CC BY
51
НАУЧНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ |МГ
Метаболическая активность соединительной и мышечной тканей на протяжении беременности, родов и послеродового периода
Воскресенский С.Л., Тесакова М.Л., Федорков А.Ч., Юрага Т.М.
Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск
Voskresensky S.L., Tesakova M.L., Fedorkov A.Ch., Yuraga TM.
Belarusian Medical Academy of Post-Graduate Education, Minsk
The metabolic activity of the connective and muscle tissues during pregnancy, delivery and postpartum period
Резюме. Определена концентрация метаболитов соединительной и мышечной тканей в моче у небеременных, беременных в I триместре и накануне родов (за 3 дня), а также у рожениц и родильниц. Установлено, что с началом беременности снижается катаболическая активность соединительной и мышечной тканей, которая достигает минимума во II триместре и сохраняется вплоть до срока естественного прерывания беременности. Максимальный уровень метаболической активности в данных тканях приходился на канун родов. Во время родов в мышечной ткани сохранялась повышенная катаболическая активность. В метаболизме соединительной ткани в родах отмечено два феномена. Первый связан с продолжением деструкции, второй - с прекращением образования«молодого»коллагена. В послеродовом периоде наблюдалось снижение метаболической активности до уровня, характерного для небеременных женщин. Сделаны выводы, что трансформация плодосох-раняющей функции организма женщины в плодоизгоняющую полностью завершается до начала родов и составляет сущность прелиминарного периода. Сами роды протекают на том уровне предродовой готовности к родам, который уже состоялся.
Периоды наиболее значимых метаболических изменений в соединительной и мышечной тканях, в связи с их масштабностью, могут рассматриваться как критические для развития самой беременности не только со стороны организма женщины, но и со стороны плода. Ключевые слова: соединительная ткань, мышечная ткань, готовность к родам, гидроксипролин, креатинин, фосфор, кальций. Summary. The concentration of the metabolites of the connective and muscle tissues in the urine of nonpregnant, pregnant women in the first trimester and on the days preceding the onset of labor (3 days), as well as parturient and pueperal women was defined. It was found, that with the beginning of pregnancy the catabolic activity of the connective and muscle tissues was reduced. The catabolic activity reaches a minimum in the II trimester and is kept up until the time of the natural pregnancy interruption. There is the maximum level of the metabolic activity in these tissues shortly before delivery. During delivery the elevated catabolic activity in the muscle tissue was kept. In the metabolism of the connective tissue during delivery two phenomena were recorded. The first is the continuation of the destruction, and the second is the termination of the form of the «young» collagen. In the postpartum period the metabolic activity was reduced to a level typical for nonpregnant women. It is concluded, that before the onset of labor the transformation of the fetal prolongy function of the femal organism into fetal interruption is completely stopped and there is the essence of the preliminary period. Delivery occurs at the level of predelivery readiness, which has already taken place. The periods of the most significant metabolic changes in the connective and muscle tissues because of their immenstty can be regarded as critical for the development of the pregnancy not only for the female organism, but also for the fetus.
Keywords: connective tissue, muscle tissue, readiness for delivery, hydroxyproline, creatinine, phosphorus, calcium.
С наступлением беременности в организме женщины происходят многоплановые функциональные и анатомические изменения. Анатомические изменения наиболее ярко выражены в теле матки. Ее масса увеличивается в 10 и более раз (с 70-100 г до 1000-1200 г). В клетках миометрия накапливаются сократительные белки, макроэргические соединения (АТФ, креатинфосфат, гликоген и др.), меняется интенсивность обмена электролитов [6, 7, 14]. В шейке матки происходит процесс сложного преобразования аморфного вещества соединительной ткани, включая коллаген, который трансформируется в так называемый «молодой» коллаген. В итоге этих изменений в «зрелой» шейке матки остается только 30-50% исходного уров-
ня коллагена и существенно изменяется соотношение различных гликозаминогли-кановых составляющих основного вещества [13, 15, 17].
Существенные изменения возникают и за пределами репродуктивной системы. Как правило, они менее демонстративные, но не менее значимые для организма женщины и исхода беременности, поскольку именно они являются фоном развития гестации и ее завершающей стадии - родов.
