CC BY
51
УДК 618.19-006-078
Т В. ЛУЧИНА, Л.А. ЛЮБОВЦЕВА
ЛОКАЛИЗАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В СТРУКТУРАХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ОНКОЛОГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ
Ключевые слова: молочная железа, мастопатия, фиброаденома, рак молочной железы, биогенные амины, сукцинатдегидрогеназа, коэффициент злокачественности.
Изучены содержание серотонина и катехоламинов в микроструктурах молочной железы в норме и при онкологической патологии люминесцентно-гистохимическим методом Фалька—Хилларпа, уровень гистамина — методом Кросса. Выведен коэффициент злокачественности клеток молочной железы. Обнаружены снижение активности фермента сукцинатдегидрогеназы в эпителио-цитах и повышение в люминесцирующих гранулярных клетках при раке молочной железы.
T.V. LUCHINA, L.A. LUBOVTSEVA LOCALIZATION OF BIOACTIVE SUBSTANCES IN THE STRUCTURES OF MAMMARY GLAND DURING CANCEROUS PATHOLOGY
Key words: mammary gland, mastopathy, fibroadenoma, breast cancer, biogenic amines, succinate dehydrogenase, tumour grade.
Serotonin and catecholamine in microstructures of mammary gland in standard and cancerous pathology involved test via Falk—Hillarp luminescent histochemic method and Cross histamine test. Mammary gland cells tumour grade was drawn. Succinate dehydrogenase enzyme activity in epithelial cells has been discovered to decrease and in luminescent granular cells to increase when breast cancer is involved.
Несмотря на внедрение современных методов диагностики онкологических заболеваний молочной железы, вопросы патоморфологической диагностики занимают важное место в системе биологических наук [1. С. 15]. Остаются неизученными механизмы развития доброкачественных и злокачественных заболеваний молочной железы. Известно, что напряжение ферментативных систем и нарушение обменных процессов обусловливает развитие патологических новообразований, в связи с чем изучению состояния ферментативной системы митохондрий уделяется особое внимание.
Цель исследования - выявление изменений активности биогенных аминов и фермента сукцинатдегидрогеназы (СДГ) при различных опухолевых заболеваниях молочной железы.
Материал и методы. Нами изучен операционный материал 25 пациенток, наблюдавшихся в Республиканском онкологическом диспансере МЗ и СР Чувашской Республики. Больные были разделены на группы: контрольную - составили 4 пациентки; в состав экспериментальной группы вошли: 7 женщин с мастопатией в возрасте от 18 до 35 лет; 7 - с фиброаденомой в возрасте от 28 до 45 лет; у 7 пациенток был рак молочной железы, возраст женщин составил от 30 до 58 лет. Всего в экспериментальную группу вошла 21 женщина.
Для изучения микроструктуры тканей молочной железы применялись следующие гистологические методы:
1. Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Евена, Роста для исследования гистамина в структурах молочной железы.
2. Люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа для исследования катехоламинов (КА) и серотонина (СТ).
3. Метод цитоспектрофлуориметрии для количественного определения уровеней катехоламинов, серотонина и гистамина в структурах молочной железы. Измерения проведены на люминесцентном микроскопе (ЛЮМАМ-4) с
применением микрофлуориметрической насадки ФМЭЛ-1А. Подсчет производили с помощью цифрового вольтметра при напряжении 900 В.
4. Корреляционный анализ был применен для выявления достоверной взаимосвязи между показателями интенсивности люминесценции нейромедиаторов в аминосодержащих структурах молочной железы. Положительный коэффициент корреляции по содержанию биоаминов означает одновременное воздействие этих веществ на структуру. Отрицательный показатель означал снижение средних значений в одном члене пары при возрастании в другом. Статистическая достоверность результатов определялась критерием Стъюдента.
5. Активность СДГ исследовали тетразолиевым методом З. Лойда.
Полученный цифровой материал обработан статистически по методу
Стьюдента с помощью прикладной программы Excel из пакета Microsoft Office 2003 в среде Windows XP.
Результаты исследований. При исследовании препаратов молочной железы в окраске по методу Фалька-Хилларпа на КА и СТ нами было обнаружено, что соединительнотканные септы у здоровых пациенток имеют очень слабое свечение. Ярко-желтое свечение имеют гранулярные люминесцирующие клетки (ГЛК), которые расположены около концевых секреторных отделов между молочными ацинусами. Кроме того, изумрудно-зеленую люминесценцию имели адренергические нервные волокна, расположенные по септам, в адвентициальной оболочке крупных и мелких сосудов, тучные клетки. Тучные клетки также имеют зеленое свечение и располагаются в соединительной ткани септ, что совпадает с данными исследователей [2. С. 37]. Нами определено, что в ряду мастопатия, фиброаденома, рак идет постепенное нарастание уровня КА во всех изученных микроструктурах молочной железы (табл. 1). При цитоспектрофлуориметрии клеточных элементов молочной
железы обнаружено, что содержание серотонина в этих структурах также повышается (табл. 2).
При исследовании молочной железы здоровых пациенток на гистамин нами было выявлено, что в соединительнотканных септах желтую люминесценцию имеют эластические волокна септ, кроме того, в междольковой соединительной ткани имеются тучные клетки. Тучных клеток, содержащих диамин, значительно меньше по сравнению с таковыми при исследовании по методу Фалька-Хилларпа [2. С. 68]. Тучные клетки также определяются в участках железы, расположен-
Таблица 1
Содержание катехоламинов в структурах молочной железы при онкологической патологии, в условных единицах (М±т)
Микро- структуры Клинические группы
кон- троль масто- патия фибро- аденома рак молочной железы
Лактоциты 7,58±0,5 8,63±0,62 9,06±0,9 10,98±0,79
ГЛК 7,42±0,11 8,48±0,66 10,39±2,02 10,73±0,8
Тучные клетки 6,1±0,25 7,3± 0,69 7,8±0,8 11,8±0,84
Таблица 2
Содержание серотонина в структурах молочной железы при патологии, в условных единицах (М±т)
Микро- структуры Клинические группы
кон- троль масто- патия фибро- аденома рак молочной железы
Эпителиоциты 29,8±1,14 31,24±2,49 41,59±9,94 62,78±19,51
ГЛК 31,5±2,15 35,11±3,55 41,65±10,60 61,38±6,58
Тучные клетки 51,1±1,16 72,41±1,14 81,7±2,15 89,4±1,11
ных между молочными ацинусами. Число этих клеток постепенно нарастает в связи с тяжестью онкопатологии. Ярко-желтое свечение имеют ГЛК, кото -рые расположены около концевых секреторных отделов, между молочными ацинусами (табл. 3). Их число также нарастает в связи с тяжестью патологии. Около концевых секреторных отделов и между лактоцитами обнаруживаются слабо люминесцирующие ГЛК. Одни из них относятся к миоэпителиальным клеткам, а вторые - к межэпителиальным, имеют гистохимические свойства клеток АПУД-системы.
Таблица 3
Содержание гистамина в структурах молочной железы при патологии, усл. ед. (М±т)
Микро- структуры Клинические группы
контроль мастопатия фибро- аденома рак молочной железы
Эпителиоциты 120,1±16,4 140,96±25,01 182,40±32,88 139,65±54,06
ГЛК 145,3±12,5 113,70±25,11 122,50±22,59 122,50±22,59
Тучные клетки 125,6±17,3 111,8±0,84 130,7±24,67 78,1±9,65
Содержание гистамина при патологии в молочной железе имеет некоторые особенности. Так, в лактоцитах наибольшее содержание диамина определяется при фиброаденоме. В ГЛК содержание гистамина резко снижается при мастопатии, при остальных формах онкопатологии также оказывается сниженным (табл. 3). В тучных клетках наряду с повышением числа этих клеток обнаруживаются их тотальная дегрануляция и снижение содержания гистамина в оставшихся клетках (табл. 3).
Анализ корреляционных связей в паре лактоцит-ГЛК показал следующее (табл. 4). Разнонаправленность ответа на онкологические процессы хорошо демонстрируется расчетом корреляционных отношений.
Для дальнейшей математиче-
Таблица4
Корреляционный анализ в паре лактоциты-гранулярные люминесцирующие клетки молочной железы между СДГ и биогенными аминами
Клиническая группа Корреляционная связь
Контрольная группа 0,2
Мастопатия -0,4
Фиброаденома 0,3
Рак молочной железы 0,5
ской обработки полученные цифровые значения были обобщены в единой матрице, на основании которой мы провели корреляционный анализ по Пирсону. Обнаружено, что сильные достоверные связи с диагнозом имеют коэффициенты гистамин/серотонин и катехоламины/гистамин, рассчитанные по уровням люминесценции в ГЛК, а также активность фермента СДГ. Именно эти переменные и были использованы для линейного регрессионного анализа, который показал следующее: коэффициент детерминации (^-квадрат), являющийся показателем качества подобранной регрессионной модели, равнялся 0,72, а значение Е равнялось 0,004, что свидетельствует о том, что созданная модель достоверна. Рассчитанные коэффициенты регрессии позволили нам установит величины влияния использованных переменных на пролиферативную активность эпителиальных клеток молочной железы. Для вычисления коэффициента злокачественности получена следующая формула:
Г КА
7,53 -1,01--------20,88-------+1,7 • СДГГЛК,
СТ
1 Г
КАГ
1 ГЛК ^ ГЛК
где СТГЛК, КАГлк, СДГГлк - содержание СТ, КА и СДГ в ГЛК.
