CC BY
10
дифференцировке постепенно растет, достигая максимума к 15 суткам.
Таким образом, наши результаты впервые описывают феномен переключения экспрессии различных типов аденилатциклаз и фосфолипаз Cß при дифференцировке МСК. Подобное переключение вероятно необходимо для регуляции направления и эффективности дифференцировки.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ (№ 1975-30007, Фундаментальные проблемы регенеративной медицины: регуляция обновления и репарации тканей человека).
Литература:
1. Thiele S., Mantovani G., Barlier A. et al. Eur J Endocrinol. 2016.
V. 175. P. 1-17.
ВЛИЯНИЕ МАЛЫХ ДОЗ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА ИММУННОЛОГИЧЕСКИЙ И СЕКРЕТОРНЫЙ ПРОФИЛЬ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА
Д.Ю. Усупжанова, Т.А. Астрелина, И.В. Кобзева, Ю.Б. Сучкова, В.А. Брунчуков, А.А. Расторгуева, В.А. Никитина, Т.Ф. Маливанова, Е.Е. Ломоносова, А.А. Самойлов
ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им.А.И. Бурназяна, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки, малые дозы радиации, рентгеновское излучение, иммунологический профиль, секреторный профиль.
На протяжении жизни человек неизбежно подвергается воздействию малых доз (от 10 до 100 мГр [1]) ионизирующего излучения (ИИ) [2]. Учитывая неизбежно растущее количество источников малых доз ИИ в современном мире, можно сказать, что точная оценка рисков, связанных с облучением в малых дозах, является важной задачей общественного здравоохранения [2]. Мезенхимальные стромальные клетки (МСК), являющиеся регенеративным резервом взрослого организма, выступают перспективной моделью для изучения эффектов облучения. Благодаря своей способности к самоподдержанию, МСК находятся в организме человека длительный период времени и могут подвергаться нескольким раундам облучения, накапливая в себе произошедшие изменения и передавая их следующим поколениям клеток, поскольку обладают потенциями к дифференциров-ке. В конечном счете, изменения, произошедшие в МСК, отражаются на организме человека в целом [3].
В исследовании иммунологического профиля было показано, что экспрессия поверхностных антигенов МСК слизистой ткани десны человека (CD90, CD73, CD105, CD44) изменяется под влиянием ИИ в дозах 50, 100 и 250 мГр в ранние сроки культивирования после облучения (до 16 дней). Наблюдаемые эффекты указывают на изменения важнейших функциональных характеристик МСК (в частности, степени стволовости и потенций к дифференцировке), а сами поверхностные антигены представляются перспективным критерием оценки последствий воздействия ИИ.
В исследовании секреторного профиля клеток было показано, что малые и средние дозы ИИ приводят к развитию противоположных воспалительных реакций в ранние
сроки культивирования после облучения (48 часов): облучение малыми дозами 50 и 100 мГр приводит к повышению концентрации ИЛ-6 и снижению концентрации ИЛ-8 в кондиционированных средах клеток, в то время как для средних доз 250 и 1000 мГр наблюдается обратная ситуация. В отдаленные сроки культивирования после облучения (43 и 64 день) для всех исследуемых облученных групп МСК показано снижение концентраций ИЛ-6 и ИЛ-8, свидетельствующее об угнетении их функциональной иммуномодулирующей активности.
Обобщая полученные результаты, был сделан вывод о влиянии малых доз рентгеновского излучения на функциональные характеристики МСК, в частности, в отдаленные сроки культивирования после облучения эффекты малых доз сопоставимы с эффектами средних доз ИИ и, в целом, свидетельствуют об угнетении функциональной активности клеток.
