CC BY
122
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Вива8ивйая1№ид8дпия1и1дн8ийВпия
ЛИМФОАНГИОГЕНЕЗ И МЕТАСТАЗИРОВАНИЕ ОПУХОЛЕЙ
А.А. Фильченков
Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, г.Киев
Фильченков Алексей Алексеевич, канд. биол. наук, 03022, Украина, г. Киев, ул. Васильковская, 45, тел./факс 8 (380 44) 258-16-56, e-mail: [email protected]
Проанализированы современные представления о молекулярных и клеточных механизмах, участвующих, в регуляции опухольассоциированного образования новых лимфатических, сосудов. Особое внимание уделено регуляции лимфоангиогене-за цитокинами VEGF-C/D и роли этих, факторов в лимфогенном метастазировании. Охарактеризованы основные методы оценки уровня VEGF-C, VEGF-D, а также плотности лимфатических, сосудов. Обсуждается перспективность определения указанных, показателей у больных, с различными формами солидных, опухолей с целью прогнозирования течения заболевания.
Ключевые слова: лимфангиогенные факторы, эндотелиальные клетки, лимфатические сосуды.
80
LYMPHANGIOGENESIS AND TUMOR METASTASIS
A.A. Philchenkov
Current knowledge concerning both molecular and cellular mechanisms controlling tumorassociated de novo formation of lymphatic vessels is analyzed. The special attention is focused on regulation of lymphangiogenesis by VEGF-C/D and their involvement in lymphatic metastasizing. The principal techniques used for the assessment of VEGF-C and VEGF-D content as well as the density of the lymphatic vessels are outlined. The prognostic/predictive potential of the above-mentioned parameters in the patients with different solid tumors is also discussed.
Тне Key words: lymphangiogenic factors, endothelial cells, lymphatic vessels.
Введение
Первые сведения о существовании лимфатических сосудов появились еще в XVII столетии. В 1627 г. была опубликована книга известного итальянского хирурга Гаспаро Азелли, в которой среди других анатомических данных были впервые описаны лимфатические («молочные») сосуды брыжейки тонкой кишки у собаки. Долгое время лимфатическую систему считали пассивным переносчиком жиров и других веществ, источником клеток, обеспечивающих иммунитет, а также дренажной системой, способствующей возвращению избытка тканевой жидкости в кровь.
Согласно современным представлениям лимфо-ангиогенез является процессом образования новых лимфатических сосудов, который происходит в нормальных и патологически измененных тканях и органах под воздействием паракринных регуляторов.
Лимфоангиогенез активируется во время эмбрионального и раннего постнатального перио-
да развития. Во взрослом организме временная инициация этого процесса наблюдается при воспалении, регенерации тканей и заживлении ран. В отличие от эмбриогенеза, когда первые лимфатические сосуды образуются из кардиальной вены, во взрослом организме лимфоангиогенез осуществляется за счет формирования отростков уже имеющихся лимфатических сосудов. При этом реализация лимфоангиогенеза не зависит от образования новых кровеносных сосудов. Открытие лимфоангиогенных факторов и расшифровка механизмов их действия позволили c новых позиций взглянуть на патогенез ряда воспалительных заболеваний (включая астму), лимфедемы, лимфоангиоматоза, диабета, ожирения и других. Примечательно, что даже название капитальной монографии («The Lymphatic Continuum Revisited»), которая увидела свет в мае 2008 г. [1], свидетельствует о пересмотре интереса к проблемам лимфологии.
В последнее время начали активно раскрываться сложные механизмы, регулирующие образование и рост лимфатических сосудов. В значительной мере этому способствовало развитие методов, позволяющих идентифицировать и выделять эндотелиаль-ные клетки лимфатических сосудов (ЭКЛС).
Новейшие успехи молекулярной лимфологии (открытие лимфоангиогенных цитокинов, рецепторов ЭКЛС, факторов транскрипции, генов и белковых маркеров лимфоангиогенеза) свидетельствуют о подобии процессов образования новых лимфатических и кровеносных сосудов. Как оказалось, регуляторами лимфоангиогенеза и ангиогенеза могут выступать одни и те же молекулы, например фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) или матриксная металлопротеиназа 2. Более того, недавно было показано, что антиангиогенный препарат рецентин (AZD2171) также ингибирует лимфоангиогенез [2].
