МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ СКРЫТОЙ АНОМАЛЬНОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ГЕМОГЛОБИНА К ВОЗДЕЙСТВИЮ МЕТГЕМОГЛОБИНОБРАЗОВАТЕЛЕЙ Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Л ИТЕРАТУРА

Басан Л. Физиол. ж. СССР, 1955, № 1, с. 95. — В о д о л а з с к и й Л. А. Бюлл. экспер. биол. Прилож., 1957, № 1, с. 59. — Г а г у а Е. Д., Балуашвили А. А. Теор. и практ. физ. культуры, 1955, № 7, с. 547. — Гуменер П. И., Полторак С. А. В кн.: Новые физиологические методы в гигиене. М., 1960, с. 32. — Клецов Г. И. Прибор для регистрации дыхания. Учен, записки Белорусск. ин-та физической культуры, 1957, в. 1, с. 105.—Мануйлов И. А. Теор. и практ. физкультуры, 1953, № 12, с. 880. — Р о з е н б л а т В. В. В кн.: Материалы 3-й (зональной) научно-практической конференции по врачебному контролю и лечебной физкультуре. Свердловск, 1959, в. 2Г с. 73. — Сарычев С. П. В кн.: Спортивная медицина. М., 1959, с. 133.— Он же. В кн.: Материалы конференции по методам физиологических исследований человека, 1962, с. 163. — Ющенко А. А., Чернавкин Л. А. Сов. невропатол., психиатр., 1932, т. 8. с. 327. — Nehbw., Klin. Wschr., 1938, Bd 17, S. 1807. — S perry С. I. Ir С a d s d e n C. P., R a d г i g u e z E. et al., Science, 1961, v. 134, p. 1423.

Поступила 4/II 1965 г.

УДК 613.63+ 616.153.963.43-02:6 (Г».7

МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ СКРЫТОЙ АНОМАЛЬНОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ГЕМОГЛОБИНА К ВОЗДЕЙСТВИЮ МЕТГЕМОГЛОБИНОБРАЗОВАТЕЛЕЙ 1

JI. Э. Горн

Институт гигиены труда и профессиональных заболеваний, Ленинград

Неблагоприятные последствия влияния даже малых доз метгемо-глобинобразователей можно предотвратить, предвидя аномальную индивидуальную реакцию организма. Существующие методы лабораторного выявления такого состояния основаны на определении ряда внутри-эритроцитарных ферментов и в первую очередь глюкозо-6-фосфатдегид-рогеназы, устойчивости восстановленного глютатиона при воздействии нэ кровь ацетилфенилгидразина (тест Beutler) и скорости обесцвечивания в присутствии крови красителя блестящего крезилового голубого (Bernstein). Эти косвенные методы сложны, ненадежны и излишне специфичны; каждый из них позволяет оценить значение только какого-либо одного компонента сложной восстанавливающей метгемоглобин системы. Одновременное же использование всех указанных методов еще более сложно.

Вследствие этого рассмотренные методы нельзя считать подходящими для массового профилактического обследования людей при решении вопроса о возможности их допуска на производства, где возможен контакт с метгемоглобинобразователями. Совершенно очевидна необходимость разработки прямого, сравнительно простого и быстро выполнимого неспецифического градуального теста, пригодного для обследования возможно большего числа людей.

В основу предлагаемого нами теста положено фотометрическое определение количества образующегося метгемоглобина при внесении в суспензию исследуемых эритроцитов метгемоглобинобразователя в количестве, вызывающем у взрослых людей, не соприкасающихся с такого рода агентами, образование в среднем 50% метгемоглобина. Усло-

1 Удостоверение о регистрации за № 51007 с приоритетом от 5/II 1965 г.

вия постановки пробы воспроизводят in vitro весь комплекс процессов, протекающих в крови in vivo при попадании в организм метгемоглобин-образователя, т. е. процессы образования и восстановления метге-моглобина в цельных нативных эритроцитах. Полупереход гемоглобина в метгемоглобин удобен тем, что он позволяет выявить случаи как повышенной, так и пониженной чувствительности.

В качестве метгемоглобинобразователя выбран солянокислый гидро-ксиламин, так как среди других метгемоглобинобразователей только этот реактив широко доступен, устойчив, бесцветен, водорастворим и в отличие от нитрита натрия способен, как и ряд других промышленных ядов, образовывать истинный внутриэритроцитарный метгемоглобин. Для убыстрения и упрощения постановки пробы использована конечная концентрация гидроксиламина, обеспечивающая полупереход гемоглобина в метгемоглобин при комнатной температуре 20° за 30 мин.

Содержание метгемоглобина в исследуемой пробе мы определяли с помощью визуального фотометра, исходя из значений оптической плотности 2 других проб той же крови с нулевым и стопроцентным содержанием метгемоглобина. Нарушение постоянства стехиометрического соотношения между количествами реагирующего гидроксиламина и внутриклеточного гемоглобина из-за переменного содержания последнего не очень существенно. Связанная с этим ошибка входит в качестве одного из компонентов в суммарную ошибку метода, расширяя тем самым значение пределов разброса величин индивидуальной чувствительности, встречающихся в норме. Такое заведомое расширение границ нормы можно было бы избежать, определяя заранее содержание гемоглобина в крови и используя затем постоянное эквимолярное количество гидроксиламина. Однако, учитывая ориентировочно-отборочный характер предлагаемого теста, мы предпочли поступиться широтой границ нормы, выигрывая при этом на простоте и скорости пробы. Ошибка и воспроизводимость определения не выходят за пределы ±5% метгемоглобина.

