CC BY
28
Каримов Д.О., Кутлина Т.Г., Мухаммадиева Г.Ф., Валова Я.В, Байгильдин С.С., Репина Э.Ф. Метаболические и молекулярно-генетические изменения в печени при интоксикации тетрахлорметаном
https://dx.doi.org/10.47470/0016-9900-2020-99-9-996-1000 Оригинальная статья
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2020
Каримов Д.О., Кутлина Т.Г., Мухаммадиева Г.Ф., Валова Я.В., Байгильдин С.С., Репина Э.Ф.
Метаболические и молекулярно-генетические изменения в печени при интоксикации тетрахлорметаном
ФБУН «Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека», 450106, Уфа
Введение. Токсический гепатит представляет собой сложное и многогранное заболевание, развитие которого опосредовано комплексом биохимических и молекулярно-генетических взаимодействий. Текущее понимание патогенеза токсического гепатита и как следствие его лечение основано на стандартизации фенотипа заболевания, часто без учёта метаболических нарушений внутри клеток.
Материал и методы. Экспериментальные исследования выполнены на белых аутбредных крысах-самцах с массой тела 200— 220 г. В качестве токсиканта использовали 50% раствор ТХМ. Биохимические исследования проводили на фотометре лабораторном медицинском «Stat Fax 3300» с использованием клинических тест-наборов и контрольных материалов производства ООО «Вектор-Бест». Ткани печени для гистологического исследования были подвергнуты стандартной процедуре гистологической проводки и заливки в парафин. Срезы толщиной 5—7мкм окрашивали гематоксилин-эозин. Анализ экспрессии генов проводили с помощью ПЦР-амплификации в режиме реального времени на приборе RotorGene (QIAGEN). Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием коэффициента корреляции Пирсона и однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Результаты считали достоверными приp < 0,05.
Результаты. В результате проведённого анализа корреляции экспрессии изучаемых генов и уровнем биохимических показателей обнаружено, что корреляция экспрессии генов Nfe2l2 и Gstml составляла r = 0,812 (р = 0,0001). Динамика экспрессии генов Chek, Gstml, Gstpl, Nfe2l2 имела отрицательную корреляцию с показателем активности АСТв сыворотке крови. А экспрессия генов Chek, Gclc, Gstml, Nfe2l2, Ripk, Sodl с показателем активности АЛТ в сыворотке крови. Через 72 ч экспрессия практически всех исследуемых генов приобрела разнонаправленный характер. И корреляция между показателями зачастую не определяется. Анализ связи уровня цитолизных ферментов с уровнем корреляции изучаемых генов показал, что через 72 ч корреляция наблюдалась у генов Gstml, Hmox и Sodl с уровнем АСТ и АЛТ.
К л ю ч е в ы е слова: острый токсический гепатит; парацетамол; четырёххлористый углерод; экспрессия генов.
Для цитирования: Каримов Д.О., Кутлина Т.Г., Мухаммадиева Г.Ф., Валова Я.В., Байгильдин С.С., Репина Э.Ф. Метаболические и молекулярно-генетические изменения в печени при интоксикации тетрахлорметаном. Гигиена и санитария. 2020; 99 (9): 996-1000. https://doi.org/10.47470/0016-9900-2020-99-9-996-1000
Для корреспонденции: Каримов Денис Олегович, канд. мед. наук, зав. отделом токсикологии и генетики с экспериментальной клиникой лабораторных животных ФБУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека», 450106, Уфа, Россия. E-mail: [email protected]
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование выполнено при поддержке гранта Республики Башкортостан молодым ученым от 07.02.2020 УГ «О присуждении в 2020 году гранта Республики Башкортостан молодым учёным».
Участие авторов: концепция и дизайн исследования - Каримов Д.О.; сбор и обработка материала - Кутлина Т.Г., Мухаммадиева Г.Ф., Валова Я.В.; морфологические исследования - Байгильдин С.С.; статистическая обработка - Каримов Д.О.; написание текста - Каримов Д.О.; редактирование - Репина Э.Ф.; утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи - все соавторы.
Поступила 22.07.2020 Принята к печати 18.09.2020 Опубликована 20.10.2020
Denis O. Karimov, Tatyana G. Kutlina, Guzel' F. Mukhammadiyeva, Yana V. Valova, Samat S. Baygildin, Elvira F. Repina
Metabolic and molecular-genetic changes in the liver during carbon tetrachloride intoxication
Ufa Research Institute of Occupational Health and Human Ecology, Ufa, 450106, Russian Federation
Introduction. Toxic hepatitis (TH) is a complex and multifaceted disease, the development of which is mediated by a complex of biochemical and molecular genetic interactions. The current understanding of the pathogenesis of TH and, as a consequence, its treatment is based on standardization of the phenotype of the disease, often without taking into account metabolic disorders within the cells. Material and methods. experimental studies were performed on white outbred male rats weighing 200-220g. A 50% solution of TCM was used as a toxicant. Biochemical studies were performed on a laboratory medical photometer "Stat Fax 3300" using clinical test kits and control materials manufactured by Vector-Best LLC. Liver tissue for histological examination was subjected to the standard histological procedure and paraffin embedding. Sections 5-7 ^m thick were stained with hematoxylin-eosin. Gene expression analysis was performed using real-time PCR amplification on a RotorGene instrument (QIAGEN). Statistical processing of experimental data was performed using the Pearson correlation coefficient and one-way analysis of variance (ANOVA). The results were considered reliable at p <0.05. Results. As a result of the analysis of the correlation of the expression of the studied genes and the level of biochemical parameters, it was found that the correlation of the expression of the Nfe2l2 and Gstml genes was r = 0.8l2 (p = 0.000l). The dynamics ofgene expression of Chek, Gstml, Gstpl, Nfe2l2, had a negative correlation with the level of AST activity in blood serum and the expression of the genes Chek,
Karimov D.O., Kutlina T.G., Mukhammadiyeva G.F., Valova Ya.V., Baygildin S.S., Repina E.F. Metabolic and molecular-genetic changes in the liver during carbon tetrachloride intoxication
https://dx.doi.org/10.47470/0016-9900-2020-99-9-996-1000
Original article
Gclc, Gstml, Nfe2l2, Ripk, Sodl with an index of ALT activity in the blood serum. After 72 hours, the expression of almost all of the studied genes became multidirectional. The correlation between indices is often not determined. An analysis of the relationship between the level of cytolysis enzymes and the correlation level of the studied genes showed that after 72 hours the correlation was observed in the Gstml, Hmox, and Sodl genes with the levels of AST and ALT.
