CC BY
18
УДК 616-005.6-092.9:611-018.74
НАРУШЕНИЯ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ КРОВЕНОСНЫХ СОСУДОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ
ПОСТТРОМБОТИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ
1 2 11 Сушков С.А. , Небылицин Ю.С. , Самсонова И.В. , Клопова В.А. ,
Пасевич Д.М.1, Демидов С.И.1, Кондратьева В.И.1
1УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский
университет1,
2Клиника УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский
университет», г. Витебск, Республика Беларусь
Резюме. При посттромботическом синдроме развиваются структурно-функциональные изменения эндотелия. Деструктивные изменения эндотелия сочетаются с дистрофическими изменениями гладких миоцитов средней оболочки, а также коллагеновых и эластических волокон. Изменение экспрессии CD31 свидетельствуют о лабильности эндотелия и отражают реакцию эндотелиальных клеток, направленную на восстановление структуры венозной стенки. Увеличение числа циркулирующих эндотелиоцитов в крови и содержания в плазме нитратов/нитритов свидетельствует о развитии функциональных нарушений эндотелия при данной патологии.
Ключевые слова: дисфункция эндотелия, посттромботический синдром, CD 31 экспрессия, морфологические изменения, функциональные изменения.
DISTURBANCES OF THE STRUCTURE AND FUNCTION OF BLOOD VESSELS
ENDOTHELIUM IN EXPERIMENTAL POST-THROMBOTIC SYNDROME
1 2 11 Sushkov S.A. , Nebylitsin Yu.S. , Samsonova I. V. , Klopova V.A. ,
Pasevich D.M.1, Demidov S.I.1, Kondrateva V.I.1
1EE «Vitebsk State Order of Peoples' Friendship Medical University», 2 Clinic of EE «Vitebsk State Order of Peoples' Friendship Medical University»,
Vitebsk, The Republic of Belarus
Abstract. Structural and functional changes in endothelium develop in post-thrombotic syndrome. Destructive changes of the endothelium are combined with dystrophic changes of smooth myocytes of the middle coat, as well as collagen and elastic fibers. Changes in the expression of CD31 indicate the lability of the endothelium and reflect the of endothelial cells response aimed at restoring the structure of the venous wall. The increase in the number of circulating endotheliocytes in the blood and the content of plasma nitrates/nitrites indicates the development of functional disorders of the endothelium in this pathology.
Keywords: endothelial dysfunction, post-thrombotic syndrome, CD31 expression, morphological changes, functional changes.
Введение. Посттромботический синдром (ПТС) отличается наиболее выраженными патологическими изменениями венозной системы [2, 4]. Важная роль дисфункции эндотелия определена в патогенезе многих заболеваний. На основании выявленных изменений разработаны новые методы диагностики, лечения и профилактики [3]. Вместе с тем состояние эндотелия при развитии ПТС остается до конца не изученным.
Цель работы. Изучить структурные и функциональные изменения кровеносных сосудов при экспериментальном посттромботическом синдроме.
Методы исследования. Экспериментальная часть работы выполнена на 110 беспородных крысах-самцах массой 300-350 грамм. Контролем являлись 10 здоровых крыс. ПТС в эксперименте воспроизводили путем введения в бедренную вену раствор тромбина (40 ЕД/кг).
Материалом для морфологического исследования служили интактные и тромбированные вены 110 крыс. Забор материала производили через 1, 3, 6, 24 часов, на 3-е ,
6-е, 15-е, 30-е, 45-е и 90 сутки после операции. Для световой микроскопии материал окрашивали гематоксилин-эозином [1]. Также серийные срезы вен окрашивались иммуногистохимически с использованием моноклональных антител Bond RTU Primary CD31. Для морфометрической оценки экспрессии CD31 в цифровых изображениях использовали программу WCIF ImageJ 1,45s. Функциональное состояние эндотелия оценивали по количеству в крови циркулирующих эндотелиальных клеток (ЦЭК) и продуктов деградации оксида азота (нитраты/нитриты - NO2/NO3).
Статистическая обработка данных проводилась с использованием статистических пакетов программ Excel, Origin 6.1, Statsoft, IBM SPSS Statistic 10.
