CC BY
37
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© Нечай В.В., 2011 УДК 616-091:616.411-089.87
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ И ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У МЫШЕЙ БЛЬБ/С В ОТДАЛЕННЫЕ СРОКИ
ПОСЛЕ СПЛЕНЭКТОМИИ
В.В. Нечай
Учреждение Российской академии медицинских наук НИИ морфологии человека РАМН, г. Москва
В эксперименте на мышах-самцах линии Ва1Ь/с были изучены морфологические изменения в легких, миокарде, печени, почках, тимусе и аксиллярных лимфатических узлах, возникающие на 30-е и 60-е сут после спленэктомии. Полученные в работе результаты патоморфологического исследования говорят о развитии инфекционно-воспалительных процессов, возникающих на фоне вторичного иммуно-дефицитного состояния в отдаленные сроки после спленэктомии.
Ключевые слова: спленэктомия, вторичное иммунодефицитное состояние.
Хирургическое удаление селезенки -спленэктомия, проводится при травмах селезенки, цитопенических состояниях различной этиологии, синдроме гиперспленизма, ходжкинских лимфомах, лейкозах и д. р. [3, 6]. Спленэктомия в отдаленные сроки после выполнения операции приводит к развитию так называемого постспленэктомического синдрома, который характеризуется развитием гематологических и иммунологических нарушений [3, 6, 8, 9]. Гематологические нарушения проявляются тромбоцитозом, эрит-роцитозом, лейкоцитозом в сочетании с мо-но- и лимфоциозом, что увеличивает риск тромботических осложнений [2, 5]. Иммунологические нарушения характеризуются развитием вторичного иммунодефицитного состояния, обусловленного нарушением анти-гензависимой дифференцировки В- и Т-лимфоцитов в селезенке. Клиническим проявлением вторичного иммунодефицитного состояния, вызванного спленэктомией, является повышение частоты инфекционных заболеваний, более тяжелое их течение и тенденция к хронизации воспалительного процесса [6, 8, 9, 10, 11].
Изучение динамики морфологических изменений, возникающих в отдален-
ном периоде после спленэктомии, возможно только в условиях экспериментального исследования.
Цель работы - изучить морфологические изменения во внутренних органах и органах иммунной системы у мышей линии Ва1Ь/с в отдаленные сроки после спленэктомии.
Материалы и методы
Работа была выполнена на 40 мышах-самцах линии Ва1Ь/с массой тела 18-20 г (питомник Столбовая). Содержание животных и выведение их из эксперимента проводилось в соответствии с приказом Минздрава СССР №755 от 12.08.1977. Мыши были разделены на три группы: контрольная группа, которая состояла из интактных животных и включала 10 мышей, две опытные группы по 15 мышей в каждой со сроками выведения из эксперимента на 30-е и 60-е сут после спленэктомии.
Мышам опытных групп проводили спленэктомию под эфирным наркозом. В левом подреберье, параллельно реберной дуге выполнялся косой разрез протяженностью 0,3-0,5 см. В рану выводилась се-
лезенка, на ее ворота накладывалась кет-гутовая лигатура, после чего селезенка удалялась. Рана ушивалась послойно кетгутом. Все манипуляции проводились с соблюдением асептики и антисептики. В послеоперационном периоде терапия антибиотиками не проводилась. В течение первых двух суток после операции погибло 5 мышей в обеих опытных группах.
Выведение мышей из эксперимента проводилось путем передозировки эфирного наркоза. Для гистологического исследования забирались кусочки легкого, печени, почки, сердца, тимуса, аксиллярные лимфатические узлы. Материал фиксировался в 10% нейтральном формалине, подвергался обезвоживанию и заливке в парафин с последующим изготовлением срезов толщиною 5-7 мкм и окраской их гематоксилином и эозином. Кроме того, срезы миокарда окрашивались железным гематоксилином по Рего для выявления контрактур-ных изменений, а срезы легких - по Маллори для дифференцировки соединительной ткани и выявления очагов фиброза, а также по Лефлеру для выявления бактерий. Для оценки объемной доли очагов пневмонии и эмфиземы на срезах легких использовали морфометрический метод [1].