Феномен диссеминации опухолевых клеток (ОК) по лимфатическим сосудам известен давно, но многие аспекты, касающиеся механизмов попадания ОК внутрь сосудов, миграции с лимфотоком и пролиферации в лимфатическом узле, до недавнего времени оставались неизвестными. Процесс лимфоангиогенеза имеет решающее значение для инициации лимфогенного метастазирования. Многие из недавно открытых лимфоангиогенных факторов (как прямого, так и опосредованного действия) способны обеспечивать проникновение ОК в интра и/или перитуморальные лимфатические капилляры (ЛК) и стимулировать перемещение ОК по лимфатической системе, блокируя при этом их гибель. Вместе с тем накапливается все больше данных о том, что продукция отдельных лимфоангиогенных факторов или высокая плотность ЛК могут служить критериями, прогнозирующими появление метастазов.
Цель данной лекции - дать читателю представление об общих принципах формирования опухольассоциированных ЛК, о ключевых молекулярных и клеточных компонентах лимфоангиоге-неза. Будут также рассмотрены особенности лим-фогенного метастазирования солидных опухолей. За рамками анализа остались вопросы разработки лекарственных препаратов, способных блокировать лимфоангиогенез и развитие лимфогенных метастазов, которые освещены в ряде недавних обзорных работ [3,4].
Молекулы и клетки, участвующие в лимфоангиогенезе
Начало изучению механизмов лимфоангиогенеза было положено установлением факта, что специфическим рецептором для VEGF Стипа является белок VEGFR3, который у взрослого человека экспрессиру-ется преимущественно в ЭКЛС [5]. Позже был выявлен еще один лиганд VEGFR3 - VEGF Dтипа, а также показана способность VEGFC и VEGFD специфически связываться с рецепторным белком VEGFR2 [6]. Опыты по блокированию лигандиндуцированной активации VEGFR3 в период эмбриогенеза убедительно свидетельствуют о необходимости VEGFR3 для об-
разования новых лимфатических сосудов [7]. Долгое время главным медиатором образования новых ЛК считался рецепор VEGFR3, а не VEGFR2, который опосредует стимуляцию ангиогенеза. Однако теперь установлено, что VEGFR2 и VEGFR3 принимают участие в регуляции как ангиогенеза, так и лимфоангиогенеза (рис. 1).
Рис. 1. Лигандрецепторные взаимодействия различных представителей семейства VEGF и их возможное участие в стимуляции ангиогенеза и лимфоангиогенеза в опухолях. PlGF—плацентарный фактор роста
Оба фактора VEGFC и VEGFD способны инициировать лимфоангиогенез in vivo [8,9]. Причем для реализации их лимфоангиогенных эффектов необходим двухэтапный процессинг проVEGFC и про-VEGFD с участием плазмина и пропротеинконвертаз.
Помимо VEGFR3 и VEGFR2, VEGFC способен специфически взаимодействовать с нейропилином-2 и а9Ь1-интегрином, которые также присутствуют на поверхности ЭКЛС [10,11]. Считается, что нейропилин-2 может поддерживать миграцию ЭКЛС, образуя комплексы с рецепторами VEGFR3 и VEGFR2. Антитела против нейропилина-2, которые препятствуют связыванию VEGFC, подавляют миграцию, но не пролиферацию ЭКЛС [12].
Следует отметить, что такое действие антител против нейропилина-2 лишь частично зависит от активации рецептора VEGFC.
Роль интегринов, в частности гетеродимера a9b1 в регуляции лимфоангиогенеза связывают с адгезией, миграцией и выживанием ЭКЛС. В отличие от рецепторов факторов роста, интегрины лишены собственной киназной активности, но способны активировать регуляторные сигналы, образуя комплексы фокальной адгезии с внутриклеточными киназами и адап-терными белками. Как оказалось, белки внеклеточного матрикса, такие как коллаген и фибронектин, способны через активацию Ь1-интегрина существенно усиливать фосфорилирование киназы VEGFR3. Интересно, что все животные, «нокаутированные» (то есть лишенные обеих аллелей гена) по а9-интег-рину, погибают в первые 2 недели после рождения с признаками лимфедемы и хилоторакса [13]. Активация специфичного для ЭКЛС фактора транскрипции PROX1 приводит к повышению экспрессии а9Ь1-ин-
тегрина, VEGFR3 и подвижности ЭКЛС in vivo. Более того, данный интегрин способствует миграции клеток, индуцированной VEGFC и VEGFD путем прямого связывания с указанными цитокинами [11]. При этом антитела против а9Ь1-интегрина подавляют клеточную подвижность, индуцированную VEGFC, что подтверждает значимость а9Ь1-интегрина для реализации процессов лимфоангиогенеза. Аналогичную роль играют некоторые другие интегрины (a1b1, a2b1, a4b1). Вместе с тем получены свидетельства различий в интегринопосредуемой регуляции лимфоан-гиогенеза и ангиогенеза. Установлено, например, что avинтегрины, которые, как известно, являются значимыми регуляторами ангиогенеза, не участвуют в образовании новых ЛК [14].
