Методы и подходы к иммунологической диагностике Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Медицинская Иммунология 2002, Т. 4, №2 © 2002, СПб РО РААКИ

МЕТОДЫ И ПОДХОДЫ К ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ

РЕГУЛЯЦИЯ РЕСПИРАТОРНОГО ВЗРЫВА НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Авхачева Н.В.1. Миллер А.В.1, Габдулхакова А.Г.2, Сафронова В.Г.2, Шехтман Д.Г.2

Пущинский Государственный Университет,

*Институт биофизики клетки РАН,

Пущине, Россия

Введение. Нейтрофилы являются первой линией защиты организма от различных инфекций. Респираторный взрыв, массированный выброс активных форм кислорода (АФК), происходит в результате функциональной перестройки ней-трофила под действием стимула. Показано, что определенные патологии могут нарушать контроль интенсивности респираторного взрыва сигнальными системами клетки, что может приводить к осложнениям. При патологиях респираторному взрыву предшествует праймирование провоспалитель-ными агентами или метаболическими регуляторами. Механизмы праймирования оксидазной активности нейтрофилов при патологиях остаются невыясненными, роль МАРКиназ в этих процессах не изучена.

Задача работы. Оценить изменения в регуляции респираторного взрыва нейтрофилов при заболеваниях сердечнососудистой системы человека.

Материалы и методы. Работа выполнена на нейгрофи-лах, изолированных из крови здоровых доноров и больных с патологией сердечно-сосудистой системы. Продукцию АФК оценивали по люминол-зависимой хемилюминесценции (ХЛ). Клетки праймир.овали 1 нМ инсулином или 10 нг/мл ЛПС из Е.соН в течение 30 мин при 37°С, и затем активировали хемотаксическим пептидом !Ч-формил-Мет-Лей-Фен (ФМЛФ) в концентрациях 1-50 мкМ.

Основные результаты. Инсулин и ЛПС не изменяли уровень ХЛ нейтрофилов здоровых доноров и больных сердечно-сосудистыми заболеваниями. Среди больных выявлены две группы с разной интенсивностью ответа нейтрофилов на ФМЛФ: у больных в острой фазе заболевания (1 группа) интенсивность ответа была значительно выше интенсивности ответа нейтрофилов больных в стационарной фазе (2 группа) и здоровых. Также в этих группах наблюдались различия в действии ЛПС и инсулина: эффекты праймирующих агентов усиливались в 1 группе. Эффект БВ 203580, ингибитора рЗ8 МАРК, на интенсивность респираторного взрыва зависела от концентрации ФМЛФ во всех исследуемых группах нейтрофилов. При совместном действии БВ 203580 и инсулина наблюдалось усиление ответа на 50 мкМ ФМЛФ, тогда как БВ 203580 значительно подавлял действие ЛПС.

Заключение. В рассмотренных группах нейтрофилов больных с патологией сердечно-сосудистой системы выявлена разная чувствительность к праймирующим агентам. Вклад р38 МАРК в регуляцию респираторного взрыва различен для нейтрофилов больных в острой и стационарной фазе заболевания.

ФАКТОРЫ ФОРМИРОВАНИЯ ВТОРИЧНОЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ НЕКОТОРЫХ СОМАТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ У ДЕТЕЙ

Агафонова Е. В., Софронов В. В., Макарова Т. П., Маланичева Т. Г., Нарыков P. X., Велижинская Т. А., Саломыков Д.В.

Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия

Вторичные иммунодефицитные состояния (ВИД) негативно влияющие на возникновение и развитие наиболее значимой патологии детского возраста, являются важной проблемой современной клинической иммунологии и педиатрии. ВИД выполняют не только триггерную роль, но и функцию поддерживающего фактора патогенеза. Изучение факторов и механизмов формирования ВИД, маркируемых хроническими рецидивирующими заболеваниями и аллергопатологией, представляет практический и теоретический интерес в плане оптимизации иммунокорригирующей терапии. Перспективным на этом пути представляется изучение параметров эндоэкологическо-го гомеостаза. Изучение показателей иммунологической реактивности включало определение содержания иммуноцитов, дифференцированных с помощью МКАТ (CD3, CD4, CD8, CD25, CD95, HLA-DR, CD 16), показатели гуморального иммунитета (системного и местного), а также фагоцитарной активности (нейтрофилов, моноцитов). В группы обследованных включались дети с атопическим (БА, АД) и инфекционным синдромом (хронический пиелонефрит, тубулоинтерстициальный нефрит, хронические эрозивные гастриты и язвенная болезнь, ассоциированные с Helicobacter pylori). Показатели эндоэколо-гического гомеостаза включали изучение МЭ - гомеостаза, уровень эндотоксинемии (LAL тест), напряженность антиэн-дотоксинового иммунитета (АТ к Re - гликолипиду, ЛПС Е. Coli, Рг. Mirabilis, Вас. Fragilis). На основании методов математического моделирования предложен подход к оценке иммунопатологических влияний факторов, позволяющий: составлять модели, выражаемые математическими формулами, оценивать воздействия в диапазоне изучаемых концентраций, прогнозировать иммунодепрессию при теоретичеком нарастании концентраций. Показаны типы воздействий: изолированные - для токсических МЭ - стронция, свинца, параметров эндотоксине-мии и сочетанные для стронция, свинца и хрома. Для эссенци-альных МЭ выявлено иммунопатологическое воздействие как дефицитов (наиболее значимое для цинка, железа и меди ) так и повышенного их содержания в сыворотке крови (для цинка и магния). Отмечено, что наиболее подверженной иммунодеп-рессивным воздействиям является субгюпуляция CD4 лимфоцитов и параметры, характеризующие резервный потенциал фагоцитов при инфекционном синдроме. Иммунопатологические воздействия эндотоксина связано с маркерами атопического типа реагирования (CD8, IgE). Для дефицитов отмечены: потребления на реализацию иммунологического ответа, экскреторные, формируемые при нарушении парциальных почечных функций. При атопическом синдроме выявлено значимое воз-

действие нарушений МЭ - гомеостаза на показатели, отражающие дисбаланс между параметрами местного иммунитета -

А и ^Е в секретах, углубляющееся при нарастании тяжести аллергического воспаления.

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СТРЕПТОКОККОВОГО КАРДИТА

Андреева Д.В., Брико Н.И., Дмитриева Н.Ф., Карманова И.В.

Ивановская государственная медицинская академия Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова, Россия

В течение года проведено дискрентно - динамическое обследование 37 пациентов острой ревматической лихорадкой с различной степенью тяжести кардита. У всех больных кроме общепринятого обследования проведено определение А-полисахарида в циркулирующих иммунных комплексах методом ИФА. В результате проведенных исследований содержание А-ПС в ЦИК у пациентов с признаками формирования и прогрессирования порока сердца - 0,05) от значений этого показателя у больных ^практически не отличалось (Р преимущественным поражением миокарда и было достоверно выше, чем в контроле (Р<0,05) между <

0,01). Отсутствовала также кореляционная зависимость (г=0; Р < эхокардиографическими признаками поражения клапанов сердца при кардите и содержанием А-ПС в ЦИК. Отсутствие связи между клиническими проявлениями острой ревматической лихорадки и значениями данного показателя позволяет предположить, что А-ПС в составе ЦИК отражает лишь инфицированность организма больного - гемолитическим стрептококком группы А.р Таким образом, данный метод позволяет подтвердить стрептококковую этиологию кардита различной степени

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ДВУХ МЕТОДОВ Ни-ТИПИРОВАНИЯ

Базарный В.В.. Соколова З.И., Крестьянинова Л.Р., Минина В.М., Бердюгина О.В., Мазеин Д.А., Беспалова В.В.

Свердловская областная клиническая больница № 1, Свердловская областная станция переливания крови, Екатеринбург, Россия

Одним из важнейших условий лабораторного обеспечения трансплантации органов и тканей является НЬА-тигшро-вание. В настоящее время для его реализации используется два метода: серологический и молекулярно-генетический. До последнего времени широкое применение имел серологический метод, который имеет ряд недостатков (качество отдельных партий антисывороток и комплемента, качество и количество выделяемых лимфоцитов пациента, примесь грануло-цитов в пробе). Существенным ограничением данного метода является отсутствие качественных сывороток для типирова-ния антигенов II класса (ОЯ, 0(2). Указанных недостатков лишен молекулярно-генетический метод НЬА-типирования на основе возможностей полимеразной цепной реакции. Однако он требует организации специализированной лаборатории и отличается более высокой стоимостью каждого исследования.

Цель данной работы заключалась в сравнительной оценке серологического и молекулярно-генетического методов типирования гистосовместимости. Лимфоцитотоксический тест выполнен по классическому протоколу, принятому в

отечественной практике. Молекулярно-генетический метод выполнен с использованием аппаратуры и праймеров фирмы Protrans (Германия). Нами проведено типирование 32 пациентов и потенциальных доноров. При сравнении результатов двух способов совпадение по антигенам гистосовместимости I класса (А, В) было выявлено в 75 % случаев, несовпадение по одному из антигенов - в 25%. При сравнении результатов типирования антигенов II класса совпадение обнаружилось в 6% случаев, частичное совпадение (по одному антигену) - в 67%, несовпадение результатов - 27%.

Полученные результаты позволяют сделать заключение

о возможности использования лимфоцитотоксического теста с антисыворотками отечественного производства в HLA -типировании I класса при условии, что в “сомнительных” случаях и при выявлении гомозигот будет проведена верификация полученного результата молекулярно-генетическим методом. Типирование DR - антигенов серологическим способом представляется нецелесообразным вследствие его низкой точности.

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ, СТРАДАЮЩИХ П0ЛИП03НЫМ РИНОСИНУИТОМ

Безрукова Е. В.. Гайковая Л.Б., Митрофанов В. В., Крапивка Н.А

ГОУВПО Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И. И. Мечникова М3 РФ, Россия

В настоящее время большое внимание уделяется изучению иммунного статуса у больных, страдающих полипоз-ным риносинуитом. Патогенетические механизмы возникновения и развития хронических воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей определяются не только вирулентностью микроорганизмов и токсичностью пенетрирую-щих веществ, но и общей реактивностью организма.

Данное исследование проведено с целью оценить общую ответную реакцию иммунной системы и местного иммунитета у больных с полипозным риносинуитом.

Обследовано 25 пациентов с полипозным риносинуитом. Давность заболевания составила от 5 до 15 лет. Гематологические показатели больных находились в пределах, соответствующих физиологической норме, что характерно для хронических воспалительных заболеваний слизистых оболочек ЛОР-орга-нов. Контрольную группу составили 24 практически здоровых, не предъявлявших субъективных жалоб, и у которых при объективном обследовании не обнаружены признаки острой или хронической соматической и ЛОР - патологии.

Было проведено иммунологическое исследование крови с определением количества субпопуляций лимфоцитов (CD3*, CD4+, CD8+, CD16\ CD19+), реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с фитогемагтлютинином (ФГА) и концентрации иммуноглобулинов А, М, G в сыворотке и циркулирующих иммунных комплексов. Неспецифическая резистентность оценивалась по фагоцитарной активности нейтрофилов с подсчетом фагоцитарного индекса. Методом ИФА определяли концентрацию интерлейкина 4 (1L-4) и интерферона - (IFN-P) в промывной жидкости верхнечелюстных пазух и сыворотке крови.

При исследовании у больных с полипозным риносинуитом в крови отмечается снижение количества Т-лимфоцитов (CD3\ CD4+), увеличение субпопуляции CD8+ с достоверным снижением соотношения CD4/CD8, увеличение индекса миграции и повышением концентрации иммуноглобулина А в сыворотке по сравнению с контрольной группой. Уровень IL-4 в сыворотке крови и содержимом верхнечелюст-

ной пазухи составил 15,0±1,02 пг/мл и 0,2±0,001 пг/мл соответственно. Уровень 1ИЧ-у в сыворотке крови составил 21,0± 1,02 пг/мл в содержимом пазухи - 71,4±3,8 пг/мл. Фагоцитарная активность нейтрофилов у пациентов с полипоз-ным риносинуитом снижена по сравнению с референтными величинами.

Проведенное исследование подтверждает, что наибольшие изменения наблюдаются на уровне местного иммунитета слизистой оболочки. Однако, при полипозном риносину-ите отмечаются изменения в системном иммунитете, что проявляется вторичным иммунодефицитным состоянием инфекционно-аллергического генеза на фоне усиления компенсаторной реактивности организма.

ИЗМЕНЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ И СПЕКТРА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ

Беловолова Р.А.. Беловолова Е.В., Терентьев В.П.

Государственный медицинский университет, Ростов-на-Дону, Россия.

Нарушения иммунного статуса у больных гипертонической болезнью (ГБ) неоднозначны и их роль в патогенезе ГБ и/или сопутствующей патологии окончательно не определена. При обследовании 83 больных ГБ определяли: процент фагоцитирующих нейтрофилов, их метаболическую активность в морфологическом тесте восстановления тетра-золия нитросинего, содержание лизосомально-катионных белков - как показатели функциональной активности нейтрофилов; уровни сывороточных иммуноглобулинов (^), циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) - как показатели реакции на антигенное воздействие; уровни ЛИИ, ЦИК и СМ (средне-молекулярные пептиды) - как показатели эндогенной интоксикации.

Полученные результаты показали, что у больных ГБ снижался процент фагоцитирующих нейтрофилов (40,0+2,3%), значительно увеличивалась их метаболическая активность, что проявлялось повышением процента диформозанположи-тельных клеток преимущественно в спонтанном тесте (29,2±1,6%) и сопровождалось снижением коэффициента стимуляции (26,4±3,1 %), свидетельствующем об уменьшении резервного потенциала окислительно-восстановительно-го метаболизма нейтрофилов. В содержании ^ сыворотки крови отмечалась тенденция к повышению уровней 1§М и ^А, увеличивалось содержание ЦИК (91,4 ед.).

Развитие гипертрофии левого желудочка (ГЛЖ) у больных ГБ сопровождалось снижением процента фагоцитов (33,3±1,8%) на фоне некоторого восстановления их метаболической активности (процент стимуляции в НСТ-тесте -48,8±3,4%); изменения сывороточных ^ оставались несущественными, более значительно увеличивались уровни ЦИК (138,5±4,3 ед.) и СМ. Дифференцированный анализ изменений параметров иммунного статуса в зависимости от вида ремоделирования левого желудочка выявил более резкие изменения при эксцентрическом его варианте, что проявлялось выраженным увеличением уровней ЦИК (168,8±4,5 ед.), СМ (0,34±0,05 ед.), повышением ^М (1,25±0,03 г/л), восстановлением резервного метаболического потенциала нейтрофилов (коэффициентстимуляции в НСТ-тесте 76,1 ±3,7%). При прогрессирующем увеличении массы миокарда левого желудочка снижался процент фагоцитоза (до 20,3±2,2%), снижалась метаболическая активность нейтрофилов; спектр сывороточных 1§ изменялся в сторону увеличения 1§А (1,8±0,1 г/л), уве-

личивалось содержание ЦИК и СМ. Содержание лизосомаль-но - катионных белков практически не менялось.

Таким образом, нарушения параметров иммунного статуса сопровождают развитие ГЛЖ у больных ГБ и проявляются изменениями нейтрофильного звена, спектра сывороточных

уровней ЦИК и СМ. Выраженность этих изменений сочетается с видом ремоделирования ЛЖ и степенью увеличения его массы. Более существенно при эксцентрическом варианте гипертрофии ЛЖ изменяются параметры, характеризующие функциональную активность нейтрофилов.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТОВ ПРИ ЭНДОПРОТЕЗИРОВАНИИ ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА

Бердюгина О.В.. Петрович Н.С., Базарный В.В.

Уральская государственная медицинская академия, Уральский НИИ травматологии и ортопедии М3 РФ, Екатеринбург, Россия

Одним из осложнений при эндопротезировании крупных суставов является развитие конфликта между имплантатом и организмом. Снижение их частоты может быть достигнуто как совершенствованием хирургической техники, так и тщательным контролем за состоянием пациента на всех этапах лечения на основе использования доступных и информативных иммунологических тестов. Поэтому вопрос об оценке клинико-диагностического значения иммунологических показателей при эндопротезировании тазобедренного сустава составил цель данной работы.

Обследовано 75 пациентов после первичного тотального эндопротезирования тазобедренного сустава, которые на основании ретроспективного клинико-рентгенологического анализа все пациенты были распределены на две группы: с не осложненным течением послеоперационного периода и благоприятным исходом лечения, и с развитием нестабильности эндопротеза.

Комплекс лабораторных тестов включал стандартные унифицированные параметры (число лейкоцитов, лейкоцитарная формула, количество Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарную активность нейтрофилов, уровень лизосомальных катионных белков, содержание сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, в, Е, 1Ь-1), а также концентрацию С-реак-тивного белка и альбумина. Лабораторные исследования проводили до операции, через 10 суток, 1,3,6, 12 месяцев после ее проведения. Полученные данные обрабатывали с использованием методов вариационной статистики, используя статистическую программу 81аПяПеа.

У пациентов при благоприятном исходе эндопротезирования в послеоперационном периоде отмечена стереотипная реакция - возрастание числа нейтрофилов и увеличение концентрации острофазовых реактантов — 1Ь-1 и СРБ с нормализацией этих параметров в течение 1 месяца. Через 6 месяцев, когда начиналось активное функционирование искусственного сустава, отмечалось нарушение соотношения лимфоцитов с увеличением числа Т-клеток и возрастание уровня катионных белков в нейтрофилах, как отражение повышенной реактивности этих клеток при появлении нагрузки в суставе. Через 1 год наблюдения у пациентов отмечалось несущественное снижение уровня иммуноглобулинов (в пределах нормы) и активация поглотительной способности ней-трофильных фагоцитов. Последнее, можно расценивать, как показатель хронического воспалительного процесса вокруг имплантата.

Изменение иммунологических параметров у пациентов с развившейся нестабильностью искусственного тазобедренного сустава было несколько иным. Уже до операции наблюдалась дисиммуноглобулинемия (снижение уровня и повышение концентрации ^Е). В послеоперационном периоде лейкоцитарная реакция крови была несколько более выраженной - число лейкоцитов сохранялось повышенным в сравнении с доопера-ционным уровнем до 3 месяцев, в то время как соотношение Т/В лимфоциты существенно повышалось в раннем послеоперационном периоде и не отличалось от дооперационного к 6 месяцу. Менее выраженными были острофазовые реакции (1Ь-1, СРБ/ альбумин) и реакция гуморального иммунитета (о чем судили по концентрации сывороточных иммуноглобулинов). Исключение составило лишь сохраняющееся повышение уровня 1§Е. Через 6 месяцев после операции, когда вероятно активно развивались тканевые процессы, ведущие к нестабильности эндопротеза, отмечалось отсутствие Т-клеточной реакции и активации нейтрофилов, повышение уровня иммуноглобулина Е и 1Ь-1.

Таким образом, реакция организма на имплантацию эндопротеза тазобедренного сустава включает две фазы: реакцию на оперативное вмешательство (послеоперационный период - до 1 - 3 месяцев) и реакцию на начало активного функционирования искусственного сустава ( с шестого месяца после операции), которые находят свое отражение в иммунологических параметрах. Развитие осложнений при эндопротезировании тазобедренного сустава сопровождается определенными сдвигами иммунологических показателей. Прогностическими критериями развития нестабильности имплантата являются: до операции - снижение уровня и повышение концентрации ^Е, в отдаленном периоде - отсутствие характерной Т - лимфоцитарной реакции, повышение уровня 1Ь-1 и содержания катионных белков нейтрофилов.

АНАЛИЗ СПОНТАННОЙ ФОРМЫ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА И АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ПОКАЗАТЕЛЯМ ИММУНИТЕТА У ЖИТЕЛЕЙ ГОРОДА ЧЕЛЯБИНСКА

Биргер О.В.. Зурочка А.В., Бастрон А.С.

Научно-исследовательский институт иммунологии Челябинской государственной медицинской академии, Челябинск, Россия

Введение. Одной из важнейших проблем современной аллергологии и иммунологии является выявление четких лабораторных критериев формирования различных вариантов иммунопатологии (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 1999; Караулов А.В.,1999; Ильина Н.И. с соавторами, 2000). В последние годы появились исследования, направленные на выявление наиболее общих закономерностей лабораторных параметров у больных вторичными иммунодефицитными состояниями. Для спонтанной формы вторичного иммунодефицита, при которой характерно отсутствие явной причины, вызвавшей нарушения в иммунной системе, и клинические проявления в виде хронических ин-фекционно - воспалительных заболеваний различных локализаций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, эти критерии остаются наименее изученными (Хаитов Р. М., 2000; Ильина Н.И. с соавторами, 2000), в тоже время, она является самой распространенной формой вторичного иммунодефицита. В доступной нам литературе, практически отсутствует обобщенные сведения по анализу состояния иммунной системы у больных со спонтанной формой ВтИД. Еще одной из малоизученных проблем иммунологии является объективная оценка лабораторных параметров иммунной системы у больных с сочетанными и комбинированными поражениями иммунной системы. Именно

поиск путей решения этих вопросов и составил цель настоящего исследования.

Целью и задачами работы явилось углубленное изучение лабораторных показателей иммунной системы у больных со спонтанной формой вторичного иммунодефицита и при аллергических заболеваниях в комбинации с хроническим инфекционным синдромом иммунопатологии.

Материалы и методы. Основную группу составили 942 больных (687 человек с хроническими инфекционно-воспалительными заболеваниями, вызванными условно-патогенными микроорганизмами на фоне спонтанной формы вторичного иммунодефицита, 200 больных различными нозологическими формами аллергических заболеваний, 55 больных, имеющих помимо аллергического заболевания хронические инфекционно-воспалительные поражения различных органов и систем, вызванные условно-патогенными микроорганизмами) (ХИС). Контрольная группа включала 101 условно-здоровых лиц, проживающих и работающих на территории г. Челябинска. Было изучено 43 параметра иммунной системы, включая определение лейкоцитарной формулы, содержания различных субпопуляций лимфоцитов (С03,С04,С08,С010,СО ИЬ, С016,С020,С025, С034, С056, С095, НЬА-ОК), функциональной активности нейтрофилов, иммуноглобулинов классов А, М, в, уровня компонентов комплемента (СН50, С1, С2, СЗ, С4, С5).

Основные результаты. Проведенное нами исследование показало, что изменения в иммунной системе при комбинации и сочетании различных типов иммунопатологических процессов, таких как: одновременное присутствие у одного и того же больного аллергического заболевания и ХИС, наличие нескольких хронических очагов инфекций, вызванных условно-патогенными вирусами и бактериями, ведет к формированию своеобразных изменений показателей иммунной системы. Эти изменения сопровождаются не только достоверными различиями при сравнении средних значений параметров иммунного статуса, но и характером корреляционных взаимосвязей между иммунологическими показателями. При этом появляются новые зависимости между иммунологическими параметрами, нехарактерные: ни для общей совокупности ХИВЗ, вызванных условно - патогенными инфекционными агентами, ни для изолированных по характеру инфекционного агента поражений, ни для больных только аллергическими заболеваниями. На наш взгляд, это может быть обусловлено как различными патогенетическими механизмами комбинированных и сочетанных воздействий, так и разными вариантами развития ответных реакций иммунной системы, возможно уже имеющей дефект генетического характера или спровоцированного не выявленной соматической патологией.

Заключение. Таким образом, комбинированные и сочетанные формы иммунопатологии требуют повышенного внимания врачей аллергологов иммунологов и более детального изучения причин, вызвавших эти состояния.

СОСТОЯНИЕ ГУМОРАЛЬНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА В ОТДАЛЕННЫЕ СРОКИ ПОСЛЕ ЭНДОПРОТЕЗИРОВАНИЯ ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА

Божкова С.А.. Афиногенов Г.Е., Машков В.М., Лукашева Т.В.

Государственное учреждение науки РосНИИ травматологии и ортопедии им. Р.Р.Вредена, Санкт-Петербург, Россия

Одним из тяжелых поздних осложнений операции эндопротезирования тазобедренного сустава является асептическое

расшатывание компонентов эндопротеза (АРКЭ). Частота его возникновения по данным литературы колеблется от 5 до 60% при сроках наблюдения свыше 5 лет (Корнилов Н.В. и соавт., 1997). В настоящее время к основным факторам, влияющим на развитие АРКЭ, относят особенности конструкции его компонентов и методики цементирования, свойства костного цемента, металлоз, асептическое воспаление, технические ошибки хирурга (Корнилов Н.В. и соавт., 1997; Barrack, 2000;). Однако, эндопротез, как и любой имплантат, необходимо рассматривать не только с позиции механики, но и биологии. Установленный компонент эндопротеза является инородным телом по отношению к организму и вызывает его иммунный ответ, который направлен, в конечном итоге, на отторжение имплантата. Конструкция эндопротеза, замещающая сустав, находится под постоянным действием иммунной системы организма, что со временем может привести к патологическому остеолизу костной ткани вокруг имплантата и необходимости проведения ревизионного эндопротезирования (Неверов В.А., 1999). Цель данной работы - оценить состояние гуморального звена иммунитета и уровень циркулирующих иммунокомплексов (ЦИК) у больных в отдаленные сроки после эндопротезирования тазобедренного сустава.

Обследовано 3 группы больных: I группа - 10 пациентов через 2-4 года после эндопротезирования тазобедренного сустава с клинико-рентгенологическими признаками асептического расшатывания компонентов эндопротеза, II группа-12 пациентов через 2-3 года после аналогичной операции со стабильными эндопротезами, III группа - 22 больных диспластическими коксаргрозами III ст. Всем больным определяли в сыворотке крови Ig классов А, М, G турбидимет-рическим методом с использованием тест-систем “Human” (Германия) и ЦИК с использованием тест-систем “Вламарк” (Россия). Статистический анализ проводили в программе Statistica 5, с использованием непараметрических методов: Wilcoxon matched pairs test и корреляции Sperman.

