Лютеин и зеаксантин содержащая добавка в диете перепелов: биохимические изменения в крови и яйцах Текст научной статьи по специальности «Животноводство и молочное дело»

Сетевой научно-практический журнал Ж" "W~A У Ч Н Ы Й

серия Медицина и фармация Л. Л. рЕЗульТАТ

НА

УДК 577.17:591.111:591.261.7

Шапошников АА Закирова Л.Р., Клочкова Г.Н., Гай И.Е., Яковлева И.Н., Шевченко Т.С.

лютеин и зеаксаитин содержащая добавка в диете перепелов: Биохимические изменения в крови и яйцах

Шапошников А.А., доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой биохимии медицинского института, Белгородский государственный национальный исследовательский университет, ул. Победы, 85, г. Белгород, 308015, Россия; E-mail: [email protected] Закирова Л.Р., кандидат биологических наук, доцент кафедры биохимии медицинского института, Белгородский государственный национальный исследовательский университет, ул. Победы, 85, г. Белгород, 308015, Россия; E-mail: [email protected] Клочкова Г.Н., кандидат биологических наук, заведующая клинико-диагностической лабораторией, областное государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Белгородская областная

клиническая больница Святителя Иоасафа», ул. Некрасова, 8/9, г. Белгород, 308007, Россия; E-mail: [email protected]

Гай И.Е. аспирант, Белгородский государственный национальный исследовательский университет, ул. Победы, 85, г. Белгород, 308015, Россия; E-mail: [email protected]

Яковлева И.Н.,

кандидат биологических наук, доцент, доцент кафедры незаразной патологии, Белгородский государственный аграрный университет имени В.Я.Горина, ул. Вавилова, 1, Белгородская обл., Белгородский р-н, п. Майский, 308503, Россия;

E-mail: [email protected] Шевченко Т.С., кандидат биологических наук, старший преподаватель кафедры биохимии медицинского института, Белгородский государственный национальный исследовательский университет, ул. Победы, 85, г. Белгород, 308015, Россия; E-mail: [email protected]

Ан

ТГа

Кп

НОТАЦИЯ

сантофилл-содержащая добавка из лепестков бархатцев и чашечек физалиса в рационе

1ерепёлок оказала положительное влияние на процессы метаболизма и увеличивала концентрацию лютеина и зеаксантина в желтке яиц в соотношении близком 4:1..

K

лючевые слова: лютеин; зеаксантин; биохимия; перепела; сыворотка крови; яйца.

Сетевой научно-практический журнал

серия Медицина и фармация

ТТАУЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ

UDC 577.17:591.111:591.261.7

Shaposhnikov AA Zakirova L.R., Klochkova G.N., Guy I.E., Yakovleva IN., Shevchenko T.S.

the lutein and zeaxanthin containing supplement in quail diet: the biochemical changes in blood and eggs

Shaposhnikov A. A., Doctor of Biological Sciences, Professor Head of Department of Biochemistry, Medical Institute Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia; E-mail: [email protected] Zakirova L. R., PhD in Biology, Associate Professor Department of Biochemistry, Medical Institute Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia;

E-mail: [email protected] Klochkova G. N., PhD in Biology, Head of the Clinical Diagnostic Laboratory Regional State Institution of Health "Belgorod Regional St. Ioasaph Clinical Hospital" 8/9 Nekrasova St., Belgorod, 308007, Russia; E-mail: [email protected] Guy I. E., Postgraduate Student Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia; E-mail: [email protected] Yakovleva I. N., PhD in Biology, Associate Professor

Department of Noncontagious Pathology Belgorod State Agricultural University named after V. Gorin 1 Vavilova St., Belgorod District, Mayskiy, 308503, Russia;

E-mail: [email protected] Shevchenko T.S., PhD in Biology, Senior Lecturer Department of Biochemistry, Medical Institute Belgorod State National Research University 85 Pobedy St., Belgorod, 308015, Russia; E-mail: [email protected]

STRAKT

Axanthophyll-containing supplement of marigold petals and physalis calyces in the diet of quail had . a positive effect on the metabolism and increased the concentration of lutein and zeaxanthin in egg yolk at a ratio close to 4:1.

y words: lutein; zeaxanthin; biochemistry; quail; blood serum; eggs.

