Математическое моделирование кинетики покровно- ямочного эпителия желудка Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

experimental gastroenterolog

МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ КИНЕТИКИ ПОКРОВНО-ЯМОЧНОГО ЭПИТЕЛИЯ ЖЕЛУДКА

Баринов Э. Ф., Лях Ю. Е., Сулаева О. Н., Гурьянов В. Г., Корриа Леон И. Р.

Донецкий национальный медицинский университет имени М. Горького, Украина

Баринов Эдуард Федорович 83003, Донецк, пр. Ильича, 16 Тел.: (0622) 95 5401, +38050 571 0577 E-mail: [email protected]

РЕЗЮМЕ

C целью формализованной оценки кинетики покровно-ямочного эпителия желудка провели морфометрический анализ биоптатов слизистой оболочки 26 пациентов без эндоскопических признаков патологии желудка. Выполняя пошаговую оценку ямочек, оценивали высоту клеток, ядерно-цитоплазматическое отношение и коэффициент элонгации ядра в недифференцированных клетках дна ямки (Ц-зона), дифференцирующихся клетках ее промежуточной части (L2) и поверхности валиков (Lj-зона). Использование кластерного многофакторного анализа и принципа нейронных сетей (пакеты Statistica и MedStat) позволило определить количественные границы разных функциональных зон (Ц — 33 ± 3%; L2 — 27 ± 3%; Ц — 40 ± 3% от глубины ямки) и создать систему стандартов соответствия клетки той или иной зоне, позволяющей фиксировать изменение диф-ференцировки клеток покровного эпителия желудка при патологических процессах, судить о его барьерных свойствах.

SUMMARY

With the aim of formalization of gastric epithelium kinetics estimation the morphometric analysis of gastric mucosa bioptates was performed in 26 patients without endoscopic signs of stomach pathology. During step estimation of gastric pits at different depth authors analyzed changes of cells size, nucleo-cytoplasmic ratio, coefficient of nucleus elongation in immature cells of pit bottom (L1 zone), differentiating cells in pit intermediate zone (L2), and on mucosa surface (L3 zone). Authors used claster and neuronet analysis (by Statistica and MedStat) to make the mathematical model which permit to determine the proportion of functional zones in normal pit (Ц — 33 ± 3%; L2 — 27 ± 3%; Ц — 40 ± 3% of gastric pit depth) and to develop the system of cell standards for each zone. These results can be used to diagnostic of gastric epithelium differentiation changes under pathology and to interpret the barrier properties of gastric epithelium.

В основе патологических изменений слизистой оболочки желудка (СОЖ) лежит повреждение гистогематического барьера [2; 9]. Состояние данной функциональной системы зависит от ряда параметров, включая специфику микробной флоры и иммунологической реактивности организма, состояние регионарного кровотока, механизмов локальной регуляции и цитопротекции, соотношение между эндогенными факторами агрессии (кислота, ферменты, пероксинитриты, желчь и

пр.) и слизисто-бикарбонатным буфером на поверхности покровно-ямочного эпителия (ПЯЭ) [6; 12]. Именно последний на сегодняшний день считается первой и наиболее уязвимой линией защиты СОЖ при действии повреждающих факторов. Согласно существующей в современной гастроэнтерологии концепции, нарушение функциональных свойств ПЯЭ может быть связано с изменением пролиферации, дифференцировки и скорости апоптоза эпителиоцитов, экспрессии

m

о

муцинов и трефоиловых пептидов, комплекса факторов роста и цитокинов, активностью кар-боангидразы и системы транспортеров плазмо-леммы, сенситивности рецепторов к системным и локальным регуляторам и пр. [2; 10; 13]. Однако используемые на сегодняшний день методические подходы не позволяют сформировать целостное представление о структурно-функциональном состоянии ПЯЭ, обновляющегося каждые 2-3 дня. Одной из причин этого является анализ отдельных параметров, выбор которых чаще всего продиктован целью исследователя. Так, для оценки пролиферации клеток применяют моноклональ-ные антитела к К-67, а апоптоза — моноклоны к р53 [8; 10], но при этом не факт, что будет исследована секреторная (слизеобразующая) функция эпителия, определяющая параметры барьерных свойств слизистой оболочки [9].