Проведенное исследование показало, что содержание IgA было повышено в 1,6, 2,3, 1,6 раз соответственно в I, II и III группах. Кроме того, уровни IgM и IgG в I группе также превышали норму и были достоверно выше аналогичных показателей во II и III группах. Содержание ЦИК у пациентов всех исследуемых групп находилось в пределах нормы. Однако была выявлена тенденция к повышению ЦИК у больных с АРКЭ по сравнению с группой пациентов со стабильными эндопротезами и больными коксартрозами.

Полученные результаты демонстрируют наличие выраженных изменений гуморального звена иммунитета больных коксартрозом III ст. и у пациентов в отдаленные сроки после эндопротезирования тазобедренного сустава, особенно при развитии асептического расшатывания компонентов эндопротеза. Таким образом, требуется дальнейшее и более углубленное изучение реакции иммунной системы на установку компонентов эндопротеза, как в раннем послеоперационном периоде, так и в отдаленные сроки после операции.

РАННИЙ И ОТСРОЧЕННЫЙ МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ ОТВЕТ ЛИМФОЦИТОВ НА ИНКУБАЦИЮ IN VITRO

Булыги» Г.В., Сараи П.В.

Красноярская государственная медицинская академия, Красноярск, Россия

Введение. Любая биологическая система характеризуется периодичностью протекающих в ней процессов. Наиболее распространенными в природе и достаточно хорошо изученными в клетках являются околочасовые ритмы и входящие в них 20-

минутные (Бродский В.Я., 1988). Однако, известно, что ранние эффекты гормонов проявляются уже через 10 минут контакта с клеткой - в момент акматической фазы 20-минутного цикла. (Бродский В.Я., 2000; Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П., 2000). Таким образом, для оценки раннего метаболического ответа клетки желательно использовать воздействия в течение 10 минут, а для характеристики отсроченного ответа - 60 минут. Изменение активности дегидрогеназ лимфоцитов отражает как изменения в них количества субстратов, так и изменение числа молекул фермента. Сопоставление метаболических эффектов первой и последующих реакций лимфоцитов на внешние воздействия может дать информацию о состоянии биохимических процессов и их генетического аппарата.

Цель исследования: анализ ранних и поздних метаболических изменений в лимфоцитах здоровых доноров при инкубации в среде, не содержащей субстратов.

Материалы и методы. Обследованы 25 клинически здоровых лиц. Лимфоциты выделяли из периферической крови с антикоагулянтом (3% раствор ЭДТА) по A.Boyum (1974) на градиенте плотности фиколл-верографина (1,077 г/смЗ). Суспензию выделенных лимфоцитов инкубировали в физрастворе (1,0 мл) при 37°С в течение 10 и 60 минут. Биолюминес-центным методом с бактериальной люциферазой (Савченко А.А., Сунцова Л.Н., 1989) определяли активность оксиредук-таз в лимфоцитах: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ); глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (ГЗФДГ), лакатдегидроге-назы (ЛДГ), НАД- и НАДФ-зависимых малатдегидрогеназ (НАДМДГ и НАДФМДГ), глутаматдегидрогеназ (НАДГДГ, НАДФГДГ), изоцитратдегидрогеназ (НАДИЦДГ, НАД-ФИЦДГ). Достоверность различий результатов оценивали с помощью пакета статистических программ “Statistica for Windows'6.0” и использованием критерия Вилкоксона.

Основные результаты. Инкубация лимфоцитов без поступления субстратов извне уже через 10 минут приводит к снижению активности Г6ФДГ, подающей субстраты на пен-тозо-фосфатный путь; это снижение сохраняется и через 1 час. Активность малатдегидрогеназ в цикле Кребса также снижается, что свидетельствует как об уменьшении образования АТФ, так и роли “малик-фермента” в продукции пирувата для гликолиза. Активность НАДГДГ через 10 минут инкубации ниже, а через час инкубации - выше по сравнению с исходной. Механизмами, компенсирующими уменьшение объема субстратов для гликолиза и цикла Кребса, можно считать и повышение активности ГЗФДГ, характеризующей интенсивность отттока субстратов с обмена липидов на гликолиз, а также повышение НАДФГДГ, которая наряду с НАДГДГ отражает интенсивность поступления в цикл Кребса продуктов аминокислотного обмена. Через 10 минут инкубации активность НАДФИЦДГ не изменяется, но повышается активность НАДИЦДГ, что свидетельствует об усилении поступления изоцитрата в цикл Кребса из цитозоля. Спустя 60 минут инкубации показатели активности обоих ферментов снижаются, вероятно, в виду уменьшения внутримитохондриальных и цитозольных резервов изоцитрата. Нами не обнаружены изменения активности ЛДГ, что свидетельствует об относительной стабильности процесса использования лактата в гликолизе при описываемых условиях инкубации.

Заключение. Отсутствие поступления субстратов извне на фоне адаптационной реакции лимфоцитов, развивающейся в ответ на механические воздействия при выделении их из крови и перемещение из физиологически оптимальной среды в изотонический раствор NaCl, приводит к изменениям метаболических характеристик клеток, зависящим от сроков инкубации. Большинство из этих изменений связаны с уменьшением количества внутриклеточных субстратов и перерасп-

ределением их потоков по метаболическим путям клетки. В то же время показатели гликолиза лимфоцитов здоровых индивидуумов остаются стабильными, что, по-видимому, обусловлено "умеренной" силой раздражения для клеток. Необходимость интенсификации этого филогенетически наиболее древнего пути обмена возникает только при достаточно сильных воздействиях на клетку, способных включать резервные механизмы адаптации (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983). Полученные данные позволяют оценить неизвестные до настоящего времени механизмы раннего и отсроченного метаболического ответа лимфоцитов, развивающегося в результате приспособительной реакции на комплекс неспецифических воздействий.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ ВАРИКОЗНОЙ БОЛЕЗНИ ВЕН НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ

Вахитов М.Ш., Зуева Е.Е., Миронова Л.С*, Тотолян А.А.

Государственный Медицинский Университет им.акад.И.П.Павлова,

* Государственный Университет,

Санкт-Петербург, Россия

Разнообразие форм осложнений хронической венозной недостаточности, обусловленной варикозной болезнью, при идентичности флебогемодинамических нарушений вызывает необходимость поиска дополнительных патофизиологических факторов их патогенеза. Исследования природы осложнений варикозной болезни показали участие иммунных механизмов в развитии осложненных форм заболевания.

С целью выявления особенностей иммунной системы пациентов, страдающих варикозной болезнью с различной степенью хронической венозной недостаточности, осуществлена оценка иммунологического профиля у 34 пациентов. Эту группу составили больные (п=10) с варикозной трансформацией поверхностных вен без видимых осложнений и 24 больных ХВН, осложненной липодерматоскле-розом. Иммунологическая диагностика включала определение уровня фагоцитирующей активности нейтрофилов, функциональной активности лейкоцитов, определение популяций и субпопуляций лимфоцитов в периферической крови (CD3+, CD4+, CD8*, CD22+, CD56\ CD25+, HLA-DR+), а также определение активности комплемента, содержание ЦИК и иммуноглобулинов классов А, М, G. Динамическое иммунологическое обследование включало определение субпопуляций лимфоцитов до и после ортостатической нагрузки в области поражения. Проведен корреляционный анализ данных иммунограмм в сопоставлении с клиническими показателями.

Выявлена корреляционная зависимость между увеличением количества CD25+лимфоцитов и массой тела пациентов, а также между увеличением CD8* лимфоцитов и содержанием моноцитов в периферической крови. С другой стороны, наблюдалась обратная корреляционная зависимость между увеличением содержания CD22t лимфоцитов и продолжительностью варикозной болезни, а также между увеличением числа CD8* лимфоцитов и лейкоцитозом.

Сопоставление клинических показателей с данными иммунологического исследования до и после ортостатической нагрузки больных варикозной болезнью с ХВН, осложненной липодерматосклерозом выявило несколько характерных

особенностей этой формы осложнения ХВН. В частности, были выявлены следующие закономерности:

- при высоком содержании Т-лимфоцитов (CD3+) до ортостатической нагрузки отмечается увеличение Т-лимфоци-тов хелперов (CD4+) после ортостатической нагрузке;

- у пациентов с исходно высоким уровнем содержания CD25* лимфоцитов, после ортостатической нагрузки значительно увеличивается содержание В-лимфоцитов;

- при высоком содержании HLA-Dr+ лимфоцитов до нагрузки содержание CD4* лимфоцитов увеличивается после нагрузки

- у больных с высоким иммунорегуляторным индексом после нагрузки возрастает содержание Т-лимфоцитов, в том числе CD4+ лимфоцитов

- высокое содержание натуральных киллеров до ортостатической нагрузки приводит к возрастанию иммунорегу-ляторного индекса после нагрузки.

Проведенные исследования подтверждают активную роль иммунных процессов в патогенезе осложненных форм варикозной болезни. Выявлены конкретные клинические и лабораторные показатели, необходимые для определения тактики лечения (оперативного или консервативного) каждого конкретного больного. Современный патогенетический подход к ведению больных с хронической венозной недостаточностью нижних конечностей должен предусматривать максимально возможную ликвидацию очагов хронической стимуляции иммунной системы, в том числе и с помощью механического удаления, т.е. оперативным путем.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БАЗ ДАННЫХ В ЛАБОРАТОРИИ КЛИНИЧЕСКОЙ ИММУНОЛОГИИ

Гайковая Л.Б., Гранстрем К.О.. Прялухин А.Е.

ГОУВПО Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И. И. Мечникова М3 РФ, Россия

Цель проводимой работы - разработка и внедрение баз данных (БД) в практику работы лаборатории клинической иммунологии многопрофильной больницы (1230 коек). При их создании использована система управления БД Microsoft Access 97 - SR2b. Одна из баз предназначена для обработки анализов, проводимых иммуноферментным методом, другая

- для анализов, направленных на определение показателей иммунного статуса.

Разработанные БД позволяют вводить, корректировать, хранить большое число лабораторных показателей, создавать резервные копии, а также осуществлять автоматический расчет показателей различных лабораторных тестов, являющихся функциями или производными от полученных в лаборатории данных, и проводить пересчет в нужные единицы измерения. Использование созданных БД помогает выводить ответы на стандартный бланк, печатать отчеты по распределению клинических и лабораторных диагнозов, учитывать частоту, повторение и динамику отдельных иммунологических тестов, представлять данные по соотношению платных и бесплатных анализов.

Каждая из созданных БД состоит из двух файлов. Один из них содержит таблицы с данными, другой - представляет собой надстройку, содержащую запросы, формы, отчеты, макросы, которые обеспечивают удобный интерфейс и выполняют все необходимые действия и расчеты

Таблицы содержат описания полей и маски ввода, которые снижают вероятность ошибки при вводе, а в последующем при печати ответов и проведении статистической обра-

ботки. По необходимому условию запросы в БД позволяют производить все необходимые расчеты и сортировку данных.

Наш опыт использования БД позволяет говорить о несомненной целесообразности их широкого применения. Главные достоинства применения БД состоят в следующем.

1 .Снижается количество ошибок при вводе данных лабораторных тестов и печати ответов. 2. Выполнение необходимых математических расчетов и автоматизированный поиск данных обследуемого освобождает время сотруднику лаборатории. 3. Пересчет всех показателей в абсолютные величины делает ответ более наглядным для лечащего врача. 4. База данных обеспечивает надежное хранение лабораторных показателей большого числа пациентов в легкодоступной и удобочитаемой форме. 5. Автоматически и быстро могут быть созданы отчеты для оценки работы лаборатории по разным параметрам.

Возможность быстрой статистической обработки большого массива данных накопленных в лаборатории за любой период времени позволяет выявлять иммунологические сдвиги у пациентов при разных видах патологии, оценивать их достоверность, использовать результаты анализов при дифференциальной диагностике и оценки динамики изменений на фоне проводимого клиницистами лечения.

ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА В КЛИНИКЕ ОСТРОЙ ТРАВМЫ

Герасимов А.А.

Городская клиническая больница №1, Чита, Россия

В последние десятилетия в связи с развитием иммунологии появились предпосылки для поиска новых путей в профилактике и лечении гнойно-септических осложнений. Ведущим направлением данной работы является изучение диагностической значимости различных показателей системы резистентности организма и возможное их использования для прогнозирования осложнений гнойно-воспалительного характера.

Целью исследования явилось изучение изменений защитных функций организма при травмах различной этиологии и их инфекционных осложнениях.

Исследование проведено у 72 пострадавших с тяжелой механической травмой. В зависимости от клинического течения они были разделены на две группы: с неосложненным течением травмы (31 человек), у которых раны зажили первичным натяжением; и с осложненным течением (41 человек), когда в ближайший период после повреждения возникали различные осложнения гнойно-воспалительного характера. Лечение больных состояло из обычного комплекса реанимационных, хирургических и терапевтических мероприятий, зависящих от вида повреждения. Было изучено содержание следующих показателей: число лейкоцитов (камерный метод), число лимфоцитов в мазке крови; содержание CD3\ CD4*, CD8+, CD19+, CD 16* (иммунофлюоресцентный метод по E.Reinherzl.), концентрация иммуноглобулинов G,A,M по Laurel 1., содержание продуктов циклооксигеназного пути обмена арахидоновой кислоты: простагландины - ПГЕ2, IIT'D,, nrF,a. (высокоэффективная жидкостная хроматография), содержание продуктов липоксигеназного пути обмена арахидоновой кислоты: лейкотриены - ЛТС4, J1TB4 (высокоэффективная жидкостная хроматография).

При неосложненном течении посттравматического периода в 1-3 сутки отмечается уменьшение общего числа лимфоцитов, содержание CD3+ и CD4\ На 5-7 сутки эти показатели практически восстанавливаются и в дальнейшем нахо-

дятся в пределах нормы. Однако это сопровождается снижением числа СО 19\ Содержание иммуноглобулинов всех классов наиболее уменьшается на 4-7 сутки после травмы. При осложненном течении посттравматического периода в первые сутки отмечается снижение количества СЭ19+, уменьшение концентрации ^ А. К 11-12 суткам практически все показатели имеют тенденцию к восстановлению. Содержание иммуноглобулинов всех классов вначале (1-5 сутки) снижается, а затем концентрация и ^А увеличивается и превышает на десятые сутки значения таковых у здоровых лиц. Было отмечено, что в первые сутки после тяжелой травмы снижение показателей Т-системы иммунитета у пострадавших с неосложненным течением посттравматического периода более выражено, чем при осложненном течении клинического процесса.

При изучении содержания в крови больных липоксиге-назных и циклооксигеназных метаболитов АК было выявлено достоверное повышение уровня большинства из них в разгар заболевания, причем степень увеличения напрямую зависит от интенсивности развития гнойно-воспалительно-го осложнения.

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ И ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ЗОНЫ У ДЕТЕЙ

Гордеева Е.Н., Краснова Е.Е., Чемоданов В.В.

Ивановская Государственная Медицинская Академия.

Хронические воспалительные заболевания гастродуоденальной зоны широко распространены среди детского населения. В их возникновении и развитии особое значение имеют изменения иммунобиологической реактивности организма, одним из показателей которой является структурно-функциональное состояние лейкоцитов.

Целью работы было сравнительное изучение структурно-функциональных характеристик лейкоцитов у детей с хроническим гастродуоденнтом (ХГД) и функциональными нарушениями желудка (ФРЖ).

Обследовано 32 ребенка в возрасте от 7 до 14 лет: 21-е ХГД и 11 - с ФРЖ. Определяли уровень В-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров, иммунорегуляторный индекс (ИРИ), число Т-активных лимфоцитов и их чувствительность к ти-молину. Изучали спонтанную и стимулированную теофилли-ном, тималином и ФГА адгезию нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов, раздельно для каждого типа клеток.

У больных ХГД отмечало депрессия Т-клеточного звена иммунитета, что проявлялось снижение уровна Т-хелперов и Т-супрессоров, величины ИРИ, числа Т-активных лимфоцитов и их чувствительности к гормонам тимуса. Выявлены достоверно более низкие показатели спонтанной адгезии лимфоцитов. Реакция на модуляторы адгезии адекватна, так как отмечалось достоверное ее повышение. Однако уровень индуцированной адгезии у больных с ХГД не достигала такого у детей с ФРЖ.

Отмечена тенденция к повышению функциональной активности моноцитов при ХГД, что отражает наличие воспалительного процесса.

Анализ корреляционных связей между изучаемыми показателями выявил слабый уровень межклеточного взаимодействия при ХГД, что, по-нашему мнению, является патогенетическим моментом возникновения и хронизации воспалительного процесса. При ФРЖ большее количество корреляционных связей свидетельствует о более сбалансированной работе указанных звеньев и является благоприятным фактором.

Таким образом, полученные результаты о структурных изменениях лейкоцитов и состояние их функциональной активности при ХГД у детей позволяют определить их роль в развитии данной патологии и наметить пути коррекции выявленных нарушений.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ БОЛЬНЫХ ПРИ ГНЕЗДНОЙ АЛОПЕЦИИ

Григорьева И. Г.. Думченко В.В.

Областной кожно-венерологический диспансер, Астрахань, Россия

Изучали особенности иммунологического статуса при различных клинических формах alopecia areata. Обследовано 39 больных в возрасте 3,5-55 лет, из них - 19 женщин и 20 мужчин. У 18 пациентов определялись единичные или множественные очаги поражения, в 11 случаях речь шла о суб-тотальной потере волос и офиазисе, 10 больных страдали тотальной или универсальной формой очаговой алопеции (ОА). Кроме общепринятых методов обследования (трихог-рамма, биопсия кожи из очага поражения, биохимические показатели крови) и расширенной иммунограммы (клеточное и гуморальное звенья иммунитета) в плазме крови больных определяли антитела классов IgG, IgA, IgM к цитоме-галовирусной инфекции (CMV), токсоплазмозу (Toxoplasma gondii - Тпл), Helicobakler pilori (Нр) и кандидозу (Candida albicans - Кд) методом иммуноферментного анализа (ИФА). В ряде случаев определяли ДНК возбудителей инфекций в лимфоцитах крови методом ПЦР-анализа (Литех, Россия). Процесс потери волос у большинства больных находился в активной стадии, в качестве контроля распространенности наличия иммунитета к соответствующим возбудителям инфекции, либо для определения фазности процесса (острая или подострая стадия), использовали базу данных практически здоровых пациентов, проходящих обследование в центре репродукции (г. Москва) на предмет донорства.

Обнаружено, что среди пациентов е ОА определяется значительная доля лиц, несущих антитела к CMV, Тил, Кд и Нр. Тем не менее, выявить достоверное повышение числа пациентов с высоким титром антител к возбудителям соответствующих инфекций, по сравнению с показателями контрольной группы, не удалось. В случае CMV и Нр отмечается достоверное увеличение числа пациентов, в крови которых определяется повышенный титр антител класса IgA и IgM. Изменения иммунограммы малоспецифичны и, чаще всего, косвенно свидетельствуют лишь о наличии персистирующей инфекции. Отмечается повышенное содержание В-лимфоцитов (CD20+) с одновременным снижением субпопуляций Т-лимфоцитов (чаще всего

- CD16+) и изменением иммунорегуляторного индекса. Кроме того, изучены особенности аутотелообразования к тканям щитовидной железы, особенно типичного для женщин, страдающих ОА. Такие сдвиги характеризуются повышенным содержанием циркулирующих иммунокомплексов и частым наличием антител к тиреоглобулину и/или микросомалыюй фракции. Однако, с учетом довольно высокой популяционной частоты лиц с аутоиммунными нарушениями, статистически достоверного увеличения числа больных, с антитиреоидными антителами доказать не удалось.

Делается вывод об отсутствии этиологической значимости CMV, Тпл, Кд и Нр и аутоиммунных заболеваний щитовидной железы в происхождении ОА.

ОСОБЕННОСТИ ПОПУЛЯЦИОННОГО И СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У ДЕТЕЙ С ОЖИРЕНИЕМ

Гришкевич Н.Ю.. Манчук В.Т., Савченко А.А., Грицинская В.Л.

Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

Иммунная система организма является одним из существенных факторов, обеспечивающих поддержания гомеостаза и находится под влиянием сложных нервных и эндокринных воздействий. Лимфоциты являются морфологическим эквивалентом, структурной основой иммунной системы. Ожирение не относится к заболеваниям при которых иммунологические механизмы играют ведущую роль. Однако ряд клинических наблюдений подтверждают, что изменения гипоталамо-гипофизарной системы, гиперинсулинемия, резистентность к инсулину, снижение углеводной толерантности, гиперлипидемия, нарушение обмена важнейших для липогенсза метаболитов приводят к изменению функционирования системы иммунитета. В результате чего, дети, страдающие ожирением, имеют пониженную сопротивляемость к инфекционным заболеваниям с частыми тяжелыми вторичными осложнениями, аллергическими реакциями. Целью исследования явилось изучение особенностей популяционного и субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток крови у детей с ожирением.

Обследовано 52 ребенка, страдающих различной степенью ожирения (23 ребенка в возрасте 7-11 лет и 29 детей в возрасте 12-14 лет). В качестве контроля обследовано 69 здоровых детей в возрасте 7-11 лет и 57 детей 12 - 14 лет. Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD16, CD72, HLA-DR. Дополнительно вычислялись иммунорегуляторный индекс (CD4+/CD8+), лей-ко-Т-клеточный (лсйкоциты/СОЗ+), лсйко-В-клеточный индекс (лейкоциты/CD 19+) и индекс активации Т-лимфоцитов (HLA-DRVCD72*).

Обнаружено, что изменения в популяционном и субпо-пуляционном составе иммунокомпетентных клеток крови у детей с ожирением преимущественно не зависят от возраста. Так, в исследуемых возрастных группах детей с ожирением снижается абсолютная и относительная концентрация СОЗ’-лимфоцитов, относительное содержанием С08+-клеток и абсолютный уровень CD16+- и НЬА-ОЯ+-лимфоцитов. В обеих возрастных группах статистически достоверно повышены величины иммунорегуляторного индекса и лейко-В-клеточного коэффициента. Кроме того установлено, что у детей с ожирением относительно показателей контрольных групп понижены процентные и абсолютные концентрации С072*-клеток и относительное содержание HLA-DR^-лим-фоцитов. В то же время, у детей с ожирением в возрасте 12 -14 лет данные иммунные параметры снижены более выражено. Единственной специфической особенностью для детей с ожирением 7-11 лет явилось снижение процентного содержания С016+-клеток. Только у больных ожирением детей 12-14 лет выявляется понижение относительной и абсолютной концентрации С04+-лимфоцитов, а также повышение величин лейко-Т-клсточного соотношения и индекса активации Т-лимфоцитов. Естественно, что выявленные изменения морфологического статуса иммунокомпетентных клеток у детей с ожирением развиваются на фоне нормального онтогенеза организма, в целом, и иммунной системы, в частности. Обнаружено, что у здоровых детей 12-14 лет по

сравнению с детьми 7-11 лет в периферической крови снижены концентрация лейкоцитов, относительное содержание С016+-лимфоцитов, а также величины лейко-Т-клеточного соотношения и индекса активации Т-лимфоцитов, но повышена процентная и абсолютная концентрация С04*-клеток и величина иммунорегуляторного индекса.

В целом, анализируя особенности популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов крови у детей с ожирением можно отметить следующее. Во-первых, выраженное снижение концентрации Т-лимфоцитов и регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов в крови у больных ожирением определяет состояние Т-клеточного иммунодефи-цитного состояния. Во-вторых, снижение относительной и абсолютной концентрации В-лимфоцитов и повышение величины лейко-В-клеточного индекса характеризуют недостаточность В-зависимого звена иммунной системы у детей. В-третьих, нарушения морфологического статуса им-мунокомпетентных клеток при ожирении более выражены у детей в возрасте 12-14 лет. Результаты данного исследования определяют необходимость изучения не только популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов крови, но и метаболизма иммунокомпетентных клеток, так как при нарушениях липидного обмена организма страдают, в том числе, и обменные реакции в клетках иммунной системы.

ВЗАИМОСВЯЗЬ ПРОВОСПАЛИТЕПЬНЫХ ЦИТОКИНОВ - ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 И ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ С ПОКАЗАТЕЛЯМИ ИНСУЛИНОВОГО ОБМЕНА И МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ ПРИ КАРДИОВАСКУЛЯРНОМ ДИСМЕТАБОЛИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ

Груздева О.В.. Суслова Т.Е., Федорова Т.С., Кошельская О.А.

НИИ Кардиологии ТНЦ СО РАМН, кафедра биологической химии и молекулярной биологии Сибирского государственного медицинского университета,

Томск, Россия

Провоспалительные цитокины - фактор некроза опухо-ли-а и интерлейкин 1, могут обладать поливалентным эндокринным действием в отношении развития кардиоваскулярного дисметаболического синдрома, включающего в себя комплекс взаимосвязанных метаболических нарушений -инсулинорезистентность, дислипидемию, нарушенную толерантность к углеводам и артериальную гипертонию. Механизмы этого феномена до сих пор остаются не ясными. В связи с этим целью работы явилось изучение взаимосвязи фактора некроза опухоли - а и интерлейкина-1 с показателями инсулинового и липидного обмена при кардиоваскулярном дисметаболическом синдроме.