Keywords: acute toxic hepatitis; paracetamol; carbon tetrachloride; gene expression.
For citation: Karimov D.O., Kutlina T.G., Mukhammadiyeva G.F., Valova Ya.V., Baygildin S.S., Repina E.F. Metabolic and molecular-genetic changes in the liver during carbon tetrachloride intoxication. Gigiena i Sanitaria (Hygiene and Sanitation, Russian journal). 2020; 99 (9): 996-1000. https://doi.org/10.47470/0016-9900-2020-99-9-996-1000 (In Russ.)
For correspondence: Denis O. Karimov, MD., Ph.D., head of the Department of toxicology and genetics with the experimental clinic of laboratory animals, Ufa Research Institute of Occupational Health and Human Ecology, Ufa, 450106, Russian Federation. E-mail: [email protected]
Conflict of interests. The authors of the article have no conflict of interest.
Acknowledgment. The research was carried out with the support of the grant of the Republic of Bashkortostan to young scientists from 02/07/2020 UG "On the award of the grant of the Republic of Bashkortostan to young scientists in 2020".
Contribution: the concept and design of the study - Karimov D.O.; the collection and processing of material - Kutlina T.G., Mukhammadiyeva G.F., Valova Ya.V.; morphological investigations - Baygildin S.S.; statistical processing - Karimov D.O.; writing text - Karimov D.O.; editing the text - Repina E.F.; approval of the final version of the article, responsibility for the integrity of ail parts of the article - all co-authors.
Received: June 22, 2020 Accepted: September 18, 2020 Published: October 20, 2020
Введение
Токсический гепатит (ТГ) представляет собой сложное и многогранное заболевание, развитие которого опосредовано комплексом биохимических и молекулярно-гене-тических взаимодействий. Текущее понимание патогенеза токсического гепатита и как следствие его лечение основано на стандартизации фенотипа заболевания, часто без учёта метаболических нарушений внутри клеток. Этиология острого повреждения печени изучена достаточно хорошо [1], но механизмы молекулярно-генетического ответа в зависимости от механизма развития ТГ требуют дальнейшего изучения.
Повреждение печени, вызванное тетрахлорметаном (ТХМ), характеризуется воспалением, истощением анти-оксидантного статуса, образованием трихлорметильных радикалов и активных форм кислорода (АФК), которые инициируют перекисное окисление липидов (ПОЛ) [2, 3]. Реактивные метаболиты детоксифицируются нефермен-тативно с помощью клеточного антиоксиданта, глута-тиона (GSH) или реакции конъюгации, катализируемой глутатион^-трансферазой (GST). Однако чрезмерное образование свободных радикалов истощает уровни GSH и вызывает окислительный стресс [4]. Глутамат-цистеинли-газа (GCL) является ограничивающим скорость ферментом для биосинтеза GSH. Было показано, что ТХМ и этанол снижают уровень транскрипции гена GCLC и активность антиоксидантных ферментов в тканях печени [5—7].
Цитозольные GST кодируются суперсемейством генов, сгруппированных по классам а, я, о, 6, Z и м по первичной аминокислотной последовательности. Ферменты, которые могут существовать в виде гомо- или гетеродиме-ров субъединичных полипептидов, катализируют реакции, включающие конъюгирование восстановленного GSH с электрофильными субстратами. Направляя электрофилы, генерируемые цитохромом P450s для конъюгации с GSH, GST способствуют скоординированному метаболизму лекарств и ксенобиотиков, способствуя окончательному выведению потенциальных токсинов [8]. Имеется много данных, доказывающих, что даже однократное воздействие ТХМ на печень вызывает изменение работы антиоксидант-ной системы в виде снижения уровня SOD, GPx, CAT, GST и GHS [9-12].
Целью проведённого исследования являлось изучение патогенетических основ токсического повреждения печени на модели острого отравления ТХМ.
Материал и методы
Экспериментальные исследования выполнены на белых аутбредных крысах-самцах с массой тела 200-220 г. Животные получали сухой сбалансированный комбикорм «Чара» производства фирмы ООО «МультиТорг» (Россия) и воду в режиме неограниченного доступа. Крыс методом случайной выборки разделили на группы и содержали в клетках по 7 особей при температуре воздуха 21 ± 1 °С. В качестве токсиканта использовали 50% раствор ТХМ, носителем и контрольным веществом (отрицательный контроль) являлось рафинированное оливковое масло, однократное подкожное введение в дозе 2 г/кг массы тела животных.
Условия проведения и вывода животных из эксперимента осуществляли с соблюдением международных принципов Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным и требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Минздрава СССР от 12.08.1977 г. № 755). Животных выводили из эксперимента путём эвтаназии с помощью углекислого газа с последующей декапитацией.
Для проведения биохимических исследований использовали сыворотку крови лабораторных животных. На фотометре лабораторном медицинском «Stat Fax 3300» (производство США, фирма «Awareness Technology») определяли биохимические показатели, отражающие метаболизм и функциональное состояние печени: активность ала-нинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), щелочной фосфатазы, показатели липидного обмена - содержание холестерина и триглицеридов, а также уровень общего белка, мочевой кислоты с использованием клинических тест-наборов и контрольных материалов производства ООО «Вектор-Бест». Для оценки белковосинтетической функции печени определяли альбумины и фракции глобулинов (ар а2, в, y) методом электрофореза сыворотки крови.
Ткани печени для гистологического исследования фиксировали в 10% формалине на фосфатном буфере (рН 7,4) и подвергали стандартной процедуре гистологической проводки (через изопропанол) для заливки в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилин-эозин. Гистологические препараты исследовали с помощью световых микроскопов ЛОМО Микмед-2 и Zeiss AXIO Imager D2.
Кусочки печени сразу после декапитации и вскрытия животных замораживали жидким азотом и заливали ExtractRNA (ЗАО Евроген). Для определения функционального состо-
Каримов Д.О., Кутлина Т.Г., Мухаммадиева Г.Ф., Валова Я.В, Байгильдин С.С., Репина Э.Ф. Метаболические и молекулярно-генетические изменения в печени при интоксикации тетрахлорметаном
https://dx.doi.org/10.47470/0016-9900-2020-99-9-996-1000 Оригинальная статья
яния печени использовали следующие методы: экстракция тотальной РНК тризолом, обратная транскрипция и ПЦР-амплификация в режиме реального времени на приборе RotorGene (QIAGEN). Синтез кДНК проводили с матрицы выделенной тотальной РНК с использованием набора реактивов MMLV RT kit и праймеров олиго(йТ)15 («Евроген», Россия). С полученными кДНК ставили ПЦР на амплифи-каторе Rotor-Gene Q («Qiagen», Германия) в присутствии SYBR Green. Олигонуклеотидные праймеры для ПЦР подбирали с помощью программы PrimerQuest («Integrated DNA Technologies, Inc.», США).