В результате связывания специфических ли-гандов с VEGFR3 активируется киназа этого рецептора, что приводит к стимуляции пролиферации и миграции ЭКЛС, опосредованной МАРкиназой p42/p44 [15]. При опухолевом лимфоангиогенезе отмечается выбрасывание филоподий ЭКЛС в направлении ОК, которые продуцируют VEGFC, и таким образом осуществляется миграция ЭКЛС. Кроме того, в результате активации рецептора VEGFR3 происходит фосфорилирование и активация киназ Akt и JNK1/2, которые блокируют апоптоз и поддерживают жизнеспособность ЭКЛС [15,16]. Выживанию клеток опосредованному VEGFR3 может также содействовать киназа MKK4 [16]. Следует отметить, что на поверхности ЭКЛС выявляются гетеродимер-ные комплексы VEGFR3/VEGFR2, что в значительной степени затрудняет идентификацию внутриклеточных регуляторных сигналов, инициируемых собственно VEGFR3.
К индукторам лимфоангиогенеза также относятся VEGFA, щелочной фактор роста фибробластов (bFGF), инсулиноподобные факторы роста (IGFI и IGFII), фактор роста гепатоцитов (HGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF) и некоторые другие (табл. 1).
Таблица 1
Лимфоангиогенные факторы и их специфические рецепторы
Лиганд Рецептор
VEGF-C/D VEGFR-3, VEGFR-2, нейропилин-2
VEGF-A VEGFR-2, нейропилин-1
bFGF FGFR-3
IGF-I/II IGF-1R
HGF c-Kit
Ангиопоэтин-1/2 Tie2
Интерлейкин-7 IL-7R
Эфрин В2 EphB4
PDGF-BB PDGFR a/b
Гормон роста GHR
Адреномедуллин CALCRl
FGFR-3 - рецептор bFGF 3 типа; IGF-1R - рецептор IGF1 типа; IL-7R - рецептор интерлейкина-7; GHR - рецептор гормона роста; CALCRl - рецептор, подобный рецептору кальцитонина; другие сокращения см. в тексте
J.A. Nagy и соавторы [17] сообщили о формировании новых лимфатических сосудов у бестимусных животных после трансфекции геном VEGFA в составе аденовирусного вектора. Следовательно, VEGFA является не только главным стимулятором ангиогенеза, но и лимфоангиогенным фактором.
В то же время, между указанными биологическими эффектами этого цитокина существуют определенные отличия. Например, для образования у бестимусных животных новых кровеносных сосудов необходимо постоянное присутствие VEGFA, тогда как для последующего развития сформированных ЛК это не обязательно [17]. Кроме того, действие VEGFA на ЛК может быть опосредованным (рис. 1), например, при участии макрофагов, которые продуцируют лимфоангиогенные факторы, либо путем повышения экспрессии VEGFC. Вывод об участии VEGFA в реализации механизмов лимфоангиогенеза подтверждают также данные, полученные на модели рака молочной железы (РМЖ) [18]. Оказалось, что нейтрализующие антиVEGFA-антитела способны существенно снижать плотность ЛК в опухоли и образование метастазов в лимфатических узлах.
PDGF, как известно, высвобождается тромбоцитами и регулирует пролиферацию и миграцию клеток мезенхимального происхождения. Кроме того, этот фактор роста повышает проницаемость сосудов. Опыты с использованием «нокаутированных» мышей показали абсолютную необходимость PDGF для нормального эмбрионального развития.
Приводятся [19] следующие доказательства прямого участия PDGF в лимфоангиогенезе: 1) антагонисты VEGFC/D или VEGFR3 не могут блокировать образование новых лимфатических сосудов, индуцированное PDGFBB; 2) PDGF способствует миграции ЭКЛС; 3) на поверхности ЭКЛС выявляются рецепторы PDGF и PDGFR); 4) PDGFBB стимулирует фосфорилирование киназ Akt, Src, Erk в ЭКЛС и 5) ЛК, формирующиеся при действии PDGF, также экс-прессируют PDGFR.
Следует остановиться на двух важных моментах. Во-первых, понятно, что лимфоангиогенные факторы не функционируют изолированно, а способны модулировать действие друг друга, в том числе через трансактивацию соответствующих рецепторов. Во-вторых, существование такой сложной системы регуляции образования новых ЛК указывает на то, что ингибирование активности только одного из группы лимфоангиогенных факторов вряд ли будет достаточным для блокирования лимфоангиогенеза с терапевтической целью.
