CC BY
61
status of birds, contributes to higher non-specific reactivity and stability of turkeys to the action of environmental factors.
УДК 619:617-089.5-616.24:636.22/28
МИКРОБИЦИДНАЯ СИСТЕМА НЕЙТРОФИЛОВ (ПЯН) ПРИ ТЕРАПИИ КОМБИНИРОВАННОЙ БРОНХОПНЕВМОНИИ ТЕЛЯТ
Главинский А.В. - гл. ветврач; Пахмутов И. А. - д.в.н., профессор;
Петрова О.Ю. - к.б.н.
ФГБОУ ВПО «Нижегородская ГСХА»
Ключевые слова: телята, бронхопневмония, комбинированная терапия, микробицидность полиморфноядерных нейтрофилов.
Key words: calves, bronchopneumonia, combination therapy,
microbicidity of polimorfnonuclears neutrophils.
Респираторные болезни у молодняка сельскохозяйственных животных, включая неспецифическую катаральную бронхопневмонию телят, широко распространены в России и за ее пределами. Как считают многие ученые и практики, в их этиологии и патогенезе основное место принадлежит ослаблению механизмов неспецифической резистентности и специфической защиты (врожденного и адаптивного иммунитета), активизации вирусов (ИРТ, ПГ-3, РС, ВД-БС и др.), микоплазм, хламидий, а также проникновению резистентной условнопатогенной экзо- и эндогенной микрофлоры в более глубокие отделы респираторного тракта на фоне неудовлетворительных условий содержания, несбалансированного кормления и целого ряда стресс-факторов, не всегда учитывающихся зооветеринарной службой хозяйств [2, 3, 5, 8].
Повреждение вне- и внутриклеточных структур воздухоносных путей способствует возникновению и развитию их воспаления, его переходу на паренхиму легких. Как правило, несвоевременная диагностика и терапия бронхопневмонии телят сопровождается обменными нарушениями на почве окислительного стресса, избыточного ПОЛ, эндогенной интоксикации, вторичных иммунодефицитов и т.п. В дальнейшем, как уже установлено многочисленными работами, переболевшие и хронически больные бронхопневмонией животные отстают в росте и развитии, они преждевременно выбраковываются или подвергаются вынужденному убою в связи с неоправданными затратами кормов, лекарственных средств, труда животноводов и зооветспециалистов [2. 6. 8. 10].
Учитывая важную роль полиморфноядерных нейтрофилов (ПЯН) в возникновении и развитии воспалительного процесса в бронхоальвеолярных структурах легких, мы поставили перед собой цель: проанализировать динамику показателей микробицидной системы ПЯН при комбинированной терапии бронхопневмонии телят.
Материал и методы исследования. Опыты проводили на телятах черно-пестрой породы 1,5-2 мес. возраста, больных спонтанной неспецифической бронхопневмонией в условиях МТФ СПК «Власть Советов» Нижегородской области.
В опытной группе (n=16) в схему-модель лечения больных животных включалась новокаиновая блокада грудных внутренностных нервов по М.Ш.Шакурову [9], препараты «Интрамицин» (СЕВА Санте Анималь, Франция), селенопиран и воднодисперсионный комплекс витаминов «Аквитин» (ЗАО «Мосагроген»), симптоматические средства,
улучшающие работу сердечно-сосудистой, дыхательной, пищеварительной и других систем организма животных в рекомендованных дозах и повторностях.
В контрольной группе (n=16) больные телята лечились по схеме, принятой в хозяйстве: бициллин-3, сердечные, муколитики,
отхаркивающие, улучшающие пищеварение и др. симптоматические средства. В качестве отрицательного контроля использовались клинически здоровые телята - аналоги по живой массе и возрасту (n=7). Подопытные животные содержались в изолированной секции телятника по 8 голов в станке на соломенной подстилке при нормальных показателях микроклимата и состава рациона согласно норм РСХА (Калашников и др., 2003).
Кроме обще клинических исследований, у телят всех групп в утренние часы до кормления брались пробы венозной крови, в которых определялся ряд показателей, отражающих функциональнометаболическое состояние ПЯН и их микробицидность в начале лечения и через 5, 7 и 10-11 суток после него. В реакциях фагоцитоза ПЯН определялась их фагоцитарная активность (ФАН), фагоцитарный индекс (ФИ). Цитохимически в ПЯН у подопытных животных изучались показатели НСТ-теста (СВ и АВ с их СЦП по Astaldi и Verga), расчет на этой основе КМАН и ИПКМН, активность ферментов МПО -миелопероксидазы, внутриклеточного лизоцима (Лизоц.), неферментных катионных белков (ЛКТ - лизосомно-катионный тест) [1, 4, 7]. Цифровой материал обрабатывался статистически с помощью лицензионной программы Statistica 6 при уровне достоверности различий р<0,05.
Результаты и их обсуждения. Важная роль полиморфноядерных нейтрофилов (ПЯН), как одного из основных клеточных факторов неспецифической защиты (врожденного иммунитета) организма животных и человека в условиях нормы и при патологии, известна еще со времен
И.И.Мечникова, и до настоящего времени она привлекает внимание большого числа исследователей в области ветеринарной и гуманной медицины. В этом плане изучение функционально-метаболических изменений в ПЯН при бронхопневмонии телят оказалось весьма полезным как с диагностической, так и с прогностической точек зрения [7]. В данной работе рассматривается динамика интралейкоцитарных микробицидных факторов ПЯН в процессе комбинированного лечения телят, больных острой формой бронхопневмонии (табл.).
Как видно из табличных материалов, у больных телят фагоцитарная реакция ПЯН значительно ослабевала по сравнению с клинически здоровыми животными (р<0,01). По истечению 5 суток с начала комбинированной терапии больных телят в опытной и контрольной группах наблюдалось возрастание ФАН. Однако в той и другой группах ее величина не достигала таковой у здоровых животных (р<0,01), но при этом обнаруживалась тенденция к более высокой активации ПЯН в опытной группе (р<0,05). Фагоцитарный индекс, отражающий в значительной мере интенсивность фагоцитоза и его завершенность, также снижался у больных телят в начале курса лечения в обеих группах (р<0,05), а через 5 суток он нормализовался.
Тем не менее, в отличие от контроля, ФИ в опытной группе через 7 и 10 суток оказался существенно выше, чем у клинически здоровых телят (р<0,05). Таким образом, на фоне комплексного лечения наблюдалось достоверное повышение микробицидной активности ПЯН в отношении использованных тест-объектов. По-видимому, этому способствовала как сама НБГВН, так и микроэлемент селен в сочетании с витаминами А, Е, С, Д, которые, как известно, стимулируют фагоцитоз ПЯН [7, 9, 11, 12].
Реальным подтверждением вышеприведенным фактическим данным оказались результаты цитохимического изучения кислородзависимых и кислороднезависимых факторов микробицидности ПЯН у телят до и после комбинированной терапии бронхопневмонии. В первом случае при исследовании показателей НСТ-теста и реакции на МПО у подопытных животных установили более чем двухкратное увеличение процента позитивно реагирующих ПЯН в СВ НСТ-теста (р<0,01) в начале заболевания, что свидетельствовало о своеобразном функциональном раздражении этих клеток, связанных с их важной ролью в воспалительных реакциях [7, 9]. При этом, как видно из табличных данных, в опытной группе нормализация этого показателя у ПЯН наступала через 7 суток, а в контроле - лишь на 10-11 сутки (р<0,05). Противоположная тенденция обнаруживалась в отношении АВ НСТ-теста: в начале лечения
потенциальная способность ПЯН к так называемому «респираторному взрыву», как основе кислородзависимой цитотоксичности этих клеток за счет наработки активных форм кислорода (Н2О2, О2:, НО', 1О2), резко ослабевала по сравнению с нормативным показателем (р<0,01).
Функционально-метаболические показатели микробицидности ПЯН у
подопытных телят (М±т, п=7)
Показатели Клин. здоров. Сроки исследований, сут.
0 5 7 10-11
ФАН, % 64,3±2,4 41,6±1,7хх 38,3±1,4хх 52,8±1,6ха 45,5±2,3хх 64,3±2,2ха 53,2±1,7хх 68,7±1,9ха 61,9±1,5
ФИ 6,8±0,3 6,0±0,2х 5,8±0,3х 6,4±0,3 6,1±0,4 6,8±0,2ха 6,2±0,1 7,6±0,4хха 6,4±0,2
НСТ, СВ, % 8,8±0,3 17,6±0,3хх 18,4±0,5хх 11,7±0,2х 13,6±0,2хх 9,3±0,5ха 12,3±0,4х 7,2±0,4 9,1±0,2
НСТ, АВ, % 73,7±1,4 56,7±2,5хх 55,5±2,3хх 61,5±1,2х 57,3±1,0хх 69,8±1,3ха 60,9±1,4х 75,4±1,5 67,8±1,3
СЦП, СВ 0,12±0,01 0,28±0,04х 0,26±0,02х 0,17±0,03хх 0,22±0,02х 0,13±0,02 0,19±0,03х 0,10±0,02 0,14±0,05
СЦП, АВ 1,57±0,04 1,29±0,06х 1,35±0,05х 1,48±0,04ха 1,39±0,02х 1,54±0,03ха 1,42±0,02х 1,68±0,02ха 1,51±0,03
КМАН 0,88±0,02 0,69±0,01х 0,67±0,02х 0,81±0,02ха 0,76±0,01х 0,89±0,03ха 0,80±0,02х 0,90±0,03 0,87±0,03
ИПКМН 1,15±0,03 0,32±0,02хх 0,35±0,03хх 0,71±0,06хха 0,48±0,04хх 1,05±0,08хха 0,60±0,05хх 1,51±0,07хха 0,94±0,04х
МПО, СЦП 2,58±0,05 2,33±0,06хх 2,31±0,05хх 2,45±0,04ха 2,34±0,02хх 2,56±0,03ха 2,47±0,04х 2,53±0,07 2,49±0,05
ЛКТ, СЦП 1,43±0,03 1,69±0,06х 1,64±0,05х 1,48±0,02ха 1,59±0,03хх 1,46±0,07 1,54±0,02х 1,39±0,08 1,44±0,05
Лизоцим, СЦП 1,31±0,03 1,16±0,05х 1,26±0,03 1,18±0,05х 1,35±0,04ха 1,22±0,03х 1,29±0,06 1,27±0,04
Примечания: КМАН - коэффициент метаболической активации нейтрофилов; ЛКТ -лизосомно-катионный тест; МПО - миелопероксидаза; ИПКМН - интегральный показатель кислородозависимого метаболизма нейтрофилов;
х - р<0,05, хх - р<0,01 - уровень достоверности различий по отношению к клинически здоровым животным; ха - р<0,05, хха - р<0,01 - то же при сравнении показателей в опытной и контрольной группах (числитель/знаменатель).__________
Как показывают данные таблицы, динамика возвращения показателей АВ НСТ-теста к норме совпадала с таковой СВ, повышенный СЦП которого, однако, в опытной группе приближался к таковому у клинически здоровых телят уже через 5 суток, тогда как в контроле этот процесс затягивался до 7-х суток при отсутствии меж групповых различий (р>0,05). В отношении СЦП АВ НСТ-теста наблюдалась противоположная
направленность реакции восстановления нитросинего тетразолия в цитоплазме ПЯН. В частности, начиная с 5-х суток, СЦП АВ в опытной группе практически достигал условной нормы и достоверно превышал таковой у телят контрольной группы до конца срока исследований (р<0,05). Причем СЦП АВ в опыте оказался существенно выше нормативной величины, отражая, по всей вероятности, стимулирующие влияние комбинированной патогенетической терапии на кислородзависимую бактерицидность ПЯН [7, 11]. Данный факт нашел свое подтверждение в итоговой оценке кислородзависимого метаболизма в ПЯН у подопытных телят, а именно по величине ИПКМН, равного произведению КМАН - коэффициента метаболической активации
- 1 СИПАЕ ТТТ-ГТЛА /ГТТ г Jt РЖ Old АВ тт
неитрофилов на отношение -------------: ИПКМН = КЛЛН * . Из
^ 1 СЦП CP CUD са
табличных данных видно, что его восстановление до нормы в опытной
группе завершилось через 7, а более высокий уровень по сравнению с ней
отмечен на 10-11 сутки (р<0,01).