Каждую реакцию ПЦР, содержащую 2 мкл кДНК, проводили в объеме 25 мкл в следующих условиях: предварительный прогрев при 95 °С в течение 3 мин, после чего следовало 45 основных циклов: 15 с при 95 °С, 25 с при 59 °С и 15 с при 72 °С. Нормирование уровня экспрессии проводили по гену GAPDH.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием коэффициента корреляции Пирсона и однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Результаты считали достоверными приp < 0,05.
Результаты
В печени крыс через 24 ч после введения подсолнечного масла (группа отрицательного контроля) какие-либо признаки повреждения не обнаружены. Границы печеночных долек определяли по расположению центральных вен, а также междольковых сосудов и желчных протоков, вместе составляющих «триады», характерные для печени млекопитающих. Печеночные балки разделялись характерными вну-тридольковыми кровеносными капиллярами — синусоидами с различным размером просветов.
На гистологических препаратах печени крыс через 24 ч после введения ТХМ патоморфологические признаки повреждений варьировались от лёгкой до тяжёлой степени (крысы № 1 и № 3) (рис. 1, см. на вклейке). Они выражались в гидропической дистрофии (при лёгкой степени), переходящей в баллонную дегенерацию, с формированием некротических участков с воспалительными клеточными инфильтратами (рис. 2, см. на вклейке). Гидропическая дегенерация относится к обратимым изменениям. При улучшении условий и при сохранности клеточных структур клетка восстанавливалась. В случае дальнейшего ухудшения условий цитоплазма увеличивалась приблизительно в два раза, просветлялась, а ядро подвергалось последовательно пик-нозу, рексису и лизису. Это состояние, называемое баллонной дегенерацией, относится к необратимым изменениям — клетка погибает. На месте погибших гепатоцитов обычно обнаруживали воспалительные клетки. У крыс № 11 и № 12 выявляли только слабые дистрофические изменения в виде гидропической и мелкокапельной вакуолизации центроло-булярных гепатоцитов, а у крысы № 5 — некоторые участки с баллонной дегенерацией. Также у крыс № 5 и № 6 обнаруживали некротические изменения ядер центролобулярных гепатоцитов (рис. 3, см. на вклейке).
У большинства крыс через 72 ч после введения ТХМ в печени балочно-радиальное построение сохранялось вблизи портальных трактов. У них обнаруживали баллонную дегенерацию центролобулярных гепатоцитов, переходящую в мо-стовидный некроз, перекидывающийся с дольки на дольку (рис. 4, см. на вклейке). У трёх крыс обнаруживали тельца Каунсильмена. В центролобулярной и интермедиарной зоне выявляли крупно- и мелкокапельную вакуолизацию и ги-дропическую дистрофию печёночных клеток (рис. 5, см. на вклейке). У всех крыс этой группы обнаруживали слабую инфильтрацию воспалительными клетками центролобулярной зоны на месте погибших гепатоцитов и сохранение структуры гепатоцитов 1-й зоны печёночного ацинуса. При этом у крыс через 24 ч после введения ТХМ площадь некротических и дистрофических изменений была менее обширной, и мо-
стовидный некроз обнаружили только в одном гистологическом препарате (крыса № 2). Таким образом, в группе крыс через 72 ч после введения ТХМ обнаруживали наиболее выраженные патоморфологические изменения после введения гепатотоксиканта по сравнению со всеми группами этого эксперимента.
Уровень активности АСТ в сыворотке крови экспериментальных животных через 24 ч после введения токсиканта статистически значимо различался (Р = 5,16; р = 0,003) по сравнению с группой контроля. Максимальный уровень активности фермента зарегистрирован через 24 ч после поступления токсиканта — 263 ± 25,94 Ед. Среднее значение активности фермента в сыворотке через 72 ч составило 242,19 ± 17,56 Ед/л. При анализе активности АЛТ в сыворотке крови экспериментальных животных в группе, получавшей ТХМ, в зависимости от времени показаны статистически значимые различия (Р = 17,50; р = 0,001). Следует выделить, что максимальный уровень активности фермента в рассматриваемой группе отмечен через 72 ч с момента введения токсиканта — 109,66 ± 16,07 Ед/л; в свою очередь минимальный — до затравки (52,64 ± 2,01 Ед/л). Спустя 24 ч с момента затравки ТХМ активность трансаминазы соответствовала отметке 106,13 ± 9,41 Ед/л.
При анализе активности гена Casp7 в печени экспериментальных животных отмечены статистически значимые различия (Р = 7,61; р = 0,003). Так, самый низкий уровень активности данного гена наблюдали в группе животных, участвовавших в эксперименте в течение 24 ч — 0,74 ± 0,27. При множественных сравнениях статистическая значимость достигнута при сравнении групп животных, участвовавших в эксперименте 24 (—0,74 ± 0,27). Через 72 ч кратность экспрессии повысилась и достигла уровня 0,79 ± 0,25 (р = 0,02). В проводимом эксперименте по изучению экспрессии гена Скек достигнута статистическая значимость (Р = 7,5; р = 0,03). Множественные сравнения также показали значимую разницу. Так, сравнение группы контроля (0,001 ± 0,22) с 24-часовой группой (-1,47 ± 0,38) показало изменение кратности экспрессии (р = 0,002). Статистическую значимость наблюдали и при сравнении двух экспериментальных групп между собой (р = 0,04). Уровень экспрессии гена Оек в группе животных спустя 24 часа после начала эксперимента значительно понизился (-2,52 ± 0,18), по сравнению с группой контроля (0,00 ± 0,24). Однако через 72 ч экспрессия имела тенденцию к повышению (-0,27 ± 0,34). Уровень различий достиг статистической значимости при сравнении начального значения экспрессии и спустя 24 ч, а также по прошествии 24 и 72 ч между собой (р < 0,001). При изучении экспрессии гена ОяШ1 в группе положительного контроля в ответ на отравление ТХМ обнаружены статистически значимые различия (Р = 22,48; р < 0,001). Через сутки с начала момента эксперимента уровень активности гена был понижен (0 ± 0,21; -1,25 ± 0,21). Спустя 72 ч экспрессия продолжила понижение (-1,94 ± 0,18). Значимости различий достигло сравнение начального уровня экспрессии с экспрессией спустя 24 (р = 0,001) и 72 ч (р < 0,001).