Поскольку ЛК фактически не содержат перицитов или гладкомышечных клеток, главной мишенью для лимфоангиогенных факторов служат ЭКЛС. В процессе лимфоангиогенеза, помимо ЭКЛС, участвуют ОК и клетки стромы, которые продуцируют VEGFC/D, а также ассоциированные с опухолью макрофаги [20].
Кстати, макрофаги, с одной стороны, могут стимулировать пролиферацию ЭКЛС, а с другой - способны к трансдифференцировке и последующему встраиванию в стенку образующегося ЛК [21].
Обсуждая вопрос о клеточных механизмах формирования новых ЛК, следует отметить участие в этом процессе предшественников ЭКЛС, которые могут с периферической кровью поступать в опухолевые очаги из костного мозга. Впервые о существовании таких клеток-предшественников сообщили P. Salven и соавторы [22]. Они показали, что субпопуляция СD34-положительных клеток содержит клетки, которые коэкспресси-руют маркер стволовых клеток CD133 и рецептор VEGFR3. В присутствии лимфоангиогенных факторов происходит дифференцировка предшественников ЭКЛС в зрелые VEGFR3+CD1330^C. Субпопуляцию CDM-положительных моноцитов также можно рассматривать в качестве клеток-предшественников, поскольку после стимуляции in vitro на них появляются маркеры ЭКЛС.
Методы выявления лимфангиогенных факторов и ЭКЛС
Не останавливаясь на инструментальных неин-вазивных методах исследования лимфатических сосудов и лимфатических узлов, рассмотрим лабораторные методы, применяемые для выявления лимфоангиогенных факторов и ЭКЛС. Для оценки показателей лимфоангиогенеза у онкологических больных чаще всего используется ряд методов, основанных на взаимодействии антиген-антитело (иммуногистохимия, твердофазный иммунофер-ментный анализ (ELISA) и проточная цитометрия (ПЦ)), а также метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Высокочувствительные варианты иммуногис-тохимического анализа позволяют с помощью мо-ноклональных антител выявлять VEGFC, VEGFD, VEGFR3, а также характерные для ЭКЛК антигены в срезах опухолевой ткани, в отпечатках и мазках, полученных при тонкоигольной аспирационной биопсии. При этом удается не только идентифицировать указанные молекулы, но и установить их тканевую и клеточную локализацию. Сегодня в мире используется много коммерческих препаратов антител против VEGFC, VEGFD или VEGFR3 с разной чувствительностью и специфичностью, что не позволяет стандартизировать метод.
Биомаркер LYVE1, позволяющий дифференцировать лимфатические и кровеносные капилляры, был открыт в 1999 г. [23]. Большая часть исследований, посвященных изучению лимфоангиогенеза в опухолевой ткани, была проведена с применением антиLYVE1 антител. Однако снижение экспрессии LYVE1 в некоторых тканях при воспалительных реакциях, а также отсутствие этого маркера в отдельных опухольассоциированных ЭКЛС показывает, что для более адекватной оценки лимфоангиогенеза необходимо использовать LYVE1 в комбинации с другими маркерами ЭКЛС [24]. В последнее время выявлено более 30 белков, экспрессия которых является характерной для клеток, формирующих эндотелий лимфатических или кровеносных сосудов. Некоторые из этих маркерных молекул приведены в таблице 2.