Литература:
1. The 2007 Recommendations of the ICRP. ICRP publication 103. 2007. V. 37 (2-4). P. 1-332.
2. Fazel R, Krumholz H, Wang Y. J Vasc Sung. 2009. V. 50 (6). P. 1526-1527.
3. Squillano T, Galano G, De Rosa R. et al. Stem Cells. 2018. V. 36 (8). P. 1146-1153.
МЕЗЕНХИМНЫЕ СТВОЛОВЫЕ/ СТРОМАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ В РАЗЛИЧНЫХ ОЧАГАХ ИНФЕКЦИИ ИЗ ЛЕГКИХ ПАЦИЕНТОВ, БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ
Е.Г. Уфимцева1, Н.И. Еремеева2, 3
1 НИИ биохимии ФИЦ ФТМ, Новосибирск, Россия
2 Институтдезинфектологии ФБУН ФНЦГ
им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора, Москва, Россия
3 УНИИФ - филиал ФГБУ НМИЦ ФПИ Минздрава России, Екатеринбург, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: пациенты с туберкулезом легких, очаги инфекции, мезенхимные стволовые/стромальные клетки, регенерация альвеол.
Туберкулез (ТБ) — заболевание, вызываемое Mycobacterium tuberculosis (Mtb), с образованием широкого спектра патологических очагов в легких пациентов с локальным или обширным ремоделированием альвеолярных тканей, известное как фиброз. Одной из актуальных проблем регенеративной медицины в современной фтизиатрической практике является восстановление структурной и функциональной целостности поврежденных ТБ тканей легких пациентов. Предполагается, при ТБ легких мезенхимные стволовые/стромальные клетки (МСК) способны участвовать и в снижении воспалительной/иммунной реакций, дифференцируясь в фибробла-сты, и в регенерации альвеол путем трансдифференци-ровки в клетки легочного эпителия [1 ]. Однако, участие МСК в этих процессах у пациентов, больных ТБ, до сих пор не было исследовано, делая актуальным изучение их роли в патогенезе ТБ инфекции в легких человека.
Для исследования клеток, инфильтрующих ткани легких пациентов, больных ТБ, нами была разработана методика получения ex vivo культур клеток из операционного материала пациентов из стенок каверн/туберкулем и, параллельно, районов, удаленных от макро-ТБ очагов [2]. На 16-18 часах ex vivo культивирования первичные
культуры, полученные из различных ТБ очагов резекта-тов легких 30 пациентов, состояли из макрофагов и других клеток иммунитета, как правило, с отсутствием фи-бробластов [2, 3].
Развитие методики с ex vivo культивированием клеток до 5-7 дней позволило не только выявить ряд характеристик Mtb [4], но и оценить вероятное присутствие МСК в первичном инфильтрате клеток из резектатов легких пациентов по появлению колоний делящихся клеток с характерной для МСК фибробластоподобной морфологией. В результате, значительное количество МСК выявили только для инфильтрата клеток из стенки туберкулемы пациента 27. Для инфильтратов клеток как из удаленного района легкого этого пациента, так и из различных ТБ очагов из резектатов легких других пациентов обнаружили только единичные МСК или полное их отсутствие вне зависимости от воспалительной и микробицидной активации клеток, зараженности их Mtb и степени фиброза в исследованных тканях. Изучение участия МСК в патогенезе и ремоделировании легких пациентов, больных ТБ, требует продолжения для разработки новых методов и препаратов для эффективного восстановления функций легочного эпителия.
Работа выполнена с использованием оборудования ЦКП микроскопического анализа биологических объектов ФИЦ ИЦиГ СО РАН и ЦКП «Протеомный анализ» ФИЦ ФТМ (соглашение № 075-15-2021-691). Финансирование бюджетное.
Литература:
1. Zhang X., Xie Q., Ye Z. et al. Front. Immunol. 2021. V. 12. Ant.
№ 695278.
2. Ufimtseva E., Enemeeva N., Petnunina E. et al. PLoS ONE. 2018.
V. 13. № 2. Ant. № e0191918.
3. Ufimtseva E.G., Enemeeva N.I., Umpeleva T.V. et al. Int. J. Mol.
Sci. 2021. V. 22. Ant. № 3452.
4. Уфимцева Е.Г., Еремеева Н.И., Кравченко М.А. и др. Пат.
РФ № 2652882. Бюл. № 13. 2018.
