CC BY
40
УДК 57.052:115:616.151.5
ЛИПИДПЕРОКСИДАЦИЯ И ГЕМОСТАЗ У АСКОРБАТЗАВИСИМЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ИХ
СОДЕРЖАНИИ НА РАЦИОНЕ БЕЗ АСКОРБАТА, С ЕГО ДЕФИЦИТОМ И ИЗБЫТКОМ
© 2009 Е.М. Шаповалова
Тюменская государственная медицинская академия Поступила 22.06.2009
Рассмотрены различия в реакции липидпероксидации и гемостаза у аскорбатзависимых и аскорбатнезависи-мых организмов на отсутствие, дефицит и избыток витамина С в питании. Обсуждается значение этих данных в выбор доз витамина С при лечении заболеваний, протекающих с явлениями гипероксидации и наклонностью к ускоренному тромбинообразованию. Ключевые слова: аскорбат. Липидпероксидация, гемостаз.
АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Несмотря на большое число наблюдений, одни из которых свидетельствует о влиянии акорбата на коагулоактивность тромбоцитов [1, 14, 32], другие
- о его влиянии на уровень отдельных, нередко единичных, про- или антикоагулянтов [26, 27, 28, 33, 34], остаются неясным, как отсутствие, дефицит и избыток в питании витамина С сказывается на готовности организма адекватно реагировать на воздействия, изменяющие тромбиногенез, следовательно, и наклонность к кровоточивости или к тромбофилии [2, 12, 36]. Приблизиться к решению этой проблемы представляется возможным при соблюдении таких условий: 1. Использовать в опытах аскорбатзависимых животных (в противном случае результаты опытов нельзя относить к человеку), 2. Использовать в опытах рацион, сбалансированный по макро - и микронутриентам, так как эффект витаминов существенно зависит от полноценности питания [25, 32], 3. Контролировать гемостаз тестами, позволяющими оценить непрерывное внутрисосудистое свертывание крови (НВСК) и толерантность к тромбину (ТкТР), изменения которых указывают на развитие наклонности к тром-бообразованию или к кровоточивости. 4. Наряду с оценкой гемостаза важно контролировать состояние липидпероксидации в тромбоцитах, так как изменения этого процесса в них модифицирует гемостаз [8], в то время как аскорбат проявляет себя в малых лозах в качестве антиоксиданта, а в больших
- прооксиданта, следовательно, этим может определяться дозазависимость эффекта аскорбата на свертываемость крови [9, 18].
Цель нашей работы - изучить динамику изменений НВСК, коагулоактивности тромбоцитов, толерантности к тромбину (ТкТР), липидпероксидации (ЛПО) и антиоксидантного потенциала (АОП) тромбоцитов в отсутствие, при дефиците и избытке витамина С в рационе аскорбатзависимых и независимых от него животных.
Шаповалова Елена Михайловна, кандидат фарма-цевти-ческих наук, доцент кафедры аналитической и органической химии. Тел (345-2) 92-10-64
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Опыты проведены на морских свинках-самцах (294, 272±27 г) - корректном объекте для моделей С-гипо- и С-авитаминоза [17, 23] и аскорбатнезави-симых белых крысах. В связи с зависимостью гемостаза от метеофакторов и сезона [7] во все опыты включали контрольную группу. Содержали свинок на рационе, обеспечивающем прогрессирующий прирост массы тела и приплод: сено, свёкла, овес, морковь, печеный хлеб, молоко, дрожжи и водопроводная вода - полноценный рацион [13]. Содержание витамина С в суточной порции такого рациона (по результатам определений) составляет 5.5 мг/кг массы тела, что близко к расчетной величине, установленной по таблицам химического состава пищевых продуктов. Рацион без витамина С содержал те же продукты, но сено, свёклу и морковь предварительно автоклавировали, а молоко -кипятили (согласно рекомендациям Всесоюзной конференцией по витаминам, М., 1934). После обработки витамин С в составе рациона не находили - это С-авитаминный рацион. Как С-гиповитаминный рацион использовали С-авитаминный, ежедневно добавляя к нему 25, 50 или 75% аскорбата от суточной потребности (т.е. от 5.5 мг на кг массы тела в сутки). Источниками витамина А и каротина в С-авитаминном рационе являлись морковь, молоко и сено, практически не разрушающиеся при использованной обработке [21]. Суточную потребность в витаминах группы В, РР и Б обеспечивали высушенные на свету дрожжи (0.4 г/кг массы тела). Источник витамина Е - овес (его количество в рационе не ограничивали). Такие рационы использовались ранее при изучении гемостаза [3, 5,14]. При изучении эффекта нагрузок ас-корбатом свинкам вводили на фоне полноценного рациона его двух-, трёх-, четырехкратные и большие суточные дозы аскорбата (водный раствор глазной пипеткой в полость рта в утренние часы).