Таблица 2
Биомаркеры ЭКЛС и ЭККС
Маркер Синоним Функция Наличие/ отсутствие
ЭКЛС ЭККС
LYVE-1 CRSBP-1 Рецептор гиалуронана + + -
Подопланин Gp38, T1?, AG-GRUS, D2-40 Трансмембранный гликопротеин + + -
Proxl Prospero-re-lated homeobox protein-1 Фактор транскрипции + + -
VEGFR-3 Flt-4 (fms-like tyrosine kinase 4) Рецептор VEGF-C и VEGF-D + -/+
Нейропи-лин-2 Корецептор VEGF-C и семафорина-У^ + -/+
CCL21 6Ckine, SLC, Exodus-2 Хемокин + -
а9-интегрин Молекула адгезии + -
LyP-1 Пептидный маркер ЭКЛС опухолевой ткани + -
Десмопла-кин Белок, взаимодействующий с кадгеринами + -
FOXC2 FKHL14, MFH-1 Фактор транскрипции + -
D6 Рецептор-«ловуш-ка» для хемокинов + -
5'-нуклео-тидаза 5'-nase, CD73 + -
CD34 Сиаломуцин Рецептор а-селек-тина; молекула адгезии +* + **
CD44 Рецептор гиалуро-нана, остеопонтина, фибронектина - +
CD54 Молекула адгезии - +
CD105 Эндоглин Низкоаффинный рецептор Ь1-и Ь3-TGF - +
VEGFR-1 Рецептор VEGF-A, VEGF-B и Р^ - +
а5-интегрин Рецептор фибро-нектина и инвазина; молекула адгезии - +
Версикан Хондроитинсульфат протеогликан - +
Нейропи-лин-1 Корецептор VEGF165 и сема-форина-ША - +
N- кадгерин Молекула адгезии - +
PAL-E Pathologische anatomie Leiden-endothelium Гликопротеин, ассоциированный с кавеолой - +
*Экспрессия в опухоль-ассоциированных, но не нормальных ЭКЛС **Экспрессия в предшественниках ЭККС
Для оценки плотности ЛК чаще других (помимо LYVE1) используют такие биомаркеры, как подопла-нин и Proxl либо их комбинации с другими специфическими для ЭКЛС молекулами в зависимости от типа исследуемой ткани. Их выявление может иметь прогностическое значение для онкологических больных (см. следующий раздел). В то же время использование биомаркеров лимфоангиогенеза и ангиогенеза позволило получить из кожи человека культуры ЭКЛС и эндотелиальных клеток кровеносных сосудов (ЭККС). Поскольку ЭКЛС сохраняют свои фенотипические признаки при длительном культивировании и их можно выращивать в виде трехмерных культур, стало возможным изучать интимные механизмы лимфоангиогенеза без применения экспериментальных животных.
К существенным недостаткам метода иммуно-гистохимии следует отнести субъективизм оценки конкретного врача морфолога и использование различных критериев учета антигенположительных клеток, что затрудняет сравнение результатов, полученных разными исследователями.
Метод ELISA позволяет проводить точную количественную оценку содержания исследуемого белка в биологических пробах. Достаточно информативным показателем в оценке прогноза заболевания считается определение (как правило, доопе-рационное) уровня лимфоангиогенных факторов в сыворотке крови онкологических больных.
Например, показано, что повышенный уровень VEGFC в крови пациентов с немелкоклеточным раком легкого, папиллярной карциномой щитовидной железы или раком пищевода коррелирует с наличием метастазов в лимфатических узлах [26-28]. Имеется сообщение о выявлении подобной коррелятивной зависимости в отношении сывороточного VEGFD у больных раком предстательной железы [29]. Более того, в случаях рака пищевода или желудка у больных с высокой концентрацией VEGFC в крови прогноз более неблагоприятен, а риск рецидивирования повышен [30,31]. Интересно, что средний уровень VEGFC в сыворотке крови больных с меланомой кожи [32], у которых метастазы были выявлены вблизи первичного очага, оказался намного меньше такового у больных с отдаленными метастазами. Применительно к лимфоангиогенезу метод ПЦ позволяет выявлять популяции клеток, экспрессирующих антигены ЭКЛК либо антигены, которые специфичны для предшественников таких клеток. Получение суспензии одиночных клеток из солидных опухолей связано с определенными (хотя и преодолимыми) трудностями. При этом не представляется возможным отдифференцировать интра и перитуморальные ЛК.
Наиболее перспективным, на наш взгляд, является выявление с помощью ПЦ различных предшественников ЭКЛК, циркулирующих в периферической крови, хотя с данной целью метод пока используется редко. Однако практическое значение ПЦ может возрасти, если будет установлена корреляция между уровнем циркулирующих предшественников ЭКЛК и клиникопатологическими характеристиками опухоли либо выживаемостью онкологических больных.
ПЦР предназначена для выявления в образце ткани заданной мРНК, а модификация этого метода, называемая «ПЦР в реальном времени», позволяет определять содержание мРНК количественно. Следует отметить высокую специфичность выявления продуктов амплификации за счет использования специально подобранных праймеров, а также быстроту метода. С помощью метода ПЦР в реальном времени была выявлена корреляция между экспрессией VEGFC в опухолевой ткани пищевода и наличием метастазов в лимфатических узлах [33].
Следует, однако, заметить, что анализ методом ПЦР не позволяет определить, в каких именно клетках экспрессируется выявляемый ген (ОК или примыкающие к ним клетки нормальных тканей). Кроме того, как известно, экспрессия гена на уровне мРНК не всегда отражает реальное содержание его белкового продукта.