ВЛИЯНИЕ СПОСОБА СТИМУЛЯЦИИ СОЗРЕВАНИЯ НА СЕКРЕЦИЮ КУЛЬТИВИРУЕМЫМИ IN VITRO ДЕНДРИТНЫМИ КЛЕТКАМИ IL-12
Ф.А. Фадеев, А.Д. Никанорова
ГАУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: дендритные клетки, стимуляция созревания, цитокины, интерлейкин 12.
Дендритные клетки (ДК) играют ключевую роль в инициации адаптивного иммунного ответа и являются перспективным средством для клеточной терапии, позволяющим стимулировать направленный антиген-специфический иммунный ответ. ДК, культивируемые in vitro, используют для лечения различных заболеваний, в первую очередь, онкологических. Противоопухолевая иммунотерапия направлена, в основном, на активацию Т-звена иммунитета и формирование клонов эф-фекторных Т-хелперов 1 типа (Тх1) и цитотксических Т-лимфоцитов, специфичных к опухолевым клеткам. Продуцируемый ДК интерлейкин-12 (IL-12) во многом определяет направление дифференцировки наивной CD4+ Т-клетки в Тх1, и в целом обусловливает развитие иммунного ответа в сторону активации клеточного звена.
В данной работе была проведена оценка различных способов стимуляции созревания культивируемых in vitro ДК на секрецию ими IL-12. ДК были получены путем обработки моноцитов из донорской крови цитоки-нами (GM-CSF и IL-4). Полученные незрелые ДК подвергали воздействию различными смесями для стимуляции созревания:
• TNFa;
• «коктейль» TNFa + IL-1 + IL-6 + PGE2;
• poly I:C;
• липополисахарид(LPS)
• лизат опухолевых клеток SK-MEL-2.
Экспрессию рецепторов ДК определяли методом проточной цитофлуориметрии. Уровень секреции цитокинов определяли методом ИФА.
При использовании разных смесей отмечены существенные различия в уровне экспрессии ДК поверхностных рецепторов (данные не представлены), хотя, в целом, их иммунофенотип соответствовал зрелым ДК (CD14-CD11c++ HLA-DR++ CD86++ CD40+ CD83+).
Уровень секреции IL-12 при использовании лигандов TLRs (polyI:C, LPS), а также лизата клеток, содержащего DAMPs, достоверно не отличался от контроля (ДК без стимуляции созревания), несмотря на то, что связывание TLRs с лигандами должно активировать сигнальные пути, усиливающие транскрипцию генов, кодирующих IL-12. ДК, подвергшиеся воздействию TNFa, также демонстрировали невысокий уровень секреции IL-12, несмотря на то, что TNFa является активатором nF-кВ сигнального пути, усиливающего экспрессию генов, кодирующих IL-12. Максимальный уровень секреции IL-12 (20,67 ± 12,06 пг / мл) отмечен при использовании «коктейля», что можно объяснить сочетанным действием входящих в его состав компонентов. Примечательно, что, содержащийся в его составе PGE2, по данным литературы, инги-бирует синтез IL-12.
Таким образом, использование «коктейля» из TNFa + IL-1 + IL-6 + PGE2 для стимуляции созревания ДК обеспечивает наиболее высокий уровень секреции IL-12. Полученные с его использованием ДК также имеют максимальный уровень экспрессии рецепторов, обеспечивающих миграцию ДК в лимфоузлы, в частности, CCR7 (данные не представлены). На этом основании можно сделать вывод, что «коктейль» является наиболее подходящим компонентом для стимуляции созревания ДК, получаемых in vitro для использования в противоопухолевой терапии.
ИССЛЕДОВАНИЕ БИОСОВМЕСТИМОСТИ ДЕЦЕЛЛЮЛЯРИЗОВАННЫХ КОЛЛАГЕНОВЫХ СКАФФОЛДОВ С АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
А.Н. Файзулина, А.Д. Кручинина
ФГБОУ ВО Пензенский государственный университет, Пенза, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: коллагеновый скаффолд, децеллюляри-зация, антимикробная активность.
Увеличение количества реконструктивных и пластических операций обуславливает потребность в расширении производства биоматериалов для регенеративной медицины. Наиболее распространенным и доступным является сырье ксеногенного происхождения. Удаление клеток методами ферментативной или химической
