CC BY
60
Молекулярные аспекты вирусиндуцированного канцерогенеза и терапии новообразований
Хмара М.Е., Жукова Т.В., Гудков В.Г.
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии, Минск, Беларусь
Khmara M.E., Zhukova TV., Gudkov V.G.
Republican Scientific and Practical Center for Epidemiology and Microbiology, Minsk, Belarus
Molecular aspects of viralindaction carcinogenesis and therapy of neoplasms
Резюме. Проведен анализ молекулярных механизмов возникновения и клинико-морфологических проявлений злокачественных новообразований, возникающих под влиянием одного из ДНК-содержащих вирусов - вируса простого герпеса, который наряду с вирусом папилломы человека является одним из основных онкопатогенов. Рассматриваются молекулярные и клинико-морфологические особенности вируса простого герпеса, демонстрирующие различные проявления его онкогенных свойств, главное из которых - способность короткого участка ДНК к образованию латентно-ассоциированных транскриптов, приводящих к возбуждению в клетке эндонуклеазной активности. Приведены данные о способности вируса образовывать с панкреатической рибонуклеазой антивирусный макромолекулярный комплекс (АМК), сходный с РНК-индуцированным silendng-комплексом, вызывающим подавление цитолитической активности матричной РНК. В литературе описаны лишь этапы образования РНК-индуцированного silencing-комплекса при участии ядерной и цитоплазматической эндонуклеаз, двух-цепочечных РНК и геликазы (68 кДа), способной расплетать указанные выше РНК, вследствие чего одна из нитей лишает тРНК ее матричной активности. Как единый комплекс такой молекулярный аппарат получен нами впервые.
Комплекс содержал метильные группы, обладал антиапоптозной и цитопролиферативной активностью, активировал синтез РНК (особенно в тканевых культурах, имеющих опухолевое происхождение или контаминированных ретровирусами), а также вызывал усиление опухолевого роста в эксперименте. Обсуждается роль деметилирования CpG-островков под влиянием АМК, что приводит к активации функции p53 как гена-супрессора опухолевого роста. Установлено, что АМК не образовывался с минус-геномными вирусами. Более того, при взаимодействии с указанными выше патогенами он разрушался, о чем свидетельствовала потеря его противовирусной активности. Минус-геномные вирусы способны подавлять опухолевый рост путем прямого лизиса злокачественных клеток, а также за счет образования своеобразных комплексов между минус-геномным вирусным белком и метилированными CpG группами раковых клеток, что может приводить к образованию комплексов, стимулирующих противоопухолевый иммунитет.
Ключевые слова: антивирусный макромолекулярный комплекс, РНК-индуцированный silencing-комплекс, ген-супрессор опухолевого роста, минус-геномные вирусы, вирус простого герпеса (ВПГ), подавление опухолевого роста, противоопухолевый иммунитет.
Медицинские новости. — 2015. — №12. — С. 14—17. Summary. The analysis of molecular mechanisms of developing and clinical and morphological manifestations of malignant tumors arising under the influence of one of the DNA-containing viruses, the herpes simplex virus, so as the human papilloma virus being one of the major oncologic pathogen was carried out. We considered the molecular and clinical morphological features of herpes simplex virus, that showed the various manifestations its oncogenic properties, the most important of them was the ability of a short DNA site to form a latent-associated transcripts leading to the formation of an endonuclease activity in a cell.
There are presented data on the virus ability to form the antiviral macromolecular complex (AMC) wtth the pancreatic ribonuclease similar to the RNA induced silencing complex inhibtting the messenger RNA cytolitic activity. The literature describes only the steps of forming an RNA-induced silencing complex involving nuclear and cytoplasmic endonucleases, double stranded RNA helicases (68 kDa) that can untwist the RNA, whereby one of its strands robs its mRNA template activity. As a single complex the molecular mechanism was obtained for the first time.