Результаты и их обсуждение
В легких у всех мышей Ва1Ь/с на 30-е сут после спленэктомии выявлялись множественные очаги интерстициальной пневмонии с перифокальной эмфиземой. В очагах пневмонии просветы альвеол были щелевидными, межальвеолярные перегородки резко утолщены за счет инфильтрации лимфоцитами, гистиоцитами и нейтрофилами. В просвете бронхов определялись единичные клетки десквами-
рованного эпителия, нейтрофилы. Эпителиальная выстилка бронхов на всем протяжении сохранена, на небольших участках эпителий был десквамирован. В адвентициальном слое бронхов выявлялась слабовыраженная лимфоидно-
гистиоцитарная инфильтрация. При помощи окраски по Лефлеру в пневмонических очагах выявлялись единичные кокки.
По данным морфометрического исследования объемная доля очагов интерстициальной пневмонии на 30-е сут после спленэктомии составляла 16,0±5,4%, при-фокальной эмфиземы - 9±1,7% (см. табл.).
На 60-е сут после спленэктомии в легких у всех мышей наблюдалась очаговая интерстициальная пневмония с фиб-розированием, просветы альвеол были очагово уменьшены, в этих зонах межаль-веолярные перегородки были утолщены за счет созревающей фиброзной ткани, представленной пучками частично упорядоченных коллагеновых волокон с воспалительной инфильтрацией гистиоцитами, лимфоцитами с примесью нейтрофилов. Вокруг зон пневмонии выявлялась пери-фокальная эмфизема. В просветах бронхов определялись единичные клетки эпителия, эпителиальная выстилка была сохранена на всем протяжении. В авентици-альном слое сосудов и бронхов наблюдалась слабо выраженная лимфоидно-гистиоцитарная инфильтрация.
По данным морфометрического исследования объемная доля очагов фиброза и интерстициальной пневмонии на 60-е сут после спленэктомии была ниже, чем на 30-е сут. Эти различия достоверно статистически значимыми не были. Показатели объемной доли эмфиземы достоверно не изменялись (см. табл. 1).
Таблица 1
Морфометрическая характеристика легких мышей линии Balb/с в отдаленные сроки после спленэктомии
Объемная доля в % 30-е сут 60-е сут
Пневмония 16,0±5,4 14,0±6,3
Эмфизема 9,0±1,7 9,0±2,9
Неизмененная ткань 75,0±6,7 77,0±7,5
В легких мышей контрольной группы патологических изменений выявлено не было.
В печени на 30-е сут после спленэктомии балочно-дольковая структура была сохранена. В дольках печени, около v. ce-nralis, наблюдались очаговые микроабсцессы, размеры которых колебались по числу нейтрофилов от 10-15 до 200-300 клеток. При окраске по Лефлеру в микроабсцессах выявлялись единичные кокки. Наблюдалась умеренная и выраженная дистрофия гепатоцитов, полиморфизм их ядер, а также увеличение числа неэпителиальных клеточных элементов. В одном случае нами были обнаружены гиалиновые тромбы в v. centralis.
На 60-е по сравнению с 30-ми сут микроабсцессы не выявлялись, наблюдалась усиленная регенерация гепатоцитов с наличием 1-2 митозов в поле зрения при увеличении х400. Наблюдалась слабая и умерено выраженная дистрофия гепато-цитов с полиморфизмом их ядер, единичные митозы в поле зрения при х400.
В печени мышей контрольной группы патологических изменений не выявлено.
В миокарде на 30-е сут выявлялись очаги гиперэозинофилии кардиомиоци-тов, в одном случае в сочетании с очаговым миоцитолизом. При окраске срезов миокарда по Рего были выявлены очаговые контрактурные изменения кардио-миоцитов (рис.3). На 60-е сут после спленэктомии и в контроле в миокарде патологических изменений выявлено не было.
В почках на 30-е сут наблюдалась слабо- и умерено выраженная гиалиновокапельная дистрофия эпителия извитых канальцев. На 60-е сут после спеленэктомии и у мышей в контрольной группе в почках патологических изменений не было.
В тимусе на 30-е сут наблюдалась акцидентальная инволюция II-III стадии. Корковый слой был гиперплазирован, в нем наблюдалась картина «звездного неба» с очаговым опустошением коры и гибнущими тимоцитами, инверсией слоев, увеличением числа телец Гассаля и формированием кистоподобных полостей. На 60-е сут в тимусе наблюдалась акциден-
тальная инволюция I-II стадии с увеличением числа телец Гассаля, гибнущими тимоцитами и небольшими очагами опустошения коры. У мышей контрольной группы патологических изменений в тимусе не наблюдалось.