Использование лектиновой гистохимии или имунноцитохимии позволяет оценить выраженность сиалирования и сульфатирования муцинов, однако не характеризует кинетику ПЯЭ [2; 10]. Применяемые сегодня методические подходы не учитывают особенностей пространственной организации разных морфогенетических процессов в эпителии слизистой оболочки желудка. Одновременная оценка программы морфогенеза ПЯЭ, включая пролиферацию, миграцию, диф-ференцировку, функциональную активность и гибель клеток, либо невозможна, либо экономически нецелесообразна. В этом контексте важно исходить из того, что каждый из перечисленных процессов в норме осуществляется в определенном пространственном компартменте (зоне) ямочек и сопровождается изменением степени зрелости и функциональной активности клеток [2; 6]. Более того, при патологических процессах (гастритах, язвенной болезни) в слизистой оболочке желудка, включающей ткани с заведомо высоким регенераторным потенциалом, имеет место нарушение репарации. Данный феномен, по данным ряда исследователей, сопровождается усилением пролиферации, но при этом имеет место поддержание или прогрессирование альтерации тканей. Ведущей причиной этого дисбаланса является изменение паттерна дифференцировки клеток. Последнее отражается на карио- и цитометри-ческих характеристиках, которые, к сожалению неоправданно забыты сегодня. Классическими морфометрическими критериями, используемыми для регистрации и трактовки указанных процессов, являются ядерно-цитоплазматическое отношение, высота клеток, кариометрическая характеристика, митотический индекс и пр. Тем не менее до сегодняшнего дня в литературе нет единой системы оценки паттерна дифференцировки клеток и понятия зональной гетерогенности ямки, которые, по сути, отражают кинетику клеток покровного эпителия и их барьерные свойства. Целью работы явилась комплексная

формализованная оценка пространственного градиента морфогенетических процессов в покровно-ямочном эпителии тела желудка путем построения и анализа соответствующих математических моделей.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведена морфологическая оценка биоптатов слизистой оболочки тела желудка у 26 пациентов в возрасте 50,0 ± 6,8 года без эндоскопических признаков патологии желудка. Биопсийный материал фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, обезвоживали в спиртах восходящей плотности, заливали в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином по методу Браше, ставили ШИК-реакцию. Верификацию пространственного распределения процессов пролиферации и апоптоза клеток проводили с использованием моноклональных антител к Ki-67 и р53. Морфометрический анализ осуществляли на основании пошагового исследования ПЯЭ на разной глубине ямочек. Для этого в серии срезов биоптатов каждого пациента измеряли максимальную глубину ямочек. Дальнейшую оценку параметров эпителия проводили в трех равновеликих отрезках стенки ямочек. С помощью окуляр-микрометра измеряли высоту клеток, максимальный и минимальный диаметры ядра, на основании чего рассчитывали коэффициент элонгации ядра (КЭ) и ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО) [1]. Кроме того, учитывали удельную плотность митотиче-ски делящихся клеток.

Для представления полученных результатов рассчитывалось среднее значение анализируемых показателя (X) и стандартное отклонение (s). При проведении сравнения показателей для различных зон использованы методы множественных сравнений [4]. Для выявления связи между признаками использовался корреляционный анализ (рассчитывался коэффициент корреляции Спирмена) [3]. С целью определения критерия степени дифферен-цировки клеток использовали методы нейросете-вого анализа [7]. Для оценки качества математической модели рассчитывался показатель согласия каппа (к) [11], показывающий степень совпадения результатов прогнозирования с истинными, а также его 95%-ный доверительный интервал (95% ДИ). Анализ показателей производили с помощью статистического пакета MedStat [3], CIA [11], а построение и анализ математических моделей — в пакете Statistical Neural Network (StatSoft. Inc., 1999).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При анализе ямочек желудка исходили из общепринятой концепции, касающейся локализации стволовых клеток в области дна ямочек (перешейка

желез), фронта их миграции и дифференцировки из глубины ямочек в направлении поверхности валиков. Визуализацию процессов пролиферации и дифференцировки клеток проводили с использованием моноклональных антител к К-67 и ШИК-реакции соответственно. На основании этого оценку ПЯЭ проводили с учетом локализации клеток в различных функциональных зонах: Ь1 — зона расположения недифференцированных клеток с максимальной способностью к делению; Ь2 — зона дифференцировки клеток, характеризующейся снижением митотической активности и нарастанием секреторной способности; Ь3 — зона функциональной активности эпителиоцитов. Анализ характера распределения высоты, КЭ и ЯЦО в 1^-зоне (критерий х2) показал большую величину вариабельности признаков (см. таблицу), что может быть обусловлено высокой частотой митозов (МИ) и

нахождением клеток данной зоны в разных фазах клеточного цикла. При проведении корреляционного анализа выявлена связь лишь между двумя переменными — высотой и ЯЦО (показатель парной корреляции составил -0,770, p < 0,05).