ШапошниковА.А.,Закирова Л.Р., Клочкова Г.Н., Гай И.Е., Яковлева И.Н., Шевченко Т.С.,

ЛЮТЕИНИ ЗЕАКСАНТИН СОДЕРЖАЩАЯДОБАВКА В ДИЕТЕ ПЕРЕПЕЛОВ: БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ И ЯЙЦАХ

РЕЗУЛЬТАТ

Сетевой научно-практический журнал

Введение. В последние годы всё большее научное обоснование и популярность приобретают способы получения пищевых продуктов с заданным химическим свойством и биологической активностью. Данное направление «пищевого дизайна» даёт возможность получать так называемые функциональные продукты питания — обогащенные макро- и микроэлементами, эссенциальными жирными кислотами, витаминами, ксантофиллами и т.п. Особый интерес вызывают ксантофиллы — лютеин и зеаксантин, в связи с их биологической ролью в организме человека и животных. Оба каротиноида, лютеин и зеаксантин, называются «макулярными пигментами», т.к. они входят в состав жёлтого пятна (macula lutea) сетчатки глаза человека в соотношение приблизительно 4:1 [4, 6]. Антиоксидантные свойства данных ксантофиллов в сочетании с их способностью поглощать излучение синего спектра света, защищают пигментный эпителий и слой хориокапилляров сетчатки от повреждающего действия окислителей, свободных радикалов, нейтрализуя активные формы кислорода [7]. Учитывая тот факт, что каротиноиды не синтезируются в организме животных и человека и должны поступать с пищей, а также то, что биодоступность эфира лютеина яичного желтка многим выше, чем лютеина из других пищевых источников и лютеина, полученного путём химического синтеза [5], актуальным является получение функциональных продуктов питания, в частности, яиц птицы, обогащенных лютеином и зеаксантином. Проведенные ранее исследования по обогащению и перепелиных [1. 2. 3] яиц лютеином и зеаксантином, используя биологически активные растительные добавки, показали их положительное влияние на сохранность, продуктивность, яйценоскость, физиолого-биохимический статус птиц, а также накопление каротиноидов в желтке яиц.

Следует отметить, что в России биологически активные добавки аналогичного типа не производятся, поэтому разработки с целью создания собственных технологий актуальны, особенно в свете современных установок на замену импортных препаратов и на возрождение отечественной медицинской и фармацевтической промышленности.

Разработанная нами биологически активная добавка отличается от известных им-

портных сбалансированностью соотношения лютеина и зеаксантина.

Целью нашего исследования было изучение влияния различных доз ксантофиллов лепестков бархатцев (Tagetes erecta L.) и чашечек физалиса (Physalis alkekengi) на биохимические показатели крови перепёлок, а также химический состав их яиц.

Материалы и методы. Опыт был проведен в фермерском хозяйстве Ивнянского района Белгородской области в январе-феврале 2012 года на перепелках-несушках породы «Фараон», в котором было изучено влияние на организм птицы различных доз (при неизменном соотношение лютеина и зеак-сантина - 4:1) смеси сухих лепестков бархатцев и чашечек физалиса в составе основного рациона (ОР).

Для эксперимента перепёлок в суточном возрасте разделили на пять групп по 20 особей в каждой. Продолжительность опыта составила 40 суток: адаптационный период -10, основной - 14 и завершающий - 16 суток.

В подготовительный период птица I-V групп получала ОР. В основной период (продолжительность 14 суток) перепёлки контрольной (I) группы получали ОР; II группы опыта ОР с добавлением 0,06; III группы -0,12; IV - 0,18; V - 0,24 мг ксантофиллов на перепёлку в сутки соответственно. В завершающий период, длительность которого составила 16 суток, вся подопытная птица получала только ОР.

Основной рацион был представлен специальным комбикормом для перепелок-несушек, сбалансированным по основным питательным, минеральным и биологически активным веществам. Потребление воды не ограничивали.