Наиболее значимый носитель соединительной ткани в организме - костная система. Она включает в себя 50% неорганических соединений, 25% воды и 25% органических веществ. Из них на коллаген приходится 90-95% белкового состава. Во время беременности костная ткань
ремоделируется, при дефиците кальция и микронутриентов возможно развитие остеопенического синдрома [2, 10, 12, 18].
Соединительнотканная составляющая кожи - дерма во время беременности также меняется. Там происходит деградация коллагенового остова. Клинически это проявляется полосами растяжения на передней брюшной стенке, бедренных, ягодичных областях, молочных железах, возникающими у 55-90% беременных женщин, повышением растяжимости тканей, связочного аппарата и подвижности суставов [11].
То есть в соединительной и мышечной тканях во время гестации происходят преобразования, которые являются безусловным следствием наступления беременности. Но они настолько масштабны
для организма, что варианты их осуществления могут влиять на течение беременности, вызвавшей их.
Можно предположить, что на протяжении беременности, во время родов и в послеродовом периоде существуют эпизоды активации и спада метаболической активности в этих составляющих организма и что нарушение их цикличности может быть связано с осложнениями гестации. Поэтому исследование особенностей метаболизма соединительной и мышечной тканей во время беременности представляет не только научный, но и практический интерес. Однако в доступной литературе мы не нашли сведений о закономерностях метаболизма в соединительной и мышечной тканях на протяжении беременности, родов и послеродового периода.
Цель исследования - установить характер изменения метаболизма со стороны соединительной и мышечной тканей во время беременности, в родах и послеродовом периоде путем определения их метаболических маркёров в моче.
Материалы и методы
Исследование проведено у 13 небеременных женщин - контрольная группа (группа 0) и 78 женщин - основная группа. Основную группу составили 47 беременных (группа I), 11 рожениц (группа II) и 20 родильниц (группа III).
Каждая из групп была разбита на подгруппы, исходя из определяющих ее характеристик. Так, группа I была разделена на пять подгрупп в зависимости от срока гестации и времени наступления родов: подгруппа Ia - беременные в сроке гестации 7-11 недель (n=9), подгруппа I6 - в сроке гестации 19-21 неделя (n=9), подгруппа !в - в сроке гестации 28-31 недель (n=9), подгруппа Ir - в сроке гестации 34-36 недель (n=10), подгруппа !д - в сроке гестации более 38 недель и за 3 дня до родов (n=10).
Группа рожениц была разделена на три подгруппы в зависимости от величины раскрытия шейки матки. Подгруппу IIa составили роженицы с раскрытием шейки матки до 4 см (n=11), подгруппу Иб - с раскрытием шейки матки 5-8 см (n=11), подгруппу Ив - роженицы с раскрытием шейки матки 9-10 см (n=11).
Группа родильниц разделена на две подгруппы в зависимости от суток послеродового периода. Подгруппа II Ia включила родильниц в 1-е сутки после родов (n=10), подгруппа Шб - родильниц в 3-и сутки после родов (n=10).
Все 89 женщин, включенных в исследование, были в возрасте от 18 до 43
лет. У них не было острых и хронических воспалительных процессов с клиническими проявлениями заболевания, а также иммунопатологических, ревматических и системных заболеваний мышечной и соединительной тканей.
Маркёрами метаболических процессов соединительной ткани были выбраны гидроксипролин (гидроксипролин свободный - Hp-f, гидроксипролин связанный -Hp-b и гидроксипролин общий - Hp), фосфор (Р) и кальций (Са), а маркёром метаболизма мышечной ткани - креати-нин (Сг).
Критериями их выбора были два условия. Биохимический цикл данных веществ в организме известен, а методики определения доступны для клинических лабораторий.
Биологической средой для количественной оценки исследованных маркёров была моча как экскрет организма, накапливающий метаболические вещества в течение нескольких часов. Эта отсроченность следствия и причины нивелировала случайности колебаний показателей и позволяла отследить интенсивность метаболизма на протяжении суток, а также более длительных промежутков времени.
