CC BY
32
Для корреспонденции
Седова Ирина Борисовна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» Адрес: 109240, Российская Федерация, г. Москва, Устьинский проезд, д.2/14 Телефон: (495) 698-53-65 E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6011-4515
Седова И.Б.1, Киселева М.Г.1, Чалый З.А.1, Ефимочкина Н.Р.1, Тутельян В.А.1, 2
Микотоксины в какао-продуктах и плодах рожкового дерева (кэроба), реализуемых на российском рынке
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи, 109240, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация
1 Federal Research Centre of Nutrition, Biotechnology and Food Safety, 109240, Moscow, Russian Federation
2 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University of Ministry of Healthcare of the Russian Federation (Sechenov University), 119991, Moscow, Russian Federation
Mycotoxins contamination of cocoa products and carob marketed in the Russian Federation
Sedova I.B.1, Kiseleva M.G.1, Chalyy Z.A.1, Efimochkina N.R.1, Tutelyan V.A.1' 2
Какао-напитки и кондитерские изделия на основе какао относят к продуктам повседневного потребления для большей части населения во всем мире. Во многих странах, включая Россию, приверженцы здорового образа жизни все чаще пьют напитки на основе заменителя какао - кэроба (порошка из плодов рожкового дерева).
Финансирование. Исследование выполнено за счет средств гранта Российского научного фонда (№ 18-16-00077-П «Эмерджентные микотоксины в пищевых продуктах растительного происхождения: разработка методов анализа, изучение контаминации, видовая характеристика микромицетов-продуцентов, разработка гигиенических нормативов»). Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов.
Вклад авторов. Дизайн исследования - Седова И.Б.; сбор и обработка результатов исследований - Чалый ЗА., Киселева М.Г.; статистическая обработка данных - Киселева М.Г., Седова И.Б.; написание текста - Седова И.Б., Ефимочкина Н.Р.; согласование концепции исследований - Тутельян В.А.; редактирование, утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи - все авторы.
Для цитирования: Седова И.Б., Киселева М.Г., Чалый ЗА., Ефимочкина Н.Р., Тутельян В.А. Микотоксины в какао-продуктах и плодах рожкового дерева (кэроба), реализуемых на российском рынке // Вопросы питания. 2022. Т. 91, № 5. С. 65-77. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-5-65-77
Статья поступила в редакцию 12.07.2022. Принята в печать 30.08.2022.
Funding. The research was funded by Russian Science Foundation (Grant № 18-16-00077-P "Emergent mycotoxins in food of plant origin: development of methods of determination, survey of occurrence, species-specific characterization of toxigenic molds, creation of regulatory"). Conflicts of interest. The authors declare no conflict of interest.
Contribution. Research design - Sedova IB.; collection and processing of material - Kiseleva M.G., Chalyy Z.A.; statistical data processing - Kiseleva M.G., Sedova I.B.; manuscript writing - Sedova I.B., Efimochkina N.R.; harmonisation of concept - Tutelyan V.A.; edition, adoption of the final article, responsibility for the integrity of all parts of the article - all authors.
For citation: Sedova IB., Kiseleva M.G., Chalyy Z.A., Efimochkina NR., Tutelyan V.A. Mycotoxins contamination of cocoa products and carob marketed in the Russian Federation. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2022; 91 (5): 65-77. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-5-65-77 (in Russian)
Received 12.07.2022. Accepted 30.08.2022.
Цель исследования - изучение загрязненности образцов какао-продуктов и кэроба, представленных на отечественном рынке, микотоксинами - вторичными метаболитами грибов родов Aspergillus, Pénicillium, Fusarium и Alternaria, а также оценка нагрузки микотоксинами на человека за счет потребления этих групп продуктов.
Материал и методы. Методом ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (УВЭЖХ-МС/МС) в 63 образцах какао и кэроба определяли содержание 27 микотоксинов. В их число входили микотоксины, регламентируемые в пищевых продуктах (афлатоксины, охратоксин А, дезоксинивале-нол, фумонизины, Т-2 токсин, зеараленон), их. производные и структурные аналоги (трихотецены групп А и В), а также эмерджентные микотоксины: альтернариол, его метиловый эфир, альтенуен, тентоксин, цитринин, стеригматоцистин, циклопиазоновая кислота, микофеноловая кислота, энниатины, боверицин.
Результаты. Из числа эмерджентных микотоксинов в образцах какао были обнаружены боверицин (в 29 из 41 пробы, в количестве от 1,6 до 2184,8 мкг/кг), тентоксин, стеригматоцистин и метиловый эфир альтернариола (по 3 образца, на уровне 0,7-1,2; 1,5-3,3 и 4,0-7,8 мкг/кг соответственно). В образцах кэроба чаще обнаруживали альтернариол (в 14 из 22 образцов, 1,5-43,1 мкг/кг), тентоксин (в 13 пробах, 0,5-8,7 мкг/кг), микофеноловую кислоту (в 6 образцах, 6,9-8,2 мкг/кг) и метиловый эфир альтернариола (в 3 пробах, 1,0-1,2 мкг/кг). Среди регламентируемых в растительных продуктах микотоксинов в исследованных пробах какао обнаружили зеараленон (в 18 из 41 пробы, 2,1-24,6 мкг/кг), охратоксин А (в 14 пробах, 0,75-12,0 мкг/кг) и афлатоксин В1 (в 2 пробах, 0,59 и 0,86 мкг/кг), в кэробе - фумонизин В2 (в 7 из 22 проб, 4,2-5,2 мкг/кг), охратоксин А (в 5 пробах, 0,5-1,4 мкг/кг) и афлатоксин В1 (в 3 пробах, 0,15-0,18 мкг/кг). Содержание охратоксина А в 2 образцах растворимого какао превысило максимальный допустимый уровень (5 мкг/кг), установленный в других растительных продуктах.
Заключение. Впервые в России получены данные, свидетельствующие о загрязнении эмерджентными микотоксинами какао-продуктов и плодов рожкового дерева (кэроба). Высокая частота обнаружения микотоксинов афла-токсинов, боверицина и охратоксина А в этих продуктах свидетельствует о потенциальном риске здоровью человека при их потреблении и необходимости гигиенической оценки загрязненности какао-продуктов и кэроба не только регламентируемым в какао афлатоксином В1, но и другими микотоксинами, в том числе эмерджентными. При расчете потенциальной нагрузки микотоксинами для различных возрастных групп показана возможность поступления высоких уровней афлатоксинов, боверицина и охратоксина А при потреблении какао-продуктов (особенно растворимых какао-напитков) детьми старше 7 лет в организованных коллективах..
Ключевые слова: микотоксины; эмерджентные микотоксины; какао; кэроб; охратоксин А; афлатоксины; загрязнение; ультра-ВЭЖХ-МС/МС
Cocoa is a daily basic food for many people all over the world. Also, people engaged in healthy lifestyle often prefer carob.
The aim of the present study was to evaluate occurrence of Aspergillus, Penicillium, Fusarium and Alternaria secondary metabolites in cocoa and carob available in the Russian Federation and assess mycotoxin's intake with these products.
Material and methods. Concentration of 27 mycotoxins in 63 samples of cocoa and carob products was determined by ultra high-performance liquid chromatography coupled to tandem mass-spectrometric detection (UPLC-MS/MS). The list of mycotoxins included regulated ones (aflatoxins, ochratoxin A, deoxynivalenol, fumonisins, T-2 toxin, zearalenone), their derivatives and structural analogs (A and B trichothecenes), and emergent mycotoxins (alternariol, its monomethyl ether, altenuene, tentoxin, citrinin, sterigmatocistin, cyclopiazonic and mycophenolic acids, enniatins, beauvericin).
Results. 29 of 41 cocoa samples were positive for beauvericin, contamination level was from 1.6 to 2184.8 jg/kg. Tentoxin, sterigmatocystin and alternatiol monomethyl ether were detected in 3 samples; their concentration varied in the ranges 0.7-1.2, 1.5-3.3 and 4.0-7.8 jg/kg correspondingly. Carob samples were positive for alternariol (14 of 22 samples, 1.5-43.1 jg/kg); tentoxin (13 samples, 0.5-8.7 jg/kg), mycophenolic acid (6 samples, 6.9-8.2 jg/kg) and for alternatiol monomethyl ether (3 samples, 1.0-1.2 jg/kg). Several samples of cocoa were contaminated with regulated mycotoxins: zearalenone (18 of 41 samples, 2.1-24.6 jg/kg), ochratoxin A (14 samples, 0.75-12.0 jg/kg) and aflatoxin B1 (2 samples, 0.59 and 0.86 jg/ kg). Several carob samples were contaminated with fumonisin B2 (7 of 22 samples, 4.2-5.2 jg/kg), ochratoxin A (5 samples, 0.5-1.4 jg/kg) and aflatoxin B1 (3 samples, 0.15-0.18 jg/kg). The ochratoxin A content in two instant cocoa beverages exceeded its maximum level (5 jg/kg) set for some plant products.
Conclusion. To the best of our knowledge, the present study is the first survey devoted to emergent mycotoxin contamination of carob and cocoa alternative products marketed in the Russian Federation. The high occurrence of such mycotoxins as aflatoxins, beauvericin and ochratoxin A in these products indicates a potential health risk and the need for a hygienic assessment of cocoa and carob products' contamination not only with regulated in cocoa products aflatoxin B1, but with other mycotoxin including emergent ones. The risk of dietary intake of aflatoxins, beauvericin and ochratoxin A with cocoa products (especially with instant cocoa beverages) has been revealed for children over 7 years old in organized groups.