Для опыта были приготовлены высушенные и измельченные:

- лепестки цветков бархатцев, содержавшие по спектрофотометрическим данным 12,5±1,5 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на неэтерефи-цированный лютеин);

- чашечки физалиса, по спектрофотометрическим данным содержавшие 9,0±0,3 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на неэтерефицированный лютеин).

Ежесуточно контролировали кормление птицы, её физиологическое состояние и яйценоскость. Цельную кровь забирали на 14

ШапошниковА.А.,Закирова Л.Р., Клочкова Г.Н., Гай И.Е., Яковлева И.Н., Шевченко Т.С.,

ЛЮТЕИНИ ЗЕАКСАНТИН СОДЕРЖАЩАЯДОБАВКА В ДИЕТЕ ПЕРЕПЕЛОВ: БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ И ЯЙЦАХ

Н

\АУЧНЫИ РЕЗУЛЬТАТ

Сетевой научно-практический журнал

сутки основного периода путем декапитации птицы (по пять перепелок из каждой группы). Цельную кровь для определения концентрации эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов стабилизировали раствором гепарина (результаты опубликованы прежде). Сыворотку крови получали стандартно.

Образцы сыворотки доставляли незамедлительно в лабораторию и анализировали с использованием полностью роботизированного иммунохимического электрохемилюми-нисцентного автоматического анализатора COBAS E 411 и иммунохимического анализатора OLYMPUS AU680 на базе Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа.

Полученный цифровой материал был обработан статистически. При определении достоверной разницы между показателями контрольной и опытными группами был использован аргумент Стьюдента. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения р<0,05.

Результаты и их обсуждение. Биохимические характеристики крови очень важны как для оценки физиолого-биохими-

ческого статуса организма животного и человека, особенно при использовании новых кормовых (пищевых) средств и биологически активных добавок.

Концентрация общего белка в сыворотке перепелок контрольной и опытных групп находилась в пределах физиологической нормы для данной возрастной группы птиц и не имела достоверных различий (табл. 1). Уровень альбумина и белков глобулиновых фракций перепелов контрольной и опытных групп, так же не имел достоверных различий. Это может свидетельствовать о том, что различные дозы ксантофиллов в диете перепелов не оказывают отрицательного влияния на содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови птиц.

Уровень альбумина и белков глобули-новых фракций перепелов контрольной и опытных групп, так же не имел достоверных различий. Это может свидетельствовать о том, что различные дозы ксантофиллов в диете перепелов не оказывают отрицательного влияния на содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови птиц.

Таблица 1

Биохимические показатели сыворотки крови, характеризующие белковый обмен у перепелок 24-суточного возраста

Table 1

Biochemical parameters of blood serum, characterizing protein metabolism in 24-day age quails

Показатель Группа

I II III IV V

Общий белок, г/л 51,3±3,3 51,1±2,3 49,9±2 53,4±3 52,8±2,4

Фракции белка, %:

альбумин 58,3±2,3 57,6±2,2 58,7±1,3 59,i±i 59,1±0,8

ai-глобулины 5,2±0,3 4,7±0,4 5±0,2 5,3±0,3 5,3±0,4

а2-глобулины 9,7±0,8 9±0,9 9,3±0,8 9±0,6 9,2±0,3

ß-глобулины 19,7±0,4 19,7±0,9 20±0,4 19,3±1,8 19,5±0,9

у-глобулины 7,2±1,8 8,9±2,6 7,5±2 6,6±1,2 7±0,5

Мочевая кислота, ммоль/л 270±14,3 229,3±9,7* 233±8,2* 244,7±17,8 244,4±8,7*

Добавление к ОР птиц добавки в различной концентрации приводит к достоверному снижению концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови птиц опытных групп, получавших растительные ксантофиллы в дозе 0,06 мг на животное в сутки на 15,1% (р<0,05), в дозе 0,12 мг на животное в сутки на 13,7% (р<0,05), в дозе 0,24 мг на животное в сутки

на 9,5% (р<0,05). Полученные данные могут свидетельствовать, как об усилении синтетических процессов в обмене белков, так и об оптимизации работы выводящей системы птиц.