В аксиллярных лимфатических узлах на 30-е и 60-е сут после спленэктомии отмечалось расширение паракортикальной зоны, светлые центры лимфоидных узелков были представлены рыхло расположенными лимфоцитами, лимфобластами и вытянутыми эпителиоидоподобными клетками. В строме мозгового слоя располагались лимфоциты, гистиоциты и единичные нейтрофилы. У мышей контрольной группы реактивных изменений в лимфатических узлах не наблюдалось.
Выводы
Таким образом, по данным морфологического исследования у всех мышей в отдаленные сроки после спленэктомии развивается вторичное иммунодефицит-ное состояние, характеризующееся акци-дентальной инволюцией тимуса и реактивными изменениями лимфатических узлов, а также развитием микроабсцессов в печени и очаговой пневмонии бактериальной этиологии с затяжным течением.
Полученные в работе результаты патоморфологического исследования внутренних органов согласуются с данными более ранних авторов [6, 9, 10], в которых показано, что наиболее частым осложнением после спленэктомии является бактериальная пневмония, развивающаяся как в раннем периоде после операции, так и в отдаленные сроки. Данные о формировании микроабсцессов в печени не совпадают с результатами [2], согласно которым в печени у морских свинок на 40-е сут после спленэктомии наблюдается лишь рыхлая лимфоцитарная инфильтрация. Сведения о реактивных изменениях в лимфатических узлах по данным исследования тех же авторов совпадают с результатами, полученными в работе. Таким образом, развитие инфекционновоспалительных процессов после спле-
нэктомии обусловлено вторичным имму-
нодефицитным состоянием.
Литература
1. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии / Г.Г. Автандилов. - М.: Медицина, 2002. - 237 с.
2. Моделирование комбинированного
иммунодефицитного состояния
спленэктомией и аллоиммунизацией антигенами лимфатических улов / В.Т. Антоненко [и др.] // Врачеб. дело. - 1985. - №9. - С. 99-101.
3. Барта И. Селезенка / И. Барта. - Будапешт: Изд-во АН Венгрии, 1976. -263 с.
4. Зайратьянц О.В. Патология вилочко-вой железы и аутоиммунные болезни: автореф. дис. ... д-ра мед. наук / О.В. Зайратьянц. - М., 1992. - 34 с.
5. Показатели системы гомеостаза после операций при травме селезенки /
B.Ф. Кирчук [и др.] // Вестн. хирургии им. Грекова. - 2008. - №4. -
C. 48-52.
6. Масляков В.В. Травма селезенки:
особенности внутрисосудистого компонента микроциркуляции в зависимости от выполненной операции: автореф. дис. ... д-ра мед. наук /
B.В. Масляков. - М., 2010. - 43 с.
7. Физиологическое обоснование применения аутолиентрансплантации при травматических повреждениях селезенки / Ю.Г. Шапкин [и др.] // Анналы хирургии. - 2007. - №4. -
C. 56-61.
8. Шапкин Ю.Г. Роль селезенки в иммунном статусе организма / Ю.Г. Шапкин, В.В. Масляков // Детская хирургия. - 2007. - №5. - С. 40-42.
9. Шапкин Ю.Г. Иммунный статус в отдаленном периоде у пациентов, оперированных по поводу повреждений селезенки / Ю.Г. Шапкин // Хирургия. - 2006. - № 2. - С. 14-17.
10. Infections in splenectomized patient / H. Coiqnard-Biehler [et al.] // Rev Prat. - 2008. - Vol. 58, №20. - P.2209-2214.
11. Immunologic function after splenic embolization, is there a difference? / G.T. Tominaga [et al.] // J Trauma. -2009. - Vol. 67, №2. - P. 289-295.
MORPHOLOGICAL CHANGES OF INNER ORGANS AND IMMUNITY SYSTEM AT MICE BALB/C IN REMOTE PERIOD AFTER SPLENECTOMY
V.V. Nechay
In experimental investigations on male-mice Balb/c studied morphological changes in lungs, myocardium, liver, kidney, thymus and lymphatic glands after splenectomy at 30th and 60th day. Morphology facts showed about infection and inflammatory process, that originated by secondary immunodeficit status in remote period after splenectomy.
Key words: splenectomy, secondary immunodeficit.
Нечай Виктор Витальевич - мл. научный сотрудник лаборатории инфекционной патологии.
Адрес: 109004, г. Москва, Пестовский пер., д. 6, кв. 4.
Тел.: 8-495-915-23-60; 8-901-526-33-45.
E-mail: [email protected].