Значение лимфоангиогенеза для метастазирования
Процесс метастазирования включает в себя каскад последовательных и взаимосвязанных этапов: инвазию злокачественных клеток вглубь окружающих тканей, стимуляцию лимфоангиогенеза и ангиогенеза, проникновение ОК в лимфатические и кровеносные сосуды (интравазация), продвижение ОК с током лимфы или крови, задержку в ближайших или в отдаленных органах и тканях в результате адгезии к сосудистому эндотелию, выход Ок из сосудов (экстравазация), адаптацию к условиям нового микроокружения, образование и рост вторичного (метастатического) опухолевого узла.
Приблизительно 80% солидных опухолей формируют метастазы преимущественно путем проникновения ОК в лимфатическую систему и только 20% - через кровеносные сосуды. Как правило, карциномы метастазируют лимфогенным (и значительно реже - гематогенным) путем, тогда как саркомы образуют вторичные опухолевые узлы главным образом после попадания ОК в кровеносное русло. Через лимфатические сосуды чаще всего распространяются клетки при таких формах злокачественных новообразований как рак предстательной железы, меланома, РМЖ, рак желудка и тонкой кишки, а также опухоли головы и шеи [34]. Известно, что задержка ОК, которые мигрируют лимфогенным путем, чаще всего происходит в одном или нескольких регионарных лимфатических узлах, называемых «сторожевыми» (СЛУ), первых на пути оттока лимфы. Более того, образование метастазов в регионарных лимфатических узлах считается одним из прогностических маркеров и важным критерием для выбора стратегии лечения [35].
На рис. 2 представлены основные этапы лимфо-генного метастазирования.
Как можно видеть, они подобны соответствующим этапам гематогенного метастазирования. Однако сравнивая 2 способа диссеминации ОК, следует отметить, что лимфогенный путь представляется более благоприятным для распространения и колонизации ОК.
■■У'
Рис. 2. Основные этапы лимфогенного метастази-рования: А — образование первичного опухолевого узла; Б — рост опухоли и секреция лимфогенных факторов; В — лимфоангиогенез в интра- и пери-туморальной зоне; Г — отделение ОК от первичной опухоли и их миграция в направлении лимфатических капилляров; Д — интравазация ОК в лимфатическую систему; Е — циркуляция ОК в лимфатическом сосуде с током лимфы; Ж — оседание ОК в
субкапсулярном синусе лимфатического узла (1,2 — приносящие и выносящие лимфатические сосуды); З — формирование и рост метастазов в лимфатическом узле
Во-первых, при отсутствии перицитов, гладко-мышечных клеток и базальной мембраны характерным признаком новых ЛК является повышенная проницаемость стенки капилляра [37]. Во-вторых, миграция по сосудистому руслу одиночных ОК и их кластеров осуществляется намного эффективнее благодаря большему диаметру ЛК по сравнению с кровеносными капиллярами (20-120 vs 7-9 мкм). И, в-третьих, в лимфатических сосудах практически отсутствуют стрессовые эффекты так называемой силы гидродинамического сдвига, которая действует в системе циркуляции крови. Благодаря этому значительно повышается выживание клеток с метастатическим фенотипом в условиях их субстрат-независимой диссеминации.
Ранее считалось, что лимфогенное метаста-зирование представляет собой лишь пассивный процесс, при котором ОК, случайно попав в лимфатические сосуды, имеющиеся вблизи первичного опухолевого очага, с током лимфы заносятся в лимфатические узлы.
Однако данные последних лет убедительно свидетельствуют, что стимуляция лимфоангиогенеза и последующая интравазация ОК в лимфатические сосуды являются важным условием для метастази-рования ОК в лимфатические узлы. Существенную роль в этих процессах играют соответственно лим-фоангиогенные факторы и протеиназа ММР2. Эксперименты с использованием рекомбинантного белка sVEGFR3Ig вектора с малыми интерферирующими РНК против гена VEGFC или антител против VEGFD свидетельствуют о непосредственной связи
между экспрессией VEGFC или VEGFD и образованием метастазов [38-40]. Кроме того, экспрессия VEGFC в клетках хирургически удаленных опухолей желчного пузыря достоверно (р < 0,001) коррелирует с образованием лимфогенных метастазов и худшей выживаемостью после операции [41]. Выявлена связь между уровнем мРНК и белка VEGFC в ткани рака желудка и инвазией ОК в лимфатические сосуды, а также формированием метастазов в лимфатических узлах [42]. Больные с высоким уровнем экспрессии VEGFC имели значительно худший показатель 5-летней выживаемости. Более того, уровень VEGFC оказался независимым прогностическим фактором риска смерти у больных раком желудка [42]. В другой работе [43] экспрессия VEGFC была зарегистрирована у 72,3% пациентов с немелкоклеточным раком легкого, а рецептора VEGFR3 - в 52,6% случаев. При этом коэкспресия VEGFC и VEGFR3 достоверно (р < 0,05) коррелировала с выявлением ОК в лимфатических сосудах и метастазов в лимфатических узлах. У больных с VEGFC-позитивными опухолями легкого прогноз был более неблагоприятным по сравнению с теми, у кого VEGFC в ткани опухоли отсутствовал. Результаты экспериментов по изучению прогностического значения VEGFC или VEGFD при разных формах солидных опухолей суммированы в таблице 3.
