НАДЛЕЖАЩАЯ ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ПРАКТИКА – СООТВЕТСТВУЮЩАЯ ЗАМЕНА СЫРЬЯ В ПРОИЗВОДСТВЕННОМ ПРОЦЕССЕ – ИССЛЕДОВАНИЕ СОПОСТАВИМОСТИ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 615.014.21

Анисимова О.А.

Магистрант 2 курса ТГУ, г. Тольятти, РФ

НАДЛЕЖАЩАЯ ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ПРАКТИКА - СООТВЕТСТВУЮЩАЯ ЗАМЕНА СЫРЬЯ В ПРОИЗВОДСТВЕННОМ ПРОЦЕССЕ - ИССЛЕДОВАНИЕ СОПОСТАВИМОСТИ

Аннотация

Разработка лекарственных препаратов часто продолжается на разных этапах клинического исследования и может потребовать сложных изменений в сырье и исходных материалах на более поздних стадиях. Таким образом, необходимо обеспечить сопоставимость свойств продукта до и после внесения изменений.

Ключевые слова

Передовые терапевтические препараты, клеточная терапия, надлежащая производственная практика, тканевая инженерия.

Anisimova O. A.

2 st-year master's student of TSU, Togliatti, Russia

GOOD MANUFACTURING PRACTICE - COMPLIANT CHANGE OF RAW MATERIAL IN THE MANUFACTURING

PROCESS - A COMPARABILITY STUDY

Annotation

The development of medicinal products often continues throughout the different phases of a clinical study and may require challenging changes in raw and starting materials at later stages. Comparability between the product properties pre- and post-change thus needs to be ensured.

Keywords

Advanced therapy medicinal products, cell-based therapies, good manufacturing practice, tissue engineering.

N-TEC, полученный как стандартным, так и модифицированным способами, продемонстрировал высокую жизнеспособность клеток и хрящевые свойства, о чем свидетельствует большое количество GAG и коллагенового матрикса II типа. Анализы qPCR показали, что несколько ключевых хондрогенных генов (Sox9, Aggrecan, Col2) показали значительно большую экспрессию в N-TEC, произведенных с добавлением hPL. Кроме того, также было обнаружено, что гены, кодирующие белки, высвобождение которых усиливается во время хондрогенеза мезенхимальных стромальных клеток (серпин A1 [1] и HAPLN1 [2]) или более обильно присутствующие в здоровом хряще по сравнению с OA (HAPLN1 [3]), экспрессируются на более высоких уровнях N-TEC, изготовленными с использованием модифицированный процесс. Кроме того, гены, кодирующие сигнальные пути FGF (например, FGFR3), BMP (например, BMPR1B) и Wnt (например, SFRP1), демонстрировали более высокие уровни экспрессии в N-TEC, изготовленных с hPL -расширенным NC. FGFR3 в изобилии экспрессируется в суставных хондроцитах во взрослом возрасте [4], и было показано, что его условная активация задерживает прогрессирование OA у мышей [5]. BMPR1B необходим для хондрогенеза во время развития [6] и, как было показано, предотвращает гипертрофию хондроцитов во время морфогенеза суставов [7]. SFRP1 является критическим негативным регулятором

передачи сигналов Wnt для нормального прогрессирования дифференцировки хондроцитов [8], и было показано, что его экспрессия снижена в хондроцитах с ОА (по сравнению со здоровыми) [9]. В целом, результаты показывают, что NC, увеличенные с помощью hPL по сравнению с аутологичной сывороткой человека, были способны повторно дифференцироваться в хрящевую ткань, но с сигнатурой экспрессии генов, более похожей на зрелый/здоровый хрящ, что еще раз подтверждает эффективность и действенность продуктов. Хотя подробная молекулярная характеристика N-TEC выходит за рамки данного исследования, потребуются дополнительные исследования (например, расширить анализ на другие регуляторы сигнальных путей и подтвердить данные qPCR на уровне белка), чтобы лучше изучить молекулярные механизмы, объясняющие эти различия.

Предпочтительным подходом для исследования сопоставимости является параллельное тестирование с использованием одного и того же сырья и, особенно, подход, основанный на разделении биологического исходного материала, для уменьшения источника вариабельности. Это особенно важно для продуктов на основе аутологичных клеток, где междонорская вариабельность может представлять собой сильно влияющий фактор для демонстрации сопоставимости [10]. Однако такой подход не мог быть применен из-за ограниченного количества остатков хряща, доступных во время операций, и неприемлемой нагрузки на пациента из-за забора крови без клинического обоснования. Альтернативным подходом, принятым EMA, если параллельное исследование невозможно, является сравнение данных после изменения (модифицированный процесс) с историческими данными, полученными в ходе клинического исследования Nose to Knee II [10].

Производственный процесс N-TEC с использованием hPL был одобрен компетентными органами Швейцарии и Германии (Swissmedic и Институт Пауля Эрлиха) и в настоящее время используется в исследовании фазы 1 для восстановления перфорации носовой перегородки (clinicaltrials.gov NCT04633928) и для восстановления поврежденных хрящей в колене и лодыжке (временное разрешение выдано Swissmedic (TA-2020-00007).

Настоящее исследование сопоставимости продемонстрировало успешное изменение сырья для производства ATMP с точки зрения качественных характеристик продукта и последующего одобрения регулирующими органами для использования в клинических исследованиях национальными компетентными органами. Подход, использованный в этом исследовании сопоставимости, предлагается здесь в качестве примера замены сырья в соответствии с нормативными требованиями на поздней стадии клинических испытаний.

Список использованной литературы:

1. S. Boeuf, et al. Subtractive gene expression profiling of articular cartilage and mesenchymal stem cells: serpins as cartilage-relevant differentiation markers. Osteoarthritis Cartilage, 16 (1) (2008), pp. 48-60.

2. C. Galeano-Garces, et al. Molecular validation of chondrogenic differentiation and hypoxia responsiveness of platelet-lysate expanded adipose tissue-derived human mesenchymal stromal cells. Cartilage, 8 (3) (2017), pp. 283-299.

3. S.L. Dunn, et al. Gene expression changes in damaged osteoarthritic cartilage identify a signature of non-chondrogenic and mechanical responses. Osteoarthritis Cartilage, 24 (8) (2016), pp. 1431-1440.

4. J. Narayana, W.A. Horton. FGFR3 biology and skeletal disease. Connect Tissue Res, 56 (6) (2015), pp. 427-433.

5. J. Tang, et al. Fibroblast growth factor receptor 3 inhibits osteoarthritis progression in the knee joints of adult mice. Arthritis Rheumatol, 68 (10) (2016), pp. 2432-2443.

6. D. Rigueur, et al. The type I BMP receptor ACVR1/ALK2 is required for chondrogenesis during development. J Bone Miner Res, 30 (4) (2015), pp. 733-741.

7. T. Mang, et al. BMPR1A is necessary for chondrogenesis and osteogenesis, whereas BMPR1B prevents hypertrophic differentiation. J Cell Sci (16) (2020), p. 133.

8. T. Gaur, et al. Secreted frizzled related protein 1 regulates Wnt signaling for BMP2 induced chondrocyte differentiation. J Cell Physiol, 208 (1) (2006), pp. 87-96.

9. L. Chen, et al. The inhibition of EZH2 ameliorates osteoarthritis development through the Wnt/ß-catenin pathway. Sci Rep, 6 (2016), p. 29176.

10.(CAT). C.f.A.T., Questions and answers: Comparability considerations for Advanced Therapy Medicinal Products (ATMP. E.M.A); 2019.

© AHMCMMOBa O.A., 2024