Анализ Ъ2-зоны ямки показал еще более выраженную вариабельность признаков. Высота клеток варьировала более чем в 2,5 раза, тогда как различия КЭ и ЯЦО достигали 3-кратного размаха, что может отражать разный уровень дифференцировки и слизеоо-бразования в эпителиоцитах. Поверхностная зона ямки с выходом на валики слизистой оболочки желудка была более гомогенна по показателям цито- и кариометрии. Высота клеток соответствовала нормальному закону распределения, а распределения ЯЦО

Б >■

¡2 о

S о L ° OS

ое

Щ о Нв

О ÏD

о.

I- ®

и

га

L Б

га

X

j

га

I-

х ш 2 s а ш с и

v

m

ПОКАЗАТЕЛИ ЦИТОМЕТРИИ РАЗНЫХ ЗОН ЖЕЛУДОЧНЫХ ЯМОК

Наименование признака X ± s (min-max) Статистическая значимость различия, p

зона L3 зона L2 зона Lj

Высота клетки, мкм 26,5 ± 4,6 (18-35) 24,0 ± 2,7* (19-29) 16,4 ± 3,3** (10-25) < 0,001

Коэффициент элонгации ядер 0,42 ± 0,13 (0,2-0,7) 0,54+0,12* (0,37-0,85) 0,57 ± 0,15* (0,3-0,8) < 0,001

Ядерно-цитоплазматическое отношение 0,30 ± 0,08 (0,2-0,45) 0,29 ± 0,06 (0,2-0,47) 0,46 ± 0,12** (0,2-0,8) < 0,001

О

Примечания: * Отмечены статистически значимые отличия средних значений показателей от средних для зоны L3. # Отмечены статистически значимые отличия средних значений показателей от средних для зоны L2 (критерий множественных сравнений Данна).

и КЭ отличались от нормального закона ^ = 0,028 и p < 0,001). Проведение межзональных сравнений показало, что если различия между Ь1- и Ь3-зонами являются статистически значимыми (во всех случаях p < 0,01), то разница между (Ь1-Ь2)- и (Ь2-Ь3)-зонами не столь демонстративна. При этом интервалы максимальных и минимальных значений всех показателей перекрываются, что свидетельствует о низкой диагностической ценности использования каждого из критериев в отдельности. Такой результат вряд ли может считаться приемлемым, поскольку не позволяет фиксировать границы и параметры клеток Ь2-зоны, хотя именно она является наиболее интересной и значимой с клинической точки зрения. Здесь происходит дифференцировка клеток, то есть выход из клеточного цикла в фазу G0. Изменение границ данной зоны может отражать степень нарушения таких морфогенетических процессов, как пролиферация и дифференцировка клеток ПЯЭ.

В поиске путей решения данной проблемы, а также с целью статистически обоснованного разделения на зоны с формированием стандартов пространственных границ между разными морфоге-нетическими процессами в ПЯЭ был использован метод нейросетевого моделирования. Для полного и точного описания клеток разных зон желудочной ямки была построена модель классификации с учетом четырех признаков (высота клетки, ЯЦО, КЭ, глубина расположения в ямке). Учитывая нелинейность связей, была построена нейросетевая модель типа «многослойный персептрон» (рис. 1). [4]. Обучение модели проводилось методами "back propagation" (1000 итераций) и "quasi-Newton" (500 итераций). Для предотвращения «переобучения» модели поводился контроль ошибки прогнозирования на контрольном множестве [4].

Полученная математическая модель может быть выражена системой уравнений:

1-Л

о

г

Y\ = -

1 + ехр(-Х Wyxh-Wov

У,=

1 + ехр(-£ W2ixh-W02)

Кз = -

1 + ехр(-£ W^xh-Wn)

где i = 1, 2, 3 — номер нейрона скрытого слоя, И. — уровень активации .-го нейрона скрытого слоя, Wы — весовые коэффициенты, полученные в процессе обучения нейросетевой модели. И. рассчитывается исходя из значений анализируемых признаков по формуле:

Л = -

1 + ехр(-£ g,jXx-gm)

h 1

(2)

где . = 1, 2, 3, 4 — номер нейрона входного слоя, х. — значение соответствующего признака, приведенное к интервалу (0, 1), g.. — весовые коэффициенты, полученные в процессе обучения нейросетевой модели.

о о

При прогнозировании степени дифференци-ровки клетки для конкретных значений ее признаков (высота клетки, коэффициент элонгации ядер, ядерно-цитоплазматическое отношение и с учетом глубины ямки) по формулам (1) и (2) рассчитывается значение уровней активации нейронов выходного слоя У,, У2, У3. Решение о степени дифференцировки клетки принимается исходя из номера к нейрона, для которого Ук принимает максимальное значение. Так, при к = 1 клетка относится к типу Ь1, при к = 2 — к типу Ь2, при к = 3 — к типу Ь3. При проведении анализа полученной нелинейной модели было установлено, что степень дифференцировки клетки в наибольшей степени (но не однозначно) определяется ее высотой. Так, при малом значении этого показателя практически при любых значениях других показателей модель относит ее к Ь1 (рис. 2

A), при больших значениях — к Ь3 (рис. 2 В). Более сложным является вопрос классификации при средних значениях показателя высоты клетки (рис. 2 С,

B). Для оценки качества прогнозирования в рамках этой модели был рассчитан показатель согласия к, который на обучающем множестве составил к = 0,81 (95% ДИ 0,71-0,92), на тестовом множестве к = 0,85 (95% ДИ 0,68-1,00). Точность предсказаний модели на обучающем множестве составила 87,8% (95% ДИ 80,1-93,8%), на тестовом множестве — 90,0% (95% ДИ 76,3-98,2%). То есть модель достаточно качественно прогнозирует отнесение объекта к каждой из зон ямки.

Использование данной модели позволило определить стандарты отношения клеток к той или иной зоне (см. таблицу), а также математически обоснованно провести пространственное разграничение ямки на функциональные зоны, пропорции между которыми составили: Ь1-зона — 33 ± 3%; промежуточная Ь2-зона — 27 ± 3%; поверхностная Ь1-зона — 40 ± 3% от глубины ямки.

Апробация модели в условиях патологии гастро-дуоденальной зоны подтвердила ее диагностические возможности, позволяя фиксировать степень изменения дифференцировки клеток ПЯЭ при патологических процессах, а также интерпретировать выраженность нарушения гастроинтести-нального барьера.

Примеры использования модели.

Пациент 1 — мужчина, 58 лет. Диагноз: острый панкреатит. Проведена диагностическая эзофаго-гастродуоденоскопия, выявлены эндоскопические признаки гипертрофического гастрита. Выполнена диагностическая биопсия.

При гистологическом исследовании биоптата тела желудка проведена оценка 5 ямочек и морфо-метрический анализ 285 клеток в трех зонах. В Ь1- и Ь2-зонах средние показатели высоты и рассчитанные индексы КЭ и ЯЦО не имели достоверных отличий от контроля. В Ь3 все показатели широко варьировали: высота клеток составляла 25,2 ± 5,3 мкм, КЭ — 0,47 ± 0,12, ЯЦО — 0,32 ± 0,1, что было связано с

О—

—I

Q—

-С-

О—

_

Q—

Рис. 1. Архитектура нелинейной нейросетевой 4-факторной модели прогнозирования степени дифференцировки клетки (треугольниками обозначены 4 нейрона входного слоя (neurons of input layer), серыми квадратами — 3 нейрона скрытого слоя, белыми квадратами — 3 нейрона выходного слоя (neurons in output layer))

Б >■

¡2 о

So L ° OS

oe

Щ o

hjg

о ¡d

l- ®

и

ID

L

Б

ID

X

j

ID IX <U 2 s

-

Ш

с

U

v

m

O

Рис. 2. Результаты прогнозирования 4-факторной нелинейной нейросетевой модели в зависимости от значений коэффициента элонгации ядер (KE) и ядерно-цитоплазматического отношения (YACO): A — высота клетки 11 мкм; B — высота клетки 29 мкм; C — высота клетки 22 мкм; D — высота клетки 25 мкм. Здесь белый цвет соответствует отнесению к L, серый — L2, черный — L .