Статистически значимых изменений экспрессии мРНК гена Gstp1 через 24 и 72 ч после затравки ТХМ в группе положительного контроля не наблюдали (Р = 3,20; р = 0,058), что может указывать на относительную стабильность данного показателя. Наблюдаемые различия в экспрессии мРНК гена Ози1 между группами животных, получавших ТХМ 24 и 72 ч, незначимы (Р = 0,29; р = 0,748). Спустя 72 ч после затравки ТХМ отмечается статистически достоверное повышение количества транскриптов гена Нтох1 по сравнению с контрольной группой (2,017 ± 0,35; р = 0,000). После введения ТХМ активность гена Ще212 спустя 24 ч характеризуется незначительным понижением экспрессии относительно исходного уровня (-1,16 ± 0,21; р = 0,01), в то время как спустя 72 ч экспрессия этого гена практически не отличалась от уровня контроля.
Karimov D.O., Kutlina T.G., Mukhammadiyeva G.F., Valova Ya.V., Baygildin S.S., Repina E.F. Metabolic and molecular-genetic changes in the liver during carbon tetrachloride intoxication
https://dx.doi.org/10.47470/0016-9900-2020-99-9-996-1000
Original article
В группе, получавшей ТХМ, экспрессия гена Nqol повышается со временем (F = 7,120; p = 0,004). Уровень относительной экспрессии гена в начале эксперимента составил 0 ± 0,37, спустя 24 ч после отравления составил 0,72 ± 0,56 и спустя 72 ч составил 2,39 ± 0,46. Таким образом, спустя 72 ч уровень экспрессии гена статистически значимо повышен по сравнению с уровнем экспрессии у животных сразу после отравления (р = 0,002). Экспрессия гена RIPK1 снижается со временем (F = 4,065; p = 0,030). Уровень относительной экспрессии гена спустя 24 ч после отравления значимо снизился и составил -0,85 ± 0,25 (начальный уровень экспрессии составил 0 ± 0,22; р = 0,041), а спустя 72 ч несколько повысился и составил -0,65 ± 0,17. Введение ТХМ через 24 ч сопровождалось статистически значимым снижением кратности экспрессии гена Sodl (-1,18 ± 0,18) относительно контрольной группы (p = 0,0001), но уже через 72 ч происходило некоторое увеличение экспрессии гена до -0,63 ± 0,16, однако отмеченные различия не достигли статистической значимости (p = 0,060).
Полученные результаты, по-видимому, свидетельствуют об истощении антиоксидантной системы в условиях окислительного стресса, вызванного интоксикацией ТХМ. Известно, что изменение активности антиоксидантных ферментов может приводить к увеличению окислительного стресса, что в свою очередь способствует повышенному уровню окислительного повреждения клеточных макромолекул и изменённому ответу на стресс [13].
Интерес представляет изучение взаимодействия и корреляции молекулярно-генетических изменений и классических биохимических показателей. Как показано на рис. 6, см. на вклейке, в первые 24 ч наблюдается положительная корреляция экспрессии практически всех изучаемых генов за исключением Gsttl и Nqol.
Нередко наблюдали довольно сильную корреляционную связь между уровнем экспрессии разных генов. Так, корреляция экспрессии генов Nfe2l2 и Gstml составляла r = 0,812 (р = 0,0001). Обращает на себя внимание корреляция экспрессии практически всех генов системы GSH. В то же время при анализе корреляции экспрессии генов с уровнем цитолизных ферментов в сыворотке крови наблюдается обратная картина. Динамика экспрессии генов Chek, Gstml, Gstpl, Nfe2l2 имела отрицательную корреляцию с показателем активности АСТ в сыворотке крови (r = -0,589; p = 0,027; r = -0,626; p = 0,017; r = -0,588; p = 0,027; r = -0,657; p = 0,011 соответственно). А экспрессия генов Chek, Gclc, Gstml, Nfe2l2, Ripk, Sodl — с показателем активности АЛТ в сыворотке крови (r = -0,605; p = 0,022; r = -0,794; p = 0,001; r = -0,746; p = 0,002; r = -0,640; p = 0,014; r = -0,630; p = 0,016; r = -0,739; p = 0,003 соответственно).
Через 72 ч после поступления токсиканта в организм лабораторных животных наблюдается отличающаяся картина (рис. 7, см. на вклейке).
Как видно из рис. 7, экспрессия практически всех исследуемых генов приобрела разнонаправленный характер. И корреляция между показателями зачастую не определяется. Исключением являлись гены Chek - Casp7, корреляция между которыми составила r = -0,610, p = 0,020; гены Ripk - Gclc - r = 0,698, p = 0,006 и Gstml, у которого наблюдалась обратная корреляция экспрессии с генами Hmox, Nqol, Ripk(r = -0,725;p = 0,003; r = -0,719;p = 0,004; r = -0,709; p = 0,005, соответственно).
Анализ связи уровня цитолизных ферментов с уровнем корреляции изучаемых генов показал, что через 72 ч корреляцию наблюдали у генов Gstml, Hmox и Sodl с уровнем АСТ (r = -0,657; p = 0,011; r = 0,670; p = 0,009; r = -0,650; p = 0,012 соответственно) и уровнем АЛТ (r = -0,570; p = 0,033; r = 0,622; p = 0,018; r = -0,574; p = 0,032 соответственно).
Обсуждение
Проблема лечения и профилактики заболеваний гепато-билиарной системы до настоящего времени остаётся окончательно не решённой. Токсические поражения печени характеризуются многообразием этиологических факторов, сложностью патогенеза и полиморфным течением, что создаёт трудности в лечении [14]. Профилирование экспрессии показало взаимодействие молекулярно-генетических механизмов, связанных с четырёххлористым углеродом [15].
Считается, что транскрипционный фактор NRF2, кодируемый геном Nfe2l2, является основным сенсором окислительного стресса в клетке [16]. При окислительном стрессе NRF2 перемещается в ядро, где связывается с промоторной областью антиоксидантных генов и инициирует их транскрипцию [17]. В настоящем эксперименте спустя 24 ч отмечалось угнетающее воздействие ТХМ на экспрессию гена Nfe2l2 во всех экспериментальных группах. Однако уже спустя 72 ч уровень экспрессии нормализуется.