В ходе предыдущих исследований [3] было установлено, что экскреция с мочой определяемых метаболитов в течение суток была неравномерной. Максимум их выделений во время беременности приходился на утренние часы, перед родами (за 3 дня) смещался на вечернее время, после родов возвращался к прежнему хронотипу. В настоящем исследовании в качестве анализируемых показателей использованы те, которые соответствовали максимальной метаболической активности у небеременных женщин, во время гестации и в послеродовом периоде. Во время родов исследование проводили в зависимости от дилатации шейки матки, не привязываясь к суточному ритму.
Уровни гидроксипролина и его фракций определяли фотометрическим методом при длине волны 520-560 нм в соответствии с рекомендациями Ша-раева П.Н. и Гапузова В.В. [4, 8, 9]. Связанный гидроксипролин вычисляли как разность концентраций общего и свободного гидроксипролина. Уровни креа-тинина, кальция и фосфора в моче определяли с помощью стандартных наборов Vital Diagnostics (Санкт-Петербург). Лабораторный этап выполнили в центральной научно-исследовательской лаборатории БелМАПО. Статистическую обработку провели с использованием t-критерия
Стьюдента. За минимальный порог достоверности приняли Р<0,05.
Результаты и обсуждение
Проведенное исследование показало, что в первые недели беременности интенсивность катаболических процессов в соединительной ткани, оценивавшаяся по концентрации гидроксипролина и фосфора в моче, снижалась. В последующем, вплоть до срока доношенной беременности, она оставалась стабильной. За 3 дня до родов метаболическая активность соединительной и мышечной тканей резко (в 5-10 раз по показателям гидроксипролина и в 3-4 раза по креати-нину) возрастала. Выделение всех фракций гидроксипролина при этом достигало максимума за весь исследуемый промежуток времени (табл. 1, рисунок).
Непосредственно во время родов, то есть на этапах раскрытия шейки матки до 4 см, более 5 см и перед началом потуж-ного периода родов, метаболическая активность, определявшаяся по выделению фракций гидроксипролина, была разная. Экскреция свободного гидроксипролина оставалась стабильно высокой, связанного - уже в начале родов быстро падала до уровня, сопоставимого с таковым до начала беременности. Вследствие этого показатели экскреции общего гидроксипроли-на отличались от таковых для его фракций (табл. 2, рисунок). Однако достоверно значимое снижение выделения как связанного, так и свободного гидроксипролина по отношению к их пику приходилось на послеродовой период (1-е и 3-и сутки).
Аналогично изменялась экскреция фосфора. Во время беременности имела место относительная стабильность выделения фосфора. За трое суток до начала родов была выявлена его повышенная экскреция, сохранившаяся и на время родов. В послеродовом периоде она падала до уровня, сопоставимого с периодом гестации (табл. 1-3, рисунок).
Экскреция кальция с мочой отличалась от показателей экскреции ги-дроксипролина и фосфора. С началом беременности отмечалось не снижение его выделения, а возрастание, которое нивелировалось лишь к началу III триместра беременности. Пик экскреции, как и для других маркёров метаболизма соединительной ткани, приходился на канун родов (3 дня до их начала), минимум - на послеродовой период. Но он наступил не сразу после родов, а только на 3-и сутки (табл. 1-3, рисунок).
Выделение с мочой креатинина, как показателя метаболизма мышечной ткани, в целом изменялось, как и вы-
Таблица 1 ^ Содержание свободного, связанного и общего гидроксипролина, креатинина; фосфора и кальция в моче на протяжении беременности (М±m)
Группа Нр-Г, мкмоль/л Нр-Ь, мкмоль/л Нр, мкмоль/л Р ммоль/л Са, ммоль/л Сг, мкмоль/л
0 (контроль) 16 ±1,6* 50±7,8* 66±8,8* 8,4±0,8 1,9±0,3* 14±2,2*
1а (7-11 нед.) 9,3± 1,6# 26±6,7# 35,6±7,8# 6,9±0,7 3,7±0,6# 9,0±1,2
1б (19-21 нед.) 6,8±0,9 15±2,9 22±3,4 6,5±0,8 3,4±0,5* 4,2±0,5#
1в (28-31 нед.) 9,4± 1,2 17±3,5 26±4,1 5,8±0,6 1,8±0,3# 5,3±0,8
1г (34-36 нед.) 12 ±2,1* 19±3,1* 31 ±4,8* 6,7±0,6* 2,5±0,3* 8,6±2,3*
|д (за 3 дня) 42±9,4# 208±24,3# 250±31,4# 16 ±1,5# 5,0±0,5# 15 ±1,4#
П р и м е ч а н и е: Здесь и в табл. 2 и 3: Различия между * и * достоверны для соответствующих групп.