Такие показатели, как триацилглицеролы (ТАГ), холестерол, транспортные формы ли-пидов - липопротеины высокой плотности (ЛПВП), липопротеины низкой плотности

ШапошниковА.А.,Закирова Л.Р., Клочкова Г.Н., Гай И.Е., Яковлева И.Н., Шевченко Т.С.,

ЛЮТЕИНИ ЗЕАКСАНТИН СОДЕРЖАЩАЯДОБАВКА В ДИЕТЕ ПЕРЕПЕЛОВ: БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ И ЯЙЦАХ

РЕЗУЛЬТАТ

Сетевой научно-практический журнал

(ЛПНП), липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП), отражающие интенсивность метаболизма липидов в организме животного, у экспериментальных перепелов находились в пределах физиологической нормы для данной возрастной группы птиц и достоверных различий по показателями в контрольной и опытных группах не выявлено (таблица 2).

Наряду с показателями белкового и липид-ного обменов значимыми являются показатели минерального обмена. Наибольший интерес представляют макроэлементы кальций и фосфор как компоненты, присутствующие во всех тканях и органах и участвующих в ряде важнейших биохимических процессах. Уровень кальция и фосфора в сыворотке крови отражает обеспеченность ими организма птиц.

Таблица 2

Биохимические показатели сыворотки крови, характеризующие липидный обмен у перепелок 24-суточного возраста

Table 2

Biochemical parameters of blood serum, characterizing lipid metabolism in 24-day age quails

Показатель Группа

I II III IV V

Холестерол, моль/л 2,27±0,3 2,11±0,22 2,34±0,32 2,22±0,18 2,21±0,2

ТАГ, ммоль/л 0,53±0,06 0,53±0,07 0,52±0,07 0,52±0,09 0,48±0,08

ЛПВП, ммоль/л 1,73±0,09 1,74±0,07 1,73±0,05 1,73±о,о8 1,72±0,14

ЛПНП, ммоль/л 0,48±0,02 0,49±0,04 0,49±0,08 0,48±0,03 0,47±0,05

ЛПОНП, ммоль/л 0,31±0,04 0,28±0,02 0,27±0,03 0,27±0,01 0,2б±0,01

Наряду с показателями белкового и липид-ного обменов значимыми являются показатели минерального обмена. Наибольший интерес представляют макроэлементы кальций и фосфор как компоненты, присутствующие во всех тканях и органах и участвующих в ряде важнейших биохимических процессах. Уровень кальция и фосфора в сыворотке крови отражает обеспеченность ими организма птиц.

Проведенные исследования показали, что добавление в рацион перепелов ксантофиллов в дозе 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки ведет к достоверному (р<0,05) снижению

концентрации кальция на 13,7 и 14,4% соответственно по сравнению с контролем (табл. 3). Уровень фосфора у птиц опытных групп также снизился по сравнению с контролем во II опытной группе на 7,77 (р<0,05), в III группе - на 21,8 (р<0,05), в IV группе -на 23,3 (р<0,001), в V группе - на 26,9% (р<0,01). Тем не менее, содержание указанных макроэлементов оставалось в пределах физиологической нормы, более того, отношение кальций/ фосфор оставалось в оптимальном диапазоне - от 1,5 до 3,0 у перепелов всех опытных

групп. Таблица 3

Элементный состав и концентрация витаминов сыворотки крови перепёлок

Table 3

The element composition and concentration of vitamins in quail blood serum

Показатель Группа

I II III IV V

Кальций, ммоль/л 2,78±0,15 2,69±0,09 2,43±0,27 2,4±0,05* 2,З8±0,15*

Фосфор, ммоль/л 1,93±0,07 1,78±0,09* 1,51±0,12* 1,48±0,07*** 1,41±0,03**

Калий, ммоль/л 11,3±0,9 10,9±0,7 10,9±0,3 10,6±0,6 10,9±0,4

Хлор, ммоль/л 107,3±5,6 104,7±5 103,1±2,4 107,9±3,1 104±6

Витамин А, мкмоль/л 0,85±0,05 1,03±0,06* 1,14±0,07** 2,03±0,06*** 1,23±0,04***

Витамин Е, мкмоль/л 0,00б±0,001 0,01±0,001* 0,01±0,002* 0,009±0,002* 0,009±0,001*

*p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001

СЕРИЯ Медицина и фармация

ШапошниковА.А.,Закирова Л.Р., Клочкова Г.Н., Гай И.Е., Яковлева И.Н., Шевченко Т.С.,

ЛЮТЕИНИ ЗЕАКСАНТИН СОДЕРЖКАЩАЯДОБАВКА В ДИЕТЕ ПЕРЕПЕЛОВ: БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ И ЯЙЦАХ

РЕЗУЛЬТАТ

Сетевой научно-практический журнал

Полученные данные можно объяснить интенсификацией минерального обмена у птиц опытных групп, конверсией макроэлементов в скорлупу яиц, что согласуется с результатами яйценоскости.

Помня об антиоксидантной роли ксантофиллов, вследствие наличия в молекуле сопряженных двойных связей, важно было изучить влияние добавки на содержание общеизвестных природных ингибиторов окисления - витамины Е и А в крови птиц. Как видно из таблицы 3, содержание ретинола и токоферола в крови перепелов всех четырёх опытных групп существенно и достоверно повысилась по сравнению с контролем. Так, концентрация витамина А в сыворотке крови

птиц II и III опытных групп увеличилась на 21,2 и 34,1%, а в IV и V группах - в 2,4 и в 1,4 раза (р<0,01) соответственно по сравнению с контролем. Применение в диете перепелов растительных ксантофиллов в дозах 0,06 и 0,12 мг на животное в сутки, привело к достоверному повышению концентрации витамина Е в сыворотке крови в 1,7 раза, в дозах 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки - в 1,5 раза по сравнению с птицами, потреблявшими ОР.

Следует также отметить, достоверное увеличение концентрации витамина Е в желтке яиц перепелов II опытной группы на 4,29% и очевидную тенденцию к повышению данного показателя у птиц остальных опытных групп по сравнению с контролем (рис. 1).

Рис. 1. Концентрация витамина Е в желтке перепелиных яиц, мкг/кг

Fig. 1. The concentration of vitamin E in the yolk of quail eggs, ßg/kg

Представленные результаты аналогичны полученным ранее данным [2] и свидетельствуют о большей сохранности жирорастворимых витаминов в организме птиц опытных групп. Поскольку других источников витаминов, кроме корма, в диете перепелов не было, есть основание предположить о протектив-ном действии лютеина и зеаксантина в составе добавки на содержание этих витаминов.

Таким образом, отмечаем, что применение в диете перепелок добавки (Патент РФ

№ 2328137, 2008 г.), содержащей растительные ксантофиллы (сухие лепестки бархатцев и чашечки физалиса) в дозах: 0,06; 0,12; 0,18 и 0,24 мг на животное в сутки положительно влияет на обмен белков и сохранность жирорастворимых витаминов А и Е в организме птиц и яичном желтке, а также не оказывает отрицательного действия на содержание некоторых метаболитов липидного и минерального обменов.

ШапошниковА.А.,Закирова Л.Р., Клочкова Г.Н., Гай И.Е., Яковлева И.Н., Шевченко Т.С.,

ЛЮТЕИНИ ЗЕАКСАНТИН СОДЕРЖАЩАЯДОБАВКА В ДИЕТЕ ПЕРЕПЕЛОВ: БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КРОВИ И ЯЙЦАХ

РЕЗУЛЬТАТ

Сетевой научно-практический журнал

литература:

1. Дейнека Л.А. Спектральный и хроматогра-фический анализ ксантофиллов в различных растительных добавках и их влияние на накопление лютеина и зеаксантина в желтке перепелиных яиц / Л.А.Дейнека, А.А.Шапошников, В.И.Дейнека, Л.Р.За-кирова, С.М.Вострикова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. 2010. № 21 (92). Выпуск 13. С. 143-149.

2. Дейнека Л.А. Влияние ксантофиллсодер-жащих растительных добавок на биохимические показатели крови, накопление лютеина и зеаксантина в желтке перепелиных яиц / Л.А.Дейнека, А.А.Шапошников, В.И.Дейнека, Л.Р.Закирова, С.М.Вос-трикова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. 2011. №21 (116). Выпуск 17. С. 53-56.

3. Дейнека Л.А. Пищевой дизайн: исследование накопления ксантофиллов в желтке куриных яиц / Л.А.Дейнека, А.А.Шапош-

ников, В.И.Дейнека, С.М.Вострикова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки. 2007. №5. Выпуск 5. С. 32-36.

4. Handelman G. J. Lutein and zeaxanthin concentrations in plasma after dietary supplementation with egg yolk [Text] / G.J.Han-delman, Z.D.Nightingale, A.H.Lichtenstein, EJ.Schaefer, J.B.Blumberg // Am. J. Clin. Nutr. 1999. Vol. 70, № 2. P. 247-251.

5. Schalch W. Possible contribution of lutein and zeaxanthin, carotenoids of the macula lutea, to reducing the risk for age-related macular degeneration: a review / W.Schalch // HKJ Ophtalmol. 2000. Vol. 4. № 1. P. 31-42.

6. Whitehead A. J., Mares J. A, Danis R. P. Macular pigment: a review of current knowledge. // Arch. Ophthalmol. - 2000. - № 124. - P. 1038-1045.

7. Johnson E. J. The Role of Lutein in Disease Prevention / E.J.Johnson, PhD J.Mayer // Nutrition in Clinical Care. 2008. Vol. 3, Issue 5. P. 289-296.

REFERENCES:

1. Deineka L.A. Spectral and Chromatographic Analysis of Xanthophylls in Various Herbal Supplements and their Effects on the Accumulation of Lutein and Zeaxanthin in the Yolk of Quail Eggs / L.A. Deineka A.A. Shaposhnikov, V.I. Deineka, L.R. Zakirova, S.M. Vostrikova // Belgorod State University. Series: Natural Sciences. 2010. № 21 (92). Issue 13. Pp. 143-149.

2. Deineka L.A. The Influence of Ksantofills-con-taining Herbal Supplements on Blood Biochemistry, Accumulation of Lutein and Zea-xanthin in the Yolk of Quail Eggs / L.A.Deine-ka A.A.Shaposhnikov, V.I.Deineka, L.R.Za-kirova, S.M.Vostrikova // Belgorod State University. Series: Natural sciences. 2011. №21 (116). Issue 17. Pp. 53-56.

3. Deineka L.A. Food Design: a Study of Accumulation of Xanthophylls in the Yolk of Eggs / L.A. Deineka A.A. Shaposhnikov, V.I. Deineka, S.M. Vostrikova // Belgorod State Univer-

sity. Series: Natural sciences. 2007. №5. Issue 5. Pp. 32-36.

4. Handelman G.J. Lutein and zeaxanthin concentrations in plasma after dietary supplementation with egg yolk [Text] / G.J.Han-delman, Z.D.Nightingale, A.H.Lichtenstein, E.J.Schaefer, J.B.Blumberg // Am. J. Clin. Nutr. 1999. Vol. 70, № 2. Pp. 247-251.

5. Schalch W. Possible contribution of lutein and zeaxanthin, carotenoids of the macula lutea, to reducing the risk for age-related macular degeneration: a review / W.Schalch // HKJ Ophtalmol. 2000. Vol. 4. № 1. Pp. 31-42.

6. Whitehead A.J., Mares J.A., Danis R.P. Macular pigment: a review of current knowledge. // Arch. Ophthalmol. 2000. № 124. Pp. 10381045.

7. Johnson E.J. The Role of Lutein in Disease Prevention / E. J. Johnson, PhD J. Mayer // Nutrition in Clinical Care. 2008. Vol. 3. Issue 5. Pp. 289-296