б
J JP1' I
£ 1
3 г
Ö«
Рис.2. А, Б - 2 штамма A. niger на среде Сабуро (диагностические посевы); В, Г - A. ustus на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом на разных сроках инкубации; Д -A. nidulans РКПГ F-1336 на картофельно-глюкозном агаре; Е - A. nidulans РКПГ F-1336 на среде Чапека с дрожжевым экстрактом. Сроки инкубации указаны в тексте
При наблюдении за ростом штамма A. niger в посеве бронхоальвеолярного лаважа при 28 °С, в котором также обнаружили рост A. fumigatus и Candida sp., выявили 2 колонии с зональной структурой, краями неправильной формы и хорошо выраженным образованием черного цвета мазута, блестящего экссудата в разновеликих каплях (Рис. 2А). Данный при-
знак для вида A. niger не является типичным. Билай В.И. и Коваль Э.З. (1988) упоминают об образовании у некоторых штаммов прозрачного мелкокапельного экссудата на среде Чапека, но в наших наблюдениях этот феномен обнаружить не удалось. По-видимому, причиной его возникновения в данном случае стало действие метаболитов двух других микромицетов -при последующих пассажах данного штамма A. niger на различных питательных средах экссудат более не появлялся.
В большинстве посевов на среде Сабуро у A. niger происходит очень интенсивное спороношение, и субстратный мицелий редко бывает заметен. На рисунке 2Б показан рост штамма A. niger в посеве брон-хоальвеолярного лаважа спустя 7 суток инкубации при 35 °С из трех точек, у которого колонии отличаются ярким бело-желтым субстратным мицелием, покрытым разреженными конидиеносцами.
Варианты A. utus и A. calidoustus на среде Чапека с дрожжевым экстрактом.
A. calidoustus - редкий возбудитель аспергиллеза человека из секции Usti, впервые описанный Varga J. и соавторами в 2008 г. [6]. Несколько случаев выделения этого микромицета было зарегистрировано в НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина. В одном из таких случаев изолят данного вида удалось выделить повторно из бронхоальвеолярного лаважа от одного пациента в нарастающем количестве. Колонии на среде Сабуро были белыми, возвышающимися в центре, с единичными каплями желтого экссудата, а в окружающую часть среды диффундировал лимонно-желтый пигмент (Рис. 1Г). После пересева на среду Чапека с дрожжевым экстрактом штамм, спустя 5 суток инкубации при 30 °С, образовал бархатистые светло-серые колонии, что соответствует типовому описанию. Отличительной особенностью была продукция большого количества янтарно-оран-жевого экссудата в крупных каплях (Рис. 1Д). Как в оригинальном описании Varga J. и соавторов, так и в обзоре по секции Usti, подготовленном Houbraken J. и соавторами [7], упоминается образование экссудата у A. calidoustus на этой среде, но в мелких каплях желто-коричневого цвета. На иллюстрациях, которыми авторы этих статей подкрепили описания, капли экссудата различимы с трудом, образуются колониями в скудном количестве и имеют гораздо менее яркий цвет. При последующих пересевах данный признак оказался нестойким и, если возникал, то больше соответствовал «типовому» описанию, чем первоначальной картине.
У A. ustus, несмотря на значительно большую историю его изучения, чем у предыдущего вида, характеристики роста штаммов на среде Чапека с дрожжевым экстрактом в различных определителях приводят не вполне подробно. Изученный нами штамм выделен из мокроты. В первом посеве на данную среду образовал распространенные колонии, которые по цветовой гамме приближались к колони-
ям штамма из Centraalbureau voor Schimmelcultures [7], но структура колонии отличалась. Молодые колонии, спустя 5 суток инкубации при 30 °С, сначала желтые, затем из-за интенсивного спороношения по периферии коричневеют и выделяют обильный светло-желтый экссудат. Центр колонии остается желтым. Обращает на себя внимание сложный сетчатый рисунок колонии. На 10-е сутки экссудат на большем протяжении исчезает, на его месте появляются облаковидные образования из стерильного воздушного мицелия (Рис. 1К).
После хранения на картофельно-морковном агаре на протяжении 5 месяцев при комнатной температуре, в новом пересеве на агаризованную среду Чапека с дрожжевым экстрактом, колония этого штамма сформировалась иначе (в этот раз посев провели в колбу на скошенный слой среды). В центре образовалось беловато-серое возвышение ватообразной консистенции из воздушного мицелия. Колония имела зональную структуру - в ней образовывались глубокие концентрические борозды. Даже спустя 15 суток инкубации спороношение было слабым, колония сохраняла беловатый цвет; наблюдали чрезвычайно интенсивное образование экссудата, который формировался в крупных неправильной формы каплях и сливался с колонии (Рис. 2В). Только к 20-м суткам инкубации, после того, как экссудат стал подсыхать, в культуре началось спороношение, и она приобрела сероватый цвет, характерный для вида. На месте капель экссудата появились углубления неправильной формы так, что поверхность колонии приобрела рельеф «ноздреватого сыра» (Рис. 2Г).