Пропись проведения теста такова.

Реактивы и оборудование: 1) 0,05% водный раствор аммиака, приготовляемый из концентрированного 25% раствора его; 2) цитратно-физиологический антикоагулянт-ный раствор, приготовляемый путем смешения 60 мл 1 % раствора хлористого натрия с 4,0 мл воды, с последующим растворением в смеси 1 г цитрата натрия; 3) 3,7% раствор глюкозы; 4) 0,01 % раствор солянокислого гидроксиламина, приготовляемый каждый раз заново десятикратным разведением водой; раствор не стоек; 5) центрифуга на 3000 об/мин; 6) водоструйный насос; 7) универсальный или горизонтальный визуальный фотометр ФМ. Использование фотоэлектроколориметров нежелательно из-за отсутствия в них оптимального светофильтра, что ведет к значительному увеличению ошибки метода.

Определение. В 2 химические пробирки, предназначенные для определения величин светопоглощения проб крови с нулевым и стопроцентным содержанием метгемоглобина, вносят 3,5 и 2 мл 0,05% раствора аммиака. В 3-ю центрифужную пробирку, в которой будет производиться собственно определение чувствительности, вносят 2,9 мл цитратно-физиологического раствора. Во все 3 пробирки вносят по 0,1 мл крови, пробы перемешивают и добавляют к ним по 0,1 мл 3,7% раствора глюкозы. После повторного перемешивания в 3-ю пробу вносят 0,6 мл, а во 2-ю—1,5 мл 0,01% солянокислого гидроксиламина, что достаточно для полного перевода гемоглобина в метгемоглобин.

Затем пробы вновь тщательно перемешивают и инкубируют точно 30 мин. при комнатной температуре (18—22°). Во время инкубации 3-ю пробирку заранее уравновешивают, после чего ее центрифугируют 5 мин. при 3000 об/мин.

Прозрачную и бесцветную надосадочную жидкость возможно полнее отсасывают стеклянным капилляром, соединенным с водоструйным насосом (остаток этой жидкости не должен превышать 0,1 мл), а осадок эритроцитов тщательно гемолизируют в 3,5 мл 0,05% раствора аммиака

Все 3 гомолизата немедленно фотометрируют в 1 см кюветах при светофильтре № 3 (619 ммк) против воды.

1 Специальная проверка показала, что отмывка эритроцитов от остатка гидроксил амина не нужна.

Пример расчета. Светопоглощение 1-й пробы с нулевым содержанием метгемогло-■бина (Е])—0,15; светопоглощение 2-й пробы со стопроцентным содержанием мет-темоглобина (Е2) ■— 0,86; светопоглощение 3-й пробы с искомым содержанием метге-моглобина (Е3) — 0,57.

100 (£3 — Ех) 100(0,57 — 0,15) „л Содержание метгемоглобина = —^ _^-=-д _д дд- 59% .

С помощью предлагаемого теста обследовано 176 человек, не соприкасавшихся с метгемоглобинобразователями и 50 контактировавших с ними в своей производственной деятельности. Содержание метгемоглоби-на колебалось от 24 до 75%, т. е. в 3 раза. Ввиду того что различия между обеими группами обследованных не обнаружены, мы в дальнейшем анализировали весь материал вместе. Частота обнаружения отдельных значений чувствительности к метгемоглобинобразователям укладывается в кривую нормального распределения Гуасса. Доверительные границы значения среднего арифметического составляют 43—57%. Поскольку за пределы ±Зо (34—66% метгемоглобина) выходит 17% обнаруженных величин (29 из 176 человек), мы считаем, что в обследованную группу попали лица с нормальной, повышенной и пониженной чувствительностью к метгемоглобинобразователям. Присутствие 15 человек с пониженной чувствительностью естественно; такие случаи многократно описывались в литературе, посвященной резистентности и привыканию к действию яда (Ре1гу).

Следует отметить, что рекомендуемый нами тест предназначен лишь для выяснения степени резистентности внутриэритроцитарного гемоглобина к действию метгемоглобинобразователей. Информации о чувствительности других органов, тканей и организма в целом он не дает. При обнаружении с помощью этого метода повышенной чувствительности невозможно сделать какое-либо предположение о конкретном механизме «е возникновения. Но в практической работе это и несущественно, ибо безотносительно к этому механизму допуск человека с подобной чувствительностью на соответствующее производство нежелателен. При необходимости точного выяснения причины развития пониженной резистентности соответствующие исследования могут быть проведены впоследствии.

Поступила 15/Х 1965 г.

УДК 614.715-074

УСКОРЕННЫЙ МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ЕСТЕСТВЕННЫХ АЭРОЗОЛ Ей С ТВЕРДОЙ ДИСП ЕРСНОЙ ФАЗОЙ ПРИ ПОВЫШЕННОЙ ВЛАЖНОСТИ ВОЗДУХА

С. П. Беляев

Определение весовой концентрации аэрозолей в естественных условиях имеет ряд специфических особенностей. Концентрация естественных аэрозолей обычно подвержена резким колебаниям, поэтому для более детального изучения хода ее необходимо минимальное время отбора пробы. Частое присутствие в воздухе избытка влаги предъявляет особые требования к материалу фильтра: во-первых, при фильтрации в условиях повышенной влажности прочность фильтра должна быть достаточной,