Имеются данные, что первыми в борьбу с окислительным стрессом включаются неферментативные, низкомолекулярные антиоксиданты, и только после их истощения активируется система ферментов. Однако при чрезмерном образовании инициаторов свободнорадикального окисления истощается пул и неферментных антиоксидантов и ферментативного звена этой системы, что приводит к подавлению их активности [18]. Если окислительно-восстановительное равновесие в клетке удаётся восстановить, то в клетке включаются механизмы репарации, и она выходит из состояния стресса.
Через 72 ч во всех экспериментальных группах отмечалось повышение уровня экспрессии до исходного. Вероятно, на 3-и сутки происходит постепенное уменьшение производства свободных радикалов, вызванное введением токсиканта, и восстановление окислительно-восстановительного баланса клетки.
Активация гена Nfe2l2 приводит к активации каскада противоокислительных механизмов организма, задействованных в нейтрализации химических веществ и АФК: НАД(Ф)-H: хининоксидоредуктаза 1 (Nqo1), глутатионци-стеинлигаз (Gclc), ферменты суперсемейства GST (Gstt1, Gstm1, Gstp1).
Восстановленный GSH является внутриклеточным анти-оксидантом, играя роль «ловушки» свободных радикалов, данные процессы катализируются глутатионпероксидазой и глутатионтрансферазой, восстанавливая окисленный глу-таредоксин [12]. Повышение экспрессии гена Gsttl после интоксикации может подтверждать данный вывод. Интересным представляется то, что наблюдалось увеличение экспрессии глутатионтрасфераз только класса T, что, по-видимому, можно объяснить активным участием именно данного класса при интоксикации ТХМ.
Ген Nqol кодирует цитоплазматическую форму фермента НАД(Ф) H-дегидрогеназы, которая образует гомодимеры и восстанавливает хиноны до гидрохинонов. Уровень эк-прессии данного гена повышался на протяжении проведённого эксперимента, что может говорить о высокой степени участия данного механизма детоксикации при отравлении ТХМ. При анализе корреляции уровня экспрессии гена Nqol с биохимическими показателями не были показаны статистически значимые различия, что может говорить о разном времени активации данных механизмов.
Следует отметить, что накопление большого количества АФК и повреждение ДНК нередко приводит к активации апоптотических механизмов гибели клеток. Существует ряд цистеиновых протеаз, которые активируют апоптотические пути. Каспаза 7 (Casp7) относится к эффекторным каспазам, которая гидролизует целевые белки и инициирует апоптоз [12]. В соматических клетках нижестоящая трансдуцерная киназа или Checkpoint киназа (Chek1) передаёт сигнал о по-
Каримов Д.О., Кутлина Т.Г., Мухаммадиева Г.Ф., Валова Я.В, Байгильдин С.С., Репина Э.Ф. Метаболические и молекулярно-генетические изменения в печени при интоксикации тетрахлорметаном
https://dx.doi.org/10.47470/0016-9900-2020-99-9-996-1000 Оригинальная статья
вреждении ДНК, опосредованный АФК [9, 18]. Взаимодействующая с рецептором протеинкиназа 1 (Ripk1) регулирует гибель и воспаление клеток с помощью киназозависимых и независимых механизмов. Ripk1 облегчает активацию путей MAPK и NF-кВ и ингибирует каспазо-8-зависимый апоптоз [17]. В результате проведенного исследования не показано выраженного повышения экспрессии генов клеточного цикла и активации апоптоза, но обнаружена их значительная корреляция с уровнем представленности генов, задействованных в обмене GSH. Данное обстоятельство может объясняться активацией процессов регенерации паренхимы печени, вследствие чего активность проапоптотического класса генов снижается.
Заключение
Механизмы повреждения гепатоцитов значительно варьируются в зависимости от токсичного агента, вследствие чего происходит активация различных защитных механизмов детоксикации и антиоксидантной защиты организма. В результате работы показано, что экспрессия ключевых генов детоксикации (Ще212, &Ш1, СНек1, Що!) имеет зависимость от механизма повреждения гепатоцитов, что в дальнейшем может служить в качестве диагностических маркеров, способных объяснить механизм повреждения и подобрать наиболее подходящую при данном виде отравления терапию.
Литература
(п.п. 1-13, 15, 17 см. References)
14. Мязин Р.Г., Снигур Г.Л., Емельянов Д.Н., Чернышова М.В. Фармакологическая коррекция экспериментального острого токсического гепатита. Журнал анатомии и гистопатологии. 2019; 8(1): 49—54. https://doi.org/10.18499/2225-7357-2019-8-1-49-54 16. Шиндяпин А.В. Молекулярно-биологические основы контроля эндо-
генного метанола и формальдегида у млекопитающих: Автореф. дисс. ... канд. биол. наук. М.; 2017.
18. Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н. Молекулярно-клеточные механизмы инактивации свободных радикалов в биологических системах. Успехи современного естествознания. 2006; (7): 29—36.
References
1. Shah M.D., D'souza U.J., Iqbal M. The potential protective effect of Com- 9. melina nudiflora L. against carbon tetrachloride (CCl4) -induced hepatotox-
icity in rats, mediated by suppression of oxidative stress and inflammation. Environ. Health Prev. Med. 2017; 22(1): 66. https://doi.org/10.1186/s12199-017-0673-0 10.
2. Yang C., Li L., Ma Z., Zhong Y., Pang W., Xiong M., et al. Hepatopro-tective effect of methyl ferulic acid against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats. Exp. Ther. Med. 2018; 15(3): 2228—38. https://doi. org/10.3892/etm.2017.5678 11.
3. Zhou C., Yin S., Yu Z., Feng Y., Wei K., Ma W., et al. Preliminary characterization, antioxidant and hepatoprotective activities of polysaccharides
from Taishan Pinus massoniana pollen. Molecules. 2018; 23(2): 281. https:// 12. doi.org/10.3390/molecules23020281
4. Jeong T.B., Kwon D., Son S.W., Kim S.H., Lee Y.H., Seo M.S., et al. Weaning mice and adult mice exhibit differential carbon tetrachloride-induced
acute hepatotoxicity. Antioxidants (Basel). 2020; 9(3): 201. https://doi. 13. org/10.3390/antiox9030201
5. Ji L.L., Sheng Y.C., Zheng Z.Y., Shi L., Wang Z.T. The involvement of p62- 14. Keap1-Nrf2 antioxidative signaling pathway and JNK in the protection of natural flavonoid quercetin against hepatotoxicity. Free Radic. Biol. Med.