Вторая микробицидная система ПЯН включает фермент миелопероксидазу (МПО), перекись водорода (Н2О2) и галогены (I, Br, CL). МПО в ПЯН, составляя около 5% сухого вещества, оказывает двоякое воздействие на микробы. Как катионный белок, она связывается с их отрицательно заряженной оболочкой, нарушая ее проницаемость. Соединяясь с железом простетической группы МПО, Н2О2 переводит галоиды в фагосомах в гипогалоидиды, разрушающие путем галогенизации (окисления) стенку микробов за счет декарбоксилирования аминокислот, образования токсических альдегидов, синглетного кислорода [7]. Как показывают материалы таблицы, у больных бронхопневмонией телят ферментативная активность МПО в ПЯН достоверно снижается в контрольной и опытной группах (р<0,01). В первом случае она остается пониженной через 5суток, тогда как во втором - она уже достигает нормального уровня с превышением такового в контроле (р<0,05).
Для оценки кислороднезависимой микробицидности ПЯН использовались два показателя: лизосомно-катионного теста
(неферментных катионных белков - НКБ) и интралейкоцитарного лизоцима. Они содержатся в специальных гранулах (лизосомах) ПЯН наряду с лактоферрином в отсутствии кислых гидролаз. Известно, что НКБ как и гистоны не обладают ферментативной способностью, но, взаимодействуя с анионными компонентами бактериальной стенки, резко снижают жизнеспособность микроба и вызывают его гибель [7]. Лизоцим, как ферментный катионный белок, оказывает антимикробный эффект за счет разрушения 1,4-^-связи между звеньями N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмураминовой кислоты, входящих в состав стенки грампозитивных микробов. В отличие от сывороточного, лейкоцитарный лизоцим достоверно отражает состояние неспецифической защиты организма,
характер течения и исхода воспалительного процесса, эффективность лечения и т.п. [1, 4]. Как показывают табличные материалы, у больных бронхопневмонией телят существенно возрастали показатели ЛКТ, но снижались таковые лизоцима (р<0,05). В дальнейшем (5 сутки) в опытной группе уровень НКБ в ПЯН нормализовался, а в контрольной он еще оставался повышенным даже через 7 суток после начала лечения (р<0,05). Лизоцимная активность в ПЯН у телят опытной группы вела себя подобно содержанию НКБ, превышая таковую в контроле через 5 и 7 суток после начала опытов (р<0,05). На завершающем этапе, когда в основном подопытные телята выглядели клинически здоровыми, ЛКТ и интралейкоцитарный лизоцим достигали нормативных значений.
Заключение. Комбинированная патогенетическая терапия бронхопневмонии телят с включением НБГВМ по М.Ш.Шакурову значительно усиливает микробицидный потенциал ПЯН по сравнению с традиционным лечением больных животных. Эффективность лечения в опытной группе составила 93,7%, в контрольной - 87,5%.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Бушмелева,Л.П. Непрямой цитохимический метод определения активности интралейкоцитарного лизоцима /Л.П.Бушмелева [и др.]//Лаб. дело,1983. - №8. - С. 15-17. 2. Данилевский, В.М. Бронхопневмония телят: этиология, диагностика, профилактика и лечение /В .М. Данилевский //Ветеринария, 1985. - №1. - С. 16-19. 3. Данилов, С.Ю. Респираторные заболевания телят в промышленном животноводстве /С.Ю.Данилов //Ветеринария, 2011. - №3. - С. 12-14. 4. Кондрахин,И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник /Под ред. проф. И.П.Кондрахина. - М.: КолосС, 2004. - 520 с. 5. Митрофанов,П.М. Диагностика, лечение и профилактика респираторных инфекций у телят /П.М.Митрофанов, В.А.Семенов. -Чебоксары, 2002. - 78 с. 6. Никулина,Н.Б. Применение перекиси водорода при острой форме бронхопневмонии телят /Н. Б. Никулина, В.М.Аксенова //Ветеринария, 2011. - №6. - С. 47-48. 7. Пахмутов,И.А. Цитохимия лейкоцитов периферической крови с.-х. животных в норме и патологии. Учеб. пособие /И.А.Пахмутов. - Казань, 1988. - 83 с. 8. Федюк, В.И. Лечение и профилактика респираторных болезней телят /В.И.Федюк, А.С.Лысухо //Ветеринария, 1997. - №8. - С. 20-23. 9. Шакуров,М.Ш. Новокаиновая блокада грудных внутренностных нервов при легочных болезнях у животных. Метод. указания /М.Ш.Шакуров, Р.З.Курбанов. -Казань, Изд-во Татарск. ОК КПСС, 1986. - 38 с. 10. Черницкий,А.Е. Применение новокаиновой блокады грудных внутренностных нервов и симпатических стволов в комплексной терапии бронхопневмонии телят /А.Е.Черницкий, А.И.Золотарев //Достижения науки и техники АПК, 2012. - №1. - С. 49-51. 11. Gyang,E.O. Effects of selenium - vitamin E inection on bovine polymorphonucleated leukocytes phagocytosis and killing of Staph. aureus [Text] /E.O.Gyang [e.a.] //Amer. J. Veter. Res., 1984. - V.45. - №1. - P.
175-177. 12. Takeda,H. Changes in blood concentration of tocopherol and selenium in cattle administrated with them [Text] /H.Takeda, S.Osame, S.Ichiyo //J. Jap. Vet. Med. Assoc., 1987. - V.40. - №12. - P. 833-837.
МИКРОБИЦИДНАЯ СИСТЕМА НЕЙТРОФИЛОВ (ПЯН) ПРИ ТЕРАПИИ КОМБИНИРОВАННОЙ БРОНХОПНЕВМОНИИ ТЕЛЯТ
Главинский А.В., Пахмутов И.А., Петрова О.Ю.
Резюме
Комбинированная терапия бронхопневмонии телят, включающая надплевральную новокаиновую блокаду грудных внутренностных нервов по М.Ш.Шакурову, достоверно повышала микробицидный потенциал полиморфноядерных нейтрофилов, как важнейшего звена врожденного иммунитета у больных животных.
MIKROBICIDIAL SYSTEM OF NEUTROPHILS (PMN) IN COMBINATION THERAPY BRONCHO-PNEUMONIAE OF CALVES
Glavinski A.V., Pahmutov I.A., Petrova O.Y.
Summary
Combined therapy of broncho-pneumonia of calves, including nadplevralnaya novokainovaya blockade of the thoracic vnutrennostnyh nerves to M.S. Shakurovu, enhances the potential microbicidity polimorfnonuclears neutrophils as a vital link innate immunity in patients with animals.
УДК 619:616-084:636.2+631.145(471.343)
РЕЗУЛЬТАТЫ ДИСПАНСЕРИЗАЦИИ КОРОВ ДАНИЛОВСКОГО КОМПЛЕКСА ЗАО ПЗ «СЕМЕНОВСКИЙ» МЕДВЕДЕВСКОГО РАЙОНА РМЭ
Грачева О.А. - к.в.н., доцент; Иваненко О Ю., Зухрабов М.Г. - д.в.н., профессор, зав.
кафедрой; *Камилов Н.К.
ФГБОУ ФПО КГАВМ,, тел.: (843) 2739755 *Комитет ветеринарии РМЭ
Ключевые слова: крупный рогатый скот, диспансеризация, обмен веществ, субклинический кетоз.
Key words: cattle, clinical and biochemical research, metabolism, subclinical ketosis.