Ни один из приведенных штаммов на среде Чапека с дрожжевым экстрактом не образовывал типичных для секции Usti клеток Хюлле.
A. calidoustus на картофельно-морковном агаре.
Описание роста A. calidoustus на данной питательной среде мы приводим впервые. Рост довольно быстрый. Посев спустя 7 суток инкубации при 30 °С представлен на рисунке 1Е. Колонии тускло-зеленого цвета с неправильными очертаниями, в центре - несколько возвышенные и с более интенсивным спорообразованием, в периферийной части колонии воздушный мицелий более рыхлый, конидие-носцы расположены реже. Отдельными участками в центральной зоне, а также обрамляя края колонии, располагается белый воздушный мицелий. Экссудат культура на этой среде не выделяет. Оборотная сторона колоний неравномерно окрашена диффундирующим пигментом в зеленовато-желтый цвет.
Вариант A. sydowii на среде Сабуро.
Для этого вида типичным считают образование бархатистых колоний бирюзово-зеленого цвета с хорошим спороношением. При пассаже штамма A. sydowii РКПГ F-1510/816 (посев в одну точку) и инкубации при 30 °С в течение 10 суток гигантская
колония сформировалась без выраженного споро-ношения с хорошо заметным рельефом из радиальных и кольцевых борозд. Только на 14-15-е стуки по периферии колонии образовался поясок, покрытый конидиеносцами (Рис. 1М).
Варианты A. flavus на среде Сабуро.
Типичные штаммы А. /1ауш на среде Сабуро образуют светло-зеленые бархатистые колонии и отличаются обильным спороношением. При пересеве штамма А. /1ауш, выделенного из ликвора, спустя 6 суток инкубации при 30 °С он образовал гигантскую колонию, приподнятую в центре и покрытую белым воздушным мицелием без конидиеносцев. Случайно образовавшаяся при посеве мелкая краевая колония была по строению более типичной для данного вида. На 8-9 сутки с края гигантской колонии к центру начали появляться высокие конидиеносцы (Рис. 1Л), которые на 10-11 сутки покрыли всю колонию. Интересно, что в исходном посеве ликвора у данного штамма не наблюдали такой характер спороноше-ния. Аналогичное поведение изолятов данного вида нам удалось обнаружить в двух посевах мокроты.
Вариант А. niger на агаре Чапека.
Штамм А. niger РКПГ Б-1446 после одноточечного пассажа на среду Чапека, спустя 7 суток инкубации при 30 °С, образовал гигантскую колонию с неравномерным рельефом. На большем протяжении колонии конидиеносцы были погружены в рыхлый белый, местами - серовато-коричневый воздушный мицелий, на % поверхности колонии конидиеносцы расположены неравномерно. Один из секторов колонии (чуть менее 1/3) был плотно покрыт конидиеносцами, и на его поверхности не было обильного воздушного мицелия (Рис. 1И). Это сектор также выделялся и на оборотной стороне - субстратный мицелий в нем оказался слабо развит, поэтому реверзум был темной окраски за счет пигментации спор; в других областях колонии наблюдали реверзум оттенков белого. Как видно из описания, данный штамм проявил рост, схожий с приведенным выше на среде с бенгальским розовым.
Изменчивость ЕтеНсеЫа пШиЫт в серии пассажей на различные среды.
Штамм А. тёи1аж РКПГ Б-1336 с картофельно-морковного агара, на котором он поддерживается в Российской коллекции патогенных грибов, осенью 2012 г. пересеяли на картофельно-глюкозный агар с добавлением 0,3% дрожжевого экстракта. Во время инкубации при 30 °С, спустя 5 суток, штамм образовал на этой среде компактные колонии зеленовато-серого цвета с возвышающимся белым воздушным мицелием в центре и темно-каштановым реверзу-мом. Спустя 10 суток колонии увеличились в размерах, воздушный мицелий приобрел характерный изумрудно-зеленый цвет, в колониях начали зонально образовываться ярко-желтые клейстотеции (Рис.
2Д). При обнаружении признаков полового процесса, согласно классической микологической номенклатуре, данную культуру правильнее именовать родовым именем Emericella. В современной микологической номенклатуре положен путь к унификации названий грибов, но для данного вида пока не избрано единое родовое имя. После этого штамм поддерживали на данной среде, а затем - на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом с целью демонстрации на учебном процессе. В результате многократных пассажей штамм стал образовывать светло-желтые зернистые колонии, почти сплошь покрытые клейстотециями, а участки типичного воздушного мицелия, обусловленные скоплением конидиеносцев, стали появляться нерегулярно только в краевой части некоторых колоний. При посеве на скошенную среду Чапека с дрожжевым экстрактом в колбу и инкубации при 30 °С, спустя 10 суток, образовалась колония, по строению сходная с последним описанием, но отличающаяся образованием большого количества экссудата чайного цвета в разновеликих каплях (Рис. 2Е). Хотя приведенные признаки не являются атипичными для E. nidulans, мы поместили здесь описание данного штамма, поскольку интересна изменчивость его колоний в серии пересевов.