The complex obtained contained a methyl groups, possessed anti-apoptotic and cytoproliferative activity, activated RNA synthesis (especially in tissue cultures of neoplastic origin or contaminated with retroviruses), and caused tumor growth increase in experiment. The role of demethylation of CpG-islands influenced AMC, which leads to the activation of p53 function as a tumor growth suppressor gene was discussed. It was found that the AMC was not formed with the virus negative genome. Moreover, by reacting wtth the above pathogens it was destroyed, as evidenced by its antiviral activity loss. Negative genomic viruses were able to suppress tumor growth through direct lysis of malignant cells, and also due to the formation of complexes between the original negative genomic viral protein and methylated CpG groups of cancer cells, which may lead to the formation of complexes that stimulate anti-tumor immunity.
Keywords: herpes simplex virus, antiviral macromolecular complex, RNA induced silencing complex, tumors growth, negative genome viruses, antitumor immunity.
Meditsinskie novosti. - 2015. - N12. - P. 14-17.
Онкологические заболевания являются второй по значимости причиной смертности населения экономически развитых стран, что обусловливает необходимость дальнейшего изучения механизмов канцерогенеза и разработки эффективных лекарственных средств.
В течение многих лет в онкологии складывалось представление о раке как о заболевании, детерминированном ге-
нетическими изменениями в опухолевой клетке, однако в 50-60 годах прошлого столетия были сформулированы основополагающие теории, определяющие развитие современной биомолекулярной онкологии. К ним относятся вирусная теория происхождения опухолей Л.А. Зильбера и гипотеза Хюбнера и Тодаро о вирогене и онкогене. Положения этих теории и гипотезы обосновали поиск компонентов
вирусного генома, действие которых обусловливает злокачественную трансформацию [1, 2].
В соответствии с современными воззрениями, неоплазия представляет собой сложный, многоступенчатый процесс, по существу - цепь или каскад событий, так или иначе основанных на активации вирусного онкогена. Использование в онкологии методов молекулярной
биологии позволило установить, что все без исключения вирусные онкогены (v-onc) имеют свои прототипы, клеточные онкогены (c-onc), в геноме различных клеток. Все это позволило также сделать вывод о существовании нескольких групп древних генов, отражающих филогенетическое родство организмов и сохранивших свою относительно неизменную структуру на протяжении длительного эволюционного процесса, что нашло отражение в данных о родстве антигенов у млекопитающих [3-5].
Краеугольным камнем сформулированной Л.А. Зильбером концепции является положение о том, что канцерогенные свойства вируса принципиально отличаются от его инфекционных свойств, а процесс вирусного канцерогенеза по своей природе не является инфекционным. Поскольку трансформация связана лишь с небольшим участком вирусного генома, обычно называемым трансформирующей областью (ТО), а инфекционность требует присутствия и экспрессии всех вирусных генов, то в трансформированной клетке должны создаваться условия для отключения функций той части вирусного генома, которая определяет его цитолитические свойства. Другими словами, в системе «онкогенный вирус - клетка» должен существовать механизм, обеспечивающий подавление инфекционных, а именно цитолитических свойств вируса, то есть, используя современную терминологию, должно иметь место «умолкание» (silencing) той части вирусного генома, которая ответственна за его цитолитические, разрушающие клетку свойства. В конечном счете должен функционировать механизм, обеспечивающий клетке атипичную цитопролиферацию, иммортализацию, морфологический атипизм, по существу -механизм канцерогенеза [6, 7].
Рассматривая морфологический ати-пизм раковой клетки и морфопатогенез злокачественных новообразований, нельзя обойти вниманием значение предопухо-левых дистрофических процессов и возникающих под влиянием разнообразных несмертельных химических, физических и биологических факторов дистрофических пролифератов, приводящих впоследствии к развитию истинных опухолей [8].
Морфологически дистрофические пролифераты могут быть представлены различными формами в зависимости от локализации и этиологии процесса. Так, в головном мозге это может быть хронический менингоэнцефалит, в этиопатогенезе которого ведущее место занимает хроническая герпетическая инфекция, морфологическим субстратом которой является
очаговый глиоз, а также пролиферация микрососудистого русла [9]. В этиопатоге-незе заболеваний легких также имеются терминальные процессы, которые по своей сути являются предраковыми. Это различные виды гиперплазий, дисплазий и метаплазий, а также склероза, являющиеся облигатными процессами для возникновения рака легкого. При этих процессах возникает ряд условий, способствующих злокачественной трансформации клеток: депонирование преимущественно экзо-и эндогенных канцерогенов, гипоксия, местная иммуносупрессия, нарушение межклеточных взаимодействий и др. [10]. В желудочно-кишечном тракте предраковыми процессами являются лейкоплакия, дисплазия эпителия и склероз (пищевод); атрофические процессы, дисплазия, метаплазия (желудок) [11]. Рак печени обычно развивается на фоне цирроза, который также считается предраковым состоянием, при этом наибольшее значение имеет дисплазия гепатоцитов. Рак поджелудочной железы также нередко развивается на фоне склероза [12]. В генитальной сфере основные предраковые процессы -эндоцервикоз, дисплазия, железисто-кистозная гиперплазия и лейкоплакия; в молочной железе - пролиферативная форма мастопатии, а также дисплазия протоков [13].