Keywords: mycotoxins; emergent mycotoxins; cocoa; carob; ochratoxin A; aflatoxins; contamination; UHPLC-MS/MS
Какао-продукты получают при выращивании Theo-broma cacao L. - многолетнего дерева из тропических лесов Южной и Центральной Америки. В настоящее время его культивируют примерно в 50 странах с тропическим и субтропическим климатом [1]. Большая часть производства какао сосредоточена в Западной Африке, значительные объемы также поступают из Азии, Центральной и Южной Америки [2]. За последние 60 лет его потребление в мире увеличилось более чем в 5 раз. Основными видами продукции, получаемой из какао-бобов, являются какао-порошок и какао-масло, широко используемые в пищевой промышленности для изготовления напитков, кондитерских изделий и других продуктов.
Тропический климат с высокой влажностью воздуха, благоприятный для произрастания многолетних бобовых растений, способствует росту потенциально токси-генных грибов родов Pénicillium и Aspergillus и накоплению микотоксинов (МТ). Наиболее распространенным МТ, загрязняющим какао-бобы в Африке и Южной Америке, считается охратоксин А (ОТА), а основными продуцентами ОТА являются микромицеты видов Aspergillus carbonarius и Aspergillus niger [3]. Загрязнение плесенями и токсинами может происходить на любых этапах производства какао-продуктов, но наибольшие уровни контаминации ОТА связывают с оболочкой какао-бобов. Удаление оболочки позволяет снизить концентрацию токсина более чем на 65% [4]. Содержание ОТА в какао-бобах во многом зависит от состояния их стручков: бобы, полученные из здоровых стручков, практически не загрязнены МТ [5, 6], поврежденные стручки могут быть контаминированы токсинообразующими грибами не только рода Aspergillus, но и Penicillium [7] и их метаболитами. К другим факторам, способствующим контаминации какао-бобов, относят условия сбора урожая. Накопление токсинов происходит также на этапе ферментации, в процессе длительной сушки, транспортировки и хранения какао-бобов [8].
Преобладающими плесневыми контаминантами какао являются представители рода Aspergillus секций Nigri и Flavi. Согласно данным M. Sanchez-Hervas и соавт., 49,2% выделенных A. niger были охратоксигенными [9]. B. Mounjouenpou и соавт., изучавшие микобиоту какао на этапе послеуборочной обработки, установили, что выделенные штаммы - продуценты ОТА - преимущественно относились к виду A. carbonarius и в меньшей степени к A. niger [10].
Хотя наибольшее количество сообщений, связанных с контаминацией МТ какао-бобов из Бразилии, Африки и Америки, было посвящено загрязнению их ОТА [11, 12], имеются сведения о загрязнении какао-бобов афлатоксинами (АФЛ) групп В и G [13-15], а также ци-тринином (ЦИТ) [16]. Как уже указывалось, в сырьевых какао-продуктах (главным образом в какао-порошке),
а также в шоколадных изделиях наиболее часто обнаруживают ОТА [11, 12], тогда как какао-масло практически не загрязнено этим токсином [17]. Зафиксированы случаи выявления в какао-продуктах АФЛ, фумонизинов В1 и В2 (ФВ1 и ФВ2) и дезоксиниваленола (ДОН) на уровне десятков и даже сотен мкг/кг, а в напитках из какао-порошка - зеараленона (ЗЕН), содержание которого достигало нескольких мг/кг [18].
Гигиенические регламенты содержания МТ в какао-продуктах в настоящее время установлены только в нескольких странах. В частности, в Бразилии Агентство санитарного надзора (ANVISA)1 установило ограничения (максимальный допустимый уровень, МДУ) по содержанию ОТА и суммы АФЛ для какао-бобов на уровне 10 мкг/кг, для продуктов их переработки и шоколада -5 мкг/кг. В Российской Федерации согласно Техническому регламенту Таможенного союза 021/2011 «О безопасности пищевой продукции» МДУ АФЛ В1 в какао-порошке составляет 0,005 мг/кг.
В качестве заменителя какао в последние годы все чаще используют кэроб - порошок высушенных плодов рожкового дерева (Ceratonia siliqua L. или Prosopis flexuosa). Благодаря наличию в составе кэроба растворимых углеводов его рекомендуют также в качестве заменителя обычного сахара [19]. Кроме того, потенциально кэроб может служить источником антиоксидантов (полифенолов, проантоцианидинов и др.) [20]. В настоящее время опубликованные данные о загрязнении кэроба МТ практически отсутствуют. В отдельных сообщениях [21] указывается об обнаружении в 8 из 11 образцов кэроба из Аргентины нескольких видов АФЛ в количестве до 19 мкг/кг. Скрининговые исследования, проведенные в 2021 г. ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», позволили обнаружить в пробах кэроба, реализуемого в России, 17 видов МТ. Чаще выявляли МТ так называемых грибов хранения - АФЛ, стеригматоцистин (СТЦ), ОТА и ЦИТ, а также тентоксин (ТЕН), циклопиазоновую (ЦПК) и микофеноловую (МФК) кислоты, реже - альтернариол (АОН), его метиловый эфир (АМЭ) и альтенуен (АЛТ); почти в половине образцов был обнаружен ФВ2 [22]. Регламенты содержания МТ для кэроба в настоящее время отсутствуют как в Российской Федерации, так и за рубежом.
Для объективной оценки контаминации какао-продуктов и кэроба мало изученными токсинами микромицетов в перечень анализируемых МТ были включены эмер-джентные микотоксины (ЭМТ) 11 видов, источниками которых могут быть как представители Fusarium sp., Aspergillus sp., Alternaria sp., Penicillium sp., так и грибы других родов.
В связи с изложенным целью исследования было изучение частоты и уровней контаминации широким спектром МТ какао-продуктов и напитков на основе кэроба, реализуемых в России. В продуктах определяли МТ,
1 Agancia Nacional de Vigilancia Sanitaria (ANVISA). Resolucao RDC n. 7, 18/02/2011. In Dispoe Sobre Limites Máximos Tolerados (LMT) Para Micotoxinas em Alimentos; Diario Oficial da Uniao: Brasilia, Brazil, 2011.
регламентируемые в пищевых продуктах растительного происхождения, их производные и структурные аналоги, а также ЭМТ. Перечень исследованных токсинов включал 27 видов МТ и ЭМТ.
Материал и методы
Образцы какао-продуктов и кэроба отбирали на предприятиях розничной торговли Москвы и Московской области случайным образом. Исследовали 63 пробы продукции: 41 образец какао-продуктов, включая какао-порошок (18 проб), растворимое какао (11 проб), какао-бобы (8 проб), какао тертое (3 образца), шоколадную посыпку (1 проба); 22 образца порошка кэроба (обжаренного и необжаренного). Большинство образцов кэроба были произведены из сырья, выращенного в Испании и Алжире. Некоторые образцы какао-продуктов были изготовлены из сырья, выращенного в Колумбии, Индонезии и Гане, значительная часть проб не имела указаний на регион происхождения сырья.
Исследованные образцы какао и кэроба тщательно перемешивали, пробы какао-бобов перед проведением анализа измельчали (размалывали). Для подготовки проб применяли модифицированный метод QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe), включающий стадии жидкостной экстракции и твердофазной очистки экстракта [23]. Порошок какао растворяли в воде в соотношении 1 : 1,5. Для анализа использовали 7,5 г суспензии (эквивалент 3 г сухого какао). До анализа пробы хранили замороженными.
В образцах какао-продуктов и кэроба определяли МТ АФЛ B1, B2, G1, G2; OTA, ДОН, ФВ1, ФВ2, токсин T-2, ЗЕН, их производные и структурные аналоги, включая диацетоксискирпенол (ДАС), токсин HT-2, Т-2 триол, неосоланиол (НЕОС); производные ДОН - 3-ацетил-дезоксиниваленол и 15-ацетилдезоксиниваленол (3-и 15-ацДОН), фузаренон Х (ФУЗ X), а также ЭМТ, включая ЦПК, ЦИТ, СТЦ, МФК, энниатины (ЭНН А и ЭНН В), боверицин (БО), ТЕН, токсины Alternaria sp. - АОН, АМЭ и АЛТ.
Подготовка проб какао
В центрифужную пробирку объемом 50 см3 помещали 7,5 г суспензии какао в воде, добавляли 18 см3 смеси ацетонитрил : вода : уксусная кислота (7 : 2,5 : 0,5% об.), перемешивали, затем смесь гомогенизировали на вор-тексе в течение 30 с при 3000 об/мин; добавляли 3 г хлорида натрия, повторно встряхивали на вортексе в течение 30 с при 3000 об/мин. После гомогенизации пробы перемешивали на шейкере в течение 60 мин при 700 цикл/мин. Готовые экстракты замораживали на 15 мин при -70 °C и центрифугировали 10 мин при 100 g и температуре 4 °C. Аликвоту объемом 1 см3 переносили в виалу для количественного определения. Пробы готовили для анализа в двух повторностях.
Подготовка проб кэроба
В центрифужную пробирку объемом 50 см3 отбирали навеску массой 1,0 г, добавляли 10 см3 дистиллированной воды, перемешивали и оставляли на 10 мин для набухания. Приливали 10 см3 ацетонитрила, подкисленного уксусной кислотой (1% об.), перемешивали и помещали в ультразвуковую ванну на 10 мин, далее встряхивали на шейкере в течение 10 мин. Затем в смесь добавляли 1 г хлорида натрия и 4 г безводного сульфата магния, тщательно перемешивали на вортексе в течение 30 с и центрифугировали с ускорением около 100 g. Ацетонитрильную фракцию объемом 3 см3 отдували в токе азота и перерастворяли последовательным добавлением 100 мкм3 метанола и 400 мкм3 воды (milliQ). Полученный раствор центрифугировали, супернатант переносили в хроматографическую виалу для анализа. Анализ образцов проводили в 3 повторностях.
Анализ образцов какао и кэроба на наличие МТ проводили с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) системы Vanquish UHPLC, соединенной с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором с подогреваемым источником (TSQ Endura), контролируемых программным обеспечением Xcalibur 4.0 QF2 Software (Thermo Scientific, США). Разделение аналитов осуществляли на колонке, заполненной силикагелем с привитыми группами октадецилсилана (Titan C18, 2,1x100 мм, 1,9 мкм, Supelco). Температура колонки - 25 °C. Скорость потока элюента - 0,4 см3/мин. Объем вносимой пробы - 10 мм3. Описание методики ВЭЖХ в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) представлено в [24].
Стандартные растворы МТ готовили из сухих стандартов (Sigma-Aldrich; Fermentek, Jerusalem, Израиль). Токсины АФЛ, СТЦ, ЦИТ, трихотецены групп A и B, ЗЕН и аналоги, OTA растворяли в ацетонитриле, токсины Alternaria, ЭНН А, ЭНН В, БО, МФК - в метаноле, ФВ1, ФВ2 - в смеси ацетонитрил : вода - 50 : 50 (% об.) в концентрации 100 или 500 мкг/см3. Из стандартных растворов готовили мультистандарты и калибровочные растворы. Все растворы хранили при -18 °C.
Для количественного определения МТ использовали внешние градуировки на «чистой» матрице. Минимальные определяемые концентрации (МОК) МТ, рассчитанные по 10-а критериям, для образцов какао составляли соответственно: 0,4 мкг/кг для АФЛ В1, 0,45 мкг/кг для ЦПК, 0,5 мкг/кг для АФЛ G1, АФЛ B2 и АОН, 0,7 мкг/кг для ТЕН, 0,75 мкг/кг для ОТА, 0,8 мкг/кг для АФЛ G2, 1,25 мкг/кг для СТЦ, 1,5 мкг/кг для ДАС, НЕОС, ФВ2, ЭНН А, ЭНН В и БО, 2 мкг/кг для ЗЕН, 2,5 мкг/кг для ФВ1, 3,125 мг/кг для ЦИТ, ЦТВ и АМЭ, 6,38 мкг/кг для АЛТ и токсина НТ-2, 2,5 мкг/кг для токсина Т-2, 9,0 мкг/кг для МФК, 52 мкг/кг для ДОН, 3- и 15- ацДОН, 26 мкг/кг для ФУЗ Х, 12 мкг/кг для Т-2 триол. МОК для образцов кэроба составляли 0,5 мкг/кг для АФЛ В1, АФЛ G2, ЗЕН, ЭНН А, ЭНН В, БО и ЦИС, 1 мкг/кг для АФЛ В2, АФЛ G1, АМЭ, для ДАС, СТЦ и ТЕН - 0,2 мкг/кг, 1,6 мкг/кг для НЕОС, 0,3 мкг/кг для АОН, 0,25 мкг/кг для ОТА, 1,5 мкг/кг для ФВ2, 2 мкг/кг
Таблица 1. Частота обнаружения и уровни загрязнения образцов какао-продуктов микотоксинами (МТ) (41 образец) Table 1. Occurrence of mycotoxins (МТ) in cocoa products (41 samples)
Токсин Toxin Количество контами-нированных проб, % Number of positive samples, % Диапазон загрязнения, мкг/кг Contamination range, m/kg Среднее содержание МТ в загрязненных пробах, мкг/кг Mean content of MT In positive samples, yg/kg Содержание МТ в пробах всего ряда, мкг/кг MT content In total samples, yg/kg
M Me 90%
БО / BEA 71 1,61-2184,8 90,60 70,73 7,7б 31,87
ЗЕН / ZEN 44 2,11-24,63 9,71 4,26 0 13,3б
OTA 34 0,75-12,03 2,80 0,96 0 1,84
АФЛ G2 / AFL G2 10 2,38-6,63 4,89 0,48 0 0
TEH / TEN 7 0,70-1,24 1,00 0,07 0 0
АМЭ/AME 7 4,03-7,75 5,52 0,40 0 0
СТЦ / STC 7 1,51-3,32 2,41 0,18 0 0
АФЛ В1 / AFL B1 5 0,59; 0,86 0,73 0,06 0 0
ЭHHВ / ENNB 5 1,85; 2,65 2,25 0,11 0 0
AOH 5 0,73; 2,47 1,60 0,08 0 0
HT-2 2 3,43 3,43 0,08 0 0
ЦПК / CPA 2 0,48 0,48 0,01 0 0
ЦИT / CIT 2 3,31 3,31 0,08 0 0
П р и м е ч а н и е. Здесь и в табл. 2-7: расшифровка аббревиатур дана в тексте. N o t e. Here and in tables 2-7: abbreviations are given in the text.
для Т-2, 4 мкг/кг для НТ-2 и ЦТВ, 10 мкг/кг для ФВ1 и АЛТ, 15 мкг/кг для ДОН, 27 мкг/кг для 3- и 15-ацДОН, 65 мкг/кг для ФУЗ Х, 80 мкг/кг для Т-2 триол, 15 мкг/кг для ЦПК. Степень извлечения МТ в какао и кэробе варьировала от 60 до 91%.
Результаты и обсуждение
Загрязненность микотоксинами какао-продуктов. В исследованных образцах какао-продуктов (п=41) обнаружен широкий спектр МТ: из общего перечня 27 ана-
up o
тов odu
с:
ро i же пр MT
I % Ï
ап n бр
' 111111111ТГГ
зз зз
67 100
100
25 25 50
25
100
Какао-порошок Растворимое Какао тертое Бобы Бобы
Cocoa powder какао Liquor обжаренные необжаренные
(18) Instant cocoa (3) Roasted beans Unroasted beans
(11) (4) (4)
Посыпка шоколадная Chocolate sprinkles (1)
S БО / 0 СТЦ
BEA ВЗЕН / ZEN / STC □ НТ-2
0 OTA
■ АФЛ B1 / AFL B1
О ТЕН / TEN □ ЦИТ / CIT
P АФЛ G2 / AFL G2 ■ ЦПК / CPA
Ш АМЭ / AME □ AOH Я ЭНН B / ENN B
Рис. 1. Загрязненность микотоксинами различных какао-продуктов Расшифровка аббревиатур дана в тексте.
Fig. 1. Mycotoxins contamination of various cocoa products Abbreviations are given in the text.
Таблица 2. Частота обнаружения и уровни загрязнения какао-порошка микотоксинами (MT) (18 проб) Table 2. Occurrence of mycotoxins in cocoa powder (MT) (18 samples)
Токсин Toxin Количество контами-нированных проб, % Number of positive samples, % Диапазон загрязнения, мкг/кг Contamination range, M/kg Содержание МТ в загрязненных пробах, мкг/кг, средние значения Mean MT content In positive samples, yg/kg Содержание МТ в пробах всего ряда, мкг/кг MT content In total samples, yg/kg
M Me 90%
БО / BEA 83 1,61-46,94 15,24 12,7О 7,9О 27,45
ЗЕН / ZEN 67 2,11-20,30 9,48 e^ 2,e8 17,11
ОТА 50 0,83-2,38 1,84 О,92 О,42 2,ОО
СТЦ / STC 11 2,40-3,32 2,86 О,32 О,42 2,4О
АФЛ В1 / AFL B1 6 0,86 0,86 О,О5 О О
ЦПК / CPA 6 0,48 0,48 О,О3 О О
ЦИТ / CIT 6 3,43 3,43 О,19 О О
ЭНН В / ENN B 6 3,31 3,31 О,18 О О
лизируемых токсинов в пробах выявлено 13 видов МТ и ЭМТ, а именно БО, ЗЕН, ОТА, АФЛ G2, ТЕН, АМЭ, СТЦ, АФЛ В1, АОН, ЭНН В, НТ-2, ЦПК и ЦИТ (табл. 1).
Наиболее часто в какао-продуктах обнаруживали фузариотоксины: в большинстве проб присутствовал эмерджентный БО, количество которого варьировало в широком диапазоне, достигая уровня 2184,8 мкг/кг, почти в половине случаев выявляли ЗЕН, в 5% образцов присутствовали незначительные количества ЭНН В. Впервые получены данные о возможности загрязнения какао-продуктов ЭМТ, продуцируемыми грибами рода Alternaria: в 17% проб были выявлены альтернариаток-сины ТЕН, АМЭ и АОН.
Кроме того, значительная часть (61%) какао-продуктов была загрязнена МТ, продуцируемыми «грибами хранения» (преимущественно родов Pénicillium и Aspergillus) -ОТА, СТЦ, АФЛ В1, ЦИТ и ЦПК. В 2 образцах был найден фузариотоксин ЭНН В на низких уровнях загрязнения -1,85 и 2,65 мкг/кг.
Обращает на себя внимание обнаружение в 6 (15%) пробах регламентируемого в какао-продуктах АФЛ В1 (без превышения МДУ 5 мкг/кг) и его произво-
дного АФЛ G2, количество которого было сопоставимо с таковым МДУ АФЛ В1 (2,38-6,63 мкг/кг). Полученные результаты подтверждают гигиеническую значимость дифференцированного регламентирования АФЛ и необходимость скрининговых исследований на наиболее значимые виды АФЛ в данной группе растительной продукции.
Детальное изучение характера загрязненности какао-продуктов показало, что 61% исследованных образцов был контаминирован сразу несколькими МТ. Чаще других встречались сочетания БО + ОТА (12% проб), или БО + ЗЕН (12% проб), 3 и более МТ одновременно регистрировали в 20% образцов.
Наиболее загрязненными МТ были какао-порошок, какао тертое и сухие растворимые какао-напитки (рис. 1). Так, при анализе 3 образцов какао тертого были найдены 5 МТ (БО, ЗЕН, ОТА, АФЛ В1, СТЦ). Значительно реже МТ обнаруживали в какао-бобах (как обжаренных, так и в необжаренных). Однако именно в пробе необ-жаренных какао-бобов был найден БО на уровне более 2 мг/кг, что в несколько раз превышало содержание этого токсина в других продуктах из какао. В образцах
Таблица 3. Частота обнаружения и уровни загрязнения растворимых какао-напитков микотоксинами (МТ) (11 образцов)
Table 3. Occurrence of mycotoxins in instant cocoa (MT) (11 samples)
Токсин Toxin Количество контами-нированных проб, % Number of positive samples, % Диапазоны загрязнения, мкг/кг Contamination range, M/kg Содержание МТ в загрязненных пробах, мкг/кг, средние значения / Mean content of MT In positive samples, yg/kg Содержание МТ в пробах всего ряда, мкг/кг / MT content in total samples, yg/kg
M Me 90%
БО / BEA 73 1,61-34,16 15,78 12,91 1 О,68 31,87
ОТА 27 1,40-12,02 7,13 3,О5 О 11,21
ТЕН / TEN 27 0,70-1,24 1,00 О,27 О 1,21
ЗЕН / ZEN 18 2,63; 3,99 3,31 О^О О 3,85
АФЛ G2 / AFL G2 18 5,82; 6,63 6,22 2,19 О e,55
AOH 18 0,73; 2,47 1,60 О,29 О 2,3О
АМЭ/AME 18 4,23; 4,77 4,50 О,81 О 4,72
ЭНН В / ENN B 9 1,85 1,85 О,17 О 1,85
HT-2 9 3,43 3,43 О,91 О 3,43
Таблица 4. Частота и уровни загрязнения микотоксинами (МТ) кэроба (22 образца) Table 4. Occurrence of mycotoxins (МТ) in carob (22 samples)
Токсин Toxin Количество контами-нированных проб, % Number of positive samples, % Диапазоны загрязнения, мкг/кг Contamination range, M/kg Содержание МТ в загрязненных пробах, мкг/кг, средние значения / Mean content of MT in positive samples, yg/kg Содержание МТ в пробах всего ряда, мкг/кг / MT content in total samples, yg/kg
M Me 90%
АОН 64 1,50-43,1 15,85 14,8б 13,42 30,бб
ТЕН / TEN 59 0,51-8,74 4,18 2,28 3,б4 6,43
ФВ2 / FB2 32 4,17-5,17 4,55 1,4б 0 4,92
МФК / MPA 27 6,92-8,23 7,25 1,98 0 7,79
ОТА 23 0,50-1,41 0,96 0,22 0 1,28
АМЭ/AME 14 1,00-1,19 1,09 0,1б 0 1,07
АФЛ G1 / AFL G1 14 0,38-0,48 0,44 0,06 0 0,48
СТЦ / STC 14 0,15-0,18 0,16 0,02 0 0,17
ДАС/DAS 14 0,21-1,43 0,72 0,10 0 1,1б
АФЛ В1 / AFL B1 14 0,15-0,18 0,17 0,02 0 0,18
HT-2 9 7,85; 9,11 8,48 0,77 0 8,98
ФВ1 / FB1 9 14,06; 18,94 16,50 1,б0 0 18,4б
обжаренных какао-бобов наряду с БО были обнаружены ОТА и СТЦ в количестве 0,61 и 1,00 мкг/кг соответственно.
Анализ полученных данных о загрязненности МТ отдельных видов какао-продуктов показал существенные различия, по-видимому, обусловленные их составом и технологией изготовления. В однокомпонентном какао-порошке наиболее часто обнаруживали БО, ЗЕН
и ОТА (табл. 2), однако среднее содержание этих МТ было ниже, чем в целом по исследованной выборке какао-продуктов (см. табл. 1). Спектр выявляемых МТ также был представлен токсинами «грибов хранения» ОТА, АФЛ В1, СТЦ, ЦИТ и ЦПК, уровни загрязнения которыми были относительно низкими.
По сравнению с какао-порошком в образцах растворимых какао-напитков, содержащих какао-порошок, сме-
%
80 70 60 50 40 30 20 10
S
I IX.
# / / # J' J- / J>
Какао / Cocoa ■ Кэроб / Carob
Y
Рис. 2. Частота загрязнения микотоксинами какао-продуктов и кэроба Расшифровка аббревиатур дана в тексте.
Fig. 2. Mycotoxin's occurrence in carob and cocoa products Abbreviations are given in the text.
0
Таблица 5. Расчетная средняя нагрузка микотоксинами (МТ) на население Российской Федерации при потреблении продуктов из какао и кэроба Table 5. Estimated mycotoxin's (МТ) daily intake per person with carob and cocoa products on average in Russian Federation
Расчетное суточное поступление МТ, нг на 1 кг массы тела в сутки
Токсин Toxin (% от референтного значения) Estimated MT daily Intake, ng/kg b.w. per day Референтные значения МТ, установленные JECFA или рассчитанные в ЕС,
с какао-продуктами (19,28 г) with cocoa products (19.28 g) с кэроб-продуктами (0,20 г) with carob products (0.20 g) нг на 1 кг массы тела в сутки Reference value for MT, set JECFA
среднее максимальное среднее максимальное or EFSA, ng/kg b.w. per day
(mean) (maximum) (mean) (maximum)
3-50**(диапазон средних значений/
БО 19,48 601,8 mean dietary exposure range) 6-93** (уровни высокого хронического
BEA (39,0-649,3) (647,0-10029,3) поступления, 95-й процентиль/ 95th percentile chronic dietary exposure range) [31]
ЗЕН 1,17 6,76 500
ZEN (0,23) (1,35) [26]
ОТА 0,26 3,31 0,0006 0,004 112*
(1,65) (20,70) (0,004) (0,025) [29]
АФЛ В1 AFL B1 0,017 (3,62-9,4) 0,24 (13,31-77,2) 0,00006 (0,11-0,29) 0,0005 (0,03-0,16) 0,18-0,47** (диапазон средних значений для АФЛ В1 / mean dietary exposure range) 0,31-1,78**
АФЛ G1 AFL G1 - - 0,0002 (0,04-0,11) 0,001 (0,08-0,44)
АФЛ G2 0,13 1,83 (максимальные уровни хронического поступ-
AFL G2 (28,1-73,4) (102,6-589,1) ления для АФЛ В1 /
ЕАФЛ 0,0002 0,002 maximum mean dietary exposure to AFL B1)
ZAFL (до 0,13) (до 0,61) [30]
ТЕН 0,019 0,34 0,007 0,025 1500
TEN (0,001) (0,023) (0,0004) (0,0017) [32]
АМЭ 0,11 0,22 0,0004 0,003 2,5
AME (4,4) (8,8) (0,016) (0,12) [32]
АОН 0,02 0,68 0,04 0,12 2,5
(0,8) (27,2) (1,6) (4,8) [32]
ФВ1 + ФВ2 0,008 0,069 2000
FBI + FB2 (0,0004) (0,003) [27]
НТ-2 0,022 (0,09) 0,94 (3,78) 0,0022 (0,009) 0,026 (0,10) 25
ДАС 0,0003 0,004 [28]
DAS (0,001) (0,02)
Т-2 + НТ-2 + ДАС 0,022 0,94 0,002 0,034 25
T-2 + HT-2 + DAS (0,09) (3,76) (0,008) (0,14) [28]
СТЦ 0,05 2,06 0,00006 0,0005 16
STC (0,31) (12,9) (0,003) [33]
П р и м е ч а н и е. * - условно переносимое недельное поступление (в неделю); ** - референтные значения токсинов представлены в виде диапазона величин, рассчитанного по данным EFSA, с использованием подхода (lower bound, LB), при котором содержание токсина в образцах, загрязненных в количестве ниже минимальной определяемой концентрации, принимали равными 0. Здесь и в табл. 6, 7: полужирным шрифтом выделены величины, превышающие референтные значения.
N o t e. * - provisional tolerable weekly intake; ** - reference values of toxins are presented as a range of values calculated from EFSA data using the lower bound approach (LB), all results less than the minimum detectable concentration = 0. Here and in tables 6, 7: bold font indicates values that exceed the reference values.
шанный с другими компонентами (сахаром, мальтодек-стрином, молочной сывороткой и др.), отмечена более высокая распространенность МТ (табл. 3).
Наиболее распространенным загрязнителем растворимых какао-напитков (как и всей исследованной группы какао-продуктов) оказался ЭМТ БО, частота его обнаружения составила 73% при среднем содержании 15,78 мкг/кг. Частота загрязнения ЗЕН (18% проб) была значительно ниже, чем в какао-порошке (67%). Ни в одном изученном образце растворимого какао не был выявлен регламентируемый АФЛ В1, однако в 2 пробах присутствовал АФЛ G2 на уровне около
6 мкг/кг, являющийся производным АФЛ В1 и оказывающий канцерогенное действие. ОТА в растворимом какао обнаруживали лишь в 27% случаев, но при этом среднее содержание токсина было в 2,5 раза выше, чем в общей выборке какао-продуктов; в 2 загрязненных пробах содержание ОТА превышало величину его МДУ, установленного в Бразилии (5 мкг/кг). Альтернариатоксины ТЕН, АМЭ и АОН были обнаружены (с частотой 27, 18 и 18% соответственно) именно в образцах растворимого какао, в других какао-продуктах эти ЭМТ не выявлены.
В целом полученные результаты свидетельствуют о подверженности какао-бобов и какао-продуктов конта-
Таблица 6. Расчетная средняя нагрузка микотоксинами на детей при потреблении какао-напитков из какао-порошка, нг на 1 кг массы тела в сутки (% от референтного значения)
Table 6. Estimated mean intake of mycotoxins with cocoa beverages for children, ng/kg b. w. per day (% of reference value)
Возраст детей Микотоксины (средние содержания для какао-продуктов, мкг/кг) / Mycotoxins (mean content in cocoa products, yg/kg)
Children age БО / BEA ОТА ЗЕН / ZEN АФЛ / AFL СТЦ / STC
(12,7) (0,92) (6,32) (0,05) (0,32)
Дети, питающиеся в домашних условиях и в организованных детских коллективах / Children feeding at home and in organized children's groups
1-3 лет 0,б8—0,63 0,042—0,046 0,29—0,31 0,002 0,01б—0,016
1-3 years old (б,3—б,7) (~ 0,16) (0,06) (0,47) (0,06—0,13)
3-7 лет 0,31—0,70 0,022—0,0б1 0,1б—0,3б 0,001—0,003 0,008—0,018
3-7 years old (б,2—11,7) (0,14—0,3б) (0,03—0,07) (0,26—0,б9) (0,06—0,13)
7-11 лет 0,34—0,б2 0,02б—0,037 0,17—0,26 0,001—0,002 0,009—0,013
7-11 years old (б,7—8,7) (0,14—0,28) (0,03—0,0б) (0,28—0,43) (0,06—0,08)
Старше 12 лет 0,23—0,37 0,016—0,027 0,11—0,18 0,001 0,006—0,009
Over 12 years old (б,8—9,3) (0,07—0,14) (0,02—0,04) (0,б4) (0,04—0,06)
Дети-сироты и без попечения родителей / Orphaned children and legally free children
Старше 7 лет до 1,03 до 0,07б до 0,б1 0,004 0,026
Over 7 years old (17,2) (до 0,49) (до 0,10) (до 0,9) (0,19)
Кадеты / Cadets
б-8-й класс 0,67-0,92 0,049—0,067 0,33—0,46 0,003—0,004 0,017—0,023
б—8й grades (16,8-23,0) (0,3б—0,49) (0,07—0,09) (1,0—1,4) (0,13—0,1б)
9-11-й класс 0,75-0,90 0,0бб—0,06б 0,38—0,4б 0,003—0,004 0,019—0,023
9—11th grades (18,8-22,5) (0,3б—0,49) (0,08—0,09) (1,1—1,3) (0,12—0,13)
минации широким спектром МТ. Видовой состав продуцирующих их грибов динамичен, зависит как от общего состояния окружающей среды, так и от условий хранения после сбора какао-бобов. Наиболее часто заражающие эти продукты микромицеты родов Fusarium, Penicillium, Alternarla, а также Aspergillus являются продуцентами как регламентируемых МТ, так и малоизученных ЭМТ.
Загрязненность микотоксинами кэроба. В исследованных образцах кэроба были найдены 12 видов МТ. Наиболее частыми загрязнителями оказались ТЕН, АОН и ФВ2 (табл. 4). Наряду с широко распространенными альтернариатоксинами ТЕН (64%) и АОН (59%) в нескольких образцах кэроба был найден также АМЭ (14%).
По перечню выявляемых МТ образцы кэроба существенно отличались от какао-продуктов (рис. 2). Наиболее частыми контаминантами кэроба были эмер-джентные альтернариатоксины АОН и ТЕН. В отличие от какао-продуктов, в исследованных пробах кэроба была обнаружена МФК, являющаяся метаболитом грибов рода Penicillium и также относящаяся к ЭМТ. Кроме того, спектр выявляемых МТ свидетельствовал о контаминации сырья для изготовления порошка кэроба «грибами хранения»: были обнаружены ОТА, СТЦ, АФЛ G1 и АФЛ В2. Уровни загрязнения ОТА не превышали 1,41 мкг/кг, что ниже регламента, установленного для ОТА в некоторых растительных продуктах в Российской Федерации. Предположительно продуцентами ОТА были Aspergillus секции Nigri, способные синтезировать их наряду с АФЛ [21, 25]. Следует отметить высокую частоту обнаружения в кэробе фузариотоксинов: ФВ1 и ФВ2 присутствовали
в 41% изученных образцов, в 23% проб были найдены НТ-2 и ДАС на достаточно высоком уровне (7,85-9,11 и 0,21-1,43 мкг/кг соответственно).
Совместное присутствие в кэробе нескольких МТ обнаружено в 64% случаев, наиболее загрязнены были 3 из 22 проб кэроба, в них одновременно были обнаружены АОН + ТЕН + АМЭ + СТЦ + ОТА + МФК, или ФВ1 + НТ-2 + ДАС + АФЛ В1, а также ФВ1 + НТ-2.
В целом полученные в данном исследовании результаты, а также выявленные ранее особенности загрязнения МТ и ЭМТ напитков из кэроба свидетельствуют о наличии в них широкого спектра продуцируемых плесенями токсичных метаболитов, не регламентируемых в данной группе продукции, в том числе в количествах, представляющих потенциальный риск для здоровья потребителей. Это подтверждает целесообразность продолжения исследований по данной проблеме, которые позволят решить вопросы о необходимости гигиенической регламентации плесневых грибов и новых видов МТ в продуктах из кэроба.
Оценка риска здоровью, обусловленного загрязненностью микотоксинами какао-продуктов и кэроба. На основании результатов проведенных скрининговых исследований загрязнения МТ какао-продуктов и кэроба, представленных на отечественном потребительском рынке, рассчитан их вклад в поступление МТ с пищей.
Сведения о потреблении населением России какао и кэроба в 2020 г. получены из базы данных Федеральной таможенной службы2. Средняя численность населения России в 2020 г., по данным Росстата3, составляла
2 Федеральная таможенная служба. Таможенная статистика внешней торговли РФ, URL: http://stat.customs.gov.ru
3 Росстат. Потребление продуктов питания в домашних хозяйствах в 2020 году по итогам выборочного обследования бюджетов домашних хозяйств. Москва, 2021. URL: https://rosstat.gov.ru/storage/mediabank/Potreb_prod_pitan-2020.pdf
Таблица 7. Расчетная средняя нагрузка микотоксинами (MT) на детей при потреблении растворимых какао-напитков (расчет на 1 порцию объемом 200 мл*)
Table 7. Estimated mean intake of mycotoxins (MT) with instant cocoa beverages for children, ng/kg b. w. per day (1 portion = 200 ml*)
Токсин Toxin Содержание МТ, мкг/кг MT content, yg/kg Расчетное суточное поступление МТ, нг на 1 кг массы тела в сутки (% от референтного значения) с растворимым какао-напитком Estimated MT daily Intake with Instant cocoa, ng/kg b.w. per day Референтное значение МТ, нг на 1 кг массы тела Reference value, ng/kg b.w. per day Расчетное суточное поступление МТ, нг на 1 кг массы тела в сутки (% от референтного значения)с растворимым какао-напитком Estimated MT daily Intake with instant cocoa, ng/kg b.w. per day Референтное значение МТ, нг на 1 кг массы тела Reference value, ng/kg b.w. per day
от 7 до 10 лет / 7-10 years old старше 10 лет / over 10 years old
БО BEA 12,91 среднее / mean 1,39-1,94 (23,2-32,2) 6 [31] 0,71-1,41 (5,5-10,9) 13 [31]
34,16 максимальное max 3,68-5,12 (92,1-128,0) 4 [31] 1,88-3,74 (20,9-41,6) 9 [31]
3,05 среднее / mean 0,33-0,46 (2,1-2,9) 0,17-0,33 (1,1-2,1)
OTA 12,05 максимальное max 1,30-1,81 (8,1-11,3) 112* [29] 0,66-1,32 (4,1-8,3) 112* [29]
2,19 среднее / mean 0,24-0,33 (50,2-69,9) 0,47 [30] (среднее значение для АФЛ В1 / mean dietary exposure to AFL B1) 0,71-0,99 (40,2-55,9) 0,27 [30] (среднее значение для АФЛ В1 / mean dietary exposure to AFL B1)
AФЛ G2 AFL G2 6,63 максимальное max 0,12-0,24 (44,6-88,9) 1,78 [30] (максимальное значение хронического поступления для АФЛ В1 / maximum dietary exposure to AFL B1) 0,36-0,73 (29,4-58,6) 1,24 [30] (максимальное значение хронического поступления для АФЛ В1 / maximum dietary exposure to AFL B1)
П р и м е ч а н и е. * - масса 1 порции составляет 3,7 г растворимого какао. N o t e. * - the mass of 1 serving is 3.7 g of instant cocoa.
146 171 015 человек. Объем потребления какао достигал 102 878 т, кэроба - 1086,46 т. Соответственно, расчетное среднее суточное потребление какао населением в среднем составило 19,3 г, кэроба - 0,2 г.
Принимая во внимание данные о среднем потреблении населением России вышеперечисленных продуктов, среднем и максимальном содержании в них МТ, была рассчитана вероятная нагрузка выявленными в исследованной продукции МТ на население. Для МТ ЗЕН, ФВ1 + ФВ2 в качестве референтных значений были взяты величины условно переносимого суточного поступления, установленные экспертами Продовольственной и сельскохозяйственной организации Объединенных Наций по пищевым добавкам (JECFA) (в нг на 1 кг массы тела): 500 для ЗЕН и его метаболитов [26]; 2000 для суммы фумонизинов [27]; переносимого суточного поступления для токсинов ДАС, Т-2 и НТ-2 отдельно или в сочетании на уровне 25 [28] и условно переносимого недельного поступления (УПНП) - 112 для ОТА [29].
В качестве ориентировочных референтных значений для АФЛ, БО, суммы ЭНН использовали величины хронического суточного поступления с пищей
[30, 31]; для альтернариатоксинов - порога токсикологической опасности (Threshold of Ttoxicological Concern, ТТС), рассчитанные по данным Европейского агентства по безопасности пищи (EFSA). В частности, ТТС АОН и АМЭ составили по 2,5 нг на 1 кг массы тела в сутки, для ТЕН - 1500 нг на 1 кг массы тела в сутки [32]; для СТЦ поступление, оказывающее незначительное влияние на здоровье человека (exposure of low health concern), -16 нг на 1 кг массы тела в сутки [33]. Все используемые для оценки референтные (ориентировочные референтные) величины указаны в табл. 5 и 6. Средняя масса тела человека была принята за 70 кг.
Показано, что при регулярном потреблении какао-продуктов, загрязненных АФЛ на средних уровнях, их поступление может достигать 11,1% от референтного значения. При условии загрязнения продукции на максимальных уровнях, такая продукция оценивается как представляющая серьезный риск для здоровья населения. Расчетное поступление ЭМТ БО даже при расчете по средним уровням более чем в 6 раз превышает величину ориентировочного референтного значения (см. табл. 5). Среднее поступление остальных видов МТ
было значительно ниже, чем их референтные величины для населения в целом. При этом при потреблении продукции из какао, загрязненной на максимальном уровне, риск для здоровья населения могут представлять АФЛ.
Для населения, регулярно потребляющего напитки из кэроба, рассчитали потенциальную нагрузку наиболее характерными для этой продукции видами МТ. Исходили из того, что в неделю человек употребляет от 1 до 7 стаканов напитка, а для приготовления 1 порции используют 2 чайные ложки (около 7 г порошка), которые растворяют в 200 мл воды. Показано, что среди обнаруженных токсинов только поступление АОН с кэробом, загрязненном на среднем уровне, могло вносить весомый вклад в нагрузку - от 59,4% (с 1 стаканом напитка) до 415,8% (с 7 стаканами напитка) от величины ТТС.
При расчете поступления МТ для детей, которые регулярно потребляют какао-напитки как в домашних условиях, так и в специализированных учреждениях, учитывали, что их масса тела может быть в несколько раз ниже массы тела взрослого человека. Согласно Сан-ПиН 2.3/2.4.3590-20 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения», суточная порция какао-порошка для детей в возрасте от 1 года до 3 лет составляет 0,5 г, от 3 до 7 лет -0,6 г; от 7 до 11 лет - 1 г, от 12 лет и старше - 1,2 г. В среднесуточные наборы пищевой продукции для питания детей, находящихся в организациях для детей, оставшихся без попечения родителей, и детей-сирот от 3 до 7 лет, порция какао-порошка составляет 0,5 г, от 7 лет и старше - 2 г (см. табл. 6). В среднесуточных наборах для организации питания детей, обучающихся в образовательных учреждениях кадетского типа, заложено потребление 6 г какао-порошка и кофейных напитков для учащихся 5-8-х классов; 8 г - для кадетов 9-11-х классов. В связи с этим в расчетах использовали в 2 раза меньшее значение (см. табл. 6).
Потенциальную нагрузку наиболее распространенными токсинами на детей при потреблении напитка из какао-порошка (см. табл. 6) рассчитывали с применением величин их среднего содержания (см. табл. 2).
Проведенные расчеты показывают, что наибольшая нагрузка МТ приходится на детей-сирот старше 7 лет и кадетов, учащихся в 5-11-х классах. Поступление АФЛ
и ОТА не превышало 1,4 и 0,5% от референтных значений соответственно. Среди всех изученных МТ наибольшее поступление токсинов с продуктом приходилось на эмерджентный БО - до 23% от референтного значения.
В домашних условиях широко практикуется потребление растворимых какао-напитков (типа «Несквик» и т.п.). Учитывая, что этот вид продуктов (см. табл. 3) оказался загрязненным ОТА и АФЛ на более высоком уровне по сравнению с напитками из какао-порошка, был проведен расчет потенциальной нагрузки токсинами на детей разного возраста при потреблении этого вида какао-продукции (табл. 7).
Установлено, что МТ АФЛ G2, ОТА и БО по сравнению с альтернариатоксинами и ЗЕН вносят наибольшие вклады - до 70, 3 и 32% соответственно - в нагрузку ими на детей от 7 до 17 лет при потреблении растворимых какао-напитков. Следует отметить, что в случае потребления какао-напитков, загрязненных вышеперечисленными токсинами на максимальном уровне, возможное поступление АФЛ может достигать 30-90% от референтного значения, ОТА - 11%, а БО может превышать референтное значение, особенно для детей 7-10 лет.
Выводы
1. Установлено, что какао и кэроб - хорошие субстраты для роста и размножения плесневых грибов, о чем свидетельствует выявление из 27 видов исследованных вторичных метаболитов плесневых грибов в какао и какао-продуктах 13 МТ и ЭМТ: БО, ЗЕН, ОТА, АФЛ G2, ТЕН, АМЭ, СТЦ, АФЛ В1, АОН, ЭНН В, НТ-2, ЦПК и ЦИТ; в образцах кэроба - 12 МТ, включая АОН, ТЕН, ФВ1 и ФВ2, МФК, ОТА, АФЛ В1 и АФЛ G1, СТЦ, ДАС, НТ-2 и АМЭ.
2. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости организации гигиенического мониторинга содержания АФЛ, ОТА в этих видах продукции и ЭМТ БО в какао и какао-продуктах.
3. При расчете потенциальной нагрузки МТ для различных возрастных групп показана возможность поступления высоких уровней АФЛ, БО и ОТА при потреблении какао-продуктов (особенно растворимых какао-напитков) детьми старше 7 лет в организованных коллективах.
Сведения об авторах
Седова Ирина Борисовна (Irina B. Sedova) - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация) E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-6011-4515
Киселева Мария Геннадьевна (Mariya G. Kiseleva) - кандидат химических наук, старший научный сотрудник лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация) E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1057-0886
Чалый Захар Андреевич (Zakhar A. Chalyy) - младший научный сотрудник лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация) E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9371-8163
Ефимочкина Наталья Рамазановна (Natalia R. Efimochkina) - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории биобезопасности и анализа нутримикробиома ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация) E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-9071-0326)
Тутельян Виктор Александрович (Victor A. Tutelyan) - академик РАН, доктор медицинских наук, профессор, научный руководитель ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», заведующий кафедрой гигиены питания и токсикологии ИПО ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (Москва, Российская Федерация) E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4164-8992
Литература
1. Lopes U.V., Pires J.L. Botany and production of cocoa // Cocoa and 16. Coffee Fermentations / eds R.F. Schwan, G.H. Fleet. Boca Raton, FL : CRC Press, 2014. P. 43-70. ISBN 9781439847916.
2. Гаврилова Н.Г. Обзор и анализ мирового производства и потребления какао // Международный сельскохозяйственный журнал. 2021. Т. 64,
ч. 2. С. 174-183. DOI: https://doi.org/10.24411/2588-0209-2021-10322 17.
3. Turcotte A.-M., Scott P.M., Tague B. Analysis of cocoa products for ochratoxin A and aflatoxins // Mycotoxin Res. 2013. Vol. 29, N 3.
Р. 193-201. DOI: https://doi.org/10.1007/s12550-013-0167-x 18.
4. Amezqueta S., Gonzalez-Penas E., Murillo M., Lopez de Cerain A. Occurrence of ochratoxin A in cocoa beans: Effect of shelling // Food Addit. Contamin. 2005. Vol. 22. P. 590-596. DOI: https://doi. org/10.1080/02652030500130160
5. Kedjebo K.B., Guehi T.S., Kouakou B., Durand N., Aguilar P., Fon- 19. tana A. et al. Effect of post-harvest treatments on the occurrence
of ochratoxin A in raw cocoa beans // Food Addit. Contam. Part A Chem. Anal. Control Expo. Risk Assess. 2016. Vol. 33, N 1. P. 157-166. DOI: https://doi.org/10.1080/19440049.2015.1112038
6. Dano S.D., Manda P., Dembele A., Kouassi Abla A.M.-J., Gouet 20. J.Z. et al. Influence of fermentation and drying materials on the contamination of cocoa beans by ochratoxin A // Toxins. 2013. Vol. 5, N 12.
P. 2310-2323. DOI: https://doi.org/10.3390/toxins5122310
7. Copetti M.V., Iamanaka B.T., Nester M.A., Efraim P., Taniwaki M.H. 21. Occurrence of ochratoxin A in cocoa by-products and determination of its reduction during chocolate manufacture // Food Chem. 2013. Vol. 136, N 1. P. 100-104. DOI: https://doi.org/10.1016/jfood-chem.2012.07.093
8. Copetti M.V., Pereira J.L., Iamanaka B.T., Pitt J.I., Taniwaki M.H. 22. Ochratoxigenic fungi and ochratoxin A in cocoa during farm processing // Int. J. Food Microbiol. 2010. Vol. 143, N 1-2. P. 67-70. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2010.07.031
9. Sanchez-Hervas M, Gil J.V., Bisbal F., Ramon D., Martinez-Culebras P.V. Mycobiota and mycotoxin producing fungi from cocoa be- 23. ans // Int. J. Food Microbiol. 2008. Vol. 125, N 3. P. 336-340. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jjfoodmicro.2008.04.021
10. Mounjouenpou B., Gueule D., Fontana-Tachon A., Guyot B., Tondje P.R., Guiraud J.-P. Filamentous fungi producing ochratoxin a dur- 24. ing cocoa processing in Cameroon // Int. J. Food Microbiol. 2008.
Vol. 121, N 2. P. 234-241. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmi-cro.2007.11.017
11. de Magalhaes J.T., Sodre G. A., Viscogliosi H., Grenier-Loustalot M.-F. 25. Occurrence of ochratoxin A in Brazilian cocoa beans // Food Control. 2011. Vol. 22, N 5. P. 744-748. DOI: https://doi.org/10.1016/j.food-cont.2010.11.006
12. Brera C., Debegnach F., De Santis B., Iafrate E., Pannunzi E., Berdi- 26. ni C. et al. Ochratoxin A in cocoa and chocolate products from the Italian market: occurrence and exposure assessment // Food Control. 2011. Vol. 22, N 10. P. 1663-1667. DOI: https://doi.org/10.1016/j.food-cont.2011.03.026
13. Maciel L.F., de Souza Madureira Felicio A.L., Miranda L.C.R. et al. 27. Aflatoxins and ochratoxin A in different cocoa clones (Theobroma cacao L.) developed in the southern region of Bahia, Brazil // Food Addit. Contam. Part A. 2017. Vol. 35. P. 134-143. DOI: https://doi.org/ 10.1080/19440049.2017.1397293 28.
14. Copetti M.V., Iamanaka B.T., Pitt J.I., Taniwaki M.H. Fungi and mycotoxins in cocoa: from farm to chocolate // Int. J. Food Microbiol. 2014. Vol. 178. P. 13-20. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmi-cro.2014.02.023 29.
15. Coulibaly A., Dagnogo K., Sidibe D., Silue N., Dembele A., Biego G.H. Daily intake of aflatoxins from cocoa (Theobroma cacao) product in Cote D'ivoire // IJSR (International Journal of Science and Research). 2016. Vol. 5, N 5. P. 1517-1522. DOI: https://doi.org/10.21275/v5i5. 30. nov163664
Akinfala T.O., Houbraken Jo., Sulyok M., Adedeji A.R., Odebode A.C., Krska R. et al. Moulds and their secondary metabolites associated with the fermentation and storage of two cocoa bean hybrids in Nigeria // Int. J. Food Microbiol. 2020. Vol. 316, N 2. Article ID 108490. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2019.108490
Turcotte A-M., Scott P.M., Tague B. Analysis of cocoa products for ochratoxin A and aflatoxins // Mycotoxin Res. 2013. Vol. 29, N 3. P. 193-201. DOI: https://doi.org/10.1007/s12550-013-0167-x Egbuta M.A., Chilaka C.A., Phoku J.Z., Mwanza M., Dutton M.F. Co-contamination of Nigerian cocoa and cocoa-based powder beverages destined for human consumption by mycotoxins // Stud. Ethno Med. 2013. Vol. 7, N 3. P. 187-194. DOI: https://doi.org/10.1080/09735070.2 013.11886460
Stavrou I.J., Christou A., Kapnissi-Christodoulou C.P. Polyphenols in carobs: a review on their composition, antioxidant capacity and cytotoxic effects, and health impact // Food Chem. 2018. Vol. 269. P. 355-374. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2018. 06.152
Durazzo A., Turfani V., Narducci V., Azzini E., Maiani G., Carcea M. Nutritional characterisation and bioactive components of commercial carobs flours // Food Chem. 2014. Vol. 153. P. 109-113. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.foodchem.2013.12.045
Mom M.P., Romero S.M., Larumbe A.G., Iannone L., Comerio R., Smersu C.S.S. et al. Microbiological quality, fungal diversity and aflatoxins contamination in carob flour (Prosopis flexuosa) // Int. J. Food Microbiol. 2020. Vol. 326. Article ID 108655. DOI: https://doi. org/10.1016/j.ijfoodmicro.2020.108655
Киселева М.Г., Чалый З.А. Определение микотоксинов в кэробе. В книге: Здоровье и окружающая среда // Сборник материалов международной научно-практической конференции / редкол. : С.И. Сычик (гл. ред.) и др. Минск, 2021. С. 424-426. ISBN: 978985-553-711-4.
Bessaire Th., Perrin I., Tarres A., Bebius A., Reding F., Theurillat V. Mycotoxins in green coffee: occurrence and risk assessment // Food Control. 2019. Vol. 96. P. 59-67. DOI: https://doi.org/10.1016/j.food-cont.2018.08.033
Седова И.Б., Киселева М.Г., Чалый З.А. Микотоксины в кофе и цикории: от регламентируемых к эмерджентным // Анализ риска здоровью. 2022. № 2. С. 64-72. DOI: https://doi.org/10.21668/health. risk/2022.2.06
Frisvad J.C., Larsen T.O., Thrane U., Meijer M., Varga J., Samson R.A. et al. Fumonisin and ochratoxin production in industrial Aspergillus niger strains // PLoS One. 2011. Vol. 6, N 8. Article ID e23496. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0023496
JECFA, 2000. Safety evaluation of certain food additives and contaminants: prepared by the Fifty-third meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA). (WHO Food Additives Series: 44). Zearalenone. Geneva : World Health Organization, 2000.
JECFA, 2010. Safety evaluation of certain contaminants in food: prepared by the Sixty-eighth meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA) (WHO Food Additives Series, No. 47)
JECFA, 2022. Summary and conclusions of Ninety-third meeting FAO/WHO Expert Committee on Food Additives Joint. Virtual meeting, 24, 25, 29, 30 March and 1 April 2022. URL: https://www.jecfa93-summary-and-conclusions-april2022.pdf
JECFA, 2008. Safety evaluation of certain contaminants in food: prepared by the Sixty-eighth meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA) (WHO Food Additives Series, No. 59). Geneva : World Health Organization, 2008. P. 357-429. Schrenk D., Bignami M., Bodin L., James Kevin Chipman J. K., del Mazo J., Grasl-Krauppet B. et al. Scientific opinion - risk assessment
of aflatoxins in food // EFSA J. 2020. Vol. 18, N 3. Abstr. 6040. 112 p. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2020.6040 31. EFSA CONTAM Panel (EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain), 2014. Scientific Opinion on the risks to human and animal health related to the presence of beauvericin and enniatins in food and feed // EFSA J. 2014. Vol. 12, N 8. Abstr. 3802. 174 p. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa. 2014.3802
32. Arcella D., Eskola M., Gomez R., Jose A. Dietary exposure assessment to Alternaria toxins in the European population // EFSA J. 2016. Vol. 18. 48 p. DOI. https://doi.org/14.10.2903/j.efsa.2016.4654
33. EFSA CONTAM Panel (EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain), 2013. Scientific Opinion on the risk for public and animal health related to the presence of sterigmatocystin in food and feed // EFSA J. 2013. Vol. 11, N 6. Abstr. 3254. 81 p. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2013.3254
References
1. Lopes U.V., Pires J.L. Botany and production of cocoa. In: R.F. Sch- 18. wan, G.H. Fleet (eds). Cocoa and Coffee Fermentations. Boca Raton,
FL: CRC Press, 2014: 43-70. ISBN 9781439847916.
2. Gavrilova N.G. An review and analysis of cocoa world production and consumption. Mezhdunarodniy sel'skokhozyaystvenniy zhurnal [Inter- 19. national Agricultural Journal]. 2021; 64 (2): 174-83. DOI: https://doi. org/10.24411/2588-0209-2021-10322 (in Russian)
3. Turcotte A.-M., Scott P.M., Tague B. Analysis of cocoa products
for ochratoxin A and aflatoxins. Mycotoxin Res. 2013. Vol. 29, N 3. 20. Р. 193-201. DOI: https://doi.org/10.1007/s12550-013-0167-x
4. Amezqueta S., Gonzalez-Penas E., Murillo M., López de Cerain A. Occurrence of ochratoxin A in cocoa beans: Effect of shelling. Food Addit Contamin. 2005; 22: 590-6. DOI: https://doi. 21. org/10.1080/02652030500130160
5. Kedjebo K.B., Guehi T.S., Kouakou B., Durand N., Aguilar P., Fontana A., et al. Effect of post-harvest treatments on the occurrence of ochratoxin A in raw cocoa beans. Food Addit Contam Part A Chem Anal Control Expo Risk Assess. 2016; 33 (1): 157-66. DOI: https://doi. 22. org/10.1080/19440049.2015.1112038
6. Dano S.D., Manda P., Dembélé A., Kouassi Abla A.M.-J., Gouet J.Z., et al. Influence of fermentation and drying materials on the contamination of cocoa beans by ochratoxin A. Toxins. 2013; 5 (12): 2310-23. DOI: https://doi.org/10.3390/toxins5122310 23.
7. Copetti M.V., Iamanaka B.T., Nester M.A., Efraim P., Taniwaki M.H. Occurrence of ochratoxin A in cocoa by-products and determination of its reduction during chocolate manufacture. Food Chem. 2013; 136 (1): 100-4. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.07.093 24.
8. Copetti M.V., Pereira J.L., Iamanaka B.T., Pitt J.I., Taniwaki M.H. Ochratoxigenic fungi and ochratoxin A in cocoa during farm processing. Int J Food Microbiol. 2010; 143 (1-2): 67-70. DOI: https://doi. org/10.1016/j.ijfoodmicro.2010.07.031 25.
9. Sanchez-Hervas M, Gil J.V., Bisbal F., Ramon D., Martínez-Culebras P.V. Mycobiota and mycotoxin producing fungi from cocoa beans. Int J Food Microbiol. 2008; 125 (3): 336-40. DOI: https://doi. org/10.1016/j.ijfoodmicro.2008.04.021 26.
10. Mounjouenpou B., Gueule D., Fontana-Tachon A., Guyot B., Ton-dje P.R., Guiraud J.-P. Filamentous fungi producing ochratoxin a during cocoa processing in Cameroon. Int J Food Microbiol. 2008; 121 (2): 234-41. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2007.11.017 27.
11. de Magalhaes J.T., Sodré G. A., Viscogliosi H., Grenier-Loustalot M.-F. Occurrence of ochratoxin A in Brazilian cocoa beans. Food Control. 2011; 22 (5): 744-8. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2010.11.006
12. Brera C., Debegnach F., De Santis B., Iafrate E., Pannunzi E., Berdini C., 28. et al. Ochratoxin A in cocoa and chocolate products from the Italian market: occurrence and exposure assessment. Food Control. 2011;
22 (10): 1663-7. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2011.03.026
13. Maciel L.F., de Souza Madureira Felício A.L., Miranda L.C.R., et 29. al. Aflatoxins and ochratoxin A in different cocoa clones (Theobroma cacao L.) developed in the southern region of Bahia, Brazil. Food Addit Contam Part A. 2017; 35: 134-43. DOI: https://doi.org/10.1080/19440 049.2017.1397293 30.
14. Copetti M.V., Iamanaka B.T., Pitt J.I., Taniwaki M.H. Fungi and myco-toxins in cocoa: from farm to chocolate. Int J Food Microbiol. 2014; 178: 13-20. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2014.02.023
15. Coulibaly A., Dagnogo K., Sidibe D., Silue N., Dembele A., Biego G.H. 31. Daily intake of aflatoxins from cocoa (Theobroma cacao) product in Cote D'ivoire. IJSR (International Journal of Science and Research). 2016; 5 (5): 1517-22. DOI: https://doi.org/10.21275/v5i5.nov163664
16. Akinfala T.O., Houbraken Jo., Sulyok M., Adedeji A.R., Odebode A.C., Krska R., et al. Moulds and their secondary metabolites associated with 32. the fermentation and storage of two cocoa bean hybrids in Nigeria. Int
J Food Microbiol. 2020; 316 (2): 108490. DOI: https://doi.org/10.1016/ j.jfoodmicro.2019.108490 33.
17. Turcotte A-M., Scott P.M., Tague B. Analysis of cocoa products for ochratoxin A and aflatoxins. Mycotoxin Res. 2013; 29 (3): 193-201. DOI: https://doi.org/10.1007/s12550-013-0167-x
Egbuta M.A., Chilaka C.A., Phoku J.Z., Mwanza M., Dutton M.F. Co-contamination of Nigerian cocoa and cocoa-based powder beverages destined for human consumption by mycotoxins. Stud Ethno Med. 2013; 7 (3): 187-94. DOI: https://doi.org/10.1080/09735070.2013.11886460 Stavrou I.J., Christou A., Kapnissi-Christodoulou C.P. Polyphenols in carobs: a review on their composition, antioxidant capacity and cyto-toxic effects, and health impact. Food Chem. 2018; 269: 355-74. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2018.06.152
Durazzo A., Turfani V., Narducci V., Azzini E., Maiani G., Carcea M. Nutritional characterisation and bioactive components of commercial carobs flours. Food Chem. 2014; 153: 109-13. DOI: https://doi. org/10.1016/j.foodchem.2013.12.045
Mom M.P., Romero S.M., Larumbe A.G., Iannone L., Comerio R., Smersu C.S.S., et al. Microbiological quality, fungal diversity and aflatoxins contamination in carob flour (Prosopis flexuosa). Int J Food Microbiol. 2020; 326: 108655. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ij foodmi-cro.2020.108655
Kiseleva M.G., Chaly Z.A. Determination of mycotoxins in carob. In: Sychik S.I. (ch. ed.), et al. Materialy mezdunarodnoy nauchno-practiches-koy konferentsii «Zdorov'e i okruzhayushchaya sreda» [Proceedings of the international scientific and practical conference «Health and Environment»]. Minsk, 2021: 424-6. ISBN: 978-985-553-711-4 (in Russian) Bessaire Th., Perrin I., Tarres A., Bebius A., Reding F., Theuril-lat V. Mycotoxins in green coffee: occurrence and risk assessment. Food Control. 2019; 96: 59-67. DOI: https://doi.org/10.1016/j.food-cont.2018.08.033
Sedova I.B., Kiseleva M.G., Chaly Z.A. Mycotoxins in coffee and chicory: from regulated to emergent. Analiz riska zdorov'yu [Health Risks Analysis]. 2022; (2): 64-72. DOI: https://doi.org/10.21668/ health.risk/2022.2.06
Frisvad J.C., Larsen T.O., Thrane U., Meijer M., Varga J., Samson R.A., et al. Fumonisin and ochratoxin production in industrial Aspergillus niger strains. PLoS One. 2011; 6 (8): e23496. DOI: https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0023496
JECFA, 2000. Safety evaluation of certain food additives and contaminants: prepared by the Fifty-third meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA). (WHO Food Additives Series: 44). Zearalenone. Geneva: World Health Organization, 2000. JECFA, 2010. Safety evaluation of certain contaminants in food: prepared by the Sixty-eighth meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA) (WHO Food Additives Series, No. 47)
JECFA, 2022. Summary and conclusions of Ninety-third meeting FAO/WHO Expert Committee on Food Additives Joint. Virtual meeting, 24, 25, 29, 30 March and 1 April 2022. URL: https://www.jecfa93-summary-and-conclusions-april2022.pdf
JECFA, 2008. Safety evaluation of certain contaminants in food: prepared by the Sixty-eighth meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA) (WHO Food Additives Series, No. 59). Geneva: World Health Organization, 2008. P. 357-429. Schrenk D., Bignami M., Bodin L., James Kevin Chipman J. K., del Mazo J., Grasl-Krauppet B. et al. Scientific opinion - risk assessment of aflatoxins in food. EFSA J. 2020; 18 (3). Abstr 6040: 112 p. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2020.6040
EFSA CONTAM Panel (EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain), 2014. Scientific Opinion on the risks to human and animal health related to the presence of beauvericin and enniatins in food and feed. EFSA J. 2014; 12 (8). Abstr 3802: 174 p. DOI: https://doi. org/10.2903/j.efsa.2014.3802
Arcella D., Eskola M., Gómez R., Jose A. Dietary exposure assessment to Alternaria toxins in the European population. EFSA J. 2016; 18: 48 p. DOI. https://doi.org/14.10.2903/j.efsa.2016.4654 EFSA CONTAM Panel (EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain), 2013. Scientific Opinion on the risk for public and animal health related to the presence of sterigmatocystin in food and feed. EFSA J. 2013; 11 (6). Abstr 3254: 81 p. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2013.3254