2015; 85: 12-23. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2015.03.035
6. Chen H.W., Huang C.S., Li C.C., Lin A.H., Huang Y.J., Wang T.S., et al. 15. Bioavailability of andrographolide and protection against carbon tetra-chloride-induced oxidative damage in rats. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2014; 280(1): 1-9. https://doi.org/10.1016/j.taap.2014.07.024
7. Lee S.Y., Ko K.S. Effects of s-adenosylmethionine and its combinations 16. with taurine and/or betaine on glutathione homeostasis in ethanol-induced
acute hepatotoxicity. J. Cancer Prev. 2016; 21(3): 164-72. https://doi. 17. org/10.15430/jcp.2016.21.3.164
8. Vaughn M.P., Biswal Shinohara D., Castagna N., Hicks J.L., Netto G., De Marzo A.M., et al. Humanizing n-class glutathione S-transferase regulation in a mouse model alters liver toxicity in response to acetaminophen 18. overdose. PLoS One. 2011; 6(10): e25707. https://doi.org/10.1371/journal. pone.0025707
Zarezade V., Moludi J., Mostafazadeh M., Mohammadi M., Veisi A. Antioxidant and hepatoprotective effects of Artemisia dracunculus against CCl4-induced hepatotoxicity in rats. Avicenna J. Phytomed. 2018; 8(1): 51-62.
Dadkhah A., Fatemi F., Ababzadeh S., Roshanaei K., Alipour M., Tabrizi B.S. Potential preventive role of Iranian Achillea wilhelmsii C. Koch essential oils in acetaminophen-induced hepatotoxicity. Bot. Stud. 2014; 55(1): 37. https://doi.org/10.1186/1999-3110-55-37
Hasanein P., Sharifi M. Effects of rosmarinic acid on acetaminophen-
induced hepatotoxicity in male Wistar rats. Pharm. Biol. 2017; 55(1):
1809-16. https://doi.org/10.1080/13880209.2017.1331248
Acharya M., Lau-Cam C.A. Comparison of the protective actions of
N-acetylcysteine, hypotaurine and taurine against acetaminophen-induced
hepatotoxicity in the rat. J. Biomed. Sci. 2010; 17(Suppl. 1): S35. https://doi.
org/10.1186/1423-0127-17-S1-S35
Lee J., Koo N., Min D.B. Reactive oxygen species, aging, and antioxidative nutraceuticals. Compr. Rev. Food Sci. F. 2004; 3(1): 21-33. Myazin R.G., Snigur G.L., Emel'yanov D.N., Chernyshova M.V. Pharmacological correction of experimental acute toxic hepatitis. Zhurnal anatomii igistopatologii. 2019; 8(1): 49-54. https://doi.org/10.18499/2225-7357-2019-8-1-49-54 (in Russian)
Huang Q., Jin X., Gaillard E.T., Knight B.L., Pack F.D., Stoltz J.H., et al. Gene expression profiling reveals multiple toxicity endpoints induced by hepatotoxicants. Mutat. Res. 2004; 549(1-2): 147-67. https://doi. org/10.1016/j.mrfmmm.2003.12.020
Shindyapin A.V. Molecular biological principles of control of endogenous methanol and formaldehyde in mammals: Diss. Moscow; 2017. (in Russian) Merry T.L., Ristow M. Nuclear factor erythroid-derived 2-like 2 (NFE2L2, Nrf2) mediates exercise-induced mitochondrial biogenesis and the anti-oxidant response in mice. J. Physiol. 2016; 594(18): 5195-207. https://doi. org/10.1113/jp271957
Chesnokova N.P., Ponukalina E.V., Bizenkova M.N. Molecular-cellular mechanisms of inactivation of free radicals in biological systems. Uspekhi sovremennogo estestvoznaniya. 2006; (7): 29-36. (in Russian)
К ст. Каримова Д.О. и соавт.
Рис. 1. Паренхима печени крысы № 1 через 24 ч после введения раствора ТХМ.
БД - баллонная дегенерация; ЦВ - центральная вена; И - воспалительный клеточный инфильтрат; ПТ - портальный тракт.
Окраска гематоксилин-эозин. Ув. * 100.
Рис. 2. Центральная вена печени крысы № 3 через 24 ч после введения раствора ТХМ.
З - застой крови в синусоидах; ЦВ - центральная вена. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. х 400.
Рис. 3. Паренхима печени крысы № 5 через 24 ч после введения раствора ТХМ.
БД - баллонная дегенерация; ЦВ - центральная вена; И - воспалительный клеточный инфильтрат. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. * 100.
Рис. 4. Паренхима печени крысы № 8 через 72 ч после введения раствора ТХМ.
БД - баллонная дегенерация; В - вакуольная дистрофия; Н - некроз гепатоцитов; ЦВ - центральная вена. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. * 100.
Рис. 5. Паренхима печени крысы № 13 через 72 ч после введения раствора ТХМ.
БД - баллонная дегенерация; В - вакуольная дистрофия; ПТ - портальный тракт; Н - некроз гепатоцитов; ЦВ - центральная вена. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. * 100.
К ст. Каримова Д.О. и соавт.
J V ,451 ,637 ,750 ,645 cd co_ о o_ -,252 ,495 -,244 ,588 ,636 со 1 СО со in 1 со CO CD 1 ,561 ,324 ,504 -,256 CD CD CD. со о in т— CO -,471 -,529
BIAIIAIBJ in oo o_ CO. l" oo in ■чГ l" •sr CO CM о CO oo ,172 ,041 ,041 оо оо см со in см СО ,375 -,270 ,290 -,337 -,393 -,433 CM oo CM in l" -,104 -,052 СО т-1П CD см in
виэд Ю CO 1 о -,379 -,386 -,352 ,352 ,231 о см CD •sr со см h-со со_ in см. со ,269 ,223 ,198 in CM CN_ i" -,071 -,088 CD о со co 1 ,424 ,070 1 -,453 -,471
Звфяив -,077 -,128 -,080 -,090 Ю о in l" ю со см см см см. ю ю о. о со CD 00 о. см ^г о CO CM co_ l" 5 CM in 1 ~ -,295 -,236 ,287 ,144 см N l" ,070 -,052 S
|,вфяив -,133 ,040 CO CM -,116 ,153 ,146 ,132 -127 ,071 -,081 ,068 о со_ см 05 CO со in о l" -,206 ,213 ,135 Ю CM in CD CM Гч- <чГ см о со о in
HMiAiÄgqLfB oo со ,641 ,753 ,642 o о CM o_ l" -,240 ,497 -,241 ,569 ,631 S in in l" оз l" N о l" in N-1П ,347 ,503 -,238 in CD 1 -,473 -,528 CD CD CD
Ж со 00 ч 1 1П l" CD in CO in Ю in CO l" CM СО со о ю l" in оо о. ю со со о> со о со 00 in ю со ^r CM in in CM CT) CM 00 in • -,238 -,251 ,287 ,309 см CO in CM.
>юиэд ,778 ,606 ,584 in CD CD oo -,178 ,101 со со ю •^г ю о. о CD CD оо N -,641 -,619 oo N l"4 CM со CD CO со co in i" со о in in со CO со CM со оо о_ i" со со 1 о in
10Х CM <э ,382 ,498 ,384 ,254 -,005 ,014 00 со со см со ю см см. CD in N о. со 1' ^r in со ,004 ,052 ,369 -,291 ,347 ,213 Ю CD CM l" N со CD со ■sf CM со
Л о ,402 ,376 ,074 -,028 -,114 -,194 ,117 -,142 ,230 ,175 -,126 -,118 -,166 -,122 ,052 ,132 ,125 in N in CO о CM Ю о 1" in см см -,337 ,561
ф1п -,434 -,403 -,544 -,590 CD CD i -,010 -,019 h-см ю ю оо со со LO ф ,554 ,600 LO cr> T— -,122 ,004 i" CM in I— о 1 о l" ,241 ,198 ,290 CD 1
JtTLf -,019 ,096 ,018 -,083 -,042 "чГ CO 1 1П со -,191 ,231 ,296 ,052 -,138 ,195 -,166 ,354 s CO ■ CD r" ,586 -,326 со см см о N см Ним со со l"
ILfV -,530 -,605 -,794 -,746 oo со CM l" ,151 ,106 о со. со N -,630 -,739 •sr со oo со о о ср. oo CO xT 1 CD 5 i" oo in in т— Ю in l" ,092 -,004 ,269 ,375 CO CO in l"
10V CM CD i" cd CO Ю l" CD CO co_ -,626 -,588 ,529 -,252 N in со ^г со со_ 1 ~ -,464 -,418 1 00 CM in СЭ ^r in in CD CM i" N l" CO l" ,340 -,181 -,307 ,424 ,043 ,182 -,176
IPOS ,437 ,460 ,748 ,639 ,281 ,219 -,248 ,467 о о. h-оо со_ T- CO 1 CD CO N l" CO CD CM со "чГ in i Ю N CD Ю -чГ CD 00 N CD CO. i" CO CD ,068 -,089 ю см СО in l" CO CO CD
у\6\ц ,584 ,681 ,528 ,666 ,573 -,338 N-1П i" N 00 ю Гч- h-00 со со о со г cö CM со со ,230 ,221 О CD in CO co_ l" CD CO in cö o. i" -,310 -,367 -,288 ,588
|,obN -,027 -,114 -,028 CO со i" -,023 ,030 -,128 со см I*4 N. 'чГ о о_ со со_ CO o -,191 -,154 -,142 CM со in l" ,054 ,085 ¥ CM B| ,071 -,055 со см_ 5- ■чГ -чГ см. l"
г\гщы ,541 ,498 ,592 ,812 ,667 ю co 1 " СМ со см ,587 ,467 -,657 -,640 Ю CO N CM in (— со со со CO со in о in • N CD N-CN i" CM CM о см ср. in CD ^r
хошн ,113 ,140 CO CO ,286 ,151 со со CM l" ,112 -,128 -,157 -,248 -,252 CO о l" CD o_ l" Ol i" ,014 ,101 ,438 -,240 CM CO CM CM СЭ l" ,231 ,172 CM in l"
mso CM CM "чГ ■sr CD CM о l" -,384 -,416 1 оо оо см i" ю 'чГ CD о со о_ оо со со. CD см. CD СМ in in CO -,010 -,114 -,005 oo ri" ,021 -,020 ,146 ,185 см in со. о со 00 о l"
ld}SQ ,459 ,581 CO co_ cd N CO T- CD ¥ i in CD со со см о_ со 1П S см. оо со 1П i" oo со CM l" CM o_ l" CD CO ■sr 1 со CM o_ l" in CM CD 00 ■sr in m co_ i" о со m Ю о in l" см ю со_ l" CD со
,764 ,746 ,582 CD Г--CD co CO СО со см см s со оо ,666 ,639 со см со co [' со со CD о CD Ю l" ho T со со in CD CO Ю ч ■ CM CD -,116 -,090 со со со_ -,284 ,645
opo ,442 ,500 CM со in CD co_ о 1" со со ■sr см CD ю со см о_ ,528 ,748 -,339 03 N [ со o_ "чГ in 1 ,376 ,498 ,584 CD in l" со in со CM_ i" о oo о CD N со_ со ю о in N
>|ЭЧЭ co in о о in ,746 ,581 -,294 о 00 CD ,681 ,460 -,589 -,605 CO cn CD со о ,402 ,382 co о CO. in CO ,040 -,128 со II 1— CO CO.
ZdsBQ ,534 ,442 co CD Ю ■vT CM CM ■чГ 1 со 7— ¥ ю h-см о ^Г N см о 00 со СО СО ю ^г ^г ю 1' [ CD l" CO ■чГ l" ,140 ,042 oo N CO со ^r l" oo со ■чГ -,133 -,077 ю со_ ю со Ю
Casp7 Chek Gele т— E ■4—• сn О Gstpl 4—■ 4—» сn о X о Е X Nfe2l2 Nqo1 Ripk "О о (Л ACT ILM d ЩФ I_ I— XCT Белок bt: альбумин альфа 1 см CO -8- jy с; го бетта гамма
Casp7 Chek Gele Gstml Gstpl Gsttl Hmox Nfe2l2 Nqo1 Ripk Sod1 АСТ AJ1T ЛДГ ЩФ 1_ 1— XCT Белок MK альбумин альфа 1 альфа2 бетта гамма 1_
Casp7 1 -,610 ,071 -,116 ,124 ,389 ,496 ,455 ,251 ,069 -,095 ,455 ,401 -,334 ,200 -,141 -,503 ,510 ,419 -,470 ,439 ,328 ,438 -,262 -,465
Chek -,610 1 ,038 -,151 ,407 -,017 -,070 -,496 ,164 -,232 ,212 -,353 -,445 -,008 -,166 ,099 ,231 -,497 -,169 ,214 -,273 -,284 -,141 ,290 ,218
Gele ,071 ,038 1 ,311 -,015 -,303 -,247 ,451 -,480 ,698 ,074 ,029 -,040 ,200 -,381 -,181 ,069 -,207 -,130 ,124 -,306 -,333 ,058 ,423 ,133
Gstml -,116 -,151 ,311 1 -,222 ,084 -,725 ,340 -,719 ,709 ,657 -,657 -,570 ,707 -,643 ,442 ,558 -,096 -,682 ,774 -,759 -,600 -,700 ,520 ,775
Gstpl ,124 ,407 -,015 -,222 1 ,128 ,321 -,181 ,352 -,079 ,118 ,093 ,096 -,325 -,011 ,007 -,481 ,271 -,042 -,137 ,080 -,075 ,295 -,001 -,139
Gsttl ,389 -,017 -,303 ,084 ,128 1 ,003 -,089 ,144 -,209 ,123 -,155 -,381 -,165 -,110 ,248 -,091 -,054 -,152 ,010 ,099 ,400 -,157 -,351 ,013
Hmox ,496 -,070 -,247 -,725 ,321 ,003 1 -,200 ,658 -,459 -,305 ,670 ,622 -,761 ,723 -,209 -,615 ,367 ,685 -,789 ,784 ,354 ,609 -,282 -,789
Nfe2l2 ,455 -,496 ,451 ,340 -,181 -,089 -,200 1 -,268 ,319 ,022 ,139 ,105 ,246 -,434 -,077 -,112 ,311 -,030 -,010 -,174 -,211 ,091 ,379 -,002
Nqo1 ,251 ,164 -,480 -,719 ,352 ,144 ,658 -,268 1 -,797 -,338 ,460 ,529 -,694 ,458 -,430 -,462 ,255 ,615 -,654 ,644 ,498 ,678 -,490 -,658
Ripk ,069 -,232 ,698 ,709 -,079 -,209 -,459 ,319 -,797 1 ,463 -,323 -,274 ,522 -,415 ,129 ,276 -,092 -,460 ,502 -,544 -,540 -,337 ,441 ,503
Sod1 -,095 ,212 ,074 ,657 ,118 ,123 -,305 ,022 -,338 ,463 1 -,650 -,574 ,544 -,381 ,193 ,565 -,049 -,395 ,686 -,668 -,776 -,460 ,517 ,680
ACT ,455 -,353 ,029 -,657 ,093 -,155 ,670 ,139 ,460 -,323 -,650 1 ,865 -,637 ,697 -,516 -,610 ,491 ,512 -,746 ,654 ,523 ,626 -,305 -,743
АЛТ ,401 -,445 -,040 -,570 ,096 -,381 ,622 ,105 ,529 -,274 -,574 ,865 1 -,540 ,620 -,557 -,568 ,542 ,634 -,681 ,641 ,398 ,680 -,364 -,683
ЛДГ -,334 -,008 ,200 ,707 -,325 -,165 -,761 ,246 -,694 ,522 ,544 -,637 -,540 1 -,468 ,300 ,813 -,040 -,364 ,908 -,896 -,629 -,631 ,425 ,909
ЩФ ,200 -,166 -,381 -,643 -,011 -,110 ,723 -,434 ,458 -,415 -,381 ,697 ,620 -,468 1 -,257 -,209 ,437 ,534 -,490 ,543 ,449 ,355 -,416 -,492
ТГ -,141 ,099 -,181 ,442 ,007 ,248 -,209 -,077 -,430 ,129 ,193 -,516 -,557 ,300 -,257 1 ,171 -,101 -,402 ,369 -,272 -,216 -,692 ,306 ,379
XCT -,503 ,231 ,069 ,558 -,481 -,091 -,615 -,112 -,462 ,276 ,565 -,610 -,568 ,813 -,209 ,171 1 -,225 -,270 ,828 -,788 -,507 -,613 ,327 ,827
Белок ,510 -,497 -,207 -,096 ,271 -,054 ,367 ,311 ,255 -,092 -,049 ,491 ,542 -,040 ,437 -,101 -,225 1 ,289 -,172 ,120 ,113 ,342 -,162 -,175
MK ,419 -,169 -,130 -,682 -,042 -,152 ,685 -,030 ,615 -,460 -,395 ,512 ,634 -,364 ,534 -,402 -,270 ,289 1 -,586 ,597 ,368 ,673 -,460 -,585
альбумин -,470 ,214 ,124 ,774 -,137 ,010 -,789 -,010 -,654 ,502 ,686 -,746 -,681 ,908 -,490 ,369 ,828 -,172 -,586 1 -,949 -,659 -,775 ,442 1,000
альфа 1 ,439 -,273 -,306 -,759 ,080 ,099 ,784 -,174 ,644 -,544 -,668 ,654 ,641 -,896 ,543 -,272 -,788 ,120 ,597 -,949 1 ,733 ,669 -,605 -,951
альфа2 ,328 -,284 -,333 -,600 -,075 ,400 ,354 -,211 ,498 -,540 -,776 ,523 ,398 -,629 ,449 -,216 -,507 ,113 ,368 -,659 ,733 1 ,488 -,851 -,660
бетта ,438 -,141 ,058 -,700 ,295 -,157 ,609 ,091 ,678 -,337 -,460 ,626 ,680 -,631 ,355 -,692 -,613 ,342 ,673 -,775 ,669 ,488 1 -,503 -,782
гамма -,262 ,290 ,423 ,520 -,001 -,351 -,282 ,379 -,490 ,441 ,517 -,305 -,364 ,425 -,416 ,306 ,327 -,162 -,460 ,442 -,605 -,851 -,503 1 ,452
А Г -,465 ,218 ,133 ,775 -,139 ,013 -,789 -,002 -,658 ,503 ,680 -,743 -,683 ,909 -,492 ,379 ,827 -,175 -,585 1,000 -,951 -,660 -,782 ,452 1
Ci
i о
Ob
О к
Ci О
Ob
Рис. 7. Корреляционная матрица уровня экспрессии генов-кандидатов и биохимических показателей через 72 ч после затравки ТХМ.