Таблица 2 Содержание свободного, связанного и общего гидроксипролина, креатинина, фосфора и кальция в моче во время родов (М±m)
Группа II НИ, мкмоль/л Нр-Ь, мкмоль/л Нр, мкмоль/л Р ммоль/л Са, ммоль/л Сг, мкмоль/л
11а (0-4 см) 111 ±21,5* 52 ±10,8* 199±45,3 22±2,0* 3,4±0,2* 13± 1,6
11б (5-8 см) 99±21,6 50±9,3 149±28,6 21 ±2,6 3,4±0,3 11 ±1,3*
11в (9-10 см) 116 ±22,2* 55± 14,6 171 ±35,5 23±3,0* 3,1 ±0,3* 14± 1,3*
Содержание свободного, связанного и общего гидроксипролина, креатинина, фосфора и кальция в моче в послеродовом периоде (М±m)
[руппа III Нр-Г, мкмоль/л Нр-Ь, мкмоль/л Нр, мкмоль/л Р ммоль/л Са, ммоль/л Сг, мкмоль/л
111а (1-е сутки) 64±6,0# 61 ±12,1 125±15,0 8,3±1,8# 3,2±0,2 6,8±0,6#
111б (3-и сутки) 40±7,4 46±12,2 86±19,1 8,4±1,6 1,7±0,2# 5,1 ±0,8
деление свободного гидроксипролина. С наступлением беременности экскреция падала, достигая минимума в сроке беременности 19-21 неделя, но за 3 дня до родов существенно возрастала и максимальной была во время родов. После родов выделение креатинина быстро снижалось, на протяжении первых трех суток после родов существенно не менялась и было аналогично таковому во II триместре беременности (табл. 1-3, рисунок).
Соединительная ткань состоит из клеток и основного вещества, или меж-
клеточного матрикса. Клетки чаще всего представлены фибробластами, хондро-и остеобластами, макрофагами и др. В межклеточном матриксе (основном, аморфном веществе) наиболее представительными молекулами являются коллаген, эластин, протеогликаны, а также фибронектин и др. При этом коллаген - наиболее весомый в количественном отношении. На него приходится до 33% общего количества белка в организме, из которого до 50% находится в костной ткани, 40% - в
коже (дерме) и 10% - в строме внутренних органов [2, 5].
Маркёром метаболизма коллагена является гидроксипролин. На эту аминокислоту приходится 13% от аминокислотного набора коллагена. Существует свободный и связанный гидроксипролин [16].
Свободный гидроксипролин появляется в результате деградации коллагена и не используется для его биосинтеза вновь. По нему оценивается интенсивность разрушения коллагена. Связанный гидроксипролин, напротив, участвует в образовании «молодого», «незрелого» коллагена и поэтому он отражает интенсивность его синтеза [1, 8, 9].
Кальций и фосфор - макроэлементы, основным источником которых в организме выступает костная ткань. Но их экскреция с мочой связана с интенсивностью преобразовательных процессов в соединительной ткани в целом, а не только в кости, из-за общности регуляторных процессов [2, 5].
Креатинин образуется из резервного макроэргического соединения мышцы -креатинфосфата. Его уровень пропорционален мышечной массе и зависит от активности протекающих в ней биохимических процессов [2, 5].
Таким образом, выбранные для исследования компоненты действительно отражают метаболизм соединительной и мышечной тканей.
Согласно полученным данным, ка-таболические процессы в соединительной и мышечной тканях с наступлением беременности, на ее протяжении, во время родов и в послеродовом периоде претерпевали существенные изменения. Сопряженность показателей, отражавших состояние организма (отсутствие беременности, ее наличие, срок геста-ции, роды, послеродовой период), и параметров метаболизма соединительной и мышечной тканей (концентрация в моче Нр-^ Нр-Ь, Нр, I? Са, Сг) позволяет прийти к заключению о значимости биохимических процессов в соединительной и мышечной тканях для течения беременности, родов и послеродового периода.
За 3 дня до родов существенно увеличивалась метаболическая активность соединительной и мышечной тканей (пятикратное для первой и двукратное для второй), что отражалось в выбросе гидроксипролина, кальция фосфора, а также креатинина. Данное явление по времени совпадало с завершением процессов подготовки к родам и предшествовало их началу.
При этом важно и то, что катаболиче-ская активность связанного гидроксипро-
Рисунок
Схематическое отображение изменений продуктов метаболизма соединительной и мышечной тканей у небеременных, беременных, рожениц и родильниц
лина была кратковременной. Она снижалась до уровня, близкого к базальному, уже к началу родов, то есть образование «молодого» коллагена заканчивалось к началу родов или в самом их начале. И хотя в родах продолжалась деструкция соединительной ткани, что иллюстрировалось увеличением экскреции свободного гидроксипролина и фосфора, процесс преобразования коллагена в шейке матки закончился.
Значит, в физиологических условиях завершающая фаза формирования готовности к родам проходит до их начала. При этом она наиболее интенсивна на протяжении последних 3 дней до родов. А сами роды, с их клиническими проявлениями в виде дилатации шейки матки, контракции миометрия, продвижения плода, проходят на том фоне интенсивности метаболических процессов, который сформировался ранее.
То есть принципиальное отличие I периода родов от прелиминарного, или латентного, периода родов состоит не в видимых, или регистрируемых, показателях активности сократительной деятельности матки, раскрытия шейки матки, появлении болевых ощущений, а в степени завершенности всех биохимических процессов в организме и половой системе женщины, сущность которых связана с инверсией плодосохраняющей функции матки, присущей беременности, в плодоизгоняющую, присущую родам. В прелиминарный,
или латентный, период родов, они продолжаются, а в родах - прекращаются.
Учитывая время, необходимое для окончательного формирования готовности к родам в естественных условиях, вероятно, следует критически относиться к существующей практике ускорения родо-возбуждения после введения одной дозы лекарственного средства, содержащего простагландин, без взвешенной оценки состояния родовых путей. Попытка инициации родовой деятельности (любыми средствами) при биохимической неготовности к родам (плотная шейка матки) опасна в отношении развития аномалий родовых сил, нарушения состояния плода, поскольку в этом случае родовой процесс будет протекать на патологическом биохимическом фоне.
Метаболическая активность соединительной и мышечной тканей у небеременных женщин, на протяжении беременности, родов и послеродового периода разная. С наступлением беременности она снижается, а накануне родов увеличивается в 2-5 раз при оценке по разным маркёрам. Увеличение экскреции метаболитов соединительной и мышечной тканей в целом носит однонаправленный характер. Она резко возрастает по крайней мере за 3 дня до начала спонтанных родов и сохраняется таковой для большинства исследованных показателей на протяжении родов, за исключением по-
казателей связанного гидроксипролина, который участвует в образовании коллагена, присущего родовому процессу. В послеродовом периоде выделение с мочой исследованных продуктов метаболизма возвращается к уровню, близкому для небеременных женщин.
Выводы
1. Интенсивность метаболизма соединительной и мышечной тканей тесно связана со сроками гестации, процессом родов и послеродовым периодом. С началом беременности катаболическая активность соединительной и мышечной тканей снижается, достигая минимума во II триместре, и сохраняется вплоть до срока естественного прерывания беременности. Активация метаболизма в соединительной и мышечной тканях приходится на последние дни беременности и в целом сохраняется до окончания родов. В послеродовом периоде интенсивность метаболизма снижается до уровня, близкого к исходному (до беременности) на протяжении первых 3 суток.
2. Метаболические процессы на протяжении беременности (в том числе соединительной и мышечной тканей) направлены на сохранение гестации. Перед родами происходит инверсия этой основополагающей функции женского организма. Начинается перестройка метаболизма, обеспечивающего не сохранение беременности, а ее прерывание, то есть действие, связанное с избавлением матки от плода. Оно возникает и проявляется задолго до родов, но наибольшую интенсивность достигает за 3 дня до родораз-решения.
3. В естественных условиях трансформация плодосохраняющей функции организма женщины в плодоизгоняющую полностью завершается до начала родов и составляет сущность прелиминарного периода. Сами роды протекают на том уровне предродовой готовности к родам, который уже состоялся. В физиологических условиях достигнутый уровень не меняется.
4. Периоды наиболее значимых метаболических изменений в соединительной и мышечной тканях в связи с их масштабностью могут рассматриваться как критические для развития самой беременности не только со стороны организма женщины, но и со стороны плода.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Белобородова, Е.В. Активность эластазо-, колла-геназоподобных протеиназ и их ингибиторов в плазме крови при метаболизме коллагена в условиях
хронического течения заболеваний печени вирусной и токсической этиологии / Е.В.Белобородова и др. // Бюл. СО РАМН, 2010. - Т.30, №2. - С.94-100.
2. Биохимия: учеб. для вузов / под ред. Е.С.Северина. - М., 2003. - 779 с.
3. Воскресенский, С.Л. Суточная цикличность метаболической активности соединительной и мышечной ткани у небеременных и беременных женщин // С.Л.Воскресенский, А.Ч.Федорков, Т.М.Юрага / Здравоохранение. - 2011. - №9. - С.47-51.
4. Галузов, В.В. Определение оксипролина в суточной моче / В.В.Гапузов // Лаборатор. дело.- 1990.-№10.- С.43-45.
5. Маршал, В.Дж. Клиническая биохимия / В.Дж. Маршал. - М., СПб., 1999. - 368 с.
6. Серов, В.Н. Руководство по практическому акушерству / В.Н.Серов, А.Н.Стрижаков, С.А.Маркин. -М., 1997.- 440 с.
7. Сидорова, И.С. Физиология и патология родовой деятельности: учеб. пособие. - М., 2006. - 240 с.
8. Шараев, П.Н. Определение свободного и свя-
занного оксипролина в моче / П.Н.Шараев и др. // Лабораторное дело. - 1990. - №12. - С.23-25.
9. Шараев, П.Н. О состоянии обмена коллагена при иммобилизации и электропунктуре / П.Н.Шараев и др. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. -1986. - №3. - С.304-306.
10. Щербавская, Э.А. Патофизиологические аспекты остеопении и остеопороза при беременности / Э.А.Щербавская, Б.И.Гельцер // Рос. мед. вести. -
2003.- №2. - С.28-33.
11. Nussbaum, R. Cosmetic aspects of pregnancy / R.Nussbaum, A.V.Benedetto // Clin. Dermatol. -2006. - V24. - P.133-141.
12. Oliveri, B. Mineral and bone mass changes during pregnancy and lactation / B.Oliveri et al. // Nutrition. -
2004. - V20. - P.235-240.
13. Rechberger, T Connective tissue changes in the cervix during normal pregnancy and pregnancy complicated by cervical incompetence / TRechberger, N.Uldbjerg, H.Oxlund // Obstet. Gynecol. - 1988. - V71, N4. - P.563-567.
14. Reece, E.A. Medicine of the fetus and mother / E.A. Reece et al. // Philadelphia: Lippincott Comp., 1992. -Р.845.
15. Ripening of the human uterine cervix related to changes in collagen, glycosaminoglicans and collagenolytic activity / N.Uldbjerg, G.Ekman, A.Malmstrom et al. // Am. J. Obstet. Gynec. - 1983. -V147, N6.- P.662-666.
16. Simsek, B. Urine products of bone breakdown as markers of bone resorption and clinical usefulness of urinary hydroxyproline: an overview / B.Simsek, O.Karacaer, I.Karaca // Chinese Med. J. - 2004.- V117, N2. - P.291-295.
17. Uldbjerg, N. The integrity of cervical collagen during pregnancy and labor / N.Uldbjerg et al. // Gynecol. Obstet. Invest. - 1985. - V.20. - P.68-73.
18. Ulrich, U. Bone remodeling and bone mineral density during pregnancy / U.Ulrich et al. // Arch. Gynecol. Obstet. 2003. - V.268. - P.309-316.
Поступила 26.07.2012 г.
Цитологическое исследование выпотных жидкостей
с использованием метода клеточных блоков
Ерохина О.А., Клюкина Л.Б., Толкач Е.В., Урбанович М.Н., Макейчик Е.Е., Кохановская О.О., Гапанович Е.А.
РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова, Минск
Erokhina O.A., Kliukina L.B., Tolkach A.V., Urbanovich M.N., Makeichyk A.E., Kokhanovskaya O.O., Hapanovich A.A.
N.N. Alexandrov National Cancer Center of Belarusy, Minsk
Cytology of serous effusions applying the cell block method
Резюме. Проведено исследование по разработке и сравнительной оценке методов приготовления клеточных блоков из материала 70 выпотных жидкостей, обработанных с помощью центрифуги и цитоспина: 70 и 64 соответственно. Показано, что оба метода обеспечивают отличную сохранность (96,3+1,3%) и качество окраски (93,3+2,2%) клеточного материала в микропрепаратах клеточных блоков. Пригодными для выполнения иммуноцитохимического анализа признано 107 клеточных блоков (79,9+3,5%). Установлено, что показатели диагностической и опухолевой клеточности цитологических мазков экссудатов достоверно выше аналогичных показателей микропрепаратов клеточных блоков (88,6+3,8 и 78,4+3,6%; 81,4±4,6 и 67,9+4,0%; р<0,05), что указывает на необходимость совершенствования способа концентрации клеточного осадка выпотных жидкостей с целью повышения информативности микропрепаратов клеточных блоков. Ключевые слова: цитологическое исследование, выпотные жидкости, метод клеточных блоков.
Summary. We have prepared 70 and 64 cell blocks using Centrifuge and Cytospin according from 70 serous effusions in order to develop the cell block method and to compare two mode of it. Both modes of cell block method provided perfectly safe keeping (96.3+1.3%) and stain quality (93.3+2.2%) of cell blocks. 107 cell blocks have been suitable to carry out the immunochemical examination (79.9+3.5%). It was determined that index of diagnostic and tumor cellularity in cytological specimens was significant higher than in cell blocks (88.6+3.8 & 78.4+3.6%; 81.4+4.6 & 67.9+4.0%; р<0,05), that indicates on necessity to improve the method of sediment concentration in serous effusions thus to raise the efficacy of cell block method. Keywords: сytological examination, serous effusions, cell block method.
Современный уровень цитологической диагностики предполагает применение иммуноцитохимиче-ских исследований (ИЦХ), способствующих уточнению гистологической формы и органной принадлежности новообразований [1-4, 8, 10, 11]. По мнению ряда исследователей, при выполнении ИЦХ-анализа наиболее надежной и экономически обоснованной является техника клеточных блоков (КБ). Ее приоритетность обусловлена тем, что в препаратах из КБ сохраняются клеточная и тканевая архитектоника исследуемого материала
с минимальной потерей гистогенетиче-ских антигенов; клеточные маркёры определяются на залитом в парафин материале по рутинной, хорошо апробированной во многих гистологических лабораториях иммуногистохимической методике, и при этом появляется возможность приготовить достаточное количество параллельных срезов, каждый из которых имеет одинаковые характеристики [5, 6, 7, 9].
Цель исследования - разработка методов приготовления клеточных блоков из выпотных жидкостей и оценка их пригодности в цитологической диагностике.
Материалы и методы
Методы приготовления парафиновых КБ разработаны на основе макро- и микроскопического исследования 70 вы-потных жидкостей (54 плевральных и 16 асцитических), полученных у 61 онкологического больного. Жидкости обрабатывали с помощью центрифуги Kubota 8100 (Япония) или цитоцентрифуги Cytospin-4 (Thermo Shandon Limited, Великобритания), по 35 экссудатов, случайный отбор. Для получения цитологического материала экссудаты центрифугировали на центрифуге или цитоспине в течение 8