Крысы получали сбалансированный казеиново-крахмальный рацион, содержащий минералы и витамины в соответствии с суточной потребностью [16]
Пробы крови брали в шприц с 3,8% раствором цитрата натрия (9:1 по объему) из обнаженной v. jugularis у наркотизированных и фиксированных на препаровочном станке животных. Рану закрывали 2-3 швами (кетгут). В плазме крови определяли содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ), отражающее интенсивность НВСК [3, 12, 20, 30]: 1. Продукты деградации фибрина (ПДФ) - маркеры ВТФ [36] - определяли по описанию [6], 2. Уровень растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ), увеличивающийся при росте гемокоагуляции [26, 36], определяли фе-нантролиновым тестом [18], 3. Уровень D-димеров - маркеры фибринообразования [9, 30] - устанавливали латексной агглютинацией (набор «D-dimertest», Roche), 4. Уровень ф. Р3 в плазме - по Rabiner & Groder в описании [2]. 5.Ф. Р4 - также по описанию [2]. Факторы Р3 и Р4 - косвенные маркеры ВТФ, их уровень в плазме пропорционален уровню тромбина, ускоряющего реакцию высвобождения тромбоцитов [27], 6. Концентрацию в плазме осаждаемого тромбином фибриногена (её снижение при других признаках ускоренного ВТФ свидетельствует об активации НВСК [36]) - определяли спектрофотометрически [4].
Толерантность к тромбину устанавливали согласно патенту [8] методом, основанным на оценке степени снижения в плазме уровня фибриногена, осаждаемого тромбином. Расчет - по формуле, приведенной в описании к патенту.
Перекисное окисление липидов в тромбоцитах и их антиоксидантный потенциал оценивали, определяя: 1. Содержание первичных липидперокси-дов - диеновых конъюгат (ДК), 2. Содержание вторичных липидпероксидов - продуктов, взаимодействующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), 3. Период индукции (ПИ) и 4. Скорость окисления (СО).
Использовали изолированные и отмытые тромбоциты [22]. Количество диеновых конъюгат (ДК) устанавливали по оптической плотности (1 = 232 нм) гептановой фазы. Количество продуктов, реагирующих с тоиобарбитуровой кислотой (ТБК-продукты), определяли флуорометрически [24]. Интенсивность флуоресценции возбуждения определяли при помощи флуориметра «Биан 130». Кинетические величины прямого инициированного окисления липидов молекулярным О2 в присутствии динитрилазобисизомаслянной кислоты (инициатора свободнорадикального окисления) также определяли в экстрактах. Выражали период индукции (ПИ) как время, затрачиваемое на поглощение пробой 25 мм3 О2, а скорость окисления (СО) - углом наклона линейного участка кинетической кривой. Схемы опытов - перед описанием каждой серии (и в таблицах).
АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ
Математическую обработку результатов прово-
дили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [11], используя вариационную статистику для малых рядов наблюдений и вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (m) и среднеквадратиче-ское отклонение (о). Для оценки достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стъюдента (t) и степень вероятности (р). Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирование, рассчитывая такие же статистические показатели. Различия считали достоверными при значениях р < 0.05.
В работе использованы : 1. Тромбин и фибриноген бычьей крови («Технология-стандарт»), 2. Тромбопластин (кадаверный лиофильно высушенный, «Технология-стандарт»). 3. Каолин (легкая фракция фирмы «Технология-стандарт»), 4. Набор «D-dimer test» («Roche»), 5. Изопропанол - ч. (дополнительная очистка простой перегонкой), 6. Хлорбензол - ч. (дополнительная очистка простой перегонкой), 7. Бутанол - х. ч., 8. Ацетат свинца х.ч. 9. Хлорид кальция х.ч. 10. Буфер Михаэлиса «Технология-стандарт», 11. Витамин С (Hemofarm D.D.)
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Схема и результаты опытов 1-й серии представлены табл. 1, где видно, что без аскорбата в рационе у животных уже через 2 недели в тромбоцитах растет уровень липидпероксидов. Сокращение периода индукции (ПИ) выявилось через 4 и заметнее через 6 и 8 недель от начала опыта. Рост скорости индуцированного окисления (СО) и рост уровня липидпероксидов обнаруживается через 4 недели, прогрессируя до конца наблюдений. При поступлении с рационом аскорбата в количестве, составляющем 25% от потребности, динамика сдвигов ЛПО сохраняется, однако прирост уровня липид-пероксидов менее выражен. С увеличением количества аскорбата до 50% и особенно до 75% от потребности замедление прироста липидпероксидов ещё значительнее. Так, при количестве, составляющем 75% от потребности, сдвиги обнаруживаются лишь через 8 недель, не превышая найденных через 2 недели на фоне питания С-авитаминным рационом.