Обследовано 30 больных с признаками кардиоваскулярного дисметаболического синдрома (гипертонической болезнью с нарушенной толерантностью к углеводам на фоне дислипидемии). Показатели липидного обмена - общего холестерина, триацилглицеролов, холестерина липротеинов низкой и высокой плотности определяли ферментативным методом. Уровень интерлейкина-1, фактора некроза опухо-ли-а, С-пептида, инсулина в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа.

У обследуемых больных уровень интерлейкина-1 и фактора некроза опухоли-а достоверно не отличался от показателей в контрольной группе. Диелипидемия характеризовалась высоким уровнем триацилглицеролов

и низким содержанием холестерина липопротеинов высокой плотности. Соотношение С-пептида и инсулина, обозначаемого как индекс С-пептид/инсулин у больных был достоверно выше, чем у здоровых доноров. Анализ взаимосвязей провоспалительных цитокинов с показателями инсулинового и липидного обмена выявил тесную корреляционную связь между уровнем фактора некроза опухоли- а и содержанием триацилглицеролов для обследуемых больных (R=0,87 р=0,05), что может свидетельствовать о негативном влиянии фактора некроза опухоли- а на обмен липопротеинов. Также обнаружена отрицательная корреляционная зависимость между уровнем интерлейкина-1 и индексом С-пептид/ инсулин для больных с признаками кардиоваскулярного дисметаболического синдрома (R=-0,76 р=0,05), что может указывать на участие интерлейкина-1 в формировании нарушения метаболизма инсулина и рецепции его тканями.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об участии провоспалительных цитокинов интерлейкина-1 и фактора некроза опухоли-а в формировании инсулинорезистентного состояния и дислипидемии при кардиоваскулярном дисметаболическом синдроме.

ТИТРЫ АНТИГЕНА CANDIDA ALBICANS И ТИТРЫ АНТИТЕЛ К CANDIDA ALBICANS В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ КАНДИДОЗОМ ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

'Гяургиева О.Х., 2Ильина В.Я., 'Фокичева Н.Х., Гяургиева К.А.

Кабардино-Балкарский государственный университет им.Х.М.Бербекова,

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования, Россия

С появлением медицинской проблемы ВИЧ-инфекции актуальность кандидоза приобрела особую остроту: в условиях фатальной поломки иммунной системы и неотвратимости контакта с возбудителем кандидоза уязвимость организма хозяина становится неизбежной.

Мы изучили эффективность серологической диагностики кандидоза у ВИЧ-инфицированных больных. Серологический анализ проведен с помощью эритроцитарных диаг-ностикумов, изготовленных в ПИИ медицинской микологии. Исследовали сыворотку больных в реакции непрямой гемаг-глютинации.

Обследовано 25 ВИЧ-инфицированных больных. Всем проведено полное клиническое и детальное микологическое обследование, в ходе которого у 19 из 25 был выявлен орофарингеальный кандидоз, у 5 - кандидоз пищевода, у 7

- кандидоз кожи, у 4 - диссеминированный кандидоз. У части больных имело место сочетание нескольких клинических форм кандидоза. Длительность наблюдения составила от 1 месяца до 3 лет. Кратность определения титров антигенов и антител в процессе динамического наблюдения составила 2-5.

У больных без клинических и лабораторных признаков кандидоза серологические тесты были отрицательные. При развитии кандидоза происходило повышение титров специфических антигенов и антител. У 9 больных после излечения кандидоза титры нормализовались.

Таким образом, серологическая диагностика может быть отнесена к цепному дополнительному способу выявления кандидоза у ВИЧ-инфицированных больных.

СОСТОЯНИЕ ИММУННЫХ И НЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ПРИ РЕАКТИВНЫХ АРТРИТАХ

Данилова Т.Г., Цыганова Л.А., Рязанцева Е.В., Бородулина И.М.

Медицинская академия, Областная клиническая больница, Ярославль, Россия

Изучение механизмов иммунной и неспецифической резистентности при реактивных артритах, а также их взаимосвязи является актуальной проблемой. По всей вероятности эти механизмы несут ответственность за нарушение гомеостаза при реактивном воспалении в связи с определенной острой инфекцией.

Цель исследования: изучение взаимосвязей лактоферрина (как показателя пула циркулирующих нейтрофилов), иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов крови, их изменения в зависимости от степени активности, клинической формы и варианта течения реактивных артритов. Лактоферрин крови определяли иммуноферментным методом, иммуноглобулины

- методом одномерной радиальной иммунодиффузии в агаровом геле, циркулирующие иммунные комплексы крови - методом преципитации с 3,5% раствором полиэтиленгликоля.

Обследовано 144 больных реактивными арчритами в возрасте от 16 до 49 лет. Преобладали больные с урогенитальной формой заболевания (54,5%). При использовании ПЦР-диагностики у 12 больных выявлены хламидии, у 4 уреаплазмы, у 2 микоплазмы. У 16 пациентов обнаружены антитела к хламидиям. Детально обследовано 30 больных реактивными артритами. У всех больных было выявлено увеличение содержания лактоферрина крови (р<0,01), что коррелировало со степенью активности заболевания. Увеличение уровней (р<0,02), (р<0,01), снижение цирку-

лирующих иммунных комплексов крови (р<0,01), отсутствие изменений 1§М не зависели от активности заболевания. При анализе различных клинических форм болезни (урогенитальной, постэн-тероколитической, назофарингеальной) не выявлено достоверных изменений изучаемых показателей крови. Хронические вариант!,I течения реактивных аргритов по сравнению с острыми сопровождались увеличением ^А, 1цС, и снижением циркулирующих иммунных комплексов крови (р<0,01). Вероятно, выраженность иммунных реакций нарастает по мере хронизации воспалительного процесса. С помощью корреляционного и дисперсионного анализов не выявлено взаимосвязей между уровнем лактоферрина и показателями гуморального иммунитета крови. Традиционное лечение реактивных артритов сопровождалось нормализацией всех изучаемых показателей крови. Таким образом, иммунные нарушения, выявленные при реактивных артритах, незначительны, а уровень неспецифической эффекторной защиты достаточно высокий.

СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОКИНОВ ПРИ ЧАСТО РЕЦИДИВИРУЮЩЕЙ ФОРМЕ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ

Дубнова Е.А.. Соколова Г.Н., Трубицына И.Е.

Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии,

Москва, Россия

Цель исследования: определение содержания цитоки-нов (ЦК) с различными функциональными свойствами при язвенной болезни 12-перстной кишки (ЯБДК) в зависимости от продолжительности заболевания и частоты рецидивов.

Материал и методы: в работе обследовано 53 пациента с обострением ЯБДК, из них - 22 женщины и 31 мужчина,

в возрасте от 16 до 62 лет, средний возраст - 34 года. Продолжительность заболевания составила от 1 года до 25 лет. Эндоскопическая картина включала выраженный отек и гиперемию слизистой оболочки луковицы 12-н.к., размеры язвенных дефектов колебались в пределах 0,5-1,5 см. Морфологическая картина характеризовалась наличием гастрита умеренной активности и присутствием Helicobacter pylori в слизистой антрального отдела желудка у 87% больных. ЦК (IL-ip, 1L-2, IL-4, IL-6, IL-8, TNFa, IFNy) в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с использованием тест-систем ТОО “Протеиновый контур” и “Цитокин”, Санкт-Петербург.

Результаты: в группе больных с ЯБДК, выявленной впервые, содержание IL-ф было в пределах 60-280 (в среднем-120) rir/мл; IL-2 - от 160 до 540 (в среднем-320) МЕ/мл; IL-4

- ог 70 до 900 (в среднем-240) пг/мл; IL-6 - 60-380 (в среднем-180) пг/мл; IL-8 - 60-640 (в среднем-95) пг/мл; TNFa -60-780 (в среднем-190) пг/мл и IFNy - 830-1370 (в среднем-1100) пг/мл. В группе больных с частыми рецидивами ЯБДК содержание цитокинов составило: IL-1 (3 - 60-80 (в среднем-70) пг/мл; IL-2 - 140-510 (в среднем-280) МЕ/мл; IL-4 - 70-500 (в среднем-210) пг/мл; 1L-6 - 60-250 (в среднем-160) пг/ мл; IL-8 - 60-600 (в среднем-90) пг/мл; TNFa - 60-190 (в сред-нем-170) пг/мл и IFNy - 590-850 (в среднем-670) пг/мл. В контрольной группе (здоровые лица, №=15) содержание исследуемых ЦК не превышало 30 пг/мл. Высокие показатели провоспалитсльных ЦК отмечались у больных с большими размерами язвы (более 1,0 см), наиболее выраженным отеком и гиперемией, с морфологическими признаками активного гастрита. При этом в начале обострения преобладало повышение уровней IFNy, IL-1 (3, 1L-8, а в стадии рубцевания было отмечено повышение содержания IL-6, TNFa, 1L-4. У больных с частыми рецидивами ЯБДК содержание исследуемых ЦК было выражено менее существенно, по сравнению с таковым у пациентов, заболевших впервые. Однако, по сравнению с больными ЯБДК с редкими рецидивами, уровень этих цитокинов был существенно выше.

Заключение: язвенная болезнь 12-перстной кишки сопровождается увеличением содержания цитокинов, что свидетельствует об активации Т и В-лимфоцитов, клеток эндотелия и эпителия, стимуляции процессов апоптоза, диффе-ренцировки и пролиферации клеток, играющих важную роль в регенерации слизистой оболочки 12-перстной кишки.

УРОВНИ АНТИГЕНЕМИИ И АНТИТЕЛ00БРА30ВАНИЯ К СЯУРТ0С0ССи5 ЫЕОРОЯМАЫЗ У БОЛЬНЫХ КРИПТ0К0КК030М НА ФОНЕ ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНОДЕФИЦИТА

'Ильина В.Я., 2Гяургиева О.Х., 2Гнургиева К.А., 2Фокичева Н.Х.

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования,

Кабардино-Балкарский государственный университет им.Х.М.Бербекова, Россия

Криптококкоз относится к наиболее частым и наиболее грозным микотическим осложнениям на стадии СПИД. Исходы криптококкоза зависят от своевременной диагностики, которая до сих пор основывается на выделении из биосубстратов гриба-возбудителя, что не позволяет проводить быструю диагностику. Цель исследования определить диагностическую значимость титра антигена Сгур1ососси$ пеорогтапБ и титра антител к СгурЮсоссиз пео/огтап.ч.

Серологическую диагностику проводили при помощи иммуноглобулинового эригроцитарного диагностикума (ИЭД) методом реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) для выявления антигена и реакцией торможения непрямой гемагглютинации (РТЫГА) для выявления антител. Иммуноглобулины получали из кроличьих иммунных сывороток, которые в реакции агглютинации с антигеном Cryptococcus neoformans имели титр 1:512 - 1:2048. Криптококковыс антитела присоединяли к стабилизированным формальдегидом эритроцитам посредством бис-диазотированного бензидина. Чувствительность ИЭД в РИГА достигала 10517 клеток Cryptococcus neoformans в 1 мл. Перекрестная активность имела место с Candida albicans, но в дозах антигена до 100 раз превышающих гомологичную. В сыворотках крыс специфическая антигенемия через неделю после интрацереб-рального заражения достигала титров 1:2048, а через месяц 1:256. В РИГА и в РТНГА с ИЭД исследовали соответственно 35 и 16 сывороток ВИЧ-инфицированных больных.

Определение уровня антигенемии и антителообразования имеет диагностическое значение. Наиболее эффективным средством диагностики криптококкоза является обнаружение специфической антигенемии при помощи ИЭД методом РИГА.

КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА UL55, КОДИРУЮЩЕГО ВЫСОКОИММУНОГЕННЫЙ ГЛИКОПРОТЕИН В ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА (ЦМВ) ЧЕЛОВЕКА

Калошин А.А.. Борисснко А.С, Лавров В.Ф..

ГУ НИИ вирусных препаратов

им. О.Г. Анджапаридзе, РАМН, Москва, Россия

ЦМВИ является одной из наиболее опасных внутриутробных инфекций и встречается у 0,2-2,5% новорожденных детей. При бессимптомном течении внутриутробной ЦМВИ у 5-17% новорожденных впоследствии возникают сенсорная глухота, задержка развития, малая мозговая дисфункция и другие психонервологические нарушения. Таким образом, лабораторная диагностика ЦМВИ у новорожденных является черезвычайно актуальной проблемой.

С целью улучшения диагностики с помощью ИФА, нами была клонирована часть последовательности гена UL-55, кодирующая 97 аминокислот (549 - 645 а. о.) гликопротеина В, являющегося одним из наиболее иммуногенных белков ЦМВ.

Фрагмент, содержащий 291 нуклеотид, амплифицирован методом ПЦР с использованием ДНК, выделенной из препарата ЦМВ (штамм AD169). В реакции применялись праймеры 5'-AAGGATCCAGCTGCGTGACCATCAACC-3' и 5'-AACTGCAGGTCGACGGTGGAGATAC-3', содержащие на 5'-концах последовательности сайтов рестрикции BamHl и Pstl, соответственно.

ПЦР-фрагмент по сайтам рестрикции BamHl и Pstl клонирован в плазмиду pQE-30 (QIAGEN). Данная плазмида содержала регуляторный промотор фага Т5 и стоп сигнал, которые необходимы для экспрессии белка. Экспрессия проводилась с использованием химического индуктора IPTG в клетках Е. coli (шт. М15), содержащего ренрессорную плазмиду pREP-4. Кроме того, полученный рекомбинантный белок содержал шесть гистидинов (данные последовательности находятся в плазмиде между сайтом рестрикции для клонирования и инициаторным кодоном).

Наличие искомого белка подтверждено электрофоретическим анализом суммарного протеинового пула в 15% полиакриламидном геле по методу Лэммли. При этом выход рекомбинантного белка составил около 25% от тотального

клеточного белка. Очистка белка проводилась в денатурирующих условиях, с использованием метода аффинной хромо-тографии по протоколу СПАСЕМ. Чистота полученного продукта составила более 95 %.

В настоящее время, проводится сравнительный анализ специфичности ИФ-тест систем, с использованием в качестве сорбента цельных вирионов ЦМВ и полученного рекомбинантного белка.

МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЙ АСПЕКТ ВАРИАБЕЛЬНОСТИ И НЕВ0СПР0ИЗВ0ДИМ0СТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ЭКСПЕРИМЕНТОВ ПО ИЗУЧЕНИЮ ВЛИЯНИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА НА ПОКАЗАТЕЛИ ИММУННОЙ И НЕЙРОЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМЫ

Кирилличева Г.Б.. Соловьева М.С., Пронин А.В., Лавров В.Ф., Горелов А.В., Наумов А,В.

Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН,

Москва, Россия,

Научно-исследовательский институт вирусных препаратов им. О .Г. Анджапаридзе РАМН,

Москва, Россия

Задачей настоящего исследования явилось экспериментальное исследование механизмов вариабельности воздействия инфекционного процесса на различные показатели иммунной и нейроэндокринной системы. Исследования проведены на мышах с генетически обусловленными четкими различиями в функциональных характеристиках иммунной и нейроэндокринной систем. В качестве модели инфекционного процесса использовали гриппозную инфекцию (штамм вируса гриппа А: А/Рг /34 ) и кампилобактериозную инфекцию (штаммы из коллекции В.Г. Жуховицкого). Кроме того, проводили исследования при действии чумной интоксикации (фракции 2 и “мышиного” токсина ВНИПЧИ “Микроб”).

Впервые экспериментально доказано, что вариабельность действия инфекционного процесса на различные показатели иммунной и нейроэндокринной системы связана, в основном с проявлением неспецифических свойств инфекционного агента. Показано, что проблема вариабельности и нсвоспроизводимости результатов эксперимента является очень часто чисто методологической проблемой, которая устраняется путем изменения тактики построения эксперимента и оценки опытных данных. Разработана новая методология, предложен оригинальный амплитудно-биоритмологический подход при изучении инфекционного процесса. Показано, что оценка действия последнего должна производиться не по изменению уровня анализируемого показателя относительно контроля в одной временной точке, а по характеру изменения его биоритма. Применение биоритмологического подхода позволило разработать методы, позволяющие дифференцировать и количественно оценить влияние неспецифического и специфического компонентов в действии инфекционного процесса на изучаемый показатель. Разработаны новые критерии стандартизации экспериментов по сравнительной оценке различных воздействий на показатели иммунной и нейроэндокринной системы.

Показана универсальность выявленных закономерностей. Доказана возможность применения разработанных методологических подходов при изучении иммуномодулирующих и различных патологических воздействий, включая действие ионизирующей радиации, стрессорно-го воздействия.

ИЗМЕРЕНИЕ АКТИВНОСТИ КАСПАЗЫ-6 В КЛЕТКАХ-МИШЕНЯХ КАК МЕТОД ОЦЕНКИ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ НАТУРАЛЬНЫХ КИЛЛЕРОВ

Коваленко Е.И., Тэлфорд Б.

Институт биоорганической химии

им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчиннникова РАН,

Москва, Россия

Натуральные киллеры (МК-клетки) выполняют в организме человека специализированную цитотоксическую функцию, направленную на уничтожение вирус-инфицирован-ных и опухолевых клеток. Преобладание активирующих сигналов, приходящих с поверхности клеток-мишеней, над ингибирующими приводит к активации ЫК-клеток и инициации цитотоксической реакции, следствием чего является запуск процесса апоптоза в клетках-мишенях. Большинство известных методов оценки цитотоксичности, опосредуемой МК-клетками, основано на измерении выхода меченого продукта из мертвых мишеней после 4-часового инкубирования мишеней с эффекторами и последующего расчета процента специфического лизиса. В данной работе для оценки натурального киллинга была сделана попытка использовать методику измерения уровня активации каспазы-6 в клетках-мишенях, ранее предложенную для оценки активности ци-тотоксических Т-лимфоцитов.

Клетки эритролейкемии человека К562 предварительно метили с помощью интеркалирующего в клеточную мембрану флуоресцентного красителя и затем использовали в цитотоксическом тесте как клетки-мишени. В качестве эффекторов использовали свежевыделенные мононуклеары периферической крови здоровых доноров, клетки с фенотипом СОЗ СБ16+С056+, отсортированные из популяции мо-нонуклеаров с помощью проточного цитометра, а также клетки ЫК-подобной линии ЫК-92. После инкубации смеси мишеней с эффекторами в течение 1 часа в образцы вносили способный проникать в клетки флуорогенный субстрат каспазы-6 и дополнительно инкубировали их в течение 45 мин. Активацию каспазы-6 в клетках-мишенях оценивали методом проточной цитофлуориметрии.

Для всех типов эффекторов обнаружена положительная зависимость доли клеток К562, в которых каспаза-6 активирована, от их соотношения с эффекторами, что свидетельствует о том, что этот параметр может быть соотнесен с цитотоксичностью. При этом чувствительность примененного метода несколько превышала чувствительность других методов оценки цитотоксичности, например, метода по выходу лактатдегидрогеназы из мертвых мишеней. Так, доля погибающих, субстрат-позитивных клеток К562 при их соотношении 1:20 с периферическими мононуклеарами составляла около 35%, при соотношении 1:3 с клетками СБЗ С016+С056+ - около 50%, при соотношении 1:5 с клетками МК-92 - 40%. Преимуществами данного метода также являются быстрота и возможность оценивать клеточную гибель исключительно в популяции клеток-мишеней.

Таким образом, нами показана возможность оценки опосредованной 1МК-клетками цитотоксичности по активации каспазы-6 - одному из ранних признаков фундаментального биохимического процесса, ведущего к клеточной гибели.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 01-04-48693).

СОСТОЯНИЕ ОБЩЕГО И МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ

Кондрашина Э.А. Калинина Н.М., Давыдова Н.И., Барановский А.Ю., Кондрашин А.С.

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования,

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины,

Россия

Целью нашего исследования является оценка содержания цитокинов, как отражения состояния иммунитета, в сыворотке крови и гастродуоденальной слизистой оболочке у больных язвенной болезнью (ЯБ).

Материалы и методы. Обследовано 64 пациента с ЯБ в возрасте 30-59 лет. Язвенные дефекты локализовались в луковице 12-перстной кишки или антропилорической зоне желудка, диагноз подтверждался данными эндоскопического и гистологического исследований. В группу контроля были включены 28 практически здоровых лиц. В сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определялась продукция следующих цитокинов: интерлейкинов 1 (3, 2 и 4, ТОТ-а, антагониста рецептора интерлейкина 1Р (1Ь-1 РРа), интерферон а. Продукция тех же цитокинов и в^А определялась с помощью 24-часового метода культуры тканей и твердофазного иммуноферментного анализа в супернатантах клеток прицельных биоптатов. Биоптаты были получены у пациентов с ЯБ из краев язв и антрального отдела, а в группе контроля - из интактной слизистой антрального отдела желудка и луковицы двенадцатиперстной кишки. Для выявления различий между группами использовался пакет 5ТАТ18Т1СА 5,0.

Результаты. В сыворотке крови у больных ЯБ по сравнению с группой контроля была выявлена тенденция к повышению содержания провоспалительного цитокина Т^-

а. Достоверных различий между уровнем других изучаемых цитокинов в крови в сравниваемых группах не было. У пациентов с пептическими язвами продукция интерлейкина 2 в крае язвенного дефекта составила 3,23±1,41 ед/ мл, в антральном отделе - 3,09± 1,12 ед/мл, что было достоверно ниже (р=0,035, р=0,026 соответственно) чем в группе контроля, в которой аналогичный показатель равнялся 9,79±3,19 ед/мл. Также в крае язвы отмечалось снижение продукции 1Ь-1рРа (1227,54± 142,28 ед/мл, в группе контроля - 1967,3 1±343,81 ед/мл, р=0,022), значения ТЫБ-а у пациентов с ЯБ, напротив, были повышены как в крае язвенного дефекта (146,05±44,96 ед/мл), так и в антральном отделе желудка (144,77±5 1,8 ед/мл, в контрольной группе - 11,32±4,67, р=0,004). Продукция других цитокинов в группах исследования и контроля достоверно не отличалась. При исследовании содержания в^А в слизистой оболочке у пациентов с ЯБ по сравнению с группой контроля наблюдалось снижение этого параметра и в крае язвенного дефекта (р=0,002), и в антральном отделе желудка (р=0,04).

Заключение: Снижение синтеза интерлейкина-2 клетками гастродуоденальной слизистой оболочки и содержания я^А у больных с ЯБ свидетельствуют о наличии недостаточности как клеточного, так и гуморального звеньев местного иммунитета слизистой оболочки, возникающей при процессах ульцерогенеза. Выявленные повышение продукции ТЫР-а клетками слизистой оболочки и тенденция к повышению его концентрации в крови в совокупности со снижением продукции 1Ь-1рРа связаны с активностью воспалительного процесса у больных ЯБ.

РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА СОСТОЯНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА У ЖИТЕЛЕЙ г. ВОЛГОГРАДА

Корсакова И.И. Пашанина Т.П., Елизаров В.В., Напалкова Г.М., Мананков В.В., Смелянский В.П., Козырев О.А., Дубич И.А., Веселков А.В., Толкунов В.И., Бессарабов О.И.

Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт;

Спортивная школа Олимпийского резерва;

Областная клиническая больница, урологическое отделение;

Медико-санитарная часть № 40;

Волгоградская медицинская академия, г. Волгоград, Россия

Введение. Иммунная система человека первой реагирует на все изменения, происходящие как в самом организме, так и в окружающей его среде. Параметры, характеризующие её функционирование, составляют так называемый иммунный статус. Даже в норме показатели иммунного статуса подвержены широким колебаниям в зависимости от целого ряда факторов, в том числе от комплекса природно-климатических факторов и влияния окружающей среды. Волгоград - крупный центр Юга России с многочисленными предприятиями химической, нефтехимической, металлургической, строительной промышленности.

Цель и задачи. Целью работы являлось изучение некоторых показателей клеточного и гуморального иммунитета у жителей г. Волгограда и сравнение их с общероссийскими данными.

Материалы и методы. Материалом для исследования служили кровь и сыворотка крови. С помощью общепринятых скрининговых методов исследования у пациентов определяли общее число лейкоцитов периферической крови, относительное и абсолютное количество лимфоцитов и их субпопуляций (CD3, CD4, CD8, соотношение CD4/CD8, NK - клетки, В-лимфоциты), содержание иммуноглобулинов (Ig) классов А, М и G в сыворотке крови, процент (ФП) и индекс фагоцитоза (ФИ), индекс завершенного фагоцитоза (ИЗФ), уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Данные по каждому параметру подвергались статистической обработке и представлены в виде среднеарифметического значения.

Основные результаты. Нами исследованы показатели иммунного статуса у 38 практически здоровых взрослых людей (18-60 лет), проживающих в г. Волгограде. Полученные средние параметры таковы: общее число лейкоцитов-6681 ±56,13 кл/мкл; лимфоциты - 1710±338,5 кл/мкл, 40,13 ± 1,22%; CD3

- 1366±80,98 кл/мкл, 66,56±2,86%; CD4 - 958±59,56 кл/мкл, 46,2± 1,62%; CD8 - 578±27,91 кл/мкл, 27,52 ± 1,44%; CD4 / CD8- 1,5±0,08;NK- клетки -348±32,64 кл/мкл, 18,89±1,83%; CD20- 130± 14,75 кл/мкл, 11,1 ±1,75%; активированные Т-лим-фоциты- 11,43±0,91%; IgA- 1,5±0,11 мг/мл; IgM- 1,12±0,07 мг/мл; IgG - 12,37±0,38 мг/мл; ФП - 70,37±2,68%; ФИ -1,72±0,04; ИЗФ-0,9±0,02; ЦИК - 27±3,32 усл.сд. При сравнении этих данных с параметрами иммунного статуса, опубликованными Кетлинским С.А., Калининой Н.М. (1998 г.), обнаружено, что у жителей г. Волгограда наблюдается некоторое увеличение значения таких показателей, как процент лимфоцитов, абсолютное число Т-лимфоцитов, процент и абсолютное число Т-хелперов, соотношение CD4 /CD8 и процентное содержание NK-клеток. В то же время показатели фагоцитарной активности (ФИ, ИЗФ) оказались сниженными.

Заключение. Проживание в регионе с развитой промышленностью нарушает сбалансированное функционирование иммунной системы, вызывая активацию Т-клеточного звена иммунитета с одновременным угнетением системы фагоцитоза.

ОСОБЕННОСТИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО СТАТУСА ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИОННОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Косякова Н.И.. Гражданкин Е.Б., Прохоренко И.Р.

Научный Центр РАН, Пущине, Россия

Рост удельного веса хронических инфекционно-воспали-тельных заболеваний в значительной степени обусловлен изменением биологических свойств условно-патогенной флоры под влиянием неблагоприятных факторов окружающей среды. Их слабо - иммуногенные антигены привели к длительной персистенции в организме бактерий, вирусов, простейших, что послужило основой формирования хронического инфекционно-воспалительного процесса с частыми его обострениями. При клинико-иммунологическом обследовании 578 пациентов в стадии обострения и в ремиссии хронических инфекционно-воспалительных заболеваний JIOP-органов (п=311), бронхо-легочной системы (п=96), кожи (п=102), мочевыделительной системы (п=69) было установлено, что в период обострения у 56,8%±2,1% пациентов отмечены низкие показатели IgA, интерферона “а” и IL-1, слабая динамика нарастания количества IgM и сниженная функциональная активность нейтрофилов (по данным хемилюминесценции отсутствовала активация моноцитарно-макрофагального звена иммунитета). У 42,8%± 1,8% пациентов отмечено было снижение соотношения CD4/CD8 до 1,0-1,2, что свидетельствовало о нарушениях в Т - клеточном звене иммунитета. Чаще всего эти изменения наблюдались при локализации инфекци-онно-воспалительного процесса в коже и JlOP-органах. Под влиянием терапии достигался баланс в показателях иммунитета, который сохранялся в среднем 2,8±0,6 месяцев и вновь нарушался, что неминуемо вело к обострению процесса. Выявленные особенности изменений в иммунном статусе при хронических инфекционно-воспалительных заболеваниях дали основание назначать иммуннореабилитационные мероприятия уже в остром периоде и продолжать их до 3-4-х раз в течение первого года наблюдения.

Всё это, несомненно, повышало эффективность лечебно

- оздоровительных мероприятий и давало возможность более чем у 54,8%±1,9 пациентов удлинить ремиссию более 6 месяцев.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ 01-04-48597.

СОЗДАНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВУЛЬГАРНОЙ ПУЗЫРЧАТКИ

Коцарева О.Д.. 'Марченко, А.С., 'Беневоленский С.В., 2Дзуцева И., 2Магушевская Е.В., Свирщевская Е.В.

Институт биоорганической химии им.М.М.Шемякина и Ю. В.Овчинникова, РАН,

ПИИ Генетики и селекции промышленных микроорганизмов,

Москва,

Российский Государственный медицинский университет,

Пузырчатка является аутоиммунным заболеванием, при котором в организме больного вырабатываются аутоантитела, направленные к молекулам адгезии клеток эпидермиса керати-ноцитов. Аутоантигеном при вульгарной форме данного заболевания является белок десмосом дссмоглеин 3 (ДГЗ), тогда как при листовидной форме аутоантигеном является гомологичный белок - дссмоглеин 1 (ДГ1). Сыворотки части больных с вуль-

гарной формой распознают как ДГЗ, так и ДГ1, тогда как при листовидной форме распознается только ДГ1. Оба белка являются трансмембранными белками, имеют пять внеклеточных доменов, трансмембранный участок и внутриклеточную сигнальную часть. Два дистальных домена внеклеточной части десмоглеинов принимают участие в межклеточном гомофиль-ном взаимодействии, обеспечивающем плотный клеточный контакт. Связывание аутоантител с десмоглеинами приводит к нарушению плотного контакта и возникновению акантолиза внутри эпидермиса. По мере роста эпидермиса участки акантолиза образуют пузыри, вскрываются и воспаляются в результате присоединения инфекций. Без лечения данное заболевание часто является фатальным. Диагностика пузырчатки основана на использовании биоптатов кожи пациентов, в которых выявляют депо аутоантител в определенных слоях эпидермиса. Данный метод диагностики является травматичным и длительным. Целью данной работы явилось получение бактериальной рекомбинантой формы двух дистальных доменов белка ДГЗ для использования в диагностике методом ИФА. Последовательность, кодирующая 1 и 2 экстраклеточные домены ДГЗ, была клонирована в бактериальном векторе рЕТ-22Ь(+). Кло-нироавние было проведено с использованием метода полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией. В качестве источника мРНК использовали линию кератиноцитов человека НаСаТ. Очистку белка проводили с использованием N1- колонки. Правильность клонирования была подтверждена рестрикт-ным анализом и сиквенированием клонированной последовательности. Полученный белок использовали для постановки ИФА в качестве подложки в концентрации 1 мкг/мл. Сыворотки 7 больных с установленным диагнозом вульгарной пузырчатки, 2 больных с листовидной пузырчаткой, 15 больных с атопическим дерматитом и сыворотки нормальных доноров использовали в разведении 1 на 200. Продукцию антител класса определяли, используя коньюгат антител против общего человека с пероксидазой хрена. Показали, что сыворотки больных вульгарной пузырчаткой достоверно отличаются от сывороток прочих больных и нормальных доноров. Таким образом, получен фрагмент антигена ДГЗ, который может быть использован для диагностики вульгарной пузырчатки.

ОЦЕНКА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ ТЕСТ-СИСТЕМЫ “БЛОТ-ВГС” ДЛЯ ПОДТВЕРЖДАЮЩЕЙ ДИАГНОСТИКИ ГЕПАТИТА С

Кузина Л.Е., Знойко О.О., Дудина К.Р., Волынская Е.А., Кузин С.Н., Суханова Л.Л., Гольцов В.А., Зверев В.В..

Инфекционная клиническая больница №1,

НИИ вирусных препаратов РАМН

им. О.Г.Анджапаридзе, ЗАО БТК “Биосервис".

Москва, Россия

В современной лабораторной диагностике гепатита С наибольшую сложность представляет подтверждение полученных при первичном скрининге результатов. Это связано с огромной

Табл. 1.

изменчивостью вируса и .соответственно, вариабельностью антигенных детерминант. Другой проблемой является невозможность наработки вируса и получения вирусного лизата, на основе которого, как правило, конструируют подтверждающие тест-системы. В связи с этим наиболее широкое распространение получило применение рекомбинантных или синтетических полипептидов или их комбинаций, причем как в скрининговой, так и в подтверждающей диагностике. В нашей стране ситуация осложняется тем, что наиболее доступные отечественные тест-системы для подтверждающей диагностики используют тот же принцип, что и скрининговые, т. е. иммуноферментный анализ на полистироловых планшетах. Кроме того, они не содержат обязательного в таких случаях контрольного антигена, позволяющего исключить ложноположительные результаты, вызванные искусственной природой антигенов.

Попытка решить эти проблемы была сделана ЗАО БТК “Биосервис”, при разработке тест-системы “Блот-ВГС” для подтверждающей диагностики, основанной на принципе лайн-блотас использованием нитроцеллюлозной мембраны. Тест-система включает четыре основных антигена-аналога антигенов вируса гепатита С (Core, NS3, NS4, NS5 ) и контрольный антиген специфичности реакции.

Целью настоящей работы было изучение чувствительности и специфичности опытной серии набора “Блот-ВГС”. В качестве наборов сравнения использовали “Deciscan HCV Plus”(Sanof'i Paster, France) и “Рскомби-Бест аити-ВГС-Спектр” (Вектор-Бест, Россия).

Нами было протестировано 38 сывороток крови пациентов отделения вирусных гепатитов ИКБ №1 КЗ г. Москва. 27 образцов, положительных при первичном скрининге в различных тест-системах, оказались положительными во всех трех подтверждающих наборах. 10 образцов, отрицательных при первичном скрининге, оказались отрицательными и при подтверждении. Один образец, отрицательный при первичном скрининге в “Рекомби-Бест анти-ВГС”, неожиданно дал положительный результат по Согс-антигену в подтверждающем наборе “Рекомби-Бест анти-ВГС-Спектр”. Этот же образец, положительный при первичном скрининге в тест-системе “Гепаскрин” (ЗАО БТК “Биосервис”), дал отрицательный результат в “Блот-ВГС” (сработала полоса контрольного антигена специфичности реакции). Поскольку в прочих скрининговых тест-системах, а также в “Deciscan HCV Plus” эта сыворотка была отрицательной, можно говорить о неспецифической реакции данного образца в скрининговом наборе “Гепаскрин” и подтверждающем наборе”РекомбиБест анти-ВГС-Спектр”. Хотя окончательные результаты по всем 27 положительным сывороткам в трех подтверждающих тест-системах совпали, спектры выявляемых антител заметно различались. Результаты представлены в таблице №1.

Полученные несовпадения ,по-видимому, обусловлены генетической вариабельностью вируса гепатита С и связаны с различиями в наборе антигенных детерминант, используемых при производстве тест-систем разными фирмами.

Как видно из полученных результатов, тест-система “Блот-ВГС” показала хорошую чувствительность и специфичность и может быть использована для подтверждения результатов первичного скрининга.

Core NS3 NS4 NS5

Рекомби-Бест анти-ВГС-Спектр 23 (85,2%) 24 (88,9%) 9 (33,3%) 9 (33,3%

Deciscan HCV Plus 27 (100%) 25 (92,6%) 21 (77,8%) отсутствует

Блот-ВГС 23 (85,2%) 25 (92,6%) 18 (66,7%) 19 (70,4%)

ВХОДНОЙ КОНТРОЛЬ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ АНТИ-ВГС

Кузина J1.E., Садикова Н.В., Малышев Н.А., Зверев В.В., Кузин С.Н.

Инфекционная клиническая больница №1,

НИИ вирусных препаратов им. О.Г.Анджапаридзе РАМН, Комитет здравоохранения, г.Москва, Россия

С целью осуществления входного контроля качества имму-ноферментных тест-систем для детекции анти-ВГС, централизованно поставляемых в сеть скрининговых лабораторий г.Мос-квы в референс-лаборатории ИКБ №1 КЗ г.Москвы была сформирована “репрезентативная” панель из 236 образцов сывороток крови. Образцы были отобраны по случайному признаку. В панель были включены сыворотки крови от больных острыми и хроническими вирусными гепатитами различной этиологии. Аттестацию панели проводили с помощью тест-систем “anti-HCV-EIA”, производства фирмы “Hoffmann La Roche” (Швейцария) и “Monolisa anti-HCV Plus”, производства фирмы “Sanofi Pasteur” (Франция), используемых нами в качестве референсных.

Входной контроль проходили следующие тест-системы для детекции анти-ВГС, закупленные КЗ г.Москвы для сети скрининговых лабораторий: а) “ИФА-anti-HCV комплект №2”, серия 09-0901, производства НПО “Диагностические системы” (г.Н.Новгород); б) “РекомбиБест анти-ВГС”, серия 447, производства ЗАО "Вектор Бест” (г.Новосибирск); в) “Гепаскрин”, серия 39, производства ЗАО “БТК Биосервис” (г.Москва).

В итоге проведенных контрольных постановок получены следующие результаты по чувствительности и специфичности указанных тест-систем: а) “ИФА-anti-HCV комплект №2” - соответственно 95,0% и 92,4%; б) “РекомбиБест анти-ВГС” - 93,6% и 97,5%; в) "Гепаскрин” - 100% и 91,1%. Полученные результаты свидетельствуют о высоких диагностических характеристиках данных тест-систем. Такой подход к проведению входного контроля, по нашему мнению, является высокоинформативным и доступным для широкого применения в практике здравоохранения.

ДИАГНОСТИКА ХРОНИЧЕСКОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ (ХАИ) С ПОМОЩЬЮ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)

Кузьмина Т.И.

ГУ НИИ биомедицинской химии РАМН, Москва

Известно, что у лиц с ХАИ наряду с аккумуляцией аутоан-тигенов и антител к ним, наблюдается также повышение уровня иммуноглобулинов класса А к конъюгату белковых молекул с ацетальдегидом, являющимся продуктом первичного метаболизма этанола в организме. При выявлении этих иммуноглобулинов с помощью серологических методов, в частности ИФА, в качестве антигенов используют белки, в том числе и сывороточный альбумин человека, обработанный ацетальдегидом (ЧСА+ АЦ). Однако получаемый препарат наряду с альбумином, вступившим во взаимодействие с ацетальдегидом (ЧСА-А), содержит также и неизмененный нативный белок (ЧСА). Поэтому уровень антител (АТ) к ЧСА-А, выявляемый при использовании такого антигена, теоретически должен равняться АТ к ЧСА+АЦ-АТ к ЧСА. Предварительное обследование 12 больных алкоголизмом и 12 доноров крови, в сыворотках крови которых с помощью ИФА выявляли IgA к ЧСА+АЦ и к ЧСА, показало, что, если при одном и том же разведении сывороток среднсгрупповой показатель оптической плотности (ОП), об-

наруживаемый при выявлении антител (АТ) к ЧСА+АЦ, превышает аналогичный показатель, регистрируемый при выявлении АТ к ЧСА не менее чем на 0,1, то наблюдаемое различие между показателями ОП, является статистически достоверным и свидетельствует о наличии АТ к ЧСА-А в исследуемых сыворотках. Отсюда за титр сыворотки было принято такое ее раз-ведение, при котором ОПчои - ОГ1чсл было не менее 0,1. Дальнейшее исследование показало, что средний уровень АТ к ЧСА-А у больных, страдающих 2-ой или 3-ей стадией алкоголизма достоверно превышает уровень специфических антител, выявляемый в сыворотках крови социально пьющих людей (средние титры соответственно 4,0±0,2 и 1,4±0,2-^,, р<0,001). Исходя из экспериментально определенной величины условно-ди-агностического титра, АТ к ЧСА-А (3,0-к^,) в злоупотреблении алкоголем можно было заподозрить 14% представителей из социально пыощей [руппы, что вполне согласуется с данными эпидемиологов. Примерно с такой же частотой (у 8-17% обследованных) повышенный уровень специфических АТ регистрировался у больных опийной наркоманией, больных с заболеваниями сердца и желче-выводящих путей, больных вирусным гепатитом В или (и) С, а также у людей с различными нарушениями иммунной системы. Нам не удалось выявить АТ к ЧСА-А у социально пьющих людей, не употреблявших алкоголь по крайней мере в течение месяца, или у лиц, имевших случайный алкогольный инцидент за 7-10 дней до забора крови. Антитела к ЧСА-А в диагностически значимых титрах обнаруживались у 64 из 76 обследованных больных алкоголизмом (83%), т.е. достоверно чаще, чем во всех прочих обследованных группах. Мониторинг за 15 больными алкоголизмом, проходившими стационарное лечение по поводу этого заболевания, показал, что в течении первых 7 дней диагностически значимые титры ^А к ЧСА-А регистрировались у всех обследованных (в среднем 6,0+0,5-^,). По мере увеличения периода воздержания от алкоголя на фоне проводимого лечения уровень специфических антител у этих больных постепенно снижался и через 15-21 день уже достоверно отличался от исходного показателя (среднее значение титра 3,9±0,3-1о§2, р< 0,05), хотя частота обнаружения повышенных титров антител к ЧСА-А изменялась незначительно (92%). Тем не менее на протяжении всего срока наблюдения (35 дней), средний уровень ^А к ЧСА-А, обнаруживаемый в сыворотках крови больных алкоголизмом превышал условно-диагностический, достоверно отличаясь при этом от аналогичного показателя у доноров крови (р<0,001). Таким образом, полученные результаты позволяют говорить о возможности использования ИФА для диагностики ХАИ, а, возможно, и для мониторинга за эффективностью проводимого лечения. Автор благодарит профессора, д.м.н. Гамалея И.Б. за научную консультацию.

ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ КАСПАЗЫ 3 В АКТИВИРОВАННЫХ Т-ЛИМФОЦИТАХ КАК СПОСОБ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИХ РЕАКТИВНОСТИ В КЛИНИЧЕСКИХ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ

Курчатова Н.Н., Сибиряк С.В.. Юсупова Р.Ш., Сибиряк Д.С., Ахматова Н.К.

Отдел клинической и экспериментальной иммунологии и иммунофармакологии Всероссийского центра глазной и пластической хирургии, г. Уфа

Оптимальный баланс между позитивной активацией (пролиферация, клональная экспансия) и негативной активацией (аноптоз, элиминация клеток) является одним из ос-

Индекс стимуляции Индекс активации каспазы 3 NPAR

Здоровые доноры (п = 44) 1 1 1

Острая вирусная инфекция - 0.85 + 2.60 + 12.01

Опийные наркоманы - 0.97 + 3.39 + 7.38

Дексаметазон (4 мкг/мл, 24 часа) - 0.57 + 0.69 + 1.0

Коинкубация с ТХДД (10 пМ, 72 часа) - 0.50 - 0.54 - 0.28

новных принципов функционирования иммунной системы. Для зрелых лимфоцитов (в основном CD4 Т-клеток) активационный апоптоз - активационно-индуцированная клеточная смерть (AICD) является способом саморегуляции силы и продолжительности иммунного ответа. Реализация программы апоптоза при активации Т-лимфоцитов может инициироваться опосредовано через TCR и (или) по Fas/FasL-зависимому механизму (клеточно-автономный суицид). При активации Т-лимфоцитов aCD3 МКА незначительная часть клеток подвергается AICD, интенсивность которой резко возрастает при ре-стимуляции TCR (особенно в условии дефицита IL-2). Точкой конвергенции апоптогенных сигналов в клетке является семейство эффекторных каспаз, в первую очередь каспаза 3, осуществляющая деградацию ряда жиз-ненно-важных для клетки структурных и регуляторных белков. Увеличение активности каспазы 3 является одним из наиболее ранних признаков активации программы апоптоза и наблюдается еще до изменения структуры фосфолипидов мембраны и нарушений морфрологии клетки. Активность каспазы 3 увеличивается и при активации Т-лимфоцитов aCD3 МКА. Можно полагать, что соотношение между степенью активации каспазы 3 и пролиферативной активностью Т-лимфоцитов при их стимуляции через TCR является адекватным отражением состояния реактивности клетки.

При анализе пролиферативной активности (морфологический метод) и активности каспазы 3 (флюорометрический метод, Apopain Assay Kit, BIORAD) в 72-часовых культурах стимулированных aCD3 МКА (2.5 мкг/мл) лимфоцитов периферической крови 44 здоровых доноров индекс стимуляции РБТЛ (ИС) составил (M±SD) 20.5± 16.9, индекс увеличения активности каспазы 3 - 5.8±4.6, а отношение индекса активации каспазы к ИС (negative/positive activation ratio, NPAR)

- 0.38±0.26. Характер изменения этих показателей при некоторых патологических состояниях и воздействиях на клетки, выраженный в стандартизованных, по отношению к контрольным значениям (матричный метод анализа данных) единицах иллюстрирует представленная таблица.

В острой фазе вирусной инфекции (геморрагическая лихорадка с почечным синдромом), у опийных наркоманов, при добавлении в культуру глюкокортикоидов, наряду с депрессией пролиферативной активности Т-лимфоцитов, отмечалось существенное увеличение степени активации каспазы 3 и, наиболее отчетливо, увеличение NPAR. Это свидетельствует о повышении интенсивности активационного апоптоза в ответ на стимуляцию aCD3 МКА. Напротив, при инкубации клеток с 2, 3, 7, 8-тетрахлордибензо-р-диокси-ном (ТХДД), способным блокировать митогенез за счет стабилизации комплекса Rb-E2F, угнетение пролиферативного ответа не сопровождалось увеличением активности каспазы 3 и NPAR. Таким образом, предлагаемый метод весьма четко отражает реактивность Т-лимфоцитов в условиях их активации.

НОРМАТИВЫ ПАРАМЕТРОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ИНФЕКЦИОННЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ОТЛИЧАЮТСЯ ОТ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЗДОРОВОГО ЧЕЛОВЕКА

Лебедев К. А.. Понякина И. Д.

КДЦ МГМСУ, Москва, Россия

При благоприятном для организма развитии инфекционновоспалительного процесса в крови наблюдаются существенные изменения уровней показателей субпопуляций лимфоцитов по сравнению с их значениями в период клинического здоровья. Эти изменения наблюдаются даже при таком слабом инфекционно-воспалительном процессе, как ОРЗ. Несомненно, что эти сдвиги являются отражением активации функционирования иммунной системы при воспалительном процессе, которая является нормальной и полезной для купирования воспалительного заболевания. Отсюда следует, что для выявлении иммунной недостаточности (иммунодефицита) в процессе инфекционно-воспалительного заболевания необходимо учитывать нормальные сдвиги иммунологических показателей, характеризующих активацию иммунной системы при воспалительном процессе. Заключение о наличии иммунной недостаточности лишь на основании отклонений уровней любых (неспецифических для данного инфекта) иммунологических показателей от нормативов клинически здорового человека несомненно часто приводит к неправильным выводам, определяющим необоснованное применение иммуностимулирующих препаратов при инфекционно-воспалительных заболеваниях.

ХЛАМИДИИ, МИКОПЛАЗМЫ И УРЕАПЛАЗМЫ КАК МАРКЕРЫ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Мананков В.В.. Тихонов Н.Г., Пашанина Т.П., Смелянский В.П., Корсакова И.И., Напалкова Г.М., Дубич И.А., Веселков А.В., Толкунов В.И., Бессарабов О.И.

Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт,

Спортивная школа Олимпийского резерва,

Областная клиническая больница, урологическое отделение.

Медико-санитарная часть № 40, г. Волгоград, Россия

Введение. В последние годы в специальной литературе достаточно широко освещается проблема урогенитальной и респираторной патологии, вызванной хламидиями, мико-уре-аплазмами, а также различными вирусами. Однако вопросы инфекционных заболеваний, у которых этиологическая роль принадлежит микстинфекциям, освещены недостаточно.

Цель и задачи. Целью работы являлось изучение распространенности вирусных патогенов (вируса герпеса и аде-

новирусов) в сочетании с хламидиями, микоплазмами и уре-аплазмами при заболеваниях урогенитального тракта, органов дыхания и зрения.

Материалы и методы. Материалом для исследования служили кровь, сок простаты и соскобы со слизистых. Исследования проводили с помощью метода флуоресцирующих антител (МФА) и твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА). Первый серологический метод позволял выявлять антигены искомых возбудителей инфекционной патологии, второй —определять антитела к ним. Комбинирование этих методов позволяло осуществлять достоверную постановку лабораторного диагноза.

Основные результаты. Нами обследовано более 12 тысяч больных с хроническими заболеваниями мочеполовой сферы, органов дыхания и зрения, вызванными микстинфек-циями (хламидии + микоплазмы, хламидии + уреаплазмы, хламидии + микоплазмы + уреаплазмы, М.pneumoniae + герпес, М.pneumoniae + аденовирусы).

Антигены хламидий, микоплазм, уреанлазм и антитела к ним в вышеуказанных сочетаниях выявлены более, чем у 46,8% пациентов. Все они в дальнейшем были обследованы на наличие антигенов вируса простого герпеса (ВПГ) и антител к нему. Процент обнаружения герпесвирусной инфекции в этих группах составил 82,6%.

Несколько выше была величина серологических находок герпетической и аденовирусной инфекций при воспалительных заболеваниях органов дыхания и зрения, вызванных возбудителем респираторного микоплазмоза - более 86,2%.

Заключение. Выявление вируса простого герпеса на фоне наличия хламидийной, мико-уреаплазменной инфекций при урогенитальной патологии, а также вируса герпеса и аденовирусов при смешанных поражениях органов дыхания и зрения (более 80%) позволяет выдвинуть гипотезу о том, что хламидии, микоплазмы, уреаплазмы и их сочетания могут выступать как маркеры ВПГ и аденовирусов, т.е. являться оппортунистическими инфекциями

СЕРОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕНИЯ IgG, IgA И IgM К CHLAMYDIA PNEUMONIAEУ ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ

Машков А.Е., Цуман В.Г., Друзюк Е.З., Манзенюк О.Ю., Манзешок И.Н., Щербина В.И., Мирончикова Ю.В.

МОНИКИ им.М.Ф.Владимирского, Москва, Россия

Инфекционная патология, вызываемая С.pneumoniae, широко распространена в мире. С.pneumoniae - потенциальный индуктор цитокинов, она обладает биологически активным липополисахаридом и может индуцировать хроническую ин-

фекцию в клеточных культурах. Спектр заболеваний, вызываемых данным возбудителем, включает синуситы, фарингиты, бронхиты, пневмонии, хроническую обструктивную легочную патологию и т.д. Активно изучается роль C.pneumoniae в этиологии инфекционной астмы, атеросклероза, острого инфаркта миокарда, саркоидоза, болезни Альцгеймера и т.д.

Вопрос развития иммунитета к данному возбудителю спорен и требует дальнейшего изучения. В странах Европы и США инфекции, вызванные C.pneumoniae, обычно не встречаются у детей в возрасте до 5 лет, но с высокой частотой (5-10% в год в возрасте 5-15 лет и 1 -2% старше 15 лет) продолжают возникать во всех возрастных группах.

Сведения о заболеваемости, вызванной C.pneumoniae, в России в отечественной литературе практически отсутствуют. Не разработаны и отечественные сертифицированные тест-систе-мы для видоспецифичсской диагностики данного возбудителя.

Нами проведен сероэпидсмиологический мониторинг распространения антител к C.pneumoniae у детей.

Исследование сывороток, отобранных на базе МОНИКИ им-.М.Ф.Владимирского, осуществляли методом непрямого иммуноферментного анализа с использованием следующих тест-систем: “Chlamydia pneumoniae - IgG - sELISA-medac”, “Chlamydia pneumoniae- IgA-sELISA-medac”, “Chlamydia pneumoniae-IgM

- sELISA-medac” производства ф. “Medac”, Германия.

Всего было исследовано 80 образцов сывороток, полученных от детей с различной соматической и инфекционной патологией, следующих возрастных групп: до 1 года (27 детей),

1-6 лет (19 детей), 6-11 лет (13 детей), 11-16 лет (21 ребенок).

Результаты исследования представлены в таблице:

Анализ полученных данных свидетельствует, что выявление антител к C.pneumoniae в возрастной группе до года обусловлено трансплацентарным путем передачи иммуноглобулинов от матери к ребенку. Это подтверждается периодом полураспада IgG и IgA, несовершенством иммунной системы у новорожденных, а также возрастом детей, у которых были выявлены специфические антитела. Так, специфические антитела IgG были выявлены у детей в возрасте до 1 месяца жизни в 92,3% случаев, а IgA наблюдали только у детей первых двух недель жизни.

Анализ трех последующих возрастных групп подтверждает данные зарубежных исследователей о незначительном представительстве инфекций, вызываемых C.pneumoniae в дошкольной группе детей с последующей высокой частотой нарастания сероиозитвных лиц в интервале от 6 до 16 лет. В нашем исследовании почти у 50% подростков были обнаружены специфические антитела к C.pneumoniae к 16 годам.

Таким образом, в результате проведенных сероэпидемиологических исследований показано увеличение роли C.pneumoniae в патологии детей с возрастом. Необходимы дополнительные исследования о роли данного возбудителя в развитии конкретных нозологических форм инфекций.

Возрастные C.pneumoniae

группы,

года IgG IgA IgM

Абс. % Абс. % Абс. %

0-1 13/27* 48,2 7/27 25,9 0 0

1-6 2/19 10,5 2/19 10,5 1/19 5,3

6-11 4/13 30,8 4/13 30,8 1/13 7,7

11-16 11/21 52,4 9/21 42,6 1/21 4,8

^Примечание — в числителе приведено количество пациентов, у которых выявлен данный класс антител к С.рпеитотае, в знаменателе - общее количество исследованных в данной возрастной группе.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ НЕСРОСШИХСЯ ПЕРЕЛОМОВ НИЖНЕЙ ЧЕЛЮСТИ

Меленберг Т.В.. Жесткое А.В.

Государственный медицинский университет,

Самара, Россия

Переломы костей лицевого скелета встречаются часто у лиц трудоспособного возраста, особенно переломы нижней челюсти (75-85%), продолжительность их заживления велика. Частота возникновения посттравматических осложнений при этом достигает 20-36%. Из них до 8% осложнений приходится на нарушение репаративного остеогенеза, проявляющееся в виде несросшихся переломов и ложных суставов.

Целью исследования было выявление иммунологических аспектов несросшихся переломов нижней челюсти системы. Всего обследовано 139 пациентов с переломами нижней челюсти клиники челюстно-лицевой хирургии и стоматологии СамГМУ. Контрольную группу составили 20 доноров Самарской областной станции переливания крови. Определялись в динамике уровни лимфоцитов, экспрессирующих CD3+, CD4+, CD8+, CD20+маркеры; ми-елопероксидазы; хемилюминесценции спонтанной и стимулированной люминолом; иммуноглобулинов классов А, G, М; циркулирующих иммунных комплексов и комплемента. С учетом дифференцированного подхода к анализу клеточных и гуморальных факторов иммунитета были выделены три группы пострадавших. 1 группа - 11 человек (7,9%) - с несросшимися переломами нижней челюсти. 2 группа - 94 человека (67,6%) - имелипереломы нижней челюсти, протекающие без осложнений: из них 90 мужчин и 4 женщины. 3 группа - 34 человека (24,5%): 32 -мужчины и 2 женщины - имели сросшиеся переломы на фоне хронического остеомиелита.

Проведенный сравнительный динамический анализ изученных показателей клеточных и гуморальных факторов иммунитета у пациентов всех групп, позволил отмстить следующие аспекты, характеризующие несращение отломков при переломах нижней челюсти. У пациентов 1 группы (не-сросшиеся переломы) к 5-7 дню мало выражена реакция костного мозга в отношении общего числа лейкоцитов. Отмечается слабая ответная реакция со стороны всех субпопуляций лимфоцитов. Это повышает, по нашему предположению, риск развития сопутствующих гнойно-воспалительных реакций. Депрессивное состояние гуморального иммунного ответа подтверждается более низким, чем в контроле, уровнем иммуноглобулинов всех классов как на 1-3 сутки, так и к 5-7 дню. Более низкие, чем у лиц контрольной группы уровни миелопероксидазы и активности комплемента и отсутствие их увеличения к 5-7 дню свидетельствуют о функциональной депрессии моноцитарно-макрофагального звена у данной группы пациентов. Полученные данные позволяют предположить, что, вероятнее всего, у пациентов с несросшимися переломами нижней челюсти нарушено исходное состояние иммунной системы и можно говорить о комбинированном иммунодефиците.

Таким образом, уже в течение первой недели с момента получения травмы у пациентов с переломами нижней челюсти можно прогнозировать нарушение процессов реиа-ративного остеогенеза. Характерными проявлениями со стороны иммунной системы для данного заболевания являются депрессия всех рассмотренных показателей иммунограммы и отсутствие динамических изменений исследованных показателей на 7-е сутки после оперативного вмешательства.

ВЗАИМОСВЯЗЬ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ С СИСТЕМОЙ ГЕМОСТАЗА У ДЕТЕЙ С УРОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

Мякишев Е.В.. Портнягина Э.В.

НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

Иммунная система организма является одним из существенных факторов, обеспечивающих поддержание гомеостаза, и находится под влиянием сложных, нервных, эндокринных и медиатор-ных воздействий. Лимфоциты обладают уникальными свойствами - высокой изменчивостью, деформируемостью, инвазивностью и способностью к рециркуляции. Обеспечивающими возможность иммунологического надзора, распознавание и координацию работы лимфоидных органов. В то же время лимфоциты, будучи мигрирующими клетками, способны отражать изменения, происходящие в организме

Система гемостаза - один из основополагающих и неотъемлемых компонентов, необходимых для жизнедеятельности человека. Она обеспечивает предупреждение и купирование кровотечений, поддерживает кровь в жидком состоянии. Несмотря на актуальность проблемы в доступной литературе мы встретили лишь единичные публикации результатов исследования системы гемостаза у детей с урологической патологией.

Целью нашей работы явилось комплексное исследование системы гемостаза в ее взаимосвязи с иммунной системой.

Нами были изучены показатели сосудисто-тромбоцитарно-го, коагуляционного и фибринолитического звеньев гемостаза, а также имунологические параметры: показатели имунного статуса и уровень нормальных киллеров аутологических эритроцитов (НКАЭ). Проанализирована их взаимосвязь у детей от 0 до 14 лег с гидронефрозом, пузырно-мочеточниковым рефлюксом, врожденными аномалиями развития почек и мочеточников.

Выявлено, что на момент поступления в стационар у пациентов увеличивались: показатели протромбинового времени (ПТВ), численность тромбоцитов и НКАЭ. В послеоперационном периоде, протекавшем без осложнений, эти показатели нормализовались к моменту выписки больных из стационара. У детей с осложненным течением послеоперационного периода в момент поступления отмечался более высокий уровень ПТВ, численность тромбоцитов находилась в пределах нормы, количество НКАЭ значительно снижена. После операции в данной группе больных фиксировалось значительное повышение количества тромбоцитов, ПТВ оставалось в пределах нормы, численность НКАЭ увеличивалось умеренно, или оставалось на прежнем уровне. Эти показатели свидетельствуют об угнетении системы иммуногенеза и повышении риска тромбообразования у детей с урологической патологией и служили прогностическим тестом.

Полученные результаты исследования позволили сделать вывод, что у больных с высоким уровнем ПТВ и уменьшением численности НКАЭ в момент поступления с целью предупреждения осложнений необходимо назначение иммуномодуляторов и антиагрегантов.

ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЕ ЛИМФОЦИТОВ С ПОМОЩЬЮ АНТИТЕЛОНЕСУЩИХ ЧАСТИЦ И ЭФФЕКТ МНОГОТОЧЕЧНОГО ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПОВЕРХНОСТЕЙ

Новиков П.Д.

Витебский государственный медицинский университет, Витебск, Россия

Введение. К настоящему времени практически сформировался стандарт, по которому осуществляется идентифика-

ция иммунокомпетентных клеток. Он включает: выделение лейкоцитарной фракции крови; взаимодействие выделенных клеток с моноклональными антителами к рецепторам-мар-керам клеточных популяций обычно при 4°С из-за вероятности их сброса; обработку клеток антимышиным иммуноглобулином, меченым флюорохромом; идентификацию маркер-несущей субпопуляции методом проточной цитометрии или иммунофлюоресценции.

Целью работы явилась разработка метода фенотипиро-вания лимфоцитов с помощью частиц, покрытых моноклональными антителами и сравнительная оценка его эффективности с проточной цитометрией и иммунофлюоресценцией.

Материал и методы. Для приготовления стабильных диагностикумов использовали 2-х этапный метод (Новиков П.Д. и др., 1999). Активированные эритроциты или частицы латекса покрывали антителами против иммуноглобулинов мышей, а затем моноклональными антителами (мАТ) против различных СО-антигенов. Лейкоциты крови здоровых лиц и больных инкубировали при 37°С 20 мин с такими ди-агностикумами, затем окрашивали мазки и подсчитывали процент розеткообразующих лимфоцитов. Параллельно мАТ против соответствующих СО-антигенов обрабатывали лейкоциты и определяли маркер-несущие лимфоциты в непрямой иммунофлюоресценции и методом проточной цитометрии. Обследовано 190 детей с бронхитами, 86 с бронхиальной астмой, 120 с другими заболеваниями, 40 здоровых детей и 46 взрослых.

Результаты и обсуждение. Уровни С022+ В-лимфоци-тов у здоровых детей и взрослых и у больных не различались при определении разными методами. Однако имелась достоверная (р<0,05) разница между уровнями СОЗ+ и СБ25+-лимфоцитов, определенных с помощью анти-СЭ-диагности-кумов методом проточной цитометрии. Если уровень СОЗ+-лимфоцитов был выше при определении на проточном цитометре, то С025+-лимфоцитов было достоверно больше (р<0,05) при детекции с помощью анти-СО-диагностикума. Это наблюдалось как у здоровых детей и взрослых, так и у больных с различными заболеваниями. Причем, в случаях снижения уровня СБЗ+ или С04+-Т-лимфоцитов оно выявлялось всеми тремя методами.

При изучении других активационных рецепторов лимфоцитов (НЬА-ОК, С095) методами связывания частиц, несущих антитела, выявлялось на 20-50% больше лимфоцитов, экспрессирующих эти рецепторы по сравнению с другими методами.

После инкубации лимфоцитов с аллергенами и антигенами в течение 6-18 часов при 37°С количество лимфоцитов, экспрессирующих С025 рецептор, увеличивалось на 18-45%, что позволило использовать метод для диагностики клеточно-опосредованных аллергических реакций.

Проточная цитометрия выявлет лимфоциты с низкой плотностью СОЗ-молекул, экспрессия которых недостаточна для связывания частиц, несущих аналогичные мАТ. В то же время при выявлении относительно лябильных структур - активационных рецепторов в процессе подготовки и обработки антителами при использовании проточной цитометрии происходит частичный сброс рецепторов ИЛИ же условия ХОЛОДОВОЙ инкубации не являются оптимальными для их выявления.

Метод с частицами, покрытыми антителами, в этом смысле более оптимален, т.к. инкубация их с лимфоцитами проводится при 37°С. Отсутствие “шапкообразования” и сброса рецепторов в этом случае объясняются многоточечным связыванием их антителами, связанными с поверхностью частицы, что предупреждает их подвижность на мембране лимфоцитов.

Выводы. Иммунофенотипирование лимфоцитов можно проводить путем связывания с ними антителонесущих частиц. Взаимодействие сорбированных на поверхности частицы антител с подвижными, лябильными рецепторами лимфоцитов отличается возможностью их стабилизации на поверхности, что в итоге позволяет более точно оценить их экспрессию по сравнению с методами, использующими связывание свободных меченых антител.

СОСТОЯНИЕ ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ПИЕЛОНЕФРИТОМ

Нургдинова Г.М.. Вагапова Д.Р., Алонова С.В

Республиканская клиническая больница им. Г. Г. Куватова,

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа, Башкортостан

Хронический пиелонефрит представляет собой одну из наиболее важных проблем нефрологии. Среди всех заболеваний человека по частоте пиелонефрит занимает второе место после острых респираторных заболеваний и первое место среди болезней почек.

Целью работы явилось изучение клеточного и гуморального иммунитета у больных хроническим пиелонефритом.

Материалы и методы. Были изучены показатели иммунного стктуса у 103 больных хроническим пиелонефритом и 55 здоровых лиц.

Оценка иммунного статуса включала определение содержания субпопуляций лимфоцитов методом иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител, исследование фагоцитарной активности пейтрофилов с частицами латекса, метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте, количественное определение сывороточных иммуноглобулинов классов G, А, М методом иммунодиффузии.

Результаты. Анализ нсспецифической резистентности выявил значительное ослабление системы нсспецифической защиты у обследуемых больных. Это депрессия фагоцитарной способности нейтрофилов и окислительно-восстановительных процессов в них. Так, показатели фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа и НСТ-теста у больных хроническим пиелонефритом составили 51,2±2,8%, 5,2±0,18 и 4,0±0,06%, в контроле 64,6+1,9%, 6,04±0,4 и 11,2+0,05% соответственно (р<0,05 во всех случаях). Уменьшение количества моноцитов свидетельствует о снижении как антиген-презентирующей функции, гак цитокинсинтезирующей способности клеточных факторов защиты (3,0%>±0,1, в норме 6,9%±0,5; р<0,001). Анализ количества натуральных киллеров показал, что у обследуемых больных имеет место дефицит CD16 -клеток, что обуславливает снижение общей естественной киллерной активности (II ,2%±0,5, в контроле 15,2%±0,9; р<0,01).

Результаты исследования фенотипа лимфоцитов свидетельствуют о значительном снижении содержания Т-лимфо-цигов (CD3 -клеток) (60,0%±1,7, в норме 66,1 %± 1,4; р<0,05). Определение CD4 клеток выявило достоверное уменьшение количества этих клеток у обследуемых больных (34,9%± 1,0, в контроле 40,7%± 1,2, р<0,05). Дефицит данных клеток приводит к нарушению синтеза ряда интерлейкинов, которые играют важную регуляторную роль в иммунологическом “оркестре”. Снижение CD8 -клеток (цитотоксические лимфоциты/супрессоры) говорит о падении киллерного эффекта клеточного звена иммунитета (20,1 %±0,7, в контроле 26,9%±0,9, р<0,05). Проведенные исследования выявили функциональную неполноценность Т-клеточной популяции.

Так, реакция торможения миграции лейкоцитов, как модель регуляторной способности Т-лимфоцитарного звена, показала угнетение функции Т-клеток (40,8±1,2, в контроле 52,8± 1,9, р<0,05).

Со стороны гуморального иммунитета у больных хроническим пиелонефритом выявлена неадекватность ответа на бактериальную инфекцию. Уровень сывороточных иммуноглобулинов классов в,А,М (15,0±0,6 г/л, 2,6±0,17 г/л и 2,0±0,15 г/л, в норме 14,5±0,7,3,0+0,2 и 2,0±0,2 соответственно, р>0,05 во всех случаях), количество В-лимфоцитов (С022 клетки) (13,0%±0,5, в контроле 14,0%±0,8, р>0,05) на манифестацию инфекции оставались неизменными. И как следствие данных нарушений падение фагоцитоза и активации системы комлемента.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о дисбалансе иммунобиологической реактивности у больных хроническим пиелонефритом.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЦИДНОСТИ КЛЕТОЧНЫХ СИСТЕМ МОНОНУКЛЕАРНЫХ И ПОЛИНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ

Песков С.А.. Патрина М.В.

Новосибирский государственный областной клинический диагностический центр,Россия

Большинство заболеваний человека, так или иначе, связано с развитием воспаления. Одной из актуальных проблем современной иммунологии является оценка биоцид-ного потенциала эффекторных клеток в очаге воспаления. По степени задействования различных клеток-эффекторов и других провоспалительных механизмов воспаление подразделяется на два варианта: экссудативно-деструктивное и пролиферативно-клеточное. Применяемые современные методы для диагностики воспаления позволяют судить о его тенденциях, в том числе о развитии в сторону деструкции, или напротив - репарации.

Учитывая большое значение биоцидности клеточных систем моно- и полинуклеарных фагоцитов для клинической практики нами поставлена цель провести сравнительную оценку диагностической информативности и клинической ценности наиболее часто применяемых лейкоцитарных тестов.

У 150 пациентов с заболеваниями воспалительной этиологии исследовалась биоцидная активность нейтрофилов крови с помощью ручного теста с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) спонтанного и индуцированного зимозаном (Ма-янский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д., 1996); параллельно нейтрофилов и моноцитов крови методом определения перок-сидазной активации нейтрофилов и моноцитов (ПАН и ПАМ) (Юдин К.Б., 1993) на полуавтоматическом иммуно-ферментном микропланшетном спектрофотометре АпШов (Австрия).

Прослежена корреляция всех показателей с тяжестью патологического процесса. Так, биоцидность нейтрофиль-ных гранулоцитов по данным НСТ-теста и ПАН совпадала и соответствовала тяжести клинического заболевания. Индекс стимуляции нейтрофилов (ИСН), как отношение индуцированных к спонтанным показателям НСТ-теста и ПАН, как отношение оптической плотности в стимулированных и не стимулированных пробах, отражали тяжесть течения основного заболевания. Степень выраженности изменений показателя ПАМ также зависела от тяжести клинических проявлений заболеваний. Существенной разни-

цы (по сравниваемым методам) в показателях НСТ-теста, ПАН и ПАМ у обследованных пациентов не выявлено. Динамика ПАМ прямо коррелировала с показателями биоцидности нейтрофильных гранулоцитов в НСТ-тесте и ПАН и в значительной мере соответствовала тяжести течения воспаления, наличию деструктивных или репаративных процессов.

Полученные данные свидетельствуют о возможности применения этих методов в качестве альтернативных источников дополнительной информации о характере воспалительного процесса и прогнозе течения заболеваний воспалительной этиологии. Для активного воспалительного процесса характерно повышение индекса стимуляции нейтрофилов в НСТ-тесте, для благоприятного прогноза течения заболевания характерна тенденция к повышению ПАМ и ИСН, а для неблагоприятного прогноза - тенденция к снижению показателя ПАМ и ИСН.

По сравнению с методом НСТ-теста, метод определения ПАН и ПАМ имеет ряд преимуществ:

- более автоматизирован,стандартизирован и объективен;

- кроме определения биоцидности нейтрофилов может определяться биоцидность моноцитов;

- за счет автоматизации метода определения ПАН и ПАМ увеличиваются объем и скорость производимых иследова-ний.

Таким образом, проведенная сравнительная оценка методов определения биоцидности клеточных систем моно- и полинуклеарных фагоцитов позволяет сделать вывод о равнозначной диагностической информативности и клинической ценности изученных лабораторных тестов. Дополнительная ценность метода определения ПАН и ПАМ обусловлена возможностями определения биоцидной активности моноцитов, стандартизации метода и большей пропускной способностью.

ОЦЕНКА БИОЦИДНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ И ФЕНОТИПЫ ГРУПП КРОВИ ПРИ ПНЕВМОКОНИОТИЧЕСКОМ ВОСПАЛЕНИИ

Песков С.А.

Новосибирский государственный областной клинический диагностический центр, Россия

В связи с высокой распространенностью профессиональных пылевых болезней легких, в частности, пневмоконио-зов (ПК), актуальна проблема их профилактики. Одним из путей профилактики является прогнозирование раннего развития ПК. В этом смысле важной задачей является определение индивидуальных особенностей организма. Использование системного подхода к оценке лабораторных тестов при ПК, темпа и скорости развития пневмокониоза как клинического интегрального выражения межклеточных взаимодействий может явиться основой поиска таких биологических особенностей. В настоящее время ведется интенсивный поиск информативных, но простых и доступных методов, которые могут служить надежными критериями для отбора лиц в пылеопасные профессии.

В развитии ПК особая роль принадлежит клеткам-эффекторам кониотического воспаления (макрофагам и нейт-рофилам). Воздействие промышленных аэрозолей вызывает существенные перестройки в функционировании системы мононуклеарных и полинуклеарных фагоцитов - активизацию макрофагов (Мф) легких и повышение биоцидности нейтрофилов (Нф), что приводит к длительной и избыточной генерации цитотоксичных активных форм кислорода.

Несмотря на обширную литературу, посвященную вопросам патогенеза ПК, практически не изучена биоцидность Нф в зависимости от фенотипических характеристик групп крови. Фенотипический профиль клеток определяет функциональное состояние фагоцитов и, следовательно, различия в количестве и качестве секретируемых ими факторов, играющих роль регуляторов межклеточных взаимодействий (про-и противовоспалительные цитокины, острофазовые реактанты, гормоны, сорбционно-транспортные свойства клеток крови и др.). В последние годы установлено, что для прогрессирования ПК характерен цитокиновый дисбаланс с гиперпродукцией провоспалительных цитокинов. К сожалению, в настоящее время имеются ограничения в определении в сыворотке всех известных (и пока неизвестных) цитокинов с помощью лабораторных методов.

Целью данной работы явилось изучение доступными методами кислородзависимой биоцидности Нф в зависимости от фенотипов групп крови у больных с ранним (прогрессирующее течение) и поздним (стабильное и мало прогрессирующее течение) развитием ПК.

Обследовано 123 больных ПК мужчин. 1-ю клиническую группу составили больные силикозом (32 чел.), И-ю -больные антракозом (49 чел.), Ill-ю - больные электросварочным ПК (42 чел.). В контрольную группу вошли 30 здоровых доноров того же возраста, не имеющих контакта с пылевым фактором. При обследовании пациентов использовались физикальные, рентгенологические, инструментальные и лабораторные методы. Биоцидность Нф исследовалась с помощью спонтанного и индуцированного (зи-мозаном, кремнеземом) НСТ-теста (сНСТ, иНСТ) (Маянс-кий Д.Н., Цырендоржиев Д.Д., 1996). Фенотипы эритроцитов по системам АВО и Rh определяли с помощью диагно-стикумов на основе моноклональных антител (“Гематолог”, Москва). Фенотипирование эритроцитов по системам MN, Р, Льюис производилось иммунными сыворотками для судебно-медицинских целей (НИИ вакцин и сывороток, Санкт-Петербург).

В контрольной группе распределение эритроцитарных фенотипов соответствовало популяционному. В распределении фенотипов групп крови в зависимости от формы ПК каких-либо закономерностей обнаружено не было. Полученные результаты показали различие в распространенности фенотипа системы Р и связанных с ним двухкомпонентных сочетаний систем АВО и Rh. Выявлено статистически достоверное значительное накопление лиц, среди больных с ранним и прогрессирующим развитием ПК, обладающих фенотипами АР* (32,9%, х2=5,9), Rh' Р" (15,0%, Х2=5,28) и ARh (13,7%, х2=4,73) при одновременном повышении показателей биоцидности Нф. В результате проведения корреляционного анализа, выяснилось, что наиболее значительная положительная связь этих фенотипов имеется с высокими показателями сНСТ-теста и кремнезём-и НСТ-теста.

Таким образом, генетические факторы детерминируют повышенную биоцидность нейтрофильных гранулоцитов, сцепленную с определенными фенотипами групп крови при ПК, и это, в конечном итоге, влияет на активность пневмоко-ниотического воспаления, сроки развития и характер клинического течения заболевания. Полученные данные позволяют более рационально, доступными и простыми лабораторными методами, проводить профессиональный отбор в пылеопасные профессии, прогнозировать раннее развитие ПК, осуществлять динамическое наблюдение за больными ПК и оценивать индивидуальный прогноз течения этого заболевания.

АУТОИНТОКСИКАЦИЯ - ВАЖНЫЙ ФАКТОР ПОДАВЛЕНИЯ РАБОТЫ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ И ЕЕ ВЫЯВЛЕНИЕ НА ОСНОВАНИИ ОЦЕНКИ АПОПТОЗА НЕЙТРОФИЛОВ

Понякина И.Д.. Лебедев К.А.

КДЦ МГМСУ, Москва, Россия

Аутоинтоксикация - это самоотравление организма токсическими продуктами метаболизма, продуктами микробного происхождения и тканевого распада.

Многочисленные исследования показывают, что на фоне интоксикации существенно снижаются показатели работы иммунной системы. Возникают различные воспалительные заболевания инфекционной природы, часто переходящие в хронические. Это является показателем недостаточности функционирования иммунной системы. На фоне интоксикации резко обостряются проявления различных аллергических заболеваний.

Различные методы детоксикации, снижающие уровень интоксикации организма, приводят к уменьшению частоты воспалительных заболеваний микробной природы, помогают достигнуть ремиссии при аллергических заболеваниях.

Вышесказанное указывает на важную роль аутоинтоксикации организма в развитии и поддержании приобретенной иммунопатологии разного генеза и необходимости проведения детоксикации организма как одного из важных компонентов при лечении различных воспалительных и аллергических заболеваний.

Для эффективной детоксикации организма необходим чувствительный лабораторный метод оценки уровня интоксикации.

В течение ряда лет для определения уровня интоксикации мы оценивали комплекс дегенеративных изменений в ядрах и цитоплазме нейтрофилов периферической крови. Он включает определение наличия фрагментации и пикноза в ядрах, выявление вакуолизации и токсогенной зернистости в цитоплазме, разрыва и клазмоцитоза цитоплазмы, уменьшения размеров клеток. Этот метод ранее широко использовался в клинической практике как компонент клинического анализа крови (И.А. Кассирский, 1948). Однако в последние годы из-за широкого перехода па фиксацию мазков крови этанолом, недостаточно высокой квалификации врачей-лаборантов для проведения качественной оценки дегенерации нейтрофилов, внедрения автоматов для просчета формулы крови, исключающих выявление морфологических нюансов, данный метод определения интоксикации организма редко используется в клинике.

В последние годы началось широкое изучение запрограммированной гибели клеток - апоптоза, в том числе нейтрофилов. Все перечисленные выше дегенеративные изменения в ядрах и цитоплазме нейтрофилов фактически являются морфологическими признаками агюптоза (см. обзор И.В. Нестерова, И.11. Швыдченко, 2001). Объективным методом определения активации апопгоза является обнаружение на поверхности нейтрофилов Раэ молекул, выявляемых с помощью моноклональных антител СЭ95.

Для выявления С095* нейтрофилов в препаратах клеток крови мы использовали визуальный стрептавидин-биотино-вый метод (К. А.Лебедев, И.Д.Понякина, Н.В.Казаченко, 2001). Параллельно оценивали уровень дегенеративных изменений в ядрах и цитоплазме нейтрофилов (К.А.Лебедев, И.Д.Поня-кина, 1990).

У 23 обследованных пациентов, часто болеющих ОРЗ и имеющих клинические признаки интоксикации, было выявлено увеличение как числа СЭ95+ нейтрофилов, так и количества клеток с морфологическими признаками апоптоза

(в отличие от 12 здоровых людей, не имевших клинических признаков интоксикации организма). Проведение у пациентов с признаками интоксикации 7-дневного курса детоксикации организма (прием энтеросгеля на фоне диеты, исключающей употребление продуктов животного происхождения) привело к резкому уменьшению в крови количества как С095* нейтрофилов, так и клеток с морфологическими признаками дегенерации, что коррелировало с клинической картиной уменьшения признаков итоксикации.

Эти данные указывают на объективность оценки интоксикации организма по выявлению в крови количества С095+ нейтрофилов. Определение уровня интоксикации по изменению числа нейтрофилов с активированным апоптозом - строго количественный критерий, дающий возможность избежать субъективизма при оценке морфологических признаков дегенерации нейтрофилов. Не менее ценно, что выявление СЭ95+ нейтрофилов возможно полностью автоматизировать, используя для этих целей проточные цитофлюориметры.

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ГРАНУЛОЦИТАРНО-МАКРОФАГАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ У ДЕТЕЙ С УРОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

Портнягина Э.В., Мякишев Е.В., Юрчук В.А, Макарская Г.В.

НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, г.Красноярск, Россия

Иммунная система организма является одним из существенных факторов, обеспечивающих поддержание гомеостаза, и находится под влиянием сложных, нервных, эндокринных и медиаторных воздействий. Лимфоциты обладают уникальными свойствами - высокой изменчивостью, деформируемостью, инвазивностью и способностью к рециркуляции. Обеспечивающими возможность иммунологического надзора, распознавание и координацию работы лимфоидных органов. В то же время лимфоциты, будучи мигрирующими клетками, способны отражать изменения, происходящие в организме.

Система иммуногенеза принадлежит к числу регуляторных систем, ответственных за молекулярно-структурный гомеостаз клеточных и гуморальных факторов иммунитета, которые играют важную роль в формировании механизмов адап-тогенеза и резистентности организма.

Известно, что при врожденной патологии мочевыделительной системы у детей развиваются иммунодефицитные состояния. Поэтому, проблема ранней экспресс-диагности-ки последних принадлежит к числу актуальных проблем детской хирургии. Перспективной, с этой точки зрения, представляется регистрация образования лейкоцитами активных форм кислорода (АФК): перекиси водорода, супероксида аниона, гидроксила и синглетного кислорода, т. к. изменение скорости образования АФК этими клетками является универсальным внешним проявлением их функциональной активности. Основной вклад в образование АФК дают фаго-

цитирующие клетки, кооперирующие с другими субпопуляциями иммунокомпетентных клеток. Наиболее чувствительным методом оценки образования АФК является метод лю-минолзависимой хемилюминисценции, основанной на регистрации потока фотонов, образующихся при окислении лю-минола АФК.

Целью работы явилось изучение зависимости формирования показателей иммунного статуса от различных уровней продукции АФК гранулоцитарно-макрофагальными клетками (ГМК) в системе красной крови у детей с урологической патологией (гидронефроз, пузырно-мочеточниковый рефлюкс, аномалиями развития мочевыделительной системы).

Результаты исследования показали, что в группе больных с уровнем генерации АФК в системе цельной крови в пределах нормы значение других показателей иммунограммы также находились в пределах физиологической нормы. У больных с гипоксическим типом генерации АФК ГМК отмечено достоверное снижение уровня Т-лимфоцитов с хелперной и супрессорной функциями, а также достоверное увеличение уровня ЦИК. При гипероксическом типе генерации АФК также отмечено достоверное снижение содержания Т-лимфоцитов с хелперной, супрессорной функциями.

Следует отметить, что у большинства больных гиперпродукция АФК ГМК коррелировала с тяжелыми клиническими проявлениями основного заболевания. При гипопродукции АФК состояние больных оценивалось среднетяжелым. А в группе детей с нормоксическим типом генерации АФК состояние было удовлетворительным.

Таким образом, результаты исследования свидетельствуют об информативности хемилюминисцентного анализа кинетики АФК для оценки функциональной активности клеточного иммунитета.

СИНТЕЗ НЕКОТОРЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ У БОЛЬНЫХ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИЕЙ

Розанова О.Е., Бубнова Л.Н., Глазанова Т.В., Павлова И.Е., Абдулкадыров К.М.

Российский НИИ гематологии и трансфузиологии, Санкт-Петербург, Россия

Известно, что гемопоэтические ростовые факторы - ге-мопоэтины, к которым относятся различные колониестимулирующие факторы, эритропоэтин и ряд цитокинов, являются неотъемлемой частью нормального кроветворения. В частности, недостаток эритропоэтина (ЭПО) на ранних этапах гемопоэза может приводить к апоптозу- гибели клеток костного мозга; некоторые цитокины (такие, как 1Ь-1Р, 1Ь-6 и другие) оказывают существенное влияние на грануло- и тромбопоэз. Поэтому исследование данных факторов при депрессиях кроветворения является весьма актуальным. Апластическая анемия (АА) - это заболевание, характеризующееся выраженным нарушением гемопоэза. Однако меха-

Показатель И-6 (пкг/мл) И-1Р (пкг/мл)

Спонтанная Индуцированная Спонтанная Индуцированная

Костный мозг 387 ± 110 935 ± 204 55 ± 15 100 ±46

Периф. кровь 284± 110 604 ± 279 216 ± 103 789 ± 299

Норма п/к 100 ± 41 2000 ± 188 33 ± 12 765 ± 91

низмы угнетения костномозгового кроветворения при данной патологии остаются до настоящего времени не вполне ясными. В связи с этим, целью данной работы явилось исследование синтеза некоторых гемопоэтических факторов, влияющих на эритро-, тромбо- и гранулопоэз, - те звенья гемопоэза, которые являются наиболее уязвимыми при АА. Для этого у больных тяжелой АА был определен собственный уровень эритропоэтина, а также продукция клетками периферической крови и костного мозга больных цитоки-нов - 1Ь-1Р и 1Ь-6.

Методы. Содержание ЭПО в сыворотке крови и способность мононуклеаров (2x10 кл/мл) периферической крови и костного мозга к спонтанной и стимулированной (пирогенал, ФГА) продукции 1Ь-1р и 1Ь-6 исследовали с помощью стандартного метода ИФА у 37 больных тяжелой АА. В работе использовали диагностикумы фирм “К&О” (США) и “Протеиновый контур” (Санкт-Петербург, Россия).

Результаты. Следует отметить, что уровень и продукция положительных гемопоэтических факторов у больных АА в среднем превышали показатели нормы. Так, уровень ЭПО у 13 больных колебался от 5 до 175 млЕ/мл, а у 24 больных - от 200 до 700 млЕ/мл (при норме 3,3-16,6 млЕ/мл). Таким образом, 35% больных характеризовались нормальным и повышенным и 65% - высоким содержанием ЭПО. Данные о продукции 1ИР и 1Ь-6 представлены в таблице. Спонтанная продукция 1И|3 у больных А А была повышена в костном мозге в среднем в 1,7 раза и в периферической крови в 6,5 раз, при этом способность клеток костного мозга к стимулированной продукции данного цитокина была снижена. Уровень спонтанной продукции 1Ь-6 у больных АА был также повышен в среднем в 2,8 и в 3,8 раз в периферической крови и костном мозге, соответственно.

Заключение. Таким образом, анализ уровня ЭПО и выработки 1Ь-1Р и 1Ь-6 у больных АА показывает, что аплазия у данных больных, вероятно, не может быть связана с недостатком изученных гемопоэтических факторов.

ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОСВЯЗИ МЕЖДУ КОНЦЕНТРАЦИЕЙ АТФ И АКТИВНОСТЬЮ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ У ЛИЦ С ИММУНОДЕФИЦИТАМИ И АЛЛЕРГИЯМИ

Савченко А.А.. Смирнова С.В.

Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

В последнее время появляется все больше работ, показывающих зависимость между функциональной активностью лимфоцитов и их энергетическим состоянием. Доказано, что при ряде иммунопатологических состояний выявляются изменения активности различных метаболических ферментов, в значительной степени определяющих интенсивность потока субстратов по гликолизу и циклу трикарбоновых кислот. Можно предположить, что в этом случае значительно изменится роль как ферментных систем, так и отдельных ферментов в регуляции энергетического обмена. Причем, синтез АТФ может осуществляться энергетически менее выгодными реакциями, с расходом интермедиатов, в норме используемых в других реакциях (например, в реакциях макромолекулярного синтеза), что, в свою очередь, значительно замедляет метаболическую активацию лимфоцитов, снижая их функциональную реактивность.

Целью данного исследования является изучение взаимосвязи концентрации АТФ от активности НАД(Ф)-зависи-

мых дегидрогеназ лимфоцитов крови у лиц с вторичным иммунодефицитом и аллергиями.

Обследованы здоровые люди, лица с вторичными им-мунодефицитными состояниями и больные аллергиями в возрасте 22 - 45 лет. Синдром вторичного иммунодефицита устанавливался врачом-инфекционистом на основании клинического осмотра и данных медицинской документации. Данную группу составили лица часто и длительно болеющие острыми респираторными заболеваниями (55%) и рецидивирующим обструктивным бронхитом (45%). Аллергический синдром диагностировался врачом-аллергологом. Группу лиц с аллергиями составляли больные с крапивницей(20%),нейродермитом (27%) и поллинозами (53%). Диагноз заболеваний ставился на основании пагогномоничных признаков. Для верификации диагноза проводилось кожное и ингаляционное тестирование с аллергенами, определение общего и специфического иммуноглобулина Е. Все больные обследованы в состоянии клинической ремиссии. Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ и концентрации АТФ в лимфоцитах крови осуществляли био-люминесцентным методом.

Обнаружено повышение содержания АТФ в иммуно-компетентных клетках лиц с аллергиями. У лиц с иммунодефицитом статистически достоверных различий в уровне АТФ относительно здоровых людей не установлено. Установлено, что метаболическое состояние лимфоцитов у лиц с иммунодефицитом характеризуется прежде всего разнонаправленными изменениями активности ок-сидоредуктаз цикла Кребса. Однако, увеличивается активность анаэробной реакции лактатдегидрогеназы и ключевой реакции малат-аспартатного водородного шунта митохондрий, что определяется повышенным субстратным потоком по гликолизу и соответствующим синтезом НАДН. По-видимому, подобное состояние обмена веществ в лимфоцитах крови у лиц со вторичными иммунодефи-ци гными состояниями не позволяет развить полноценной метаболической реакции при активации иммунокомпетен-тных клеток, что и может являться основной причиной функциональной недостаточности иммунной системы. У больных аллергиями обнаружена активация исследуемых оксидоредуктаз цитоплазматического и митохондриального компартмента иммунокомпетентных клеток. Выявленные изменения в активности метаболических ферментов лимфоцитов у лиц с иммунопатологическими состояниями приводят к нарушению роли отдельных метаболических ферментов и систем в регуляции уровня АТФ в иммунокомпетентных клетках, что выявляется с помощью корреляционного анализа и модели множественной регрессии. Установлено, что у лиц с иммунодефицитом уровень АТФ в лимфоцитах определяется уровнями активности анаэробной реакции лактатдегидрогеназы и 2-оксоглута-ратдегидрогеназного комплекса. В то же время, у лиц с аллергиями выявлена сонаправленная зависимость пластических и энергетических реакций, что характерно для активированных клеток. С помощью регрессионного анализа обнаружено, что у лиц с иммунодефицитом и аллергиями концентрация АТФ в лимфоцитах крови зависит от незначительного числа исследуемых ферментов. Предполагается, что подобная зависимость от малого числа факторов определяет повышенную вероятность срыва энергетического гомеостаза иммунокомпетентных клеток в случае развития иммунного ответа и, соответственно, приведет к нарушению функциональной активности лимфоцитов.

СРАВНЕНИЕ ДВУХ СИСТЕМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА) ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ (1д) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

Самойлович М.П.1. Кузенкова А.В.1, Алешина Л.А.2, Григорьева АЛ.3, Климович В.Б.1

Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт МЗРФ, £анкт-Петербург,

* Санкт-Петербургский Государственный уедицинский университет им. акад. И.П.Павлова, Городской ревматологический центр, Санкт-Петербург, Россия

Цель работы - сопоставление концентраций ^А, ^М, 1»0 в сыворотке крови, измеренных с помощью методов двухцентрового ИФА (“сэндвич”, С-ИФА) и ингибиторного ИФА (И-ИФА), а также метода радиальной иммунодиффузии (РИД) по Манчини.

Исследовали образцы сыворотки крови здоровых доноров, пациентов с миеломной болезнью, аллергическими и аутоиммунными заболеваниями, а также пациентов, обследуемых с целью установления диагноза.

Использовали разработанные в лаборатории гибридом-ной технологии ЦНИРРИ методы ИФА, основанные на применении моноклональных антител (МКАТ) против человека. В С-ИФА одно из МКАТ, специфичное к консервативным эпитопам тяжелой цепи, фиксировано на поверхности планшета. Для выявления молекул, связанных с МКАТ на твердой фазе, применяли смесь конъюгатов пе-роксидазы с МКАТ против легких цепей 1§. В методе И-ИФА ^ исследуемого образца ингибируют связывание меченых пероксидазой МКАТ с ^ того же изотипа, фиксированными на поверхности планшета. Концентрации ^ методом РИД определяли с помощью моноспецифических поликлональных сывороток производства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи.

При исследовании сывороток крови доноров выявлено совпадение результатов, полученных с помощью РИД и И-ИФА. Данные С-ИФА коррелировали с результатами двух других методов, но были достоверно выше. Методы РИД и И-ИФА выявляли одинаковые концентрации в крови пациентов с ревматоидным артритом, тогда как уровни ^А и ^М совпадали в 50% сывороток. Результаты, полученные с теми же сыворотками в С-ИФА, были достоверно более высокими. Диапазон колебаний концентраций 1^С, ^А, ^М у пациентов с различными заболеваниями, был значительно шире при использовании ИФА-методов по сравнению с РИД. При этом в среднем в 8% сывороток крови отмечено 2-3 кратное превышение концентрации lgG в С-ИФА по сравнению с другими методами анализа. Наибольшие расхождения между результатами трех методов определения наблюдали при обследовании пациентов с множественной миеломой. Так, при высоких концентрациях свободных легких цепей уровни выявляемые в РИД, были завышены. При наличиии моноклонального ^03 в С-ИФА отмечено существенное завышение концентрации общего а в И-ИФА - его занижение. Исследовано влияние некоторых приемов обработки сывороток на результаты определений. Прогревание сывороток при +56 °С не влияло на результаты С-ИФА, снижало концентрации ^ всех трех классов, выявляемые методом РИД, и повышало значения, определяемые в И-ИФА. Предварительная инкубация сывороток доноров в буфере с рН2 не влияла на результаты И-ИФА и РИД, но снижала концентрации определяемые в С-ИФА. Проведенное сравнение указывает

на необходимость учета границ нормальных значений (по группе доноров) для каждого метода. При исследовании материала от пациентов сопоставление данных, полученных с помощью разных методов, требует учета изменений в составе и свойствах Ig при разных заболеваниях.

ИММУНОДИАГНОСТИКА ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ

Серова Т.И.. Ильченко Л.Ю., Якимчук Г.Н., Голованова Е.В., Федотова Т.Ф., Сухарева Г.В., Царегородцева Т.М.

Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии, Москва, Россия

В развитии и течении хронических заболеваний печени (ХЗП) важная роль принадлежит нарушениям функциональной активности иммунной системы.

Цель исследования: изучение дифференциально-диагностической и прогностической ценности иммунных реакций при ХЗП.

Материал и методы: исследование иммунного статуса проведено у 7000 больных с хроническими поражениями печени (вирусными, аутоиммунными, алкогольными и др.) иммунологическими методами (иммуноферментным, иммуно-флуоресцентным, иммунодиффузии и др.)

Результаты: при ХЗП маркеры вирусных гепатитов В (HBV), С (HCV), D (HDV), G (HGV), ТТ (HTTV) иммуноферментным методом с использованием тест-систем ТОО “Диагностические системы” (Н.Новгород) обнаружены в периферической крови больных в 72%. Наиболее регулярно и в высокой концентрации выявляются маркеры интеграции - ви-русспецифические антитела к HCVcor, NS3,4,5 IgG класса, а также антитела к HBs, е, сог и HGV. Частота обнаружения и содержания маркеров репликации вирусов (антитела IgM класса к НВсог и HCVcor, NS3,4,5) существенно ниже (в 3 раза). ХЗП вирусной этиологии с маркерами HCV, HBV, HDV, HGV, HTTV сопровождаются умеренным (в 2,5 раза) увеличением в периферической крови содержания М, G, А классов, к и Л типов иммуноглобулинов (ИГ), циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), интерлейкинов (IL). Аутоиммунные поражения печени характеризуются значительным увеличением содержания отдельных классов и типов ИГ, прежде всего IgG (до 45г/л) и к -типов ИГ (до 7,3г/л), а также антинуклеар-ных, антигладкомышечных аутоантител, парапротеинов, ЦИК. У больных первичным билиарным циррозом на первый план выступает абсолютная и относительная макроглобулинемия: содержание IgM достигает 6,5г/л и выше; антимитохондри-альных антител -70-1000 ME, IL-6-360 пг/мл. При алкогольных поражениях печени преобладает избирательное увеличение содержания IgE и IgA. Резкое возрастание уровня IgA (8,3 г/л) и альфа-фетопротеина (свыше 500 ME) в сыворотке крови - отличительная особенность гепатоцеллюлярного рака. При гепатоцеребральной дистрофии изменения функциональных свойств Т- и В- лимфоцитов выражены минимально. ХЗП в 27-83% случаев сопровождаются изменениями эффектор-ных и регуляторных свойств иммунокомпетентных клеток (хелперных, супрессорных, цитокинпродуцирующих, пролиферативных и др.), отражающих активность заболевания, его прогноз.

Заключение: особенности и характер изменений иммунного статуса определяются этиологическими факторами, стадией, активностью заболевания, проводимой терапией, что подтверждает высокую диагностическую и прогностическую ценность иммунных реакций при ХЗП.

СТРУКТУРА ИММУННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ СРЕДИ ОТДЫХАЮЩИХ НА КУРОРТЕ “УСТЬ-КАЧКА”

Сидоров Д.В.. Мишланов В.Ю.

Пермская государственная медицинская академия, курорт "Усть-Качка", Пермь, Россия

Согласно существующим Стандартам диагностики и лечения (Иммунопатология и аллергология, 2001 г.), повышение инфекционной заболеваемости служит главным критерием диагностики иммунной недостаточности. Эпидемиологические вопросы этой проблемы в настоящее время остаются неопределенными. Поэтому целью нашего исследования было изучение структуры иммунных нарушений среди отдыхающих на курорте “Усть-Качка”.

Проанализированы результаты анкетирования 61 отдыхающих в возрасте от 24 до 66 лет, среди которых было 42 женщин и 19 мужчин. Анкета для первичной диагностики включала 20 вопросов, выявляющих как общие признаки иммунной недостаточности, так и симптомы хронических очагов инфекции или наличие в анамнезе некоторых известных факторов иммунной недостаточности. В зависимости от результатов тестирования все пациенты были разделены натри группы. 1-я включала 13 обследованных, указавших на наличие 5 и более признаков иммунной недостаточности.

2-я группа состояла из 34 пациентов, указавших на наличие от 1 до 4 признаков иммунной недостаточности. 3-я группа отдыхающих ответила на все вопросы анкеты отрицательно. У пациентов с признаками иммунной недостаточности выполнено иммунологическое обследование, включающее показатели Т-, В- звеньев и оценку фагоцитарной активности различных популяций лейкоцитов. По показаниям проводилось определение специфических ^Е в отношении аллергенов, признанных виновными по результатам изучения аллергологического анамнеза. Пациенты, имеющие признаки иммунной недостаточности осмотрены аллергологом-имму-нологом.

Наиболее выраженные изменения в иммунном статусе по клиническим и лабораторным признакам выявлены у пациентов 1-й группы, составляющих 21,3% от числа обследованных. Специфичными для указанной группы больных оказались такие клинические симптомы, как:

- гнойно-воспалительные заболевания костей (100%);

- появление гнойничковой сыпи на коже за последний год (80%);

- грибковые поражения кожи (75%);

- повторные обострения герпетической сыпи на лице (губы) или на коже тела за последний год (71,4%);

- наличие хронического бронхита с обострением более 3-х раз в течение года (71,4%);

- повторные пневмонии в анамнезе (66,6%);

- повторные ангины (хронический тонзилит) с обострением более 3-х раз в году (60%).

Перечисленные признаки можно назвать облигатными по отношению к диагнозу иммунной недостаточности, их выявление требует детального иммунологического обследования и использование методов иммунокоррекции в соответствии с установленными правилами.

Отмечено, что у пациентов более старшей возрастной группы признаки иммунной недостаточности выявляются чаще, чем в возрасте до 55 лет. В тоже время пациенты старше 55 лет составили всего 12,8% от числа всех обследованных с признаками иммунной недостаточности (6 человек: 1 старше 55 лет и 5 старше 60 лет, из них 2-е в группе № 1 и 4 в группе № 2). Этот факт свидетельствует о большой распространенности признаков иммунной недостаточности среди работос-

пособного населения.

Метод анкетирования установил преобладание выявляемых признаков иммунной недостаточности среди женщин с очевидной разницей между 1-й и 3-й группами наблюдения, что практически исключает зависимость этих результатов от специфики самого метода обследования.

Установлена зависимость изменений в лабораторных показателях иммунного статуса от количества выявляемых при анкетировании симптомов и специфичность отдельных клинических признаков иммунной недостаточности.

Результаты проведенного исследования позволяют считать метод анкетирования адекватным для скринингового обследования населения на выявление признаков иммунной недостаточности.

ПРОБЛЕМЫ ИММУНОДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ОСТЕОМИЕЛИТА У ДЕТЕЙ

Слесарев В.В., Пыхгеев Д.А., Сучков С.В,. Машков А.Е.

Отделение детской хирургии и лаборатория клинической иммунологии МОНИКИ,

Москва, Россия

Сегодня важная роль иммунной системы в патогенезе и исходе гнойно-септических заболеваний (ГСЗ) не вызывает сомнений (Маянский В.Н., 1992; Gruber Н.Е., 1991; Peters К.М. et al., 1994). Одной из мало изученных в этом плане клинических моделей в детской хирургии являются хронические остеомиелиты, удельный вес которых составляет 5-12% среди детей с ГСЗ, Хронизация остеомиелита связана с рядом факторов, среди которых ключевое значение имеет формирование вторичного постинфекционного иммунодефицита, вызванного как иммунодепрессивным влиянием микробных возбудителей, так и особенностями иммунологической реактивности организма-хозяина [Beard L.J. et al., 1990; Gruber H.E., 1991; Haas D.W., McAndrew M.P.. 1996; Smeltzer M.S., Gilasy A.P., 20001.