При использовании метода линейной регрессии расширяются возможности исследователей в плане диагностики онкопатологии. Метод дает возможность практического применения полученных данных как для уточнения предполагаемого диагноза, так и для прогноза развития патологического процесса.
При исследовании на СДГ нами было обнаружено, что гранулы формаза-на выявляются практически во всех структурах молочной железы, но особенно их много в лактоцитах, миоэпителиальных, тучных, гранулярных клетках и по ходу адренергических нервных волокон, в адвентиции сосудов.
Развитие мастопатии со-
провождается умеренным снижением СДГ в лактоцитах молочной железы в 1,5 раз (табл. 5). При фиброаденоме происходило возрастание ее активности в лактоцитах, но эти цифры не достигали уровня контроля (рис. 1). В гранулярных клетках при фиброаденоме происходит также
Таблица 5
Количественное содержание СДГ у пациенток с патологией молочной железы, усл. ед. оптической плотности
Микро- структуры Клинические группы
кон- троль масто- патия фибро- аденома рак молочной железы
Лактоциты 0,58±0,16 0,38±0,12 0,42±0,15 0,30±0,06
глк 0,42±0,09 0Д0±0,05* 0,21±0,09 0,28±0,06
Примечание. * показаны достоверные отличия.
снижение активности СДГ, но оно менее выражено, чем в лактоцитах (рис. 2). При раке молочной железы происходит резкое снижение СДГ во всех структурах (рис. 3).
Рис. 1. Непролиферирующий фиброаденоматоз (мастопатия). Окраска по методу Ь^ёа на СДГ. Ув.х100:
1 - концевые отделы молочной железы; 2 - стенка сосуда с рядом расположенными тучными клетками; 3 - тучные клетки
Рис. 2. Фиброаденома молочной железы. Окраска по методу Ьо](!а на СДГ. Ув.х100:
1 - железистый компонент;
2 - поперечный срез стенки сосуда; 3 - клетки соединительной ткани
Рис. 3. Инфильтрирующая карцинома.
Окр. по методу Ьо^ёа на СДГ. Ув.х400: 1 - эпителиальный компонент опухоли; 2 - тучная клетка
Выводы. 1. При патологии молочной железы происходят существенные биоаминные перестройки.
2. Количественный гистохимический анализ микроструктур молочной железы при онкопатологии выявил снижение активности фермента энергетического обмена сукцинатдегидрогеназы.
Литература
1. Боженко В.К., Васкевич Е.Ф., Чазова Н.Л. и др. Исследование экспрессии мРНК маммаглобина А при различной патологии молочной железы // Вестник РНЦРР. 2009. Вып. 9.
2. Любовцева ЛА. Люминесцентно-гистохимическое исследование аминосодержащих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов. Чебоксары: Изд-во Чуваш. ун-та, 1993. 100 с.
ЛУЧИНА ТАТЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА — соискатель ученой степени кандидата медицинских наук кафедры цитологии, гистологии, эмбриологии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары ([email protected])
LUCHINA TATjANA VLADIMIROVNA - competitor of scientific degree of Medical Sciences Candidate, Cytology, Embryology, Histology Department, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
ЛЮБОВЦЕВА ЛЮБОВЬ АЛЕКСЕЕВНА. См. с. 347.__________________________________________
УДК 618.19-006-008.831-074
Т.В. ЛУЧИНА, Л.А. ЛЮБОВЦЕВА
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ ПРИ ПАТОЛОГИИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Ключевые слова: рак молочной железы, ферменты, моноаминоксидаза, сукцинатдегидроге-наза, кислая фосфатаза, щелочная фосфатаза.
С помощью гистохимических методов обнаружено наличие ферментов (моноаминоксидазы, сукцинатдегидрогеназы, кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы) в эпителиоцитах (лак-тоцитах), люминесцирующих гранулярных клетках молочной железы. Выявлено повышение активности ферментов в изученных микроструктурах при раке молочной железы. При фиброаденоме ферменты выявляются в основном в выводных протоках желез.
T.V. LUCHINA, L.A. LUBOVTSEVA COMPARATIVE ANALYSIS OF ENZYME ACTIVITY DURING BREAST CANCER
Key words: breast cancer, enzymes, monoamine oxidase, succinate dehydrogenase, acid phosphatase, alkaline phosphatase.
With the help of histochemic test enzymes (of monoamine oxidase, succinate dehydrogenase, acid phosphatase, alkaline phosphatase) have been found in epithelial cells (lactocytes), luminescent granular cells of the mammary gland. An increased activity of the enzymes in the studied microstructures during breast cancer has been detected. When fibroadenoma is involved enzymes are mainly found in excretory ducts of the glands.
Патоморфологические особенности доброкачественных и злокачественных новообразований молочных желез являются предметом научных иссле-