Дистрофические пролифераты, подвергнутые воздействию определенных молекулярно-биологических комплексов вирусной природы, запускающих механизмы индукции генетической нестабильности клеток, становятся по существу материальным субстратом онкогенеза.
Такая регулируемая нецитолитическая вирусная «инфекция» позволяет клеткам активировать элементы собственного генетического аппарата. В этих условиях дистрофический пролиферат становится рецептором той части генома вируса простого герпеса (ВПГ), которая (при «умолкании» цитолитической активности) обеспечивает ему выживание и имморта-лизацию [14].
Такой подход согласуется с мнением Л.Л. Киселева, определявшего опухолевые клетки «...как клетки, утратившие тонкий баланс между системами внешней и внутренней регуляции их жизни, что приводит к ослаблению зависимости от внешних сигналов позитивного контроля деления клеток над негативным, пролиферации над дифференцировкой. Если не бояться обвинений в антропоморфизме и не понимать все буквально, то можно было бы сказать, что рак - это победа клеточного эгоизма над клеточным альтруизмом, при-
несение в жертву одной клетки интересов всего организма» [15].
Получая дополнительные генетические модули и частично уходя от апоптоза, раковая клетка получает возможность блокировать презентацию раковых онкогенов как антигенов, обеспечивающих развитие адекватных противоопухолевых иммунологических реакций.
Как указывалось выше, онкогенные вирусы могут реализовывать трансформирующую область своего генома и вызывать злокачественную трансформацию клеток только при условии выключения их цитолитической активности, то есть должно иметь место «умолкание» генов, ответственных за вирусный цитолиз.
Необходимо отметить, что в последние годы феномену «умолкания» генов уделяется большое внимание. Так, Нобелевская премия по медицине в 2006 г. была присуждена за выполненные в 1998 г. исследования по так называемому «генетическому нокдауну», приводящему к избирательному подавлению активности некоторых генов у нематоды Ceanorhabditis elegans в результате введения двухцепочечных РНК (дцРНК) [16]. Впоследствии термин silencing стал применяться в более общем смысле для обозначения подавления экспрессии матричной РНК (мРНК) под действием малых siPHK. При этом заключительный механизм «умолкания» mPHK происходит за счет связывания двухцепочечной siPHK с цитоплазматической (Dicer) и ядерной (Droscha) эндонуклеазами, образуя так называемый RNA-induced silencing complex (RISC). Однако RISC, связанный с двухцепочечной siPHK, неактивен. Для его активизации необходимо расхождение цепей siPHK, катализируемое геликазой с молекулярной массой 68 кДа. Только после этого входящая в состав комплекса RISC эндорибонуклеаза способна расщепить молекулу мРНК-мишени, вследствие чего последняя теряет свою матричную активность [17].
Здесь важно отметить, что цитируемые выше авторы такой комплекс в чистом виде не получали и он до настоящего времени представляет гипотетическую конструкцию. В то же время еще в 1984 г. группой авторов, возглавляемых академиком В.И. Вотяковым, впервые был получен антивирусный макромолекуляр-ный комплекс (АМК), который подавлял цитолитические свойства ряда вирусов, за исключением орто- и парамиковирусов, оказывая при этом выраженный цитопроли-феративный эффект, особенно в тканевых культурах, имеющих опухолевое происхождение. Способ состоял в обработке
лизата первично трипсинизированных клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК), инфицированных ВП17 панкреатической ри-бонуклеазой при pH 6,5-6,8 и температуре 85-95 °С. Образовавшийся хлопьевидный осадок отделяли путем центрифугирования при 3000 g, супернатант использовали как экспериментальный противовирусный препарат (ЭПВП). В качестве контролей исследовали действие супернатантов, приготовленных из лизатов неинфициро-ванных клеток ФЭК в присутствии рибону-клеазы, а также супернатантов из лизатов вируссодержащих суспензий, инкубируемых in vitro при 95 °С в течение 15-30 минут в отсутствие рибонуклеазы, а также термически обработанной рибонуклеазы. Исследования in vitro показали, что ЭПВП обладал выраженной противовирусной активностью, подавляя цитолитические свойства ряда вирусов, за исключением орто- и парамиковирусов, оказывая при этом выраженный цитопролиферативный эффект.
Состав полученного ЭПВП определялся методом гель-хроматографии на колонках с сефадексами G-50, G-100 и биогелем P-4. Было показано, что противовирусной активностью обладала фракция с молекулярной (мол.) массой 97-100 кД, которая в присутствии 1M NaCl разделялась на три фракции с мол. массами 68, 15,8 и 13,8 кД. Кроме того, при гель-хроматографии на биогеле P-4 выявлялся низкомолекулярный компонент с мол. массой около 2 кДа.
Спектр ИК-поглощения активной фракции ЭПВП соответствовал валентным и деформационным колебаниям метильных (CH3) групп и характеризовался 3-5-кратным возрастанием оптической плотности. В то же время в контрольном, не инфицированном вирусом, препарате имеются сходные с ЭПВП спектральные характеристики, например при частотах максимума полос 1000-1240 cм"1 и 3070-3320 cм-1 [18].
Таким образом, антивирусный эффект ЭПВП, полученного при воздействии панкреатической нуклеазы на лизат инфицированных ВПГ клеток ФЭК, обусловлен антивирусным макромолекулярным комплексом (АМК), который состоит из трех видов белковых молекул с мол. массами 68 кД; 13,8 кД; 15,8 кД и низкомолекулярного компонента с мол. массой около 2 кД. Полагаем, что белок с мол. массой 68 кД является геликазой, белки с мол. массой 13,8 кД; 15,8 кД обладают нукле-азной активностью, а субстрат 2 кДа является компонентом нуклеотидной природы. В этом комплексе нуклеазы обеспечивают
противовирусный эффект, а метильные группы - цитопролиферативный за счет метилирования генов-супрессоров опухолевого роста класса р53мт [17-19].
В дальнейших исследованиях для получения АМК использовали ВПГ обладающий выраженными онкогенными свойствами. Полученный комплекс имел значительную концентрацию метильных групп, проявлял высокую антиапоптозную и цитопролиферативную активность, вызывал повышение синтеза РНК на фоне снижения синтеза ДНК в культуре ткани и обусловливал усиление роста опухоли в эксперименте. В то же время АМК вызывал статистически достоверное подавление титра ВПГ в культуре ткани. Необходимо отметить, что АМК не образовывался при использовании минус-геномных вирусов (орто- и парамиксовирусов). Он также не подавлял цитолитическую активность этих патогенов. Более того, эти признаки свидетельствуют о способности указанных вирусов разрушать АМК.
Известно, что в случае отсутствия цитолитической активности (например, при персистенции в нейронах) у ВПГ транскрибируется не весь геном, а лишь его короткая область, называемая областью ассоциированных с латенцией РНК-транскриптов. Учитывая современные данные и по аналогии с механизмом «умолкания» матричных РНК, можно предположить, что как раз эти РНК латентно ассоциированных транскриптов под влиянием ядерных и цитоплазматических клеточных эндорибонуклеаз становятся источником микро-РНК №НК). Последние участвуют в образовании упомянутого выше РНК-индуцированного комплекса «умолкания» генов (RISC), подавляющего цитолитическую активность ВПГ и определяющего затем цитопролиферативную и неопластическую трансформацию клеток.
В свете изложенного впервые выполненные исследования полученного нами комплекса представляются достаточно значимыми и открывают новые возможности в изучении механизмов малигнизации клеток.
Установлено, что вирусиндуциро-ванное действие, проявляющееся как в защите клеточного монослоя, так и в подавлении репродукции инфицированного ВПГ оказывали только лизаты инфицированных клеток, прединкубированные с рибонуклеазой при 85-95 °С в течение 15-30 минут. Если с рибонуклеазой инкубировали лизаты нормальных клеточных суспензий, то противовирусное действие не проявлялось. Оно не было обнаружено
и при применении лизатов вируссодержащих суспензий, проинкубированных при этих условиях в отсутствие рибонуклеазы. Антивирусное действие не проявлялось и в том случае, если прединкубация рибонуклеазы проводилась с очищенным вирусом ВПГ [19]. Инфицирование культуры ткани фибробластов эмбриона кур ВПГ совместно с АМК приводило к сохранности клеточного монослоя и давало возможность моделировать хроническую инфекцию in vitro. Кроме того, АМК стимулировал синтез РНК, что сопровождалось приростом «урожая» клеток, и это сближает его с действием ростовых факторов. По-видимому, активация синтеза РНК происходит и в ядрах инфицированных клеток при хронической герпетической инфекции (ХГЭ), что приводит к их увеличению, создавая картину клеточного полиморфизма, иногда сходную с неопластической трансформацией [20]. Подтверждением такой точки зрения могут быть данные, полученные недавно C. Bolshoff [21] при исследовании патогенеза саркомы Капоши, которая лишь условно относится к новообразованиям, поскольку пролиферирующие при этом веретенообразные клетки идентифицируются как неврогенные (шванновские), фибропластические или эндотелиальные элементы. Автор полагает, что преобладание пролиферативных процессов, определяющих основной патоморфологический признак заболевания, свидетельствует о ведущей роли «латентных» белков, синтезирующихся в нерепликативной фазе инфекции за счет активации отдельных участков генома вируса. Выделенный при этом из инфицированных герпесвирусом 8 типа веретенообразных клеток ростовой фактор - vesicular endothelial growth factor (VEG) - вызывал пролиферацию клеток эндотелия сосудов и обусловливал ан-гиогенез. Минимальная выраженность воспалительных и некротических изменений при ХГЭ свидетельствует о том, что АМК и VEG (vesicular endothelial growth factor), выделенные из инфицированных герпесвирусом 8 типа клеток, обладая противовирусными свойствами, подавляют репликативную фазу размножения вируса. Имея такой механизм, вирус не только уходит от биологического парадокса, когда он разрушает пораженные им клетки, но и в процессе хронизации создает условия для сохранения своего генома в латентном состоянии в жизнеспособных пролиферирующих клеточных элементах, высокий индекс пролиферации которых сближает их с неопластическим процессом.
Таким образом, представленные литературные и полученные нами клинические, морфологические и экспериментальные данные указывают на снижение инфекционных свойств вируса, что позволяет объяснить некоторые патогенетические механизмы формирования хронического патологического процесса при инфицировании клеток ЦНС персистирующим в организме ВПГ. Так, снижение цитопатогенных свойств вируса приводит к ограничению некротических поражений, а на первый план выступает продуктивный воспалительный процесс в виде выраженной пролиферации макро- и микроглии, а также эндотелия сосудов микроциркуляторного русла [22]. Активация синтеза РНК в сохраняющихся инфицированных клетках проявляется полиморфизмом ядер нейронов, глиальных и эндотелиальных клеток. Такой тип патологического процесса вполне согласуется с постепенным нарастанием неврологической симптоматики, а преобладание когнитивных нарушений связано с вторичной гибелью нейронов коры. Анализируя патогенетические аспекты хронизации ВПГ-инфекции, следует иметь в виду, что патологический процесс может быть связан с активацией лишь отдельных участков ДНК-генома вируса. При этом не происходит синтез полноценных вирионов и белков, обладающих антигенной активностью. Здесь речь может идти о геномных вирусных инфекциях, на существование которых ранее указывали В.М. Жданов и В.И. Гаврилов [23].
Многообразие клинических проявлений от острого герпетического энцефалита (ОГЭ) до ХГЭ и злокачественных новообразований, ассоциированных с ВПГ подтверждает точку зрения Европейского регионального бюро ВОЗ, что этот вирус будет определять будущее целого ряда заболеваний, ассоциированных с этим патогеном. В пользу этого свидетельствует открытие в последнее время новых представителей семейства Herpesviridae, в частности упоминавшегося выше 8, а также 6 и 7 типов, ассоциированных с клеточной трансформацией, роль которых в патологии человека еще предстоит изучить [24].
Анализ литературных и собственных данных позволяет сформулировать полигенную гипотезу возникновения опухолей под влиянием ВПГ с учетом многостадий-ности как клеточных (дистрофические пролифераты), так и молекулярно-биоло-гических процессов, приводящих к «умол-канию» (silencing) его цитолитической активности за счет РНК индуцированного silencing-комплекса и АМК. Еще раз под-
черкнем важность факта, что АМК не образовывался при использовании вирусов с негативным геномом. Кроме того, эта группа вирусов была нечувствительна к антивирусному действию АМК, что заставило нас обратиться к изучению противоопухолевой активности этой группы вирусов, в частности вируса болезни Ньюкастла [25]. Можно предположить, что установленный противоопухолевый эффект этого патогена [25, 26] связан с разрушением подобных цитопролифе-ративных комплексов. Нельзя также исключить стимуляцию противоопухолевого иммунитета, поскольку известно, что, осуществляя cap snetching («похищение метильных шапочек»), вирус болезни Ньюкастла образует комплекс с метилированными нуклеиновыми кислотами инфицированных клеток. Антитела к такому комплексу могут препятствовать метилированию CpG-островков. Подобное деметилирование приводит к активации белка P53, способного подавлять опухолевый рост [27, 28]. Данное направление является авангардным в разработке препаратов для терапии злокачественных новообразований за счет экспрессии чужеродных генов минус-геномными вирусами. Это находит свое подтверждение в цитируемых выше исследованиях [25, 26] и недавно опубликованных разработках научно-исследовательских центров США и Китая [29].
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Зильбер, Л.А. Вирусно-генетическая теория возникновения опухолей / Л.А.Зильбер. - М.: Наука, 1968. - 286 с.
2. Huebner, R. Oncogenes of RNA Tumor Vituses as determinants of cancer / R.Huebner, GTodaro // Proc. Nat. Acad. Sci USA. - 1969. - Vol.64. P.1087-1097.
3. HirabayasN, Y. Singeneic monoclonal МGm3, a prominent ganglioside of B-16 melanoma / YHirabayashi, A.Hamaoka, M.Matsumoto // J. Biol. Chem. - 1985. -Vol.260. - P.13328-13333.
4. Pete, I. Comparative analysis of immunocritical melanoma markers in the mouse melanoma cell lines B-16, K1735 and S91-M3 / I.Peter, A.Mezzacasa, P.LeDonne et al. // Melanoma Res. - 2001. - Vol.11, N1. - P.21-30.
5. Vollmers, H. Monoclonal antibodies that prevent adhesion of B-16 melanoma сells and reduce metastasis in mice: cross-reaction with human tumor cells / H.Vollmers, W.Birchmeier // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1983. - Vol.80. - P.6863-6867.
6. Киселев, Ф.Л. Молекулярные основы канцерогенеза у человека / Ф.Л.Киселев, О.А.Павлиш, А.Г.Татосян. - М.: Медицина, 1990. - 315 с.
7. Тихоненко, Т.И. ДНК-содержащие онкогенные вирусы / Т.И.Тихоненко // Журн. всесоюз. хим. общ-ва им. Д.И.Менделеева. - 1986. - Т.31 (3). -C.286-292.
8. Петров, Н.Н. Основные вопросы возникновения и роста истинных опухолей / Н.Н.Петров // Вопр. онкологии. - 2005. - Т.51(1). - С.24-33.
9. Протас, И.И. Герпетический энцефалит (клиника, патогенез, лечение) / И.И. Протас. - Минск, 2000. -175 с.
10. Бердников, Р.Б. Патоморфология и некоторые вопросы морфогенеза бронхиолоальвео-лярного рака / Р.Б.Бердников, Л.М.Гринберг // М-лы Урал. регион. конф. - Екатеринбург 2003. - С.8-11.
11. Correa, P. The gastric precancerous cascade / P.Correa // J. Digest. Dis. - 2012. -Vol.13, N1. - P.2-9.
12. Бакулин, И.Г. Актуальные вопросы противовирусной терапии хронических гепатитов В и С / И.Г.Бакулин // Эксперим. и клинич. гастроэнтерология. - 2010. - N5. - С.3-9.
13. Вишневская, Е.Е. Предопухолевые заболевания и злокачественные опухоли женских половых органов / Е.Е.Вишневская. - Мн.: Выш. школа, 2002.
14. Бахов, И.И. Клеточные системы защиты организма от вирусной инфекции: внутриклеточные механизмы защиты /И.И. Бахов, А.А. Барсуков, В.М. Земсков // Успехи современной биологии. -2003. - Т.123 (2). - C.161-173.
15. Киселев, Л.Л. Молекулярная онкобиология / Л.Л.Киселев // Журн. Всесоюз. химич. общ-ва. -2001. - Т.12 (2). - C. 181-193.
16. Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans /
A.Fire, S.Xu, M.K.Montgomery // Nature. -1998. -Vol.391. - P.806-811.
17. Вильгельм, А.Э. Интерференция РНК: Биология и перспективы применения в биомедицине и биотехнологии / А.Э.Вильгельм, С.П.Чумаков,
B.П. Прасолов // Молекуляр. биология. - Т.40 (3). -
C.387-403.
18. Votyakov, V.I. Antiviral and Physico-chemical Properties of Macromolecular Complex Isolated from the Virus - Infected Cell Extract Treated with Ribonuclease / VL.Votyakov, M.E.Khmara, A.A.Akhrem, S.G.Moroz // Phiziol. Pathol. Interferon System. Proceedings. Contrib. Oncol. - Basel: Karger, 1984. - Vol.20. - P.176-184.
19. Хмара, М.Е. Патогенетические аспекты хронического генетичесого энефалита / М.Е.Хмара. -Минск: РИВШ БГУ 2004. - 137 с.
20. Хмара, М.Е. Герпетическая инфекция ЦНС: кли-нико-морфологические и патогенетические аспекты / М.Е.Хмара // Мед. новости. - 2004. - №5. -С.15-20.
21. Bolshoff, C. Coupling Herpesvirus to angiogenesis /
C.Bolshoff // Nature. - 1998. - Vol.391. - P.24-25.
22. Жукова, Т.В. Механизмы влияния контаминации вируса простого герпеса на рост и развитие нейро-эпителиальных опухолей / Т.В.Жукова // Мед. новости. - 2011. - №11. - С.9-14.
23. Жданов, В.М. Смешанные и хронические вирусные инфекции / В.М.Жданов, В.И.Гаврилов // Сб. тр. ин-та вирусологии им. Д.И.Ивановского АМН СССР. - М., 1975. -С.94-104.
24. Гранитов, В.М. Герпесвирусная инфекция. - М.: Мед. книга. - 2001. - С.81.
25. Хмара, М.Е. Онколитический вирус болезни Ньюкастла: особенности противоопухолевой активности у животных и перспективы клинического применения в терапии злокачественных новообразований / М.Е.Хмара, В.Г.Гудков // Соврем. пробл. инфекц. патологии. - 2014. - Вып.2. - C.257-261.
26. Zamarin, D. Oncolytic Newcastle disease virus for cancer therapy: old challenges and new directions /
D.Zamarin, P.Palese // II Future Microbiol. - 2012. -Vol.7 (3). - P.347-367.
27. Дьяченко, О.В. Структурно-функциональные особенности распределения 5-метилцитозина в эу-кориатическом геноме / О.В.Дьяченко, Т.В.Шевчук, Я.И.Бурьянов // Молекуляр. биология. - Т.44, №2. -2010. - С.195-210.
28. Скворцова, Ю.В. Изучение метилирования протяженных геномных локусов в нормальных и опухолевых тканях человека / Ю.В.Скворцова, Д.В.Гра, Н.П.Киселева, Т.Л.Ажикина // Молекуляр. медицина. - 2010. - №1. - С.22-27.
29. Bai Е^.Экспрессия чужеродных генов с помощью вируса болезни Ньюкастла в терапии опухолей / FL.Bai, HTian, O.ZYu, G.P.Ren, D.S.Li // Молекуляр. биология. - 2015. - Т.49, №2. -С.195-204.
Поступила 04.09.2015г.