Характер и специфика иммунологической реактивности при хронических остеомиелитах, в свою очередь, определяется морфологической деструкцией кости и окружающих мягких тканей в зоне воспаления, приобретающих на определенном этапе воспаления свойства аутоантигенов. Развивающиеся в этих условиях иммунодефицит и дисбаланс компонентов иммунного ответа снижают возможности специфической и неспецифичсской защиты, что также способствует пер-систенции микробных агентов и развитию порочного круга, обуславливающего поддержание патологического процесса [Gruber Н.Е., 1991; Пауков B.C. с соавт., 1996; Пауков B.C. с соавт., 1998; Smeltzer M.S., Gilasy А.P., 2000].

Вместе с тем, в литературе отсутствует однозначная информация относительно роли микробных ассоциатов и конкретных звеньев иммунного ответа в патогенезе инфекцион-но-воспалительного процесса, что является серьезным препятствием на пути к созданию системы иммунологического мониторинга пациентов с хроническим остеомиелитом. Также отсутствуют работы, в которых сопоставлялись бы данные относительно особенностей микробного пейзажа, характерного для хронического остеомиелита, с иммунологическими нарушениями. Однако, известно, что некоторые бактерии способны выключать процессы антителообразования как прямым, так и опосредованным (через индукцию факторов, препятствующих активации Т-клеток) путем, и, тем самым, снижать общий уровень иммунного ответа. [Christensson В.

et al., 1985; Faist Е. et al., 1986; Del Piano M. ct al., 1989; Moniuddin A.A. et al., 1991].

Немаловажную роль при этом играют цитокины, которые, будучи медиаторами иммунитета, способны менять характер течения гнойно-воспалительного процесса. [Ковальчук Л.В., 1989; Seidel.J., 1989; Klosterhaefen В. et al., 1996]. Естественно, что при таком сложном механизме иммунорегуляции течение гнойно-септического процесса зависит не только от имуногенного потенциала инфицирующих микроорганизмов, но и от исходного иммунного статуса организма-хозяина.

Таким образом, несмотря на появление и развитие новых методов диагностики, внедрение в практику современных антибактериальных препаратов и определенную тенденцию к улучшению результатов лечения, процент инвалидизации таких больных остаётся достаточно высоким и по данным разных авторов колеблется в пределах 10-18%. Естественно, что хаотично применяемые в хирургической практике отдельные иммунологические тесты не позволяют достоверно оценить роль иммунологических нарушений на фоне микробной инфекции у больных с хроническим остеомиелитом и использовать такого рода информацию в прогнозировании состояния пациента и характера осложнений и исхода заболевания. Это ставит разработку системы иммунологического мониторинга и иммунологических критериев эффективности лечения хронического остеомиелита в ряд актуальных проблем современной детской хирургии и клинической иммунологии.

ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ РАЗЛИЧНЫМИ ВАРИАНТАМИ ИБС

Столов С.В.. Мазуров В.И., Линецкая Н.Э., Горбунова С.И.

Кафедра терапии №1 им. Э.Э. Эйхвальда, СПбМАПО

В исследованиях, выполненных за последнее время, получены данные, позволившие предположить, что атеросклероз является следствием хронического иммунного воспаления, подобного реакции гиперчувствительности замедленного типа. В пользу этого утверждения свидетельствуют обнаруживаемые в атеросклеротически измененных артериях Т-и В-лимфоциты, находящиеся в активном состоянии. В нашем исследовании изучена экспрессия некоторых маркеров активации лимфоцитов периферической крови у больных с инфарктом миокарда и стенокардией (данные приведены в таблице).

У больных стенокардией и инфарктом миокарда наблюдалась тенденция к снижению CD 18 по сравнению с показателями контрольной группы (25,14±5,6; 27,7±4,6%, 38,8±2,7; соотв.). Индукцию CD 18 регулируют, главным образом, про-воспалительные цитокины.

Экспрессия CD25 при инфаркте имела тенденцию к увеличению по сравнению с контролем (33,8±9,2; 24,1 ±1,6, соотв.). Содержание CD 16 у больных ИБС не отличалось от уровня в контрольной группе (24,0+1,5; 18,9+7,9; 28,7+5,7%, соотв.).

В группе больных инфарктом миокарда выявлено существенное повышение экспрессии CD95 по сравнению с конт-

ролем (37,3+2,4^ 11,8+1,6, соотв., (р<0,05)). Тенденция к повышению CD95 отмечена и в группе больных стенокардией.

Содержание антигенов HLA-II класса локуса DR существенно не различалось в обследуемых группах, имелась лишь тенденция к повышению экспрессии этого антигена у больных ОИМ (33,4+6,1; 25,3+1,3%, соотв.) по сравнению с контролем.

Анализируя распределение кластеров дифференцировки на лимфоцитах у больных ИБС, необходимо отметить, что достоверным оказалось лишь повышение CD95 у больных инфарктом миокарда, что указывает на существенное увеличение доли лимфоцитов, вошедших в активацию и готовых к апоптозу. Кроме того, у больных инфартом миокарда выявлена тенденция к повышению таких маркеров клеточной активности как CD25, HLA-DR и CD 16. Изменения фенотипа лимфоцитов в группе больных стенокардией не регистрировалось.

Выявленные изменения фенотипа лимфоцитов у больных инфарктом миокарда могут свидетельствовать об активном участии этих клеток в патогенезе заболевания. Активация лимфоцитов более выражена при прогрессирующих формах ИБС (нестабильной стенокардии и инфаркте миокарда), поэтому изменения фенотипа лимфоцитов у больных стабильным течением стенокардии существенно не отличаются от показателей контрольной группы.

КРИТЕРИЙ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИНФЕКЦИОННО-СЕПТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ У КАРДИОХИРУРГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

Сускова B.C., Хитрик Н.М.. Тельнюк Я.И.*, Саитгареев Р.Ш., Пец И.Д.

Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов М3 РФ,

*ГНЦ - Институт иммунологии М3 РФ

Гнойно-септические осложнения, остаются частыми у кардиохирургических больных. Возможность их прогнозирования по изменению иммунологических параметров весьма актуальна.

Цель: определение уровня относительной аффинности естественных антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий (ОАД) в сыворотке кардиохирургических больных как прогностического признака инфекционно-септических осложнений.

Материалы и методы. У 104 больных в отделении реконструктивной хирургии пороков сердца НИИ трансплантологии и искусственных органов М3 РФ поступивших для протезирования клапанов сердца определяли уровень относительной аффинности естественных антител к ОАД по методу Luxton R.W и Thompson E.J. модифицированного в отделении клинической диагностики и иммунокоррекции ГНЦ - Институт иммунологии М3 РФ (зав. Пинегин Б.В.). Средний возраст пациентов был 42+ 14 лет (от 16 до 67 лет). Больные были разделены на 2 группы: 1 - с неосложненным послеоперационным периодом (38 больных- 37%>), 2- с инфекционно-септическими послеоперационными осложнениями (66 больных- 63%).

Группы больных CD16+ CD18+ CD25+ CD95 + HIA-DR+

Стенокардия п=20, % Инфаркт миокарда п=18, % Контроль п=20, % 18,9±7,9 28,7±5,7 24,0±1,5 25,14±5,6 27,7±4,6 38,8±2,7 21,2±6,5 33,8±9,2 24,1 ±1,6 23,4±7,6 37,3±2,4* 11,8±1,6 23,6*7,4 33,4±6,1 25,3*1,3

Примечание: * -р<0,05 по сравнению с контрольной группой.

Инфекционно-септическими осложнениями считали: лихорадку неясного генеза, нагноение послеоперационной раны, передний медиастенит, ранний протезный эндокардит, прогрессирующая полиорганная недостаточность на фоне сепсиса.

Результаты. При ретроспективном анализе данных было установлено, что среди больных с осложненным послеоперационным периодом у 50 больных (76%) был снижен уровень относительной аффинности естественных антител к ОАД (590± 89 у.е.), а у 16 (24%) больных с более тяжелым течением послеоперационного периода аффинность составляла 823± 115у.е., что превышало средний уровень в группе (707±102 у.е.) и и могло быть связанно со скрытой предсуществующсй инфекцией. У больных 1 группы показатель аффинности изменялся в пределах нормы (1364±200 у.е.).

Выводы. У кардиохирургических больных сниженный уровень аффинности к ОАД является прогностически значимым критерием развития послеоперационных инфекционносептических осложнений и показанием к проведению профи-лактической/превснтивной иммунотерапии перед операцией.

СВЯЗЬ ОКСИДА АЗОТА, ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 И ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ С МАССОЙ МИОКАРДА ЛЕВОГО ЖЕЛУДОЧКА И РЕАКЦИЕЙ ЛУЧЕВОЙ АРТЕРИИ НА ПРОБУ С РЕАКТИВНОЙ ГИПЕРЕМИЕЙ У БОЛЬНЫХ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ

Суслова Т.Е.. Павлюкова Е.Н., Лихоманов К.С., Карпов Р.С.

НИИ Кардиологии ТНЦ СО РАМН, Томск, Россия

Оксид азота (N0), интерлейкин - 1 (1Ь-1), фактор некроза опухоли-а (ТОТа) являются факторами, влияющими на эндотелиальную функцию и тонус кровеносных сосудов, обсуждается их участие в пролиферации и гипертрофии гладкомышечных клеток. Однако недостаточно изучена связь оксида азота моноцитарного происхождения, фактора некроза опухоли - а и интерлейкина-1 с сосудистой реакцией на реактивную гиперемию и массой миокарда левого желудочка (ЛЖ), оцениваемой в В- режиме при эхокардиографическом исследовании (ЭхоКГ).

Целью работы явилось определение связей интерлейки-на-1, фактора некроза опухоли - а и оксида азота моноцитарного происхождения с реакцией плечевой артерии на реактивную гиперемию и массой миокарда ЛЖ у больных гипертонической болезнью.

Обследовано 15 больных с верифицированной гипертонической болезнью в возрасте от 35 до 55 лет (средний возраст 45,82±5,42 лет) и давностью артериальной гипертензии более 7 лет (10,02±4,02 лет) без гипертрофии ЛЖ. Критериями исключения являлись наличие коронарной болезни сердца, сахарный диабет, нарушение толерантности к углеводам, патология щитовидной железы, заболевания легких, печени, почек.

Всем пациентам проведено ЭхоКГ с определением массы миокарда ЛЖ (ММЛЖ) в В-рсжиме по форме площадь -длина ЛЖ, индекса ММЛЖ (ИММЛЖ), площади полостей ЛЖ в систолу и в диастолу, показателей систолической и диастолической функции ЛЖ. Изменения кровотока в лучевой артерии в ответ на реактивную гиперемию проводили по стандартной методике. Оценивали пиковую скорость кровотока (Ур.ч), максимальную конечную диастолическую скоростью кровотока (Уеё), усредненную по времени максимальную скорость кровотока, индекс периферического сопротивления (ЯІ), индекс пульсации (РІ), систолодиастолическое соотно-

шение (Б/Ю) в исходе, на 20, 40, 60 и 90 сек и на 2, 3, 4.5 после пробы реактивной гиперемии. Продукцию N0 моноцитами периферической крови оценивали но содержанию нитрит-нитрат ионов в супернатанте суточной культуры мононукле-арон активированных линонолнсахаридом с использованием реактива Гриеса. Уровень интерлейкина-1 и фактора некроза опухоли в сыворотке крови определяли мечодом иммунофер-ментного анализа.

Обнаружены связи продукции оксида азота с ИММЛЖ (т=0,90; р=0,037), площадью ЛЖ н систолу (г=0.90: р=0.037). Аналогичных связей цитокинов с ЭхоКГ показателями не выявлено. Систолическое и диастолическое АД (САД и ДАД) коррелировали с продукцией оксида азота (САД: г=0.97: р=0,048; ДАД: г=0,90; р-0,037) и интерлейкином-1 (САД: г=-

0.82; р=0,045).

Анализ взаимосвязей нровоеналительных ціпокипов и оксида азота с линейными показателями кровотока выявил корреляционные связи: исходным днаме гром просвета лучевой артерии (N0: г=-0,94: р=0,004; Т\'1-'а: І--0.94; р=-0,004) и диаметром артерии в ответ на реактивную гиперемию (ТЫрц на 2 мин: г=-0,94: р=0,04; на 5 мин: г=0.94: р=0,004), индексами периферического еопрот ивленпя и пульсации 20 сек и 3 мин после пробы реактивной гиперемии (20 сек : ТМчх - РІ: г=0,83; р=0,04; ТЫРа - К1: г=0,82: р -0.04; 3 мин ТКІ'-а - Р1: г=0,90; р=0,037; 1Ь-1 - Р1: г=-0,90; р г(),<)4) и систолодиаето-личсским соотношением на 20 сек (Ї^Ри: г=(),82: р=0,04).

11олучснные предварительные резулы аты свидет ельству-ют об участии интерлейкина-1 и фактора некроза онухолн-и в сосудистой реакции плечевой артерии в ответ на пробу с реактивной гиперемией. По всей видимости, в местной реї V-ляции сосудистого тонуса (особенно когда эн дот елнй подвергается различного рода натої енным воздействиям, в том числе про воспалительным шпокинам) участ вусі оксид азота не только эндотелиального, но и моноцитарного происхождения. Можно также предполагать учас тие оксида азот а, продуцируемого моноцитами, в формировании і ппертрофин левого желудочка.

ПРИНЦИПИАЛЬНЫЕ ПОДХОДЫ К РАЗРАБОТКЕ ИММУН0ФЕРМЕНТН0Г0 АНАЛИЗА ПЕСТИЦИДОВ НА ПРИМЕРЕ И30ПР0ТУР0НА

Сухаи Т.О.. Дзантнсв Ь.Ь., Жердев Л.В.

Институт биоорганической химии НАИБ. Минск, Беларусь, Институт биохимии им. Л. П. Баха РАИ, Москва, Россия

В настоящее время, когда пестициды стали неотъемлемой частью современных аі роіечнологнй. возникла необходимость в широком экологическом мопи торинге данных вешес і в. Хроматографические методы, традиционно используемые для определения пестицидов и их метаболитов, трудоемки, длительны, недостаточно специфичны и чувеч вительны. Более перспективными для широкою практического применения в анализе пестицидов иредс тавляюіся нммуноаналитпческне методы, иреимуществснно основанные па принципах т вердо-фазного иммуноферментного анализа (ИФА), соче тающего высокую специфичное!ь и чувствительность.

Цели и задачи исследования: разработать принципиальные подходы к созданию тест-системы для твердофазного ИФА пестицидов на примере широко используемою гербицида - изопротуроиа (!.ч). Для .тост ижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить основные аналитические параметры исследуемых аитисывороток к К - аффинность, специфичность, тит р:

2. Выбрать оптимальный для адсорбции на полистироло-вую матрицу коньюгат Is с белком-носителем, удовлетворяющим требованиям анализа;

3. Определить кинетический режим разработанной системы на различных стадиях анализа

Материалы и методы. Все исследования проводились методом непрямого конкурентного твердофазного ИФА на кроличьих антисыворотках к изопротурону, полученных в Институте биохимии им. Баха РАМН, Москва. Стандартные образцы изопротурона и других пестицидов (этидимирон, бенз-тимирон, метабензтиазурон, фенурон, которан, дикуран, хлор-сульурон) получены и оттестированы в Институте химических средств защиты растений (Москва). Использованные реактивы: Bovine Serum Albumin - BSA (Sigma), Soybean Trypsin Inhibitor - STI (TSN Pharmaceutical, USA), Ovalbumin - OVA (TSN Pharmaceutical, USA), Triton X-100 (Serva, USA), 2,2’-azino-bis (3-ethylbenzathiazoline-6-sulfonic acid)-diamonium salt

- ABTS (TSN Pharmaceutical, USA), антикроличий иммунопе-роксидазный коньюгат (НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Гамалеи, Москва).

Результаты:

1. Определены основных аналитических параметры антисыворотки к изопротурону - аффинность, специфичность, титр;

2. В результате сравнительного анализа коньюгатов изопротурона с различными белковыми носителями (BSA, OVA, TG) выбран оптимальный для адсорбции на полистирол коньюгат;

3. Оценена кинетика лимитирующей стадии анализа (стадии взаимодействия антигена с антителом), показано, что насыщение центров связывания может быть достигнуто в течение 15-20 мин в зависимости от концентрации антител.

На основе охарактеризованных компонентов разработана принципиальная схема тест-системы для ELISA изопротурона.

ИССЛЕДОВАНИЕ АКТИВАЦИОННЫХ МОЛЕКУЛ ЛИМФОЦИТОВ В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК ПРИ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К НПВП

Титова JI. Д.. Мясникова Т. М., Сидорович И. Г.

Институт иммунологии Минздрава РФ,

Москва, Россия

При непереносимости нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) патогенез острых реакций на медикамент до конца невыяснен, и основную роль отводят продуктам метаболизма арахидоновой кислоты - лейкотриенам и IL-1, которые при блокаде циклооксигеназ (СОХ1 и СОХ2) и при определенных условиях могут инициировать реакции гиперчувствительности. Известно, что СОХ-1 постоянно экспрессируется в организме и участвует в физиологических процессах, в то время, как появление СОХ-2 ассоциируется с воспалительными реакциями. В активированных Т-лимфоцитах мРНК СОХ-2 обнаруживалась в раннюю фазу активации. Ингибиторы СОХ-2 NS398 и Celecoxib ослабляли ранние и поздние события Т-клеточной активации, включая экспрессию мембранных молекул CD25 и CD71, продукцию IL-2, TNF-a и IFN-y, ( но не экспрессию CD69 молекул), которые составляют репертуар ТЫ ответа. Из этого следует, что супрессирующий эффект НПВП в большей степени проявляется именно в реакциях ТЫ лимфоцитов. На фоне подавления ТЫ активности нарушается динамическое равновесие в сторону усиления Th2 ответа в организме с развившейся воспалительной реакцией, а при аллергических заболеваниях в большинстве случаев - на фоне уже повышенного Th2 ответа. Возможно участие других механизмов в развитии гиперчувствительности к НПВП.

Действие салицилата Na не ограничивается блокирующим эффектом циклооксигеназ. Установлено его блокирующее действие на TNF-a (цитокин из репертуара Thl ответа) на уровне ядерных факторов транскрипции NF-кВ, через активацию р38 МАРК (mitogen-activated protein kinase). В литературе описаны случаи истинных аллергических реакций на НПВП, когда в крови пациентов обнаруживались антитела к аспирину.

С целью повышения результативности лабораторной диагностики лекарственной гиперчувствительности при наличии противопоказаний для проведении тестов in vivo исследовали активацию Т-лимфоцитов в культуре мононуклеарных клеток периферической крови (МНПК) цитофлуориметричес-ким методом с использованием моноклональных антител к мембранным молекулам активации лимфоцитов CD25 и CD69.

Обследованы 40 пациентов с диагнозом лекарственной гиперчувствительности в стадии реконвалесценции и поступившие для планового обследования и лечения аллергических заболеваний, а также 10 студентов медицинского института, которые составили контрольную группу. Статистическая обработка результатов проводилась по парному критерию Стьюдента.

Из обследованных была выделена группа пациентов (Ючело-век) с установленным диагнозом гиперчувствительности к аспирину и/или анальгину. Диагноз был подтвержден клиницистами и совпадал с результатами настоящего обследования В культурах клеток с медикаментом у пациентов с непереносимостью анальгина и аспирина определялось достоверно больше CD25 лимфоцитов по сравнению с лимфоцитами доноров и по сравнению с культурами клеток пациентов без медикамента (р<0,01).

В группе из 13 пациентов (21 проба) с гиперчувствительностью к НПВП исследовались спонтанная экспрессия CD69 молекул на лимфоцитах ( М±8; 4,83±1,0 %) и при добавлении в культуры клеток НПВП (М±8: 17,0±4,7 %). Разница в показателях была достоверной (р<0,01).

Для объяснения полученных результатов возможны два варианта: если анальгин выступает в роли аллергена , то сигнал идет через TCR (Т-клеточный рецептор), ras каскад и активацию транскрипционных факторов генов IL-2 и IL-2R. Этот путь активации может заканчиваться пролиферацией. В случае непереносимости НПВП, CD25 и CD69 молекулы могут экспрессироваться при воздействии лейкотриенов и IL-1 , синтез которого увеличивается при отсутствии антагониста ПГЕ2 в результате блокады циклооксигеназ, при этом возможны повышение функциональной активности лимфоцитов или апоптоз.

Выводы: Выявлено достоверное повышение экспрессии активационных молекул на мембранах лимфоцитов при добавлении причинного препарата в культуры МНПК у пациентов с гиперчувствительностью к НПВП .

Заключение.

Полученные результаты по исследованию активированных лимфоцитов в культурах клеток (in vitro) могут применяться в диагностике причинного медикамента при лекарственной гиперчувствительности к НПВП.

СОДЕРЖАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДКА

Трубицына И.Е.. Царегородцева Т.М., Соколова Г.Н., Серова Т.И., Чикунова Б.З., Ткаченко Е.В., Дубцова Е.А., Федотова Т.Ф., Сухарева Г.В.

ЦНИИ гастроэнтерологии, Москва, Россия

В патогенезе язвенной болезни желудка (ЯБЖ) существенное значение принадлежит биологически активным веществам

(БАВ) - вазоактивным медиаторам, интерлейкинам (1Ь), про-стагландинам(ПГ) регулирующим гемостаз, воспаление, иммунный ответ слизистой оболочки желудка.

Цель исследования: изучение содержания вазоактивных аминов гистамина (Г), серотонина (С), ацетилхолина (Ах) , ПГ в крови и в слизистой оболочке желудка, в биоптатах взятых из края язвы и 1Ь в периферической крови при ЯБЖ на разных сроках патологического процесса.

Материал и методы: содержание С,Г определяли методом 5ас1оуапцу1уас1, Ах методом НейЦтп. ИЛ в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с использованием тест-систем ТОО “Протеиновый контур” и “Цитокин”, С-Петербург. Обследовано 30 больных в стадии обострения и ремиссии, в возрасте от 25-74 лет, с продолжительность заболевания от 1 года до 25 лет.

Результаты: на ранних сроках обострения в крае язвы повышено содержание С - 4,3 мкг/г, норма - 2,4 мкг/г, содержание Г не менялось. Содержание Ах повышалось до 2,7 мг/г, норма 1,2 мг/г. Содержание ПГ снижалось. В периферической крови содержание С было несколько повышенным 0,22 мкг/мл, норма 0,08-0,16 мкг/мл, содержание Г не менялось, содержание АХ было на верхних цифрах нормы и несколько выше 0,8- 1,2 мг/мл, норма до 1,0 мг/мл. В эти сроки в сыворотке крови больных наблюдается увеличение концентрации 1Ь-8 до 225 пг/мл, 1Ь-1(3- 370 пг/мл, 1Ь-2 - 430 МЕ/мл. В период рубцевания язвы в крае язвы снижено содержание Ах - 0,7 мг/г, содержание С остается высоким - 3,4 мкг/г. Повышается содержание ПГ , но не достигает уровня нормы. В сыворотке крови повышено содержание С до 0,19 мкг/мл. Содержание Ах в пределах нормы. В периферической крови увеличено содержание 1Ь-6, 4 и Т№а, в то время как содержание 1Ь-1|3,

2, 8 приближается к норме(40-80 пг/мл).

Заключение: повышение и снижение содержания БАВ, вазоактивных медиаторов, 1Ь, ПГ при ЯБЖ подтверждает их непосредственное участие как в формировании язвенного дефекта , так и в процессах рубцевания, регулируя уровень кровотока в капиллярной сети и артсриолах, нарушая проницаемость сосудистой стенки, вызывая отек и гиперемию.

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ЦИТОКИНОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ

Царегородцева Т.М.. Серова Т.Н., Ильченко Л.Ю., Голованова Е.В., Якимчук Г.Н., Рогозина В.А., Сухарева Г.В., Трубицина И.Е., Лазебник Л.Б.

Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии, Москва, Россия

Цитокины, обладающие широким спектром функциональных свойств, играют важную роль в патогенезе хронических заболеваний органов пищеварения (ХЗОП), формируя сложную биологическую коммуникационную сетевую систему, регулирующую интенсивность воспалительных, иммунных, метаболических процессов.

Цель исследования: сравнительное изучение содержания про- и противовоспалительных интерлейкинов (1Ь) при ХЗОП различной этиологии в динамике патологического процесса.

. Материал и методы: содержание интерферона-у (1РТч!у), 1Ь-1(3, 2, 4, 6, 8, Т№а определяли иммуноферментным методом в периферической крови 360 больных язвенной болезнью желудка и 12-ти перстной кишки (ЯБ), желчекаменной болезнью (ЖКБ), хроническим гепатитом (ХГ), циррозом печени (ЦП), неспецифическим язвенным колитом (НЯК), глю-

теновой энтеропатией (ГЭ) и др. с использованием тест-систем “Протеиновый контур”, “Цитокин” (С. Петербург). Контрольная группа включала 15 клинически здоровых лиц.

Результаты: на ранних сроках обострения ЯБ, ЖКБ, ГЭ преобладает повышение содержания IFNy (790-1300 пг/мл), lL-ip-(290-1100 пг/мл), IL-2-(340-780 пг/мл), 1L-8- (210-620 пг/мл). По мерс развития патологического процесса возрастает уровень IL-6 (220-680 пг/мл), TNFa (220-860 пг/мл), IL-4 (360-980 пг/мл), в то время как содержание IFNy, 1L-1[3, 2, 8 снижается. Исследуемые интерлейкины играют важную роль в инициации и поддержании воспаления, иммунного ответа, активируют Т- и В-лимфоциты, фагоциты, хемотаксис, адгезию, продукцию простагландинов, стимулируют апоптоз, диф-ференцировку, пролиферацию клеток, регенерацию тканей и др. У большинства обследуемых больных ХЗОП повышение содержания 1L в периферической крови носит умеренный характер (150-300 пг/мл, в контроле менее 30 пг/мл), что соответствует показателям клинической, биохимической, морфологической активности заболевания. Однако, у ряда больных ЯБ, ЖКБ, ХГ в стадии обострения уровень IFNy, IL-1P, 8, 4, TNFa возрастал в 20-30 раз, достигая 2500 пг/мл и выше. При хронических прогрессирующих заболеваниях органов пищеварения, таких как аутоиммунный гепатит, ЦП, НЯК и др. содержание IL было в пределах 250-830 пг/мл. При алкогольных поражениях печени, гепатоцеребральной дистрофии, злокачественных заболеваниях уровень определяемых 1L не превышал 190 пг/мл.

Заключение: ХЗОП сопровождаются нарушением цито-кинового баланса, выраженным в различной степени в зависимости от локализации патологического процесса, этиологического фактора, стадии и активности заболевания. Динамика изменений определяемых цитокинов имеет прогностическое значение при ХЗОП.

ДИАГНОСТИКА РАННИХ И СКРЫТЫХ ФОРМ СИФИЛИСА

'Чернышова И.Н.. 2Новоселов B.C., 'Гаврилова М.В., 'Сидорова Е.В.

,ГУ НИИ вирусных препаратов РАМН;

М.М.А. им. Сеченова, Москва, Россия

Рост числа малосимптомных и скрытых форм сифилиса требует развития методов диагностики, позволяющих выявлять заболевание на ранних стадиях. При любых заболеваниях самыми ранними антителами (АТ) к инфекционному агенту являются АТ класса М. Особенностью иммунного ответа на Т. pallidum является выработка антитрепонемных АТ не только при первичном заражении сифилисом, но и при его рецидивах и реинфекции, поэтому появление IgM-AT служит показателем наличия в организме вирулентного возбудителя.

Чрезвычайно важно выявление IgM-AT ктрепонеме у детей, рожденных больными сифилисом матерями, поскольку наличие таких АТ свидетельствует об инфицировании и позволяет диагностировать врожденый сифилис. Все это диктует необходимость раздельного определения IgM и IgG АТ. С этой целью нами были разработаны непрямой и ловушечный иммуноферментные методы (ИФА) определения IgM и IgG антитрепонемных АТ.

В непрямом ИФА планшеты покрываются очищенным трепонемным антигеном, не реагирующим с иммуноглобулинами здоровых людей, а AT IgM и IgG классов, содержащиеся в сыворотках инфицированных пациентов, выявляются с помощью пероксидазных конъюгатов моноклональных АТ мыши к ц- и у- цепям иммуноглобулинов человека. В лову-

шечном ИФА лунки планшета сенсибилизируются моноклональными АТ к Рс-фрагменту человека, а ^М-АТ к тре-понеме выявляются с помощью пероксидазного конъюгата очищенного трепонемного антигена.

Использование непрямого и ловушечного ИФА для выявления АТ в сыворотках детей, рожденных больными сифилисом матерями, и при половых контактах описано нами ранее (Сидорова, Ляхов, 1995). Дифференцированное определение и АТ в сыворотках детей с подозрением на врожде-ный сифилис в ряде случаев показало отсутствие АТ при наличии АТ класса (материнских). Определение ^М АТ в разные сроки после половых контактов позволило выявлять такие АТ уже на 10-12 дни, когда какие-либо другие признаки заболевания еще отсутствовали.

Известно, что современные рутинные методы дают значительное количество ложно-положительных реакций, особенно у лиц пожилого и старческого возраста. В настоящей работе ИФА был использован для определения и АТ у лиц пожилого возраста с положительными реакциями на сифилис (ЛСР, РИФ, РИБТ, РИГА). Среди пациентов до 75 лет были 52 женщины и 56 мужчин; старше 75 лет - 42 женщины и 17 мужчин. У всех пациентов имелись различные рекуррентные заболевания. По результатам непрямого ИФА пациенты были разделены на 5 групп: ^М(-)^С(-) - 71 человек; ^М(-)1§0(+) - 48; ^М(+)^0(-) - 15; ^М(+)^в(+)-

10 и ^М(?) ^0(?) - 23 человека. Таким образом, у 71 человека из 167 обследованных (42%) с помощью непрямого ИФА удалось предупредить ошибочную диагностику латентно протекающей сифилитической инфекции.

Особый интерес представляют пациенты 3-й группы, у которых выявляются 1"М-АТ (в отсутствие ^С-АТ) и которые не имеют в анамнезе диагноза заболевания сифилисом. Для исключения ложно-положительной реакции, обусловленной возможным наличием ревматоидного фактора, сыворотки этих пациентов в настоящее время исследуются в лову-шечном ИФА.

Обсуждаются возможные причины появления ложно-по-ложительных реакций у лиц пожилого возраста.

ПРЕДСТАВЛЕНИЕ О ЦЕЛОСТНОМ СОСТОЯНИИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У БОЛЬНЫХ ТРАВМАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ

Чсснокова И.Г.. Г.П. Котельников

Самарский государственный медицинский университет, Самара, Россия

Введение. Введение понятия “травматическая болезнь” в настоящее время отвечает потребностям здравоохранения, медицинской науки. По нашим представлениям травматическая болезнь представляет собой синдромокомплекс компенсаторно-приспособительных и патологических реакций всех систем организма в ответ на травму различной этиологии, характеризующийся стадийностью и длительностью течения, определяющий ее исход и прогноз для жизни и трудоспособности (Г.П. Котельников, И.Г. Чеснокова, 1996). При травмах поражение в иммунной системе наблюдаются с первых часов и сохраняются до1 года и более.

Цель и задачи - изучить с применением математического моделирования, патогенетическое значение иммунных нарушений при травматической болезни

Материалы и методы. Проведено комплексное клинико-иммунологическое обследование 96 больных (в возрасте 20-50 лет) травматической болезнью при консерва-

тивном способе лечения переломов бедра - скелетном вытяжении с последующим наложением гипсовой повязки в течение 1 года с момента получения травмы. Иммунологические методы исследования включали определение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с помощью моноклональных антител серии ЛТ (CD3 , CD4 , CD8+ CD72 , HLA-DR клетки), изучение чувствительности Т-лимфоцитов к теофиллину, исследование содержания иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови, фагоцитарной функции, активности комплемента, циркулирующих иммунных комплексов. Контроль - 50 здоровых доноров того же возраста. Комплексную оценку функционального состояния иммунологической системы осуществляли с помощью системного многофакторного анализа и математического моделирования (Б.А. Углов, М.В. Углова, 1987,1988, 1994).

Основные результаты. Проведенный анализ математической модели функционального состояния иммуногенеза при травматической болезни показал, что для больных характерно значительное отклонение интегрального показателя в сторону отрицательных значений во все сроки обследования. Критическими в отношении гнойно-септических осложнений были 1-е - 30-е сутки, когда обобщенный показатель составлял в среднем Хв =-0,3129 — 0,4922. Клинически в это время у 2,4% - септическое состояние, у 7% развивался острый бронхит, у 5% -острая очаговая пневмония, у 5% -нагноение в области введения спицы при скелетном вытяжении, у 16% -грипп и ОРВИ. Данные иммунограмм свидетельствовали о наличии смешанного иммунодефицита, так как общее количество лимфоцитов уменьшалось на 51% (Р=0,05), количество Т-лим-фоцитов - на 70% со значительным снижением их мембранных функций (Р=0,05), HLA -DR лимфоцитов на 90% (Р=0,05), Т- хелперов/ индукторов - на 40% (Р=0,05), повышалось количество Т-супрессоров/цитотоксических на 37% (Р=0,05), снижалось число В-лимфоцитов на 82% (Р=0,05), концентрация IgA в 3 раза (Р=0,05), IgG - в 2 раза (Р=0,05), IgM - на 75% (Р=0,05), активность комплемента в 4 раза (Р=0,05) , фагоцитоз на 49,5% по сравнению с контролем (Р=0,05). Это связано с наличием у всех пациентов травматического шока 1 и П степени, выраженной кровопотерей (1,5 - 2,5 л), тяжестью травмы, мерами по выведению из шока (переливанием крови, кровезаменителей; введением обезболивающих, наложением скелетного вытяжения). Незначительный рост активности иммунных процессов имелся с 30-х по 90-е сутки с момента получения тяжелой травмы. В последующем отмечалось прогрессивное уменьшение интегрального показателя системы, а к 1 году он составлял Хв= - 0,3711 ±0,0047, что указывало на выраженное снижение иммунореактивности у таких больных. Это подтверждалось клинически: у 78% больных в сроки от 6-и месяцев до 1 года наблюдались инфекционные и воспалительные проявления в виде очаговой пневмонии, пиодермии, ангины, гриппа и ОРВИ (чаще 1 раза в месяц), характеризующиеся вялым, затяжным течением с осложнениями; у 32% было замедление консолидации переломов. Лабораторные данные указывали на наличие в это время иммунодефицита смешанного тина, так как было снижено количество Т-лимфоцитов на 44% (Р=0,05); Т-активных лимфоцитов на 20% (Р=0,05); Т-хелперов/индукторов на 40% (Р=0,05); Т- теофиллин-чувствительных лимфоцитов на 20% (Р=0,05); концентрация IgA на 66,7% (Р=0,05), IgG - в 2 раза, IgM - на 67% (Р=0,05), активность комплемента в 2 раза, фагоцитоза на 49,5% (Р=0,05) по сравнению с группой контроля. Вычис-

ление коэффициентов влияния у этой категории больных позволило достоверно показать зависимость направленности общих иммунных реакций от состояния клеточного звена, раскрыть тонкий механизм формирования посттрав-матического иммунодефицита, связанного с длительной Т-клеточной супрессией.

Следовательно, иммунологические нарушения при травматической болезни имеют патогенетическое значение и требуют своевременной коррекции.

КЛИНИКО-ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО И ЦИТОКИНОВОГО СТАТУСА ПРИ ЦИРРОЗЕ ПЕЧЕНИ ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Шапиро В.Я. Сек Ок Суп, Кноринг Б.Е.

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования, Россия

Введение. Несмотря на успехи современной медицины, цирроз печени и сегодня остается одной из самых серьезных проблем гепатологии. Смертность от циррозов печени во всем мире составляет около 300000 человек в год и имеет неуклонную тенденцию к росту. Однако полиморфизм симптомов при циррозе печени, его бессимптомное течение у 20% больных, обусловливают трудности в его диагностике и определении степени активности. Известно, что цирроз печени развивается на фоне значительных изменений иммунного ответа и раз-балансирования в продукции цитокинов.

Цель исследования заключалась в определении взаимосвязи показателей иммунного и цитокинового статуса с кли-нико-биохимическими параметрами, характеризующими активность процесса, и выделении наиболее информативного для диагностики и прогноза цирроза печени комплекса иммунологических и биохимических исследований.

Материалы и методы. Обследовано 38 больных циррозом печени вирусной этиологии. Из них активный процесс диагносцирован у 20 пациентов, неактивный у 18, стадия компенсации установлена у 19 человек, декомпенсации также у 19 лиц. Контрольную группу составили 10 практически здоровых лиц. Иммунологическое обследование включало определение популяций и субпопуляций лимфоцитов(СОЗ ,CD4 , CD8 , CD 14 , CD20 , HLA-DR ), определение уровней иммуноглобулинов классов IgM, IgG, IgA, ЦИК, а также содержания IL-6, IL-10, TNF-cx в сыворотке крови. Изучение клинико-биохимических показателей включало общепринятый комплекс исследований.

Результаты исследования. Установлено, что больные с высокой степенью активности цирроза печени, выраженной декомпенсацией характеризуются снижением числа CD3 , CD8 -лимфоцитов, повышением экспрессии антигенов HLA-DR и CD14 , значительным нарастанием продукции IgA, IgG, IgM и концентрации ЦИК, резким увеличением уровня IL-6, IL-10, TNF-a. При менее тяжелых формах цирроза (неактивный, компенсированный) наблюдается сохранение или даже увеличение количества CD3 и CD8 -лимфоцитов, нормальное содержание CD14 , HLA-DR , CD20 , умеренное увеличение синтеза иммуноглобулинов, уровня ЦИК и продукции IL-6, IL-10, TNF-a, достоверно более низкое, чем у больных с активным декомпенсированным процессом. Отмечена прямая взаимосвязь эндогенной продукции IL-6, IL-10, TNF-a с биохимическими показателями, характеризующими активность патологического процесса в печени и обратная с параметрами, отражающими функциональную состоятельность печени. Анализ клинической значимости иммунологических и кли-

нико-биохимичсских показателей позволил выделить критерии прогноза течения и тяжести процесса. Наиболее информативными тестами для раннего определения активности цирроза печени являются высокий уровень TNF-a (>35пг/мл), IL-10 (>30пг/мл), у-глобулинов (>24%), тимоловой пробы (>5ед.). Каждая из этих проб соответствовала активному процессу в 83-100% случаев против 0-5% при неактивном. Наиболее значимыми для раннего выявления декомпенсации являются повышение уровня TNF-a (>35пг/мл), IL-6 (>0,5пг/ мл), CD 14 (>13%), ЦИК (>120у.с.) и у- глобулинов (>24%). Каждый из этих показателей соответствовал декомпенсиро-ванному циррозу печени в 50,0%-85,7% против 0-6,7% при компенсированном. Анализ выделенных критериев активности и стадии заболевания показал, что большинство диагностически значимых параметров для определения активности и декомпенсации совпадают. Однако повышение экспресии CD14 (>13%) характерно только для декомпенсированного цирроза печени независимо от степени активности.

Таким образом, тяжесть цирроза печени коррелирует с интенсивностью синтеза цитокинов, степенью депрессии Т-клегочного иммунитета, активацией гуморального звена, экспрессией молекул активации и маркеров моноцитов. Определенные интервалы ряда лабораторных показателей могут служить критериями неблагоприятного течения заболевания-.Установленные взаимосвязи уровней параметров иммунитета с другими клинико- лабораторными показателями и особенностями течения цирроза печени указывают на клиническую значимость комплексного учета цитокинового, иммунного и биохимического статуса больных.

К ИНФОРМАЦИОННЫМ СВОЙСТВАМ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНОГО ИНДЕКСА ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ПАТОЛОГИИ

Шутко А.Н.. Екимова Л.П., Шумский И.А., Лыткина И.Ю.

Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт. Санкт-Петербург, Россия

Суммарные популяции CD4* и CD8+лимфоцитов, используемые для расчета иммунорегуляторного индекса(ИРИ), неоднородны и содержат незрелые составляющие в виде “индукторов” (CD4+,Leu8+) и “прссупрессоров” (CD8\1 lb*,28 [Dammle N,Engleman E, 1989]. Вопрос о вкладе зрелых компонент (“хелперов” и цитотоксических “киллеров”) в формирование величины ИРИ не ясен, хотя именно они часто подразумеваются при интерпретации индекса.

Целью работы явилось уточнение степени влияния ранних и зрелых компонент CD4* и CD8* субпопуляций на величину отношения CD47CD8*.

Методика: Источником лимфоцитов служила периферическая кровь 38 больных неоперабельным почечноклсточ-ным раком и раком яичников 1II-IV стадии, полученная до, в процессе или после лечения. Фснотипирование клеток осуществляли на флуоресцентном микроскопе “OPTON” с ди-гитальной системой регистрации по программе Photoshop-

6. Основные антитела: “Dako”,CD4(FITC),CD8(FITC); дополняющие: Becton Dickinson,Leu8(PE),Leu 15/ CD 11 b(PE). Статистическая обработка данных - по программе “Excel” с использованием трех рядов парных измерений: I - CD4V CD8+: II - CD4\Leu8V CD8+, 11 b+; III - (CD4*- CD4+,Leu8+)/( CD8+-CD8Mlb+).

Результаты: Минимаксные значения для ряда I составили 0,11-2,03; для ряда II - 0,25-14; и для ряда III - 0,1-1,36.

Зависимость значений ряда II (ранние клетки) от значений ряда 1(х) аппроксимированы в программе степенным уравнением:

II =2,16х124; R2=0,59;

или логарифмическим

11=0,35е R2=0,66.

Зависимость значений ряда Ш(зрелые клетки) от значений ряда 1(х) удовлетворяют линейному уравнению :

III=0,54x+0,l 1 ;R2=0,59.

Графический анализ установленных связей показывает, что, например, 4-х кратное изменение ИРИ(1) с 0,5 до 2,0 сопровождается > 7-ми кратным увеличением отношения II, и лишь =2,5-кратным увеличением отношения III. Важно подчеркнуть при этом примерное равенство величин достоверности аппроксимации R2.

Заключение: Колебания ИРИ при злокачественной патологии формируются в основном за счет соотношения ранних CD8+ и CD4+ клеточных форм (пресупрессоры, индукторы) и практически не зависят на этом фоне от соотношения зрелых хелперов, супрессоров и цитотоксических лимфоцитов.

ПРИМЕНЕНИЕ КОНЪЮГАТА ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ С ИММУНОГЛОБУЛИНАМИ ЧЕЛОВЕКА В КАЧЕСТВЕ КАЛИБРАТОРА В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕ АУТОАНТИТЕЛ К ТИРЕОГЛОБУЛИНУ

Шербань А.И.. Марчук С.И.

Институт биоорганической химии НАН Беларуси, Минск, Беларусь

В иммуноферментном анализе (ИФА) аутоантител (ауто-АТ) к тиреоглобулину (ТГ) в качестве калибратора (стандарта) используются аутоАТ, которые получают из пуловых сывороток крови больных аутоиммунными тиреоидными заболеваниями с высокой концентрацией аутоАТ. Однако при организации серийного производства иммуноферментных тест-систем возникает проблема получения таких сывороток в больших количествах.

Целью настоящей работы было изучение возможности применения в качестве калибратора в твердофазном двухсай-товом ИФА аутоАТ к ТГ конъюгата на основе доступных в больших количествах компонентов - поликлональных антител (полиАТ) к ТГ и lgG человека.

Для получения конъюгата использовали обогащенные фракции IgG, которые выделяли фракционированием с помощью сульфата аммония из кроличьей высокоспецифичной антисыворотки к ТГ и из нормальной сыворотки крови человека. ПолиАТ к ТГ и IgG человека ковалентно сшивали с помощью бифункционального реагента - глутарового альдегида при молярном соотношении полиАТ к IgG 1:2. Очистку конъюгата и очистку аутоАТ к ТГ из пуловой сыворотки крови больных тиреоидитом Хашимото осуществляли методом иммуноаффинной хроматографии на ТГ-сефарозе 4В. В двух-сайтовом ИФА аутоАТ использовали высокоочищенный ТГ для иммобилизации на поверхности лунок полистирольных микропланшетов и иммуноферментный конъюгат - кроличьи АТ к IgG человека-пероксидаза хрена.

При проведении ИФА аутоАТ к ТГ стандартную калибровочную кривую строили на основе аффинноочищенных аутоАТ к ТГ (диапазон концентраций 0-4000 МЕ/мл), откалиброванных относительно международного стандарта 1ЯР 65/93. Калибровочная кривая, построенная с применением в качестве калибратора конъюгата полиАТ к ТГ с человека, практически совпадала со стандартной кривой. При использовании калибровочных кривых, построенных на основе аутоАТ и конъюгата, для расчета концентраций аутоАТ в сыворотках крови здоровых доноров (п=87), больных тиреоидитом Хашимото (п=17) и диффузным токсическим зобом (п=23) были получены совпадающие результаты (г=0,997; р<0,01).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о возможности применения конъюгата полиАТ к ТГ с человека в качестве калибратора в двухсайтовом ИФА аутоАТ (^О) к ТГ. Доступность компонентов и простой, хорошо воспроизводимый способ получения конъюгата делают возможным использование его в серийном производстве ИФА тест-систем.

ИНФОРМАТИВНОСТЬ ИММУНОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОМОЦИСТЕИНА У БОЛЬНЫХ С НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ МОЗГОВОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

Эмануэль Ю.В., Скоромец А.А., Катышева Н.С., Пленкова В.Г.

Санкт-Петербургский Государственный медицинский Университет им. акад. И.П.Павлова, Городское объединение медико-социальной экспертизы,

Санкт-Петербург, Россия

В настоящее время среди приоритетных проблем клинической неврологии сосудистые заболевания головного мозга прочно удерживают лидирующее положение. Известно, что большинство ишемических инсультов развиваются как осложнения хронической сосудисто-мозговой недостаточности (ХСМН), вследствие атеросклеротического процесса. К факторам риска возникновения острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК) относят гипергомоцистеинемию.

Целью работы явилось использование иммунохимической технологии исследования концентрации гомоцистеина в крови и применение методов медицинской информатики, использующих интервальное распределение параметра, на основании которого, используя алгоритмы распознавания образов (стратегия Байса, Нермана-Пирсона) формируется виртуальный компьютерный образ изучаемого состояния как основа базы знаний для характеристики исследуемого пациента.

Показано развитие ОНМК при более высокой концентрации гомоцистеина крови в достоверно более молодом возрасте. При этом наличие корреляции между концентрацией гомоцистеина и СРБ в крови может свидетельствовать об активном течении атеросклероза при повышении концентрации гомоцистеина. Установлено, что у больных с недостаточностью мозгового кровообращения без выраженных клинико-ла-бораторных проявлений атеросклеротического поражения в 4,6 раза чаще концентрация гомоцистеина нормальна, нежели при наличии этих признаков. Выявлена взаимосвязь между уровнем гомоцистеина и концентрацией мочевины крови (г = 0,725), которая имеет высокую достоверность (р < 0,00001). Интересно отметить, что эта корреляция практически отсутствует в диапазоне нормальных концентраций обеих аналитов (г = 0,125, р > 0,05). В подгруппе с пограничными и повышенными концентрациями метаболитов эта корреляция

носит отчетливый характер (г = 0,856, р < 0,00001). Кроме того выявлена корреляция и с величиной ее понефронной экскреции (р = 0,0306, г = -0,41). Возможно, почечная гемодинамика, зависящая от состояния сосудистой стенки, подвержена “повреждающему” действию “независимого фактора”, каким является гомоцистеин. Повышение уровня гомоцисте-ина может определяться как нарушением почечной гемодинамики, характерной для ишемической болезни почек, так и свидетельствовать об изменении почечного порога реабсорбции этой аминокислоты, обусловленного ишемическим повреждением тубулярных систем.

Определено предсказательное диагностическое значение лабораторных признаков, косвенно отражающих уровень го-моцистеина с ошибкой в 6,7%: дискриминанта осмолярнос-ти, концентрация креатинина, мочевины и триглицеридов крови.

В группе больных с ХНМК, имеющих экстравазальный генез окклюзии сосудов, обеспечивающих кровоснабжение головного мозга, уровень нитратов и нитритов, рассматриваемый как критерий продукции оксида азота в эндотелии сосудов, не зависит от уровня гомоцистеина в крови.

У больных с ХНМК, имеющих инструментально подтвержденные интравазальные признаки окклюзии сосудов, обеспечивающих кровоснабжение головного мозга, уровень нитратов и нитритов определенным образом взаимосвязан с концентрацией гомоцистеина в крови, судя по корреляционному отношению: нитраты и нитриты/гомоцистеин равному 0.682, р = 0.01086, хотя прямая зависимость признаков не выявлена (г = 0.232, р = 0.26611).

КОМПЛЕКСНЫЕ СКРИНИНГОВЫЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА

Ястребова Н.Е.. Ванеева Н.П.

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Москва, Россия

Цель исследования состояла в разработке скрининговых тест-систем на основе антигенов условно-патогенных микро-

организмов и препаратов органоспецифических антигенов, выделенных из тканей органов человека, и изучении гуморального иммунитета у различных групп здоровых и больных людей.

Объектом исследования явились препараты клеточных стенок и другие антигены, выделенные из бактерий S.aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus, S. pneumoniae, Streptococcus sp., M. luteus, P. aeruginosa, E. coli, P. vulgaris, P. mirabilis, K. pneumoniae, H. influenzae, S. minnesota Re, Y. enterocolitica, a также препараты органоспецифических антигенов (микросо-мальные фракции), выделенные из гипофиза, щитовидной железы, желудка, надпочечника, яичника, поджелудочной железы, легкого, сердца, почек, печени, тонкого и толстого кишечника. Анализу с помощью ИФА подвергли более 2000 сывороток крови здоровых и больных различными заболеваниями людей.

В результате выполненных исследований разработаны не имеющие аналогов скрининговые иммуноферментные системы для изучения гуморального антибактериального и проти-вотканевого иммунитета, обладающие высокой специфичностью, чувствительностью и надежностью. С помощью этих тестов изучено состояние гуморального иммунитета у здоровых и больных различными заболеваниями людей. Выявлена высокая частота позитивных реакций сывороток крови доноров г. Тулы с антигенами щитовидной железы. Установлена корреляция более частого определения антител к S. aureus с высеваемостью этого вида возбудителя из помещений станций метрополитена у работников московского метрополитена. Показано, что при бронхо-легочных, желудочно-кишечных и аутоиммунных заболеваниях человека в 11%, 16% и 26% случаев соответственно высокий уровень антител к бактериальным антигенам сочетается с высоким уровнем IgG антител к органоспецифическим антигенам. Установлено, что при сахарном диабете и аутоиммунном тироидите, в большей степени, чем при других эндокринопатиях, гуморальный аутоиммунитет представлен спектром аутоантител ко многим органам эндокринной системы.

Выявлены перекрестные реакции между антигенами щитовидной железы и антигенами S. aureus, Е. coli, P. mirabilis и Y. enterocolitica.