явлениями вакуолизации, отека цитоплазмы, дистопии ядер. Полученные данные не позволяют сформулировать обоснованный вывод относительно характера изменения морфогенетических процессов в желудочной ямке, что стало основанием для использования разработанной модели.

Результаты использования модели. Выявлено расширение L1-зоны до 49,6 ± 3,2% ^ < 0,05), преимущественно за счет ограничения L3-зоны (до 18,4 ± 2,7%, p < 0,01), тогда как ширина L2-зоны менялась недостоверно. Данный результат свидетельствует о чувствительности используемой модели, позволяющей зафиксировать расширение зоны пролиферации клеток при сохранении паттерна дифференцировки, хотя процент функционально полноценных клеток в ямке снижается, отражая ускорение кинетики или снижение жизнеспособности зрелых эпителиоцитов.

Следующим этапом стало использование модели для оценки кинетики покровного эпителия при остром нарушении структурного гомеостаза СОЖ, а также при различных исходах патологического процесса.

Пациент 2 — мужчина, 64 года. Диагноз: острое кровотечение из язвы тела желудка. Средняя степень тяжести. Размер язвы 1,2 см, проведен

эндоскопический инъекционный гемостаз. Исход — заживление язвы. Взят биоптат краевой зоны язвы на момент кровотечения и через 3 суток после лечебного гемостаза. В каждом биоптате проведено измерение 5 ямочек и морфометрия клеток в них. Морфологически на момент кровотечения изменения в ямочном эпителии заключались в резком нарушении морфогенетических процессов. Помимо снижения глубины ямок и усиления пролиферации клеток на их дне, в поверхностных отделах ямки определялись выраженные дистрофические изменения, активация апоптоза клеток, формирование зон десквамации эпителиального пласта. В большинстве клеток выявлялись признаки вакуолизации цитоплазмы и дистопии ядер, изменение их формы и размера.

Результаты использования модели. Проверка цитометрических параметров в разработанной модели выявила резкое снижение количества клеток, соответствующих стандартам L3 (4,2 ± 0,3%) и L2 (9,9 ± 1,1%), за счет расширения зоны L1 (до 86,0 ± 2,1%). То есть на момент язвенного кровотечения в ПЯЭ имеет место ускорение пролиферации при резком угнетении процесса дифференцировки клеток и уменьшении процента функционально полноценных эпителиоцитов.

о

Через 3 суток после гемостаза отмечалось снижение доли клеток, соответствующих Ь1, до 54,9 ± 3,4% при расширении Ь2-зоны — до 36,1 ± 5,7%; Ь3-зоне соответствовали 9,0 ± 2,1% клеток в ямках. Эта динамика отражает тенденцию к восстановлению кинетики клеток ПЯЭ за счет включения механизмов дифференцировки, количественно отражающихся на протяженности Ь2-зоны. Однако при этом стоит отметить резкое снижение площади Ъ3-зоны— зоны расположения функционально зрелых и активных клеток, что, по сути, свидетельствует об ограничении слизисто-бикарбонатного барьера в СОЖ в условиях заживления язвы.

Пациент 3 — мужчина, 62 года. Диагноз: острое кровотечение из язвы тела желудка. Средняя степень тяжести. Размер язвы 1,5 см, проведен эндоскопический инъекционный гемостаз. Через 1 сутки имело место развитие повторного кровотечения. Морфометрическая оценка биоптатов была проведена только на момент первичного кровотечения. Морфологическая картина была сходна с таковой у пациента 2.

Результаты использования модели. Тестирование клеток ямочного эпителия в модели показало превалирование клеток, соответствующих Ь1 (до 99,1 ± 0,8%), и наличие единичных клеток Ь3-зоны (0,9 ± 0,3%) при отсутствии клеток с параметрами Ъ2-зоны. Эти данные, по сути, отражают превалирование незрелых клеток и выключение процесса дифференцировки в ПЯЭ. С одной стороны, это ведет к нарушению образования клеток, продуцирующих слизь, а с другой — отражает нарушение регуляции кинетики ПЯЭ — усиление эффектов промитогенов и ограничение выхода в G0.

С функциональной точки зрения данные результаты позволяют оценить снижение эффективности регенерации слизистой оболочки. Учитывая, что зрелость клеток ПЯЭ желудка предполагает высокую способность к продукции слизи, выход на поверхность недифференцированных клеток означает ограничение формирования слизисто-бикарбонатного буфера, а следовательно, низкую резистентность эпителия и СОЖ в целом к действию ульцероге-нов. Использование модели при патологическом процессе показало, во-первых, ее чувствительность к изменениям структурно-функционального состояния слизистой оболочки желудка, во-вторых, селективность, позволяющую провести объективную оценку нарушений кинетики и созревания клеток покровно-ямочного эпителия при различной патологии. Результаты использования модели позволяют судить о степени альтерации гастроинтестинального барьера, что дает возможность прогнозировать течение репаративных процессов при повреждении СОЖ.

Таким образом, продемонстрирована возможность описания морфогенетических процессов в желудочной ямке на основании комплекса морфометрических критериев: высота клетки, ЯЦО и КЭ, что позволяет формализовать степень дифференцировки клеток покровно-ямочного эпителия и характер морфогене-тических процессов на различных уровнях глубины желудочной ямки. С прикладной точки зрения оценка пространственного распределения разных морфоге-нетических процессов в покровно-ямочном эпителии позволяет регистрировать ранние изменения в СОЖ, интерпретировать их характер и глубину, а также прогнозировать состояние барьерной функции эпителия и репарации при ульцерогенезе.

ЛИТЕРАТУРА

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. — М., 1991. — 381 с.

2. АруинЛ.И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. — М., 1998. — 496 с.

3. Лях Ю.Е., Гурьянов В.Г., Хоменко В.Н. и др. Основы компьютерной биостатистики: анализ информации в биологии, медицине и фармации статистическим пакетом Medstat. — Донецк: Папакица Е.К., 2006. — 214 с.

4. Казаков В.Н., Лях Ю.Е., Кутько И.И. и др. Теоретические и практические аспекты автоматизированной информационной системы «Депрессии». Серия «Очерки биологической и медицинской информатики». — Донецк: изд-во ДонГМУ, 2001. — 160 с.

5. Филиппов Ю.А., Гайдар Ю.А. Перспективы развития иммуноги-стохимических исследований в гастроэнтерологии // Журн. АМН Украши. — 2002. — Т. 8, № 1. — С. 69-81.

6. ФроликоваМ.В., Горчаков В.Н., РадченкоЛ.П. Морфологическая характеристика слизистой оболочки желудка и его регионарного лимфатического узла при язвенном процессе и лимфотропной коррекции // Бюлл. СО РАМН. — 2005. — Т. 115, № 1. — С. 11-16.

7. Хайкин С. Нейронные сети: полный курс, 2-е изд., испр.; пер. с англ.— М.: И.Д. Вильямс, 2006.— 1104 с.

8. Allen A. Gastroduodenal mucus bicarbonate barrier: protection

against acid and pepsin // Am. J. Physiol. Cell Physiol. — 2005. — Vol.

288, № 1. — C. 1-19.

9. Henriksnas J., PhillipsonM. Impaired mucus-bicarbonate barrier in Helicobacter pylori-infected mice // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. — 2006. — Vol. 291, № 3. — G396-403.

10. Hernández-Muñoz R., Montiel-Ruíz C. Gastric mucosal cell proliferation in ethanol-induced chronic mucosal injury is related to oxidative stress and lipid peroxidation in rats // Lab. Invest. — 2007. — Vol. 87, № 8. — P. 1161-1169.

11. Statistics with confidence. Confidence intervals and statistical guidelines. 2nd ed. / Altman D.G., Machin D., Bryant T.N., Gardner M.J. (eds). — Bristol: BMJ Books, 2003.

12. Tarnawski A., Szabo I.L., Husain S.S. et al. Regeneration of gastric mucosa during ulcer healing is triggered by growth factors and signal transduction pathways // J. Physiol. — 2001. — Vol. 95, № 1. — P. 337-344

13. Taupin D., Podolsky D.K. Trefoil factors initiators of mucosal healing // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. — 2003. — Vol. 721, № 4. — P. 214-220.

со

•о