CC BY
84
ИММУНОЛОГИЯ № 6, 2012
ЛИТЕРАТУРА
1. Караулов А. В., Анисимова Н. Ю., Должикова Ю. И. и др. Спонтанная и индуцированная продукция цитокинов лейкоцитами периферической крови у больных бронхиальной астмой в стадии обострения // Рос. биотерапевтический журн.
- 2010. - 2010. - Т 9, № 4. - С. 93-96.
2. Borish L. C., Nelson H. S., Lanz M. J. Interleukin-4 receptor in moderate atopic asthma. A phase I/II randomized, placebo-controlled trial // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 1999. - Vol. 160.
- P. 1816-1823.
3. Bi Y., Liu G., YangR. Th17 cell induction and immune regulatory effects // J. Cell Physiol. - 2007. - Vol. 211. - P. 273-278.
4. Barnes P. J., Chung K. F., Page C. P. Inflammatory mediators of asthma: an update // Pharmacol. Rev. - 1998. - Vol. 50. - P. 515-596.
5. Bhupinder S. Mann, Kian F. Chung Blood neutrophil activation markers in severe asthma: lack of inhibition by prednisolone therapy // Respiratory Research. - 2006. - Vol. 7. - P. 59.
6. Jatakanon A., Uasuf C., Maziak W. Neutrophilic inflammation in
severe persistent asthma // Am J. Respir Crit Care Med. - 1999.
- Vol. 160. - P. 1532-1539.
7. Gibson P. G., Simpson J. L., Saltos N. Heterogeneity of airway inflammation in persistent asthma: evidence of neutrophilic inflammation and increased sputum interleukin-8 // Chest. - 2001.
- Vol. 119. - P. 1329-1336.
8. Nonopsonic phagocytosis of zymosan and Mycobacterium kansasii by CR3 (CD11b/CD18) involves distinct molecular determinants and is or is not coupled with NADPH oxidase activation.
9. Le Cabec V., Cols C., Maridonneau-Parini I. // Infect Immun. -2000. - 68(8). - P. 4736-4745.
10. Ramesh G., Jindal S. K., Ganguly N. K., Dhawan V Increased nitric oxide production by neutrophils in bronchial asthma // ERJ May 1. - 2001. - Vol. 17, N 5. - P. 868-871.
11. Гуревич К. Г., Шимановский Н. Л. Оксид азота: биосинтез, механизмы действия, функции // Вопр. биологической и фармацевтической химии. - 2000. - № 4. - С. 16-21.
12. Culotta E., KoshlandD. E. NO news is good news // Science. -1992. - Vol. 258. - P. 1862-1865.
Поступила 09.01.12
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012
УДК 616-002.182-06-092:612.112.95.014.2]-07
Б. А. Эль Зейн, С. А. Терпигорев, И. А. Василенко, В. Б. Метелин, В. К. Беляков МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МОНОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ
крови при саркоидозе
Первый МГМУ им. И.М.Сеченова (119991, г Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2); ГБУЗ МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского, Филиал ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н. И. Пирогова Минздравсоцразвития России (129110, г Москва, ул. Щепкина, д. 2); Научно-клинический центр геронтологии (119619, г Москва, ул. 7-я Лазенки, д. 12)
В статье была дана оценка изменений морфофункциональных параметров циркулирующих моноцитов у больных саркоидозом с поражением легких и внутригрудных лимфоузлов в зависимости от активности текущего воспаления и сопоставление чувствительности этих клеток к стероидам in vitro с результатами терапии пациентов системными глюкокортикостероидами.
Ключевые слова: саркоидоз, моноциты, кровь
B.A. ElZeine, S.A. Terpigorev, I.A.Vasilenko, V.B.Metelin, V.K. Belyakov
MORPHOFUNCTIONAL CHARACTERISTICS OF PERIPHERAL BLOOD MONOCYTES IN SARCOIDOSIS
The article was the assessment of changes of morphological parameters of circulating monocytes in patients with sarcoidosis with the defeat of the lungs and intrathoracic lymph nodes depending on the current activity of inflammation and comparison of the sensitivity of these cells to steroids in vitro with the results of the therapy of patients with systemic glucocorticosteroids.
Keywords: sarcoidosis. monocytes, blood
Саркоидоз - воспалительное заболевание неизвестной этиологии, характеризующееся образованием неказеозных гранулем в различных органах и тканях. Наиболее часто в патологический процесс вовлекаются легкие и внутригрудные лимфоузлы [1-4]. В настоящее время важную роль в инициации, формировании и поддержании хронической воспалительной реакции при этом заболевании отводят клеткам си-
Терпигорев Станислав Анатольевич - канд. мед. наук, ст. науч. сотр., тел. 8(903) 979-61-10
стемы мононуклеарных фагоцитов, в частности моноцитам и образующимся из них макрофагам [5-7, 9-11]. Проведенные исследования показали, что моноциты больных саркоидозом имеют отличительные особенности по сравнению с моноцитами здоровых людей, в частности, могут экспрессировать большее количество молекул главного комплекса гистосовместимости (HLA-DR), фактора некроза опухоли альфа (ФНО-а), ангиотензинпревращающего фермента и обладают повышенной способностью к формированию многоядерных гигантских клеток [10-13]. Увеличение синтетической активности циркулирующих моноцитов при саркоидозе проявляется экспрессией молекул VLA-1 и Р2-интегрина, повышающих
- 322 -
ИММУНОЛОГИЯ № 6, 2012
их способность к адгезии и последующему рекрутированию в интерстициальную ткань [6, 14, 15]. В ряде работ отмечено увеличение притока моноцитов из периферической крови в легочную ткань еще до стадии формирования в ней саркоид-ных гранулем [16-18].
Интерес исследователей к изучению этого типа клеток при различных иммунопатологических процессах (в том числе и при саркоидозе) обусловлен не только их участием в патогенезе заболеваний, но и тем, что циркулирующие моноциты являются клетками-мишенями для глюкокортикостероидов (ГКС) вследствие наличия специфических стероидных рецепторов. В настоящее время накоплены данные о существовании различий в чувствительности к глюкокортикостероидной терапии больных саркоидозом, что может быть обусловлено и особенностями реакции клеток-участниц воспалительного процесса на ГКС. В этой связи циркулирующие моноциты являются привлекательным объектом для изучения патогенеза саркоидоза и оценки влияния ГКС на его течение.
В последние годы для исследования клеток крови используется метод лазерной компьютерной интерферометрии, который позволяет получить морфофункциональные характеристики живых нефиксированных клеток и оценить динамику их изменений после воздействия различных экзогенных факторов. Данный метод нашел применение для выявления различий чувствительности клеток крови к преднизолону in vitro и может оказаться полезным для выявления причин гормонорезистентности при саркоидозе [19].
Цель настоящего исследования - оценка изменений морфофункциональных параметров циркулирующих моноцитов у больных саркоидозом с поражением легких и внутригрудных лимфоузлов в зависимости от активности текущего воспаления и сопоставление чувствительности этих клеток к стероидам in vitro с результатами терапии пациентов системными ГКС.
Материалы и методы. Обследованы 52 некурящих пациента (41 женщина и 11 мужчин) в возрасте от 19 до 67 лет (средний возраст 34,7 года) с морфологически верифицированным саркоидозом легких и внутригрудных лимфоузлов без признаков легочного фиброза и значимых коморбидных состояний. Продолжительность заболевания составляла от 3 до 12 мес. У 41 пациента (группа А) были выявлены признаки активности системного воспалительного процесса (субфебрилитет, снижение массы тела, прогрессирующая в течение 3-4 мес рентгенологическая симптоматика внутригрудного саркоидоза, лимфоцитоз жидкости бронхоальвеолярного лаважа, спленомегалия и периферическая лимфаде-нопатия). У 11 больных (группа Н) проявлений активности саркоидного воспаления не отмечали. Контрольную группу составили 20 здоровых добровольцев.
Всем пациентам проводили общеклиническое обследование, измерение уровня неоптерина плазмы крови, анализ цитограммы бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), а также компьютерную томографию (КТ) грудной клетки высокого разрешения. Методы функциональной диагностики включали общую плетизмографию и исследование диффузионной способности легких (Dlco).
Морфофункциональное состояние моноцитов оценивали экспресс-методом лазерной компьютерной фазометрии (КФМ) с использованием модуля когерентной фазовой микроскопии «Биони КФМ» аппаратно-программного комплекса (АПК) для клинической и лабораторной диагностики с цифровой обработкой изображения (ООО «Весттрейд», Москва). В основе работы модуля лежит метод регистрации фазы света путем модуляции опорной волны, т.е. аппаратный способ интерферометрии. Источник когерентного излучения - гелий-неоновый лазер с длиной волны Х=632 нм.
В настоящей работе использовали объектив х30, общее увеличение системы х5000, точность измерения по высоте
0,5 нм, по полю - 20 нм, дискретность изображения 128 х 128, при минимальном размере пиксела 3 нм. Микроскоп обладает разрешением, незначительно уступающим растровому электронному микроскопу, и позволяет регистрировать параметры биологических объектов, не подвергавшихся предварительной фиксации или окрашиванию [20].
Забор крови (4-5 мл) для морфометрических исследований производили из локтевой вены, кровь стабилизировали гепарином в концентрации 25 ЕД на 1 мл. Мононуклеары выделяли стандартным методом по Boyum на градиенте плотности для лимфоцитов Ficoll-Paque (р = 1,077 г/см3) производства "Amersham Biosciences" (Швеция). Разделение лимфоцитов и моноцитов производили по степени их адгезивности к пластику. Взвесью клеток заполняли камеру Горяева с зеркальным напылением рабочей поверхности. После 3-5 минутного интервала, необходимого для оседания клеток, производили съемку изучаемых цитообъектов. Оптимальный объем выборки составлял 50-100 клеток. Время сканирования 1 клетки не превышало 12 с. Исследования проводили до и после инкубации клеток in vitro с преднизо-лоном в концентрации 10-4 ммоль/л.
Алгоритм морфометрии включал автоматическое определение заданных размерных параметров отдельных моноцитов, статистическую обработку данных и документирование результатов в виде протоколов I, II и III уровней. I уровень обеспечивал визуализацию фазово-интерференционного образа клетки (топограмму, 3D-изображение, профиль, гистограмму распределения фазовых высот); II уровень - расчет морфометрических показателей отдельных клеток; III уровень - интегральный анализ клеточной популяции по мерным признакам, построение моноцитограмм.
После проведенного обследования 25 больным с признаками воспалительной активности заболевания назначали терапию преднизолоном в суточной дозе 15-20 мг в течение 2 мес с последующим снижением дозы до поддерживающей (10-12,5 мг/сут). Остальные больные составили группу наблюдения. Выбор пациентов для проведения терапии был нерандомизированным, а показания к лечению определялись врачом независимо от исследователей. Динамику естественного течения болезни и результат проводимого лечения оценивали через 12 мес от момента включения пациента в исследование.
Статистический анализ данных проводили с помощью алгоритмов среды MatLab и математического пакета Statistica
6. Стандартная обработка выборок включала подсчет значений средних арифметических величин, ошибок средних, а также величины дисперсии, среднего квадратического отклонения и анализ асимметричности распределения. Различия между сравниваемыми группами рассчитывали по критериям Вилкоксона-Манна-Уитни или Стъюдента. Уровень значимости устанавливали равным 0,05.
Результаты и обсуждение
По данным исследования у 41 пациента (группа А) были выявлены признаки активности системного воспалительного процесса (субфебрилитет, снижение массы тела, прогрессирующая в течение 3-4 мес рентгенологическая симптоматика поражения легочной паренхимы, лимфоцитоз жидкости бронхоальвеолярного лаважа, спленомегалия и периферическая лимфаденопатия). У 11 больных (группа Н) проявлений активности саркоидного воспаления не отмечали.
Сравнение морфофункциональных параметров циркулирующих моноцитов больных саркоидозом и здоровых доноров позволило выявить их достоверное различие по величине средних в популяции значений диаметра (8,8 ± 0,9 и 9,5 ± 0,4 соответственно; р < 0,0001), периметра (25,6 ± 2,6 и 27,8 ± 1,3 соответственно; р < 0,0001) и площади (46,3 ± 8,9 и 52,4 ± 4,2 соответственно;р < 0,0001). Группы больных А и Н между собой по этим параметрам достоверно не различались (табл. 1).
Для оценки ядерного полиморфизма моноциты дискриминировали по величине их фазовой высоты (PH): PH1 > 2
- 323 -
ИММУНОЛОГИЯ № 6, 2012
мкм, PH2 < 2 мкм. У здоровых добровольцев и больных сар-коидозом процентное содержание клеток в циркулирующей популяции с соответствующими значениями фазовой высоты составило 32,7 ± 9,2 и 49,2 ± 24,8 (PH^, 67,3 ± 9,4 и 50,8 ± 24,8(PH2) соответственно; p < 0,004.
Корреляционный анализ полученных данных показал, что у больных саркоидозом имелась положительная зависимость между процентным содержанием циркулирующих моноцитов с фазовой высотой менее 2 мкм, относительным количеством лимфоцитов жидкости БАЛ (г = 0,34; p = 0,03) и уровнем неоптерина (г = 0,54; p = 0,0006). При этом уровень неоптерина обратно коррелировал как со значением фазовой высоты и фазового объема моноцитов (г = -0,42; p < 0,001), так и с относительным количеством моноцитов, имеющих фазовую высоту 2 мкм и более (г = -0,54; p < 0,008).
Пациентов с признаками активности системного воспаления от остальных больных отличал значительно более высокий уровень неоптерина плазмы крови (18,1 ± 7,4 и 6,9 ± 3,6 нмоль/л соответственно;р < 0,00001) и лимфоцитов жидкости БАЛ (21,4 ± 15,3 и 9,2 ± 3,8 соответственно; р = 0,005). Значимого различия между группами по функциональным параметрам дыхания не было. При сравнении морфометрических параметров циркулирующих моноцитов больных группы А и Н было выявлено достоверное различие фазовых высот исследуемых клеток (2,1 ± 0,3 и 2,3 ± 0,3 соответственно; р < 0,01) (см. табл. 1). При этом у пациентов с признаками активности саркоидного воспаления выявлялось достоверно большее количество моноцитов с малой (менее 2 мкм) фазовой высотой, чем у больных группы Н (55,4 ± 23,4 и 31,2 ± 15,8% соответственно; р < 0,003).
Через 12 мес от начала исследования у 41 пациента наблюдали частичное или полное исчезновение симптомов заболевания на фоне терапии преднизолоном (в 18 случаях) либо спонтанно (у 23 больных). У 11 больных, 7 из которых получали терапию преднизолоном, рентгенологические и функциональные симптомы болезни оказались стойкими или прогрессировали, что расценивалось как неблагоприятный исход саркоидоза.
Сопоставление исходных данных морфометрии моноцитов с результатами последующей терапии системными ГКС 25 больных саркоидозом показал, что благоприятный результат лечения наблюдали у пациентов, моноциты которых имели больший фазовый диаметр, фазовый периметр и фазовую площадь (табл. 2).
У больных с благоприятным результатом терапии ГКС после инкубации с преднизолоном в концентрации 10-4 ммоль/л было зарегистрировано увеличение фазовых высот
Таблица 1
Морфофункциональные параметры моноцитов периферической крови больных саркоидозом и здоровых добровольцев (M ± т)
Фазовые параметры моноцитов Здоровые добровольцы, n = 20 Общая группа больных саркоидозом, n = 52 Группа А, n = 41 Группа Н, n = 11
Диаметр, мкм 9,5 ± 0,4 8,8 ± 0,9** 8,8 ± 1,0** 8,9 ± 0,6**
Периметр, мкм 27,8 ± 1,3 25,6 ± 2,6** 25,5 ± 2,8** 26,0 ± 2,0*
Площадь, мкм2 52,4 ± 4,2 46,3 ± 8,9** 45,8 ± 8,6** 48,2 ± 10,0 **
Высота, мкм 2,0 ± 0,1 2,1 ± 0,3 2,1 ± 0,3*** 2,3 ± 0,3
Объем, мкм3 44,5 ± 4,9 47,2 ± 12,1 45,7 ± 11,0 52,7 ± 14,9
Примечание. * р < 0,03 с группой доноров; ** р < 0,005 с группой доноров; *** р < 0,01 с группой Н.
моноцитов на 14,5% и более (значение параметра до и после инкубации 1,97 ± 0,09 и 2,1 ± 0,13 мкм соответственно; р < 0,03), тогда как у резистентных к лечению пациентов существенной динамики морфофункциональных параметров моноцитов после инкубации с преднизолоном не наблюдали.
Неблагоприятный результат стероидной терапии оказался связанным с более низким уровнем диффузионной способности легких (66,0 (60,0-72,1) и 74,1 (69,0-83,0) соответственно, р < 0,016).
Результаты многочисленных исследований системы моно-нуклеарных фагоцитов при саркоидозе позволяют говорить о возможности оценки активности текущего воспаления на основании измерения морфометрических параметров этих клеток [2, 3, 8, 21-23]. Например, циркулирующие моноциты больных с признаками воспалительной активности заболевания экспрессируют большее количество CD14, CD16 и CD69, что сопровождается увеличением синтеза этими клетками ФНО-а, простагландина Е2 и F1, лейкотриена B4, повышением их антигенпрезентирующей способности и склонности к формированию многоядерных гигантских клеток [7, 10, 17].
Полагая, что различия в активности текущего воспаления при саркоидозе связаны с особенностями морфофункциональных параметров циркулирующих моноцитов, мы использовали в работе экспресс-метод витальной компьютерной фазово-интерференционной морфометрии, который позволяет оценивать изменение фазы прошедшего через клетку излучения и получать информацию о распределении биологического вещества внутри клетки. В трансформации фазового рельефа значительную роль играют концентрация, химический состав и агрегатное состояние внутриклеточного вещества. Фазово-интерференционные портреты моноцитов сопоставимы с их известными изображениями, полученными с помощью световой или электронной микроскопии. В то же время метод КФМ позволяет неинвазивно в режиме реального времени исследовать особенности структурногеометрических и оптических показателей живых функционирующих клеток, комплексно характеризующих не только их морфологию, но и функциональное состояние.
Согласно полученным данным моноциты страдающих сар-коидозом пациентов имели достоверно меньшие параметры (диаметр, периметр и площадь) по сравнению с моноцитами здоровых доноров. У пациентов с признаками воспалительной активности заболевания фазовая высота циркулирующих моноцитов была достоверно меньше, чем в группе больных без признаков активности системного воспаления. Фазовая высота клетки отражает в первую очередь состояние клеточного ядра. В процессе синтеза клеткой биологически активных молекул ядерный хроматин претерпевает сложные конформационные превращения, изменяющие его физико-химические свойства, что влияет на величину анизотропии (двулучевого преломления). Величина анизотропии зависит от степени упорядо-ченностии хроматина, снижение уровня анизотропии может свидетельствовать о переходе гетерохроматина в эухроматин.
Таблица 2
Исходные морфофункциональные параметры циркулирующих моноцитов больных с благоприятным и неблагоприятным результатом терапии преднизолоном
Фазовые параметры моноцитов Благоприятный результат, n=18 Неблагоприятный результат, n=7
Диаметр, мкм 9,1 ± 0,7* 8,3 ± 0,4
Периметр, мкм 26,5 ± 2,0* 24,0 ± 1,5
Площадь, мкм2 49,5 ± 9,0* 40,9 ± 4,6
Объем, мкм3 51,0 ± 16,1 42,6 ± 8,5
Высота, мкм 2,1 ± 0,3 2,1 ± 0,3
* р < 0,02.
- 324 -
ИММУНОЛОГИЯ № 6, 2012
При активации клетки в ядре происходит перераспределение гетерохроматина к периферии, заметное снижение его электронной плотности, а в ядрышке образуются множественные, так называемые фибриллярные центры, окруженные плотным фибриллярным и гранулярным компонентами. Таким образом, снижение фазовой высоты моноцитов отражает повышенную активность биологических процессов, протекающих в клеточном ядре [24].
В настоящем исследовании была выявлена отрицательная корреляционная зависимость величин фазовой высоты и объема моноцитов от уровня неоптерина крови [11]. Связь оптических фазовых показателей клеток с активностью воспаления подтверждало и то, что число циркулирующих моноцитов с низкими значениями фазовой высоты (< 2 мкм) увеличивалось при повышении уровня неоптерина плазмы крови и относительного количества лимфоцитов БАЛ.
Полученные данные указывают на возможность использования морфометрических характеристик моноцитов периферической крови, в частности их фазовой высоты, для интегральной оценки активности системного воспалительного процесса у больных саркоидозом. Рассчитанная специфичность показателя фазовой высоты в оценке активности саркоидоза оказалась довольно высокой (90%), однако чувствительность этого параметра была всего 42,9%, тогда как для неоптерина крови эти величины составили 82,6 и 73,5% соответственно.
Назначение системных глюкокортикостероидов больным саркоидозом с признаками активности системного воспаления в большинстве случаев (72%) привело к их выздоровлению в течение 6-12 мес. Однако у 7 (18%) больных рентгенологические и функциональные проявления болезни после проведенного лечения сохранялись. Низкая эффективность стероидов при саркоидозе могла быть связана с процессами фиброзообразования в легочной ткани, однако у всех больных, резистентных к терапии ГКС при КТ не было получено данных о наличии легочного фиброза. Одной из причин гормонорезистентности могла быть низкая чувствительность к стероидам клеток-мишеней. Так, у пациентов с благоприятным результатом терапии отмечалось достоверное увеличение (на 14,5% и более) фазовой высоты циркулирующих моноцитов после инкубации клеток с преднизолоном в концентрациях 10-4 мкмоль/л in vitro, демонстрирующее подавление их метаболической активности под влиянием ГКС. В группе гормонорезистентных больных, напротив, значимых изменений этого параметра после инкубации не наблюдали.
Таким образом, эффективность стероидной терапии больных саркоидозом была связана с высокой чувствительностью циркулирующих моноцитов к преднизолону in vitro, а резистентность к лечению сочеталась с отсутствием динамики морфофункциональных параметров клеток при инкубации их с преднизолоном.
В настоящей работе была выявлена зависимость эффективности терапии больных ГКС от исходных значений DLco. В группе больных, резистентных к лечению стероидами, уровень этого показателя был значительно ниже, чем у пациентов с благоприятным результатом терапии. Данные изменения могли быть интерпретированы как следствие начинающегося легочного фиброза, не проявляющегося в виде фиброзного паттерна на КТ высокого разрешения. Однако у 10 привлеченных к исследованию больных ГКС оказались высокоэффективны, несмотря на то что исходный уровень DLco был менее 70%. Фазовый диаметр моноцитов этих больных исходно оказался значительно больше, чем у больных с неблагоприятным результатом терапии (9,1 ± 0,6 и 8,3 ± 0,4 соответственно; р < 0,038) и при этом не отличался от значений фазового диаметра моноцитов остальных больных этой группы. Для пациентов, резистентных к терапии ГКС, исходный фазовый диаметр клеток был менее 8,7 мкм.
Заключение
Исходя из полученных результатов мы полагаем, что мор-
фометрические характеристики циркулирующих моноцитов больных саркоидозом могут быть использованы для оценки активности текущего воспалительного процесса. Низкие значения фазовой высоты моноцитов и появление в периферической крови большого количества моноцитов с малой (менее 2 мкм) фазовой высотой могут служить дополнительным критерием активности саркоидного воспаления.
С целью предварительной оценки эффективности ГКС при саркоидозе целесообразно проводить исследование чувствительности циркулирующих моноцитов к преднизо-лону in vitro. Отсутствие прироста фазовой высоты моноцитов после инкубации с преднизолоном в концентрации 10-4 мкмоль/л свидетельствует о низкой чувствительности клеток к стероидам, что может быть причиной снижения эффективности ГКС-терапии при этом заболевании.
ЛИТЕРАТУРА
1. Hunninghake G. W., Costabel U., Ando M. et al. Statement on sarcoidosis. Joint Statement of the American Thoracic Society (ATS), the European Respiratory Society (ERS) and the World Association of Sarcoidosis and Other Granulomatous Disorders (WASOG) adopted by the ATS Board of Directors and by the ERS Executive Committee // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1999. - Vol. 160. - P. 736-755.
2. Agostini C., Garbisa S., Trentin L. et al. Pulmonary alveolar macrophages from patients with active sarcoidosis express type IV collagenolytic proteinase. An enzymatic mechanism for influx of mononuclear phagocytes at sites of disease activity // J. Clin. Invest. - 1989. - Vol. 84. P. 605-612.
3. Lohmann-Matthes M. L., Steinmuller C., Franke-Ullmann G. // (1994) Pulmonary macrophages Eur. Respir. J. - 1994. - Vol.
7. - P. 1678-1689.
4. Bitterman P. B, Saltzman L. E., Adelberg 5, Ferrans V J., Crystal R. G. Alveolar macrophage replication: one mechanism for the expansion of the mononuclear phagocyte population in the chronically inflamed lung. // J. Clin. Invest. - 1984. - Vol. 74. - P. 460-469.
5. Terao I., Hashimoto S., Horie T. Effect of GM-CSF on TNF-alpha and IL-1-beta production by alveolar macrophages and peripheral blood monocytes from patients with sarcoidosis // Int Arch. Allergy Immunol. - 1993. - 102(3). - P. 242-248.
6. HeronM., Grutters J. C., van Velzen-BladH. et al. Increased expression of CD16, CD69, and very late antigen-1 on blood monocytes in active sarcoidosis // Chest. - 2008 Nov. - 134(5). - P. 1001-1008.
7. Rоmer F. K., Christiansen S. E., Kragballe K. et al. Studies of peripheral blood monocytes in pulmonary sarcoidosis // Clin Exp Immunol. - 1984, November. - 58(2). - P. 357-363.
8. Terao I., Hashimoto S., Horie T. Effect of GM-CSF on TNF-alpha and IL-1-beta production by alveolar macrophages and peripheral blood monocytes from patients with sarcoidosis // Int Arch. Allergy Immunol. - 1993. - 102(3). - P. 242-248.
9. Gerke A., Hunninghake G. The immunology of sarcoidosis // Clin. Chest Med. - 2008. - 29. - P. 379-390.
10. Jenkins J. K., MalyakM., Arend W. P. The effects of interleukin-10 on interleukin-1 receptor antagonist and interleukin-1-beta production in human monocytes and neutrophils // Lymphokine Cytokine Res. - 1994. - 13. - P. 47-54.
11. Costabel U., du Bois R. World Association of Sarcoidosis Other Granulomatous Disorders.. Consensus conference: activity of sarcoidosis; third WASOG meeting, Los Angeles, USA, September 8-11, 1993 // Eur Respir J. - 1994. - 7. - P. 624-627.
12. Semenzato F. Adami, Maschio N., Agostini C. Immune mechanisms in interstitial lung diseases // Allergy. - 2000. - 55. - P. 1103-1120.
13. Muller-Quernheim J. Sarcoidosis: immunopathogenetic concepts and their clinical application // Eur Respir J. - 1998. - 12. - P. 716-738.
14. Zielonka T. M., Demkow U., Bialas B. et al. Modulatory effect of sera from sarcoidosis patients on mononuclear cell-induced angiogenesis // J. Physiol Pharmacol. - 2007 Nov. - 58 Suppl
- 325 -
ИММУНОЛОГИЯ № 6, 2012
5(Pt 2). - P. 753-766.
15. Сесь Т. П. Особенности воспалительного процесса при сар-коидозе // Цитокины и воспаление. - 2002. - №3. - С. 3-8.
16. Борисов С. Е. Саркоидоз органов дыхания: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - М., 1995.
17. Трошев М. Ю., Кудрявицкий А. И. Иммунологические аспекты патогенеза саркоидоза // Пробл. туб. - 1988. - №3. - С. 60-65.
18. Хоменко А. Г., Ерохин В. В., Филиппов В. П. и др. Саркоидоз как системный гранулёматоз. - М., 1999, с. 39 с ил.
19. Терпигорев С. А., Ильченко В. А., Василенко И. А. и др. Соотношение результатов лечения глюкокортикоидами с их влиянием на моноциты in vitro при бронхиальной астме // Бюл. экспер. биол. и мед. - 2003. - №6. - С. 683-687.
20. Василенко И. А., Кардашова З. З., Тычинский В. П. и др. Клеточная диагностика: возможности витальной компьютерной
микроскопии // Вестн. последипломного мед. образования. - 2009. - № 3-4. - С.64-68.
21. Keogh B. A., Hunninghake G. W., Line B. R., Crystal R. G. The alveolitis of pulmonary sarcoidosis: evaluation of natural history and alveolitis-dependent changes in lung function // Am. Rev. Respir Dis. - 1983. - 128. - P. 256-265.
22. Toossi Z., Hirsch C. S., Hamilton B. D. Decreased production of TGF-P1 by human alveolar macrophages compared with blood monocytes // J. Immunol. - 1996. - 156. - P. 3461-3468.
23. Minuno K., Okamoto H. et al. Heightened ability of monocytes from sarcoidosis patients to form multi-nucleatedgiant cells in vitro by supernatants of concanavalin A-stimulated mononuclear cells // Clin Exp Immunol. - 2001. - 126. - P. 151-156.
24. Разин С. В., Быстрицкий А. А. Хроматин: упакованный геном. - М., 2009. - С. 176.
Поступила 08.10.12
ОБЗОРЫ
© А. А. ЯРИЛИН, А. Д. ДОНЕЦКОВА, 2012 УДК 612.017.1:612.438.014.3
А. А. Ярилин, А. Д. Донецкова
Т-КЛЕТКИ - НЕДАВНИЕ ЭМИГРАНТЫ ИЗ ТИМУСА
ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России, г. Москва
Обзор посвящен самым молодым из присутствующих в периферическом отделе иммунной системы клеток T-ряда, называемым недавними эмигрантами из тимуса (RTE - от "recent thymic emigrants"). Описаны условия и контроль эмиграции зрелых T-лимфоцитов из тимуса. Критически проанализированы методы определения RTE, включая методы, основанные на использовании флюоресцентной метки и определении T-рецепторных эксцизионных колец, остающихся в T-клетках после перестройки генов TCR. Представлены данные об особенностях мембранного фенотипа RTE. Детально проанализирована роль RTE в гомеостатических процессах, основным ресурсом которых являются эти клетки. Приведены данные о возрастной динамике RTE, главным проявлением которой является снижение их численности в процессе старения.
Ключевые слова: тимус, T-рецепторные эксцизионные кольца, недавние эмигранты из тимуса A.A.Yarilin, A.D. Donetskova
T-CELLS ARE RECENT MIGRANTS FROM THE THYMUS
Review is dedicated to the youngest of those present in the peripheral section of the immune system cells T-series, called the recent immigrants from the thymus ( RTE - from the "recent thymic emigrants"). Describes conditions and control of the emigration of Mature T-lymphocytes of the thymus. Critical analysis methods to determine the RTE, including methods based on the use of fluorescent labels and determining the T-receptor exision rings, remaining in the T-cells with the reconstruction of the TCR genes. Presented data about the peculiarities of membrane phenotype RTE. Analyzed in detail the role of the RTE in the homeostatic processes, the main resource of whom are these cells. Presents data on the age dynamics of the RTE, the main manifestation of which is the reduction of their population in the process of aging
Keywords: thymus. T-receptor exision rings, recent migrants from the thymus
Постоянство численности Т-лимфоцитов в течение жизни поддерживается благодаря осуществлению двух процессов - поступления Т-лимфоцитов из тимуса и гомеостатической пролиферации в периферическом отделе иммунной системы. В момент рождения тимус является единственным источником Т-клеток, а в последующем параллельно с возрастной инволюцией этого органа его вклад в неогенез Т-клеток ослабляется, а вклад автономных гомеостатических событий, осуществляемых на периферии, возрастает. Каждая
Ярилин Александр Александрович - д-р мед. наук, проф., тел. +7(499) 617-79-19
из названных составляющих может быть оценена с помощью лабораторных тестов. Мерой вклада тимуса в пополнение популяции периферических Т-лимфоцитов является численность особой фракции Т-клеток - недавних эмигрантов из тимуса - RTE (от recent thymic emigrants). Значительный интерес к этим клеткам появился лишь в последние десятилетия, и наши знания о них отнюдь нельзя считать полными. Между тем на этой переходной стадии развития между тимусом и периферией Т-лимфоциты завершают антигеннеза-висимый этап своего созревания и адаптируются к условиям существования в условиях рециркуляции, претерпевая при этом определенные структурные и функциональные изменения.
- 326 -