С увеличением количества витамина С в рационе (в 2 раза выше потребности - 11.0 мг/кг) уже через 4 недели падает в тромбоцитах уровень ДК, ТБК и скорость окисления, удлиняется период индукции (ПИ). После 6 и особенно 8 недель от начала опыта сдвиги в том же направлении усиливаются (заметнее снижается уровень ДК, ТБК и удлиняется ПИ, заметнее снижалась и скорость окисления).
С увеличением количества аскорбата в 4 раза от потребности отклонения до 6-й недели не выявлялись, а через 8 недель уровень липидпероксидов ДК и ТБК оказался выше контрольных значений, сократился период индукции, и повысилась ско-
рость окисления. При введении аскорбата в количестве, превышающем потребность в 8 раз, тенденция роста содержания липидпероксидов и скорости окисления, наряду с тенденцией к укорочению периода индукции, выявились через 6 недель, и отклонение в этом случае оказалось выше, чем при 4-
кратной дозе аскорбата после 8 недель введения. Примерно такие же сдвиги вызвало 16-кратное количество витамина С в рационе, однако появлялись они быстрее - после 6 недель (исключение составил только сдвиг периода индукции, который обнаружился лишь после 8 недель опыта).
Таблица 1. Изменения ЛПО и АОП в тромбоцитах морских свинок неполучавших витамина С, получавших его в количестве, равной потребности, ниже потребности и в превышающих потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (строки 1,2, 3 и 4 - соответственно после 2, 4, 6 и 8 недель)
Показатели Контроль (получали ас-корбат по 5.5 мг/кг), n=10 Животные (n - 5 на каждом этапе) получали АК (мг/кг массы тела) в дозах:
0.0 1.375 2,75 4,125 11,0 22,0 44,0 88,0
ДК, А/мг ЛП 0.079±0.0 6 0.083±0.002* 0.086±0.004* 0.097±0.004* 0.099±0.005* 0.082±0.005 0.083±0.006 0.089±0.004* 0.094±0.005* 0.080±0.007 0.081±0.006 0.084±0.003* 0.086±0.003* 0.079±0.004 0.077±0.005 0.080±0.002 0.083±0.004* 0.074±0.007 0.069±0.009* 0.063±0.005* 0.059±0.006* 0.078±0.009 0.083±0.008 0.079±0.011 0.086±0.009* 0.081±0.009 0.077±0.007 0.074±0.007 0.089±0.004* 0.076±.0.005 0.077±0.004 0.084±0.008* 0.090±0.008*
ТБК, ед./мг ЛП 0.47±0.02 0.48±0.01 0.53±0.04* 0.58±0.02* 0.62±0.03* 0.48.±0.01 0.51±0.04 0.56±0.02* 0.61±0.10* 0.47±0.01 0.51±0.02 0.55±0.06 0.57±0.03* 0.48±0.09 0.45±0.07 0.47±0.08 0.52±0.02* 0.50±0.03 0.43±0.04* 0.40±0.03* 0.37±0.05* 0.48±0.07 0.46±0.09 0.52±0.08 0.55±0.06* 0.47±0.08 0.49±0.09 0.50±0.07 0.57±0.03* 0.48±0.04 0.55±0.05* 0.59±0.04* 0.58±0.05*
ПИ, мин/мл 70.1±2.00 73.1±1.06 65.2±1.04* 63.3±1.01* 55.6.±1.04 71.5±1.04 66.4±2.06 64.3±1.14 57.2.±1.04* 68.2±1.05 67.1±1.08 65.5±1.19 59.0.±1.05* 72.5±1.07 73.2±1.06 68.7±1.09 71.1.±1.03 74.5±1.02 77.9±1.07* 82.6±1.09* 87.8.±1.10* 74.2±1.07 72.7±1.06 75.5±1.11 64.0.±1.03* 71. 6± 1.06 69.3±2.07 67.4±1.10 60.2.±1.03* 70.3±2.05 68.7±.1.02 67.9±1.10 66.2.±1.06*
СО, мм3/мл/ мин 0.68±0.04 0.72±0.07 0.77±0.05* 0.82±0.04* 0.90.±0.02* 0.69±0.08 0.74±0.07 0.78±0.05* 0.80.±0.03* 0.67±0.06 0.70±0.07 0.71±0.06 0.77.±0.06* 0.71±0.04 0.72±0.06 0.74±0.08 0.76.±0.04* 0.67±0.04 0.62±0.04* 0.55±0.09* 0.51±0.04* 0.64±0.06 0.66±0.05 0.70±0.11 0.75±0.02* 0.60±0.06 0.59±0.05 0.73±0.09 0.78±0.06* 0.67±0.03 0.69±0.02* 0.70±0.05* 0.68±0.07*
Обозначения: ДК - диеновые конъюгаты, ТБК - липоперекиси, взаимодействующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ -
период индукции, СО - скорость окисления, ЛП - липид
Отсутствие аскорбата в рационе ведет к ускорению липидпероксидации, выявляющемуся уже через 2 недели после перехода на С-авитаминный рацион, и нарастающему в дальнейшем. Количества аскорбата, составляющие часть суточной потребности, ограничивают эти сдвиги и отодвигают сроки их наступления в степени, пропорциональной дозе. Двукратный избыток витамина С в питании предупреждает появление сдвигов ЛПО, а при использовании его в течение четырёх недель в небольшой степени тормозит её и повышает АОП тромбоцитов. Четырёхкратный избыток аскорбата к концу наблюдений ускоряет ЛПО и снижает АОП тромбоцитов лишь после 8 недель. Аналогично влияет и 8-кратная доза, действие которой чуть более выражено, чем 4-кратной. Доза аскорбата, превышающая потребность в 16 раз, ускоряет ЛПО и снижает АОП заметнее, чем 8-кратная доза.
Данные табл. 2, полученны у этих же свинок и в те же срок при изучении уровня маркеров НВСК и толерантности к тромбину. Видно, что у свинок, рацион которых лишен витамина С, через 2, 4 и 6 недель от начала опыта повышен уровень факторов (фф.) Р3 и Р4. К концу 8 недели их содержание оказалось ниже контрольного значения. Снижается через 6 и заметнее через 8 недель и уровень фибриногена. Уровень ПДФ, несколько увеличившийся к концу 6-й недели, через 8 недель оказывается ниже контрольного значения. Уровень РКМФ возрос уже через 4 недели, но через 8 недель также упал ниже контрольной величины. Ниже контрольного к концу опыта оказался и уровень Б-димеров. Толерантность к тромбину, снизилась против контроля через 6 недель (на 14%) и через 8 недель (на 37%, р<0.05).
Таблица 2. Интенсивность НВСК, фибринолиз и ТкТР у свинок неполучавших аскорбата, получавших его в дозе, равной суточной потребности, в дозах, ниже потребности и в дозах, превышающих потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (строки 1,2, 3 и 4 - соответственно после 2, 4, 6 и 8 недель опыта)
Показатели Контроль (5.5 мг/кг) Свинки (п - 5 на каждом этапе) получали АК (мг/кг массы тела) в дозах:
0.0 1.375 2,75 4,125 11,0 22,0 44,0 88,0
Ф. Рз,% 80.2±1.3 84.0±1.0* 85.7±1.1* 85.9±1.0* 70.0±1.3* 81.2±1.1 84.0±1.6 84.9±1.1* 73.6±1.0* 82.0±1.0 85.6±1.5 82.4±2.3 75.1±0.8* 80.9±1.0 84.0±1.2 85.9±1.4 77.3±1.0* 83.6±1.4 85.4±1.6 85.1±1.7 87.0±1.8* 82.7±1.3 84.1±1.6 86.1±1.9 88.3±1.1* 84.4±1.9 86.7±2.1 89.7±1.0* 89.9±1.3* 87.±2.8 86.4±1.9 85.0±1.8 91.6±1.9*
Ф. Р4, с 3.0±0.02 3.4±0.06 3.6±0.03* 3.7±0.03* 2.5±0.02* 3.3±0.04 3.4±0.07 3.5±0.04 2.7±0.02* 3.0±0.02 3.2±0.05 3.3±0.08 2.8±0.01* 3.0±0.05 3.1±0.04 3.3±0.07 2.9±0.04 3.2±0.09 3.4±0.09 3.5±0.11 3.6±0.07* 3.4±0.05 3.2±0.06 3.4±0.09 3.7±0.06* 3.6±0.09 3.5±0.07 4.1±0.07* 4.2±0.06* 3.7±0.06 3.6±0.07 3.7±0.08 4.3±0.07*
ФГ, г/л 2.4±0.02 2.2±0.07 2. 1 ±0. 11 1.9±0.04* 1.5±0.02* 2.2±0.11 2.2±0.17 2.1±0.06 1. 9±0.01* 2. 1 ±0. 11 2.2±0.14 2.3±0.08 2.1±0.03 2.0±0.10 2.2±0.11 2. 1 ±0. 11 2.2±0.09 2.1±0.08 2.0±0.09 2.2±0.08 2.2±0.12 2.1±0.09 2.2±0.06 2.2±0.06 2.6±0.03 2.2±0.05 2.3±0.07 2.4±0.05 2.7±0.09* 2.2±0.04 2.2±0.07 2.5±0.06 3.0±0.06*
ПДФ, мг% 14.1±0.8 14.2± 1. 3 14.9± 1. 1 16.0.±0.7* 11.5±0.7* 14.7±1.1 15.3±1.0 15. 9± 1.0* 12.1±0.4* 15.1±1.1 15. 6± 1. 0 14.0±0.6 12.8±0.7* 15.0±1.9 15.1ё±1.3 14.7±0.9 14.3±0.5 14.6±1.4 14.7±1.2 15.0±1.3 15.9±0.9* 14.4±1.2 14.7±1.1 15.2±1.0 16.4±0.9* 15.0±1.3 15.1 ±0. 8 16.1±0.6 17.3±0.8* 15. 4± 1. 1 16.0±0.9 17.2±1.4 18.4±0.9*
РКМФ, мкг/мл 22.1±0.8 23.1±1.3 24.7±0.9* 20.0±0.5 17.6±0.7*" 23.2 ±1.1 24.3±1.2 22.1±0.7 18.3±0.5* 23.2 ±1.1 22.4±1.1 22.9±2.0 19.8±1.0* 22.8 ±1.1 22.1±0.8 22.0±0.9 23.4±0.3* 23.2±0.7 23.6±0.9 23.9±0.8 24.9±0.8* 23.9±0.8 24.0±0.9 24.9±0.7* 25.2±0.9* 24.7±0.9 25.1±1.2 24.6±1.7 26.7±1.1* 24.5±1.1 25.0±1.3 25.3±1.7 26.9±1.5*
Б-Д, мкг/мл 0.18±0.0 10 0.21±0.010 0. 18±0.011 0.17±0.006 0.15±0.003 * 0.19±0.013 0.18±0.011 0.20±0.061 0.16±0.011 * 0.20±0.011 0.21±0.013 0.19±0.008 0.17±0.009 0.20±0.012 0.21±0.018 0.17±0.006 0.18±0.009 0.19±0.013 0.18±0.014 0.21±0.015 0.24±0.011 * 0.21±0.015 0.22±0.013 0.23±0.014 0.25±0.015 * 0.21±0.012 0.22±011 0.24±0.012 0.25±0.013 * 0.22±0.012 0.24±011 0.24±0.009 0.27±0.011 *
ТкТР, % 100±2.3 96.8±2.3 94.7±2.6 86.0±2.3* 63.2±1.4* 97.4±1.9 97.9±1.4 90.5.±1.3 67.19±1.1* 93.2±1. 95.4±1.7 92.6±1.3 73.9±1.4* 97.6±1.7 93.6±1.9 91.3±1.4 91.9±1.4 98.2±1.5 102±2.9 102±1.9 99.8±2.4 102±1.7 106±2.8 108±1.9 101±2.4 101±1.9 106±3.2 111 ±2. 9 * 112±3.4* 112±1.8* 119±2.0* 124±2. 1 * 129±2.6*
Обозначения: как в тексте, знак * - достоверное отличие от контроля, знак + - от значений в 3-й колонке
В присутствии в рационе аскорбата в количестве, составляющем 25, 50 или 75% от суточной потребности, изменения, которые наблюдались в условиях С-авитаминного питания, заметно уменьшились уже при наименьшем количестве аскорбата, и ещё заметнее при введении аскорбата в количестве, составляющем 50% от потребности в нём. При количестве аскорбата, составляющем 75% от суточной потребности несколько ниже контроля в конце опыта оказался уровень ф. Р3, и несколько выше контрольного - уровень РКМФ. Остальные величины были равны контрольным.
При введении аскорбата в количестве, 2-кратно превышающем потребность, через 8 недель обнаружился прирост уровня фф. Р3 и Р4, ПДФ, РКМФ и Б-димеров. При введении аскорбата в количествах 4-, 8- и 16-кратных против потребности, к концу наблюдений (т.е. через 8 недель от начала опытов) также обнаружился рост уровня этих маркеров НВСК в степени, несколько превышающей найденный при 4-кратной дозе. Кроме того, при наибольшей из доз аскорбата найдено повышение ТкТР (на 12-20% против контроля), в то время как
при меньших дозах наблюдалась лишь статистически неподтверждающаяся тенденция увеличения этого показателя.
В табл. 3 представлены схема и результаты опытов, проведенных на аскорбатнезависимых животных (белых крысах), у которых оценивали изменения ЛПО, АОП, НВСК и ТкТРфибринолиза при их содержании на рационе без добавления аскорбиновой кислоты и с её возрастающими количествам.
Здесь видно, что контрольная группа получала полноценный рацион, включавший витамин С в количестве, соответствующем суточной потребности для свинок (рацион для крыс, как отмечено выше, витамина С не содержит и крысы в нём не нуждаются).
Крысы подопытных групп получали по 22.0, 44,0 или 88 мг/кг массы, т.е. 4-, 8- или 16-кратный избыток, с тем, чтобы выяснить, как это влияет на ЛПО, АОП и гемостаз у животных, не нуждающихся в постоянном поступлении витамина С извне.
Таблица 3. ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменный уровень маркеров ВТФ, фибринолиз и ТкТР у крыс, получавших аскорбат в дозах, эквивалентных лечебным (верхняя строка - 2, вторая сверху - 4, третья сверху - 6 и четвертая - 8 недель; п = 5 на всех этапах)
Крысы получали в составе рациона АК (мг/кг)
5.5 (контроль) 22.0 44.0 88.0
0.051+0.002 0.046+005 0.041+004* 0.034+003*
ДК, А/мг ЛП 0.048+0.003 0.039+008* 0.037+009* 0.047+008
0.050+0.003 0.035+0.003* 0.055+0.009 0.058+0.009*
0.052+0.004 0.036+0.007* 0.063+0.007* 0.065+0.006*
0.76+0.03 0.71+0.06 0.68+0.04* 0.61+0.05*
0.77+0.05 0.65+0.04* 0.67+0.03* 0.82+0.02*
ТБК, ед./мг ЛП 0.79+0.06 0.62+0.06* 0.74+0.07 0.85+0.06*
0.78+0.03 0.61+0.05* 0.85+0.07* 0.85+0.09*
45.3+1.8 45.9+2.0 52.7+2.0* 52.9+1.2*
45.7+1.6 54.5+1.8* 54.7+1.6* 40.3+1.1*
НИ, мин/мл 46.4+1.7 54.8+1.8* 42.1+0.7 42.2+0.8*
45.1+1.6 54.4+1.7* 40.0+1.3* 42.1+1.1*
0.77+0.03 0.76+0.04 0.70+0.04* 0.67+0.05*
СО, м3/мл/мин 0.74+0.04 0.67+0.03* 0.67+0.03* 0.72+0.09
0.76+0.07 0.66+0.04* 0.79+0.09 0.84+0.06*
0.77+0.05 0.65+0.06* 0.85+0.04* 0.86+0.07*
87.3+1.7 87.9+1.9 81.1+1.2* 80.0+1.1*
90.2+1.6 79.4+1.8* 89.8+1.8 93.2+1.0*
Ф. Р3,% 89.6+1.8 77.9+1.7* 97.1+1.4* 97.9+1.6*
87.9+1.8 77.1+1.4* 99.6+1.3* 98.8+1.1*
3.3+0.02 3.3+0.02 3.0+0.01* 2.8+0.02*
3.1+0.02 3.0+0.02* 3.3+0.04 3.4+0.03*
Ф. Р4, с 3.2+0.04 2.9+0.01* 3.9+0.02* 4.0+0.02*
3.3+0.05 2.7+0.03* 3.9+0.03* 4.1+0.04*
2.1+0.05 2.2+0.09 2.1+0.07 2.0+0.06
2.0+0.07 2.1+0.08 2.3+0.09 2.2+0.08
ФГ, г/л 2.2+0.05 2.2+0.08 2.3+0.08 2.5+0.09
2.3+0.07 2.1+0.06 1.9+0.07* 1.8+0.07*
15.1+1.0 14.9+1.2 13.4+1.0* 13.0+1.0*
15.3+1.1 13.7+0.4* 13.9+0.4 14.8+0.4
ПДФ, мг% 14.9+1.2 13.3+0.8* 15.9+0.3* 15.7+0.2*
14.7+1.5 13.5+0.5* 16.7+0.4* 16.1+0.3*
23.8+1.3 24.2+1.0 21.1+1.0* 22.6+1.1
24.0+0.8 22.2+0.7* 22.9+0.9 22.8+0.7
РКМФ, мкг/мл 23.7+1.1 21.7+0.7* 25.6+0.7* 25.9+0.8*
24.2+0.9 21.2+0.6* 26.5+0.6* 26.4+0.7*
0.20+0.01 0.17+0.01 0.17+0.01* 0.16+0.02*
0.17+0.04 0.14+0.03* 0.21+0.03 0.20+0.03
Б-Д, мкг/мл 0.18+0.09 0.14+0.01* 0.24+0.02* 0.25+0.04*
0.18+0.07 0.13+0.02* 0.24+0.03* 0.24+0.05*
99.1+3.4 97.0+3.5 96.1+3.3
ТкТР, % 102+3.2 113+3.4* 115+3.2*
100+3.0 120+2.1* 127+2.4* 133+3.1*
124+3.0* 132+3.1* 137+3.0*
Обозначения: как к таблицам 1 и 2
С увеличением количества аскорбата в 4 раза уже через 2 недели наблюдалось замедление ЛПО и рост АОП (снижение в тромбоцитах уровня ДК, ТБК, удлинение ПИ и замедление СО). То же обнаружилось и через 4 недели от начала опыта. Однако через 6 недель значения всех этих показателей сравнялись с контрольными величинами, т. е. восстановилась исходная интенсивность перекисного окисления липидов, а через 8 недель выявилось достоверное ускорение ЛПО (прирост уровня ДК и
ТБК) и снижение АОП (укорочение ПИ и рост СО).
Введение с рационом 8-кратного количества аскорбата уменьшило (начиная с 4-й недели) уровень ДК и ТБК, замедлило скорость СО и удлинило ПИ, т.е. замедлило процессы ЛПО и повысило АОП. Все эти изменения далее не усиливались: степень убыли липидпероксидов, степень изменения показателей АОП через 6 и 8 недель сохраняли значения, выявлявшиеся через 4 недели. То же относится и к сдвигам толерантности к тромбину, которая
увеличилась в те же сроки и примерно в той же степени, что и при 8-кратной дозе аскорбата.
При количестве аскорбата, превышающем суточную потребность в 16 раз, наблюдались такие же сдвиги, с той разницей, что эффект через 2 недели был выше, а через 4 недели (т.е. быстрее, чем при 8-кратной дозе) произошло выравнивание всех показателей с контрольными величинами. Спустя 8 недель появились такие же по степени признаки ускорения ЛПО и снижения АОП, какие нашли при 8-кратном количестве аскорбата.
ВЫВОДЫ
1. Исключение витамина С из рациона аскорбат-зависимых животных ускоряет липидпероксида-цию, повышает коагулоактивность тромбоцитов, интенсифицирует непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, которое затем замедляется при длительном нахождении на С-авитаминном питании.
2. Витамин С в количествах, не достигающих суточной потребности, ограничивает сдвиги ли-пидпероксидации, двукратный избыток предупреждает их появление, а в количествах, эквивалентных лечебным дозам, в первые недели проявляет антиоксидантный эффект, сменяющийся по мере удлинения длительности введения прооксидант-ным.
3. У аскорбатнезависимых животных витамин С в малых дозах обнаруживает первоначально анти-оксидантный эффект, сменяющийся прооксидант-ным быстрее, чем это имеет место у аскорбатзави-симых животных, а в количествах, эквивалентных лечебным, дозазависимо снижает антиоксидантный потенциал и ускоряет липидпероксидацию в тромбоцитах.
4. Изменения в гемостазе у аскорбатзависимых и аскорбатнезависимых животных следуют за сдвигами интенсивности перекисного окисления липидов (при ускорении ЛПО и снижении АОП коагулоактивность тромбоцитов, непрерывное внутрисосудистое свертывание крови интенсифицируются, а толерантность к тромбину падает, при замедлении ЛПО и повышении АОП снижается коагулоактивность тромбоцитов, замедляется НВСК и растет ТкТР).
Полученные данные обосновывают необходимость глубокого изучения дозазависимости влияния аскорбата на гемостаз при использовании его в терапии заболеваний, сопровождающихся гемоста-тическими нарушениями.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Андреенко Г В, Лютоа Л.В. Значение аскорбиновой ки-
слоты в сохранении функции противосвертывающей
системы крови // Система свертывания крови и фибри-
нолиз. Киев: Здоровья, 1969. С.8-9
2. Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы
гемостаза. Томск: ТГУ, 1980. 310 с.
3. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение
внутренних болезней. Кровоточивость, или геморраги-
ческий синдром. Дифференциальная диагностика. М.: МГУ, 2002. - 75 с.
4. Бышевский АШ, Мохнатое В. Метод определения анти-
плазмина в сыворотке крови // Система свертывания крови и фибринолиза. Киев: Здоровья. 1969. С. 220-221
5. Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция // Сверд-
ловск: Средне-Уральское книжное издательство, 1978. 124 с
6. Бышевский А.Ш. Способ определения содержания про-
дуктов деградации фибрина: А.С. № 1659855, 1.03. 1991 г, публикация в Бюлл. № 24, 30.06. 1991
7. Бышевский А.Ш., Кожевников ВН. Витамины и здоровье
женщины. Красноярск: КГУ, 1991. 192 с
8. Бышевский А.Ш. и др. Способ определения толерантно-
сти животных к тромбину. Патент РФ № 2219546, 20.12.2003
9. Бышевский А.Ш. и др. Связь гемостаза с перекисным
окислением липидов. М.: Медицинская книга, 2003. 95 с
10. Воробьева Н.М. и др. Повышение Д-димера в период лечения антикоагулянтами и рецидивы венозных тромбозов - есть ли связь? // Матер. IV Всероссийской конф. «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии». М.: АМН РФ, 2009. С.108-109
11. Гланц С.А. Медикобиологическая статистика. М.: Практика. 1998. 112 с
12. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. Казань: ФЭН АНТ, 2000. 367 с
13. Ковалевский К.Л. Содержание мелких лабораторных животных в вивариях. М.: Сельхозгиз, 1949. 135 с
14. Кудряшов БА. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови // М.: Медицина, 1975. 488 с.
15. Кузник Б.И. и др. Докл. симпозиума «Биологические проблемы Севера». Петрозаводск: Петрозаводский ун-т, 1976. С. 77-79
16. Курцинь О.Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс. М.: Институт питания АМН ССР, 1952. 5 с
17. Меньшиков Ф.К. Об эритропоэтической функции костного мозга при экспериментальном авитаминозе С // М.: Сб. новостей НИИП, 1938. С.17-29
18. Мищенко В.П. и др. Перекисное окисление липидов, антиоксиданты и гемостаз. Полтава: АСМИ (Украина), 2005. 159 с
19. Момот А.П. и др. Методика и клиническое значение паракоагуляционного фенантролинового теста. Клин. лабор. диагностика, 1999. № 4. С. 17-20.
20. Орлова О.В. и др. Маркеры тромбообразования и воспаления при остром клеточном, гуморальном и персисти-рующем отторжении сердечного трансплантата с гемо-динамическими нарушениями. Матер. IV Всероссийской конф. «Клиническая гемостазиология и гемореоло-гия в сердечно-сосудистой хирургии». М., 2009. С.365-367
21. Савинов Б.Г. Каротин Киев: АН УССР, 1948. 131 с
22. Самаль А.Б. и др. рН среды как фактор регуляции функциональных свойств тромбоцитов // Гематол. и трансфу-зиол., 1989. Т.34, № 2. С. 35-38.
23. Смирнов М.И. Витамины // М.: Медицина. 1974. 495 с
24. Ушкалова ВН. Комплексный анализ липидов крови спектрофотометрическим, флуорометрическим и кинетическим методами // Лаб. дело. 1987. № 6. С. 446-460.
25. Шараев ПН. Витамины и здоровье // Ижевск: «Экспертиза», 2004. 108 с
26. Широков В.Ю. Значение нарушений внутрисосудистого компонента микроциркуляции в патогенезе хронического генерализованного пародонтита у больных с патологией желудочно-кишечного тракта и в динамике лечения: Автореф. дис. ... докт. мед. наук Саратов, 2009. 42
с
27. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз. Санкт-Петербург, 2000. 222 с
28. Casanueva E. Possible interplay between vitamin C deficiency and prolactin in pregnant women with premature rupture of membranes: facts and hypothesis // Med. Hypotheses, 2005. Vol, 64, № 2. P. 11-13.
29. Codoner-Franch P. Mandarin juice improves the antioxidant status of hypercholesterolemic children // J. Pediatr.Gastroenterol. Nutr. 2008. Vol. 47, № 3. P.349-355.
30. Levi M. New treatment strategies for disseminated intravascular coagulation based on current understanding of the pathophysiology // Ann. Med., 2004. Vol, 36. № 1. P.41-49
31. Moerloose P. Should neurologists measure D-dimer
concentrations? // Lancet Neurol.. 2003. № 2. P. 77
32. Shirakawa A.K. 1, 25-dihydroxyvitamin D3 induces CCR10 expression in terminally differentiating human B cells // J. Immunol., 2008. Vol, 180, № 5. P. 2786-2795.
33. Junghans E. Die Bahandlung von gynecologischen Blutungen mit Vitamin C // Klinisch. Wschr., 1935. Vol. 14, № 25. S. 899-911
34. Jurk K. Platelets: physiology and biochemistry // Semin. Thromb. Hemost., 2005. Vol. 31, № 4. P. 381-392.
35. Van Guilder G.P. Acute and chronic effects of vitamin C on endothelial fibrinolytic function in overweight and obese adult // J. Physiol., 2008. Vol.15, № 14. P. 3525-3535.
36. Wada H. Increastd plasma solubilit fibrinin patients with dissiminated iinravascular coagulation // Am. J. Hematol., 1996. №. 51. P. 255-260.
LIPIDPEROXIDATSIYA AND HEMOSTATIC AT ASKORBATDEPENDENT ANIMALS IN THEIR UPKEEP DIET WITHOUT ASCORBATE, WITH ITS DEFICIT AND SURPLUS
© 2009 E.M. Shapovalova
Tyumen State Medical Academy
We consider the differences in the reaction lipidperoxidation and hemostasis in askorbatdependent and askorbatindependent organisms in the absence of a deficit and an excess of vitamin C in the diet. We discuss the significance of these material in the selection of doses of vitamin C in the treatment of diseases occurring phenomena Hyperoxidation and inclinations to an accelerated thrombinogenesis. Key words. Ascorbate. Lipidperoxidation. Hemostasis
Shapovalova Elena Michaylovna Associate Professor Department of Analytical and Organic Chemistry. Тел (345-2) 92-10-64.