заключение
Полученные данные о необычных вариантах Aspergillus spp. обогащают представления о полиморфизме представителей данного вида. Морфологические особенности различных видов аспергил-лов, приведенные нами, очевидно, имеют многофакторное происхождение. Они могли быть связаны с индивидуальными особенностями генома, определяющими биосинтез компонентов клеточной стенки, процессы ветвления гиф, спорообразование, синтеза пигментов, а также интенсивность энергетического и пластического обменов. Поскольку микробиологическая питательная среда для аспергиллов является артифициальной, случайной средой обитания, у свежевыделенных на ней штаммов не следует искать появление «глубоких» приспособительных механизмов. В то же время, при длительном музейном хранении штаммов на питательных средах можно добиться появления стойкой адаптации, позволяющей грибу оптимально использовать питательные субстраты среды, нивелировать действие собственных токсичных метаболитов и максимально длительно сохранять жизнеспособность. Но такого эффекта можно добиться только с использованием приемов селекции, питательных сред стандартного состава и фиксированных сроков пересева.
Из причин полиморфизма не следует исключать также возможное сигнальное действие некоторых компонентов питательных сред или их производных, образующихся в результате биотрансформации.
Механизмы стойкой изменчивости у грибов связаны не только с генетическими, «ядерными», но «цитоплазматическими», протеомными факторами,
поскольку как в природных, так и в лабораторных условиях у подавляющего большинства медицински значимых видов доминирует вегетативный путь образования новые колоний.
Длительное время считали, что проявление морфологической изменчивости в культуре является исключительно лабораторным феноменом, изучение которого позволяет оптимизировать только процесс морфологической идентификации. С внедрением экспертных приемов идентификации, включая парциальное ДНК-сиквенирование и МЛЬБ1-ТОР-масс-спектрометрию белкового экстракта, интерес к полиморфизму возбудителей микозов в медицинской микологии существенно угас. Однако в последние годы появились работы, в которых показана связь биосинтеза некоторых факторов вирулентности аспергиллов (гидрофобинов, меланина, системы захвата ионов 7п+2) с особенностями роста культуры [8-10]. В связи с этим необходима разработка технологий биочипирования, позволяющих быстро и
комплексно определять у изолятов возбудителей микозов видоспецифичные признаки (для целей идентификации); конституциональные и индуцибельные факторы патогенности (включая связанные с морфогенезом), а также факторы резистентности к анти-микотикам. Возможно, внедрение таких технологий позволит проводить скрининговый отбор по морфологическим признакам изолятов, обладающих биологическими свойствами, представляющими ценность для клинициста.
Авторы выражают благодарность лабораторному микологу, к.м.н. Ю.А. Сухановой за предоставление штамма А. шЬш.
Работа выполнена при поддержке гранта «УМНИК» Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере (договор № 0005783) и гранта им. профессора Э.Э. Эйх-вальда.
цитированная литература
1. Samson R.A., et al. Diagnostic tools to identify black aspergilli// Studies in Mycology. - 2007. - Vol. 59. - Р. 129-145.
2. Samson R.A., et al. New species in Aspergillus section Terrei// Studies in Mycology. - 2011. - Vol. 69. - Р. 39-55.
3. Журавлева Н.П., Блинов Н.П., Васильева Н.В., Босак И.А. Выявление литического фактора у штаммов микромице-тов - продуцентов аллергенов// Проблемы медицинской микологии. - 2013. - Т. 15, №1. - С. 40-48.
4. Рябинин И.А., Чилина Г.А. Связь результатов MALDI-TOF-масс-спектрометрии с культуральными свойствами Aspergillus fumigatus// Проблемы медицинской микологии. - 2014. - Т. 16, №2. - С. 120.
5. Рябинин И.А. и др. Выявление родственных связей у клинических изолятов Aspergillus fumigatus Fres. и A. niger v. Tiegh посредством анализа масс-спектров их протеомов// Проблемы медицинской микологии. - 2014. - Т. 16, №1. - С. 50-56.
6. Varga J., et al. Aspergillus calidoustus sp. nov., causative agent of human infections previously assigned to Aspergillus us-tus// Eukaryotic Cell. - 2008. - Vol. 7, №4. - Р. 630-638.
7. Houbraken J., et al. Polyphasic taxonomy of Aspergillus section Usti// Studies in Mycology. - 2007. - Vol. 59. - Р. 107-128.
8. Amich J., et al. The ZrfC alkaline zinc transporter is required for Aspergillus fumigatus virulence and its growth in the presence of the Zn/Mn-chelating protein calprotectin. 6th advances against aspergillosis. Abstract book. - 2014. - Р. 219.
9. Beauvais A. Aspergillus cell wall and biofilm. 6th Advances against aspergillosis. Abstract book. - 2014. - Р. 34.
10. Juvvadi P.R. Hyphal growth and septation. 6th Advances against aspergillosis. Abstract book. - 2014. - Р. 35.
Поступила в редакцию журнала 27.11.2014
Рецензент: И.А. Босак