Результаты и их обсуждение. Первые сутки характеризовались набуханием всех оболочек стенки вены, периваскулярным отеком. При этом в tunica intima эндотелий определялся на всей поверхности. Однако, при этом отмечались гофрированность эндотелиальной выстилки, набухание эндотелиоцитов. В сроки 3-6 часов просвет вены был заполнен тромботическими массами, представленными наряду с фибрином большим количеством эритроцитов, появлением гемосидерофагов. К исходу первых суток эти изменения нарастали, появлялись участки десквамации эндотелия, отмечалось выраженное набухание tunica media, что, надо полагать, явилось следствием изменения проницаемости эндотелия и выхода компонентов плазмы из просвета сосуда. Морфологические изменения в стенке вен на 3-е и 6-е сутки после операции были однонаправленными и характеризовались наряду с дистрофическими изменениями преимущественно в tunica intima и tunica media явлениями реактивного воспаления в стенке с накопление нейтрофилов, макрофагов, проникновение фибробластических элементов в тромб. Наряду с этим отмечались размножение клеток интимы, некротические изменения еще сохранившихся лейкоцитов. 15-е сутки характеризовались появлением в тромбе сосудистых щелей, которые были выстланы эндотелием (реканализация). При этом в нем наряду с фибробластами в толще тромба определялись формирующиеся волокнистые элементы. На 30-е характеризовались появлением в толще тромба большого количества новообразующихся сосудов, что отражало явления реваскуляризация. На 45-е тромб был полностью замещен сетью мелких дифференцированных сосудов, что отражало завершение процесса реваскуляризации и определяло восстановление кровотока. 90-е сутки характеризовались образованием фиброзномышечной бляшки, стенозирующей просвет сосуда.
Через 1 час после экспериментального моделирования ПТС морфометрически
установлено, что площадь экспрессии CD31 по отношению к общей площади образца в
образцах бедренной вены экспериментальных животных была существенно выше
2 2 контрольных показателей и составила - 0,013±0,0008 p,m (в контроле - 0,008±0,0005 p,m )
(p<0,05). Через 3 и 6 часов после экспериментального моделирования ПТС площадь
экспрессии CD31 по отношению к общей площади образца в образцах снижалась и
приближалась к контрольным показателям. Морфометрическая оценка экспрессии CD31 в
образцах бедренной вены через 1 и 3 суток после экспериментального моделирования ПТС
выявила дальнейшее снижение площади экспрессии CD31 по отношению к общей площади
образца. Максимально низким данный показатель был на 6-е и 15-е сутки - 0,00055±0,00002
p,m2 и 0,0005±0,00002 цш2 (p<0,05). Через 30 суток после экспериментального
моделирования ПТС морфометрически установлено, что площадь экспрессии CD31 по
отношению к общей площади образца в образцах бедренной вены экспериментальных
животных увеличивалась и достигала максимума - 0,01620±0,0006 p,m (p<0,05). Через 45 и
90 суток экспрессия CD31 приближалась к показателям контрольной группы и не имела
статистических отличий.
При экспериментальном ПТС отмечалось увеличение ЦЭК через 24 часа на 58,8%, через 3-е суток - на 38,2%, через 7 суток - на 44,3%, на 15-е и 30-е сутки - на 27,7% и 21,7%, на 45-е сутки - на 29,4% (р<0,05). Содержание NO2/NO3 в плазме через 24 часа оказалось повышенным на 38,4%, на 3-е сутки - на 54,9%, на 7-е сутки - на 23,4%, на 15-е сутки - на 24,1%, на 30-е сутки - на 29,5%, на 90-е сутки - на 43,6% (р<0,05).
Выводы
1. В ранние сроки после экспериментального моделирования посттромботического синдрома наблюдались нарушения целостности цитоплазматической мембраны, деструкция эндотелиоцитов кровеносных сосудов.
2. Структурные изменения эндотелиального слоя внутренней оболочки стенки сосудов сопровождались изменением экспрессии маркера CD31, что указывает на патогенетическую значимость в развитии патологического процесса.
3. Увеличение числа циркулирующих эндотелиоцитов в крови на фоне повышения содержания в плазме крови нитратов/нитритов свидетельствует о развитии функциональных нарушений эндотелия кровеносных сосудов при посттромботическом синдроме.
ЛИТЕРАТУРА
1. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии : учеб. пособие. - М. : Медицина, 1996. - 544 с.
2. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Рудакова И.Н., Никифоров А.А. Влияние генетических факторов на течение посттромботического синдрома нижних конечностей // Новости хирургии, 2016. - № 2. - С.125-130.
3. Пискун Д.В., Семенов В.М., Солодков А.П. Клиническое значение нитрозативного и оксидативного стресса при острых респираторных заболеваниях, осложненных развитием инфекционно-токсического шока // Вестник Витебского государственного медицинского университета. - 2006. - Т. 5, № 3. - С. 50-55.
4. Хрыщанович В.Я. Посттромботическая болезнь: диагностика, лечение, профилактика // Новости хирургии. - 2013. - Т.21. - №3. - С. 120-128.