Таблица 3
Примеры корреляции между уровнем VEGF-C/-D, плотностью лимфатических капилляров, выявлением метастазов в лимфатических узлах и прогнозом
Тип опухоли Экспрессия Высокая плотность ЛК Метастазы в лимфатических узлах Неблагоприятный прогноз
VEGF-C VEGF-D
РМЖ + + +
- " - + + +
- " - + + +
Рак шейки матки + + + +
Рак эндометрия + + +
- " - + + +
- " - + +
Рак яичника + + + +
Немелкоклеточный рак легкого + + +
- " - + + +
Мелкоклеточный рак легкого + +
Плоскоклеточный рак ротовой полости + + +
- " - + + +
Рак языка + + +
Рак пищевода + + +
Тип опухоли Экспрессия Высокая плотность ЛК Метастазы в лимфатических узлах Неблагоприятный прогноз
VEGF-C VEGF-D
Рак желудка + + +
- " - + + +
- " - + + +
Рак толстой и прямой кишки + + + +
- " - + + + *
Рак поджелудочной железы + + + +
- " - + + + +
Гепатоцеллюлярная карцинома + + +
Холангиокарцинома + + +
Рак желчного пузыря + + +
Рак мочевого пузыря + + +
- " - + +
- " - + + +
Рак предстательной железы + +
- " - + +
- " - + +
Папиллярный рак щитовидной железы + +
- " - + +
Опухоли головы и шеи + +
- " - + +
Меланома + +
- " - + + + + +
Метастазы в отдельных органах
*При одновременном определении с плотностью кровеносных микрососудов
Другой механизм участия лимфоангиогенеза в процессах метастазирования состоит в стимуляции образования новых ЛК в СЛУ [44] (рис. 3).
На экспериментальных моделях было показано, что процесс может активироваться еще до момента попадания ОК в лимфатический узел, и в роли основных инициаторов лимфоангиогенеза в СЛУ выступают лимфоангиогенные факторы, продуцируемые клетками первичной опухоли. Образование новых ЛК внутри и вокруг подмышечных лимфатических узлов у больных РМЖ было подтверждено недавно в одной из работ [45].
Предполагается, что активация лимфоангиогенеза в СЛУ благоприятствует дальнейшему метаста-зированию в отдаленные органы и ткани. Однако этот вопрос продолжает оставаться малоизучен-
Группа регионарных лимфоузлов
Рис. 3. Лимфогенное и гематогенное метастазиро-вание опухолей: 1 — лимфоангиогенез в первичном опухолевом узле; 2 — лимфоангиогенез в регионарном лимфатическом узле; 3 — сторожевой лимфатический узел; 4 — отдаленный лимфатический узел;
5 — правый лимфатический проток; 6 — печень;
7—кость; 8 — головной мозг; 9 —легкие; 10 — ангиогенез в первичном опухолевом узле. Тонкими стрелками указано направление тока лимфы, толстыми стрелками — тока крови
ным. Исследования в эксперименте свидетельствуют, что индукция новых ЛК способствует появлению метастазов не только в лимфатических узлах, но и в легком [46,47]. На основании этих и некоторые других данных справедливо заключить, что формирование метастазов в лимфатических узлах может быть плацдармом для последующей колонизации метастатическими ОК легкого, печени, мозга и других органов. Более того, при солидных опухолях определенных локализаций резекция опухоли, проведенная одновременно с удалением региональных лимфатических узлов (в случае выявления в них метастатических очагов), является стандартом лечения, которое обеспечивает повышение продолжительности жизни больных без рецидивов и отдаленных метастазов.
Общеизвестно, что определенные типы опухолей преимущественно метастазируют в определенные органы или ткани. Например, метастазы РМЖ чаще всего выявляют в костях, печени, легком или мозге; метастазы меланомы - в легком; метастазы рака толстой и прямой кишки - в печени; а метастазы опухолей предстательной железы - в костях. Остается неясным, зависит ли такая избирательность от путей диссеминации ОК в организме. В онкологии уже больше столетия существует теория «семян и почвы», согласно которой опухоль ме-тастазирует в органы с наиболее благоприятными для ее роста условиями. Альтернативная точка зрения придает решающее значение анатомическим особенностям локализации первичного опухолевого очага. Например, у больных раком толстой и прямой кишки ОК чаще всего проникают именно в печень по портальной системе (более чем у 55% больных) [48].
Скорее всего, оба представления о преимущественном месте расположения метастазов следует признать обоснованными. В последнее время получены данные, проливающие свет на один из механизмов реализации теории «семян и почвы». Оказалось, что органоспецифическому метастази-рованию содействуют рецепторы хемокинов, экс-прессирующиеся на поверхности ОК. Как известно, хемокины представляют собой семейство секрети-руемых цитокинов, необходимых для активации нейтрофилов и моноцитов и их привлечения в очаг воспаления. Установлено, что клетки РМЖ человека экспрессируют рецептор хемокинов CXCR4, тогда как его специфический лиганд CXCL12 продуцируется клетками тканей (костный мозг, легкое и лимфатические узлы), в которых чаще всего выявляют метастазы РМЖ [49]. При этом в системе in vitro клетки РМЖ способны мигрировать по направлению к CXCL12, а антитела, нейтрализующие CXCR4, ингибируют образование метастазов в лимфатических узлах у экспериментальных животных. Клетки СЛУ продуцируют и другие (например, CCL21) специфические хемокины, привлекающие к ним ОК из первичной опухоли, что коррелирует с наличием метастазов в СЛУ [50]. Важные аспекты механизма, связанного с хемотаксической активностью хемокинов, были недавно раскрыты J.D. Shields и соавторами [51]. Показано, что секретируемые клетками перевиваемых опухолевых линий хемокины CCL19 и CCL21 способствуют привлечению ОК к эндотелию лимфатических сосудов.
Такая направленная миграция ОК обеспечивается за счет распознавания градиента концентрации хемокинов их рецептором CCR7, имеющимся на ОК.
Следовательно, клетки первичной опухоли (то есть «семена») способны участвовать в подготовке «почвы» для формирования будущих метастазов. Такой вывод подтверждается данными клинических исследований. Установлена связь между повышенной экспрессией хемокинового рецептора CCR7 на клетках опухолей толстой и прямой кишки, ме-тастазированием в лимфатические узлы и снижением у таких больных показателей выживаемости [52]. Взаимодействие ОК с ЭКЛС не ограничивается только секретируемыми факторами, как, например, VEGF, хемокины или другие цитокины. Молекулы адгезии, экспрессирующиеся на апикальной поверхности ЭКЛС, усиливают способность ОК мигрировать внутри сосуда по направлению к лимфатическим узлам [53]. Среди структур, непосредственно участвующих в таких межклеточных взаимодействиях, особый интерес вызывает рецептор маннозы, специфичный для ЭКЛС, а также CLEVER1, присутствующий как на ЭКЛС, так и на ЭККС. Механизмы узнавания ЭКЛС, способствующих миграции ОК, заслуживают дальнейшего исследования.
Состояние лимфатических узлов - наиболее важный критерий для определения категории риска у больных c I/II стадией солидных новообразований. При этом отсутствие метастазов в регионарных лимфатических узлах (включая СЛУ) рассматривается как особенно значимый фактор для отнесения
случая к низкой категории риска. Выявление микрометастазов в регионарных лимфатических узлах имеет неблагоприятное прогностическое значение в случаях РМЖ, меланомы, рака толстой и прямой кишки, пищевода, желудка, легкого, головы и шеи, органов женской половой сферы и некоторых других [54]. Другим ухудшающим прогноз фактором является инвазия лимфатических сосудов, особенно у больных с отсутствием метастазов в лимфатических узлах. Выявление инвазии лимфатических сосудов коррелирует с выживаемостью больных РМЖ, раком желудка, мочевого пузыря и предстательной железы. В последнее время плотность лимфатических сосудов также стали рассматривать в качестве фактора прогноза, на чем мы остановимся детальнее.
Поскольку при увеличении плотности ЛК повышается вероятность проникновения ОК в лимфатическую систему, следует ожидать, что существует корреляция между плотностью ЛК и частотой образования метастазов в лимфатических узлах.
Например, Q. Li и соавторы [30] выявили достоверную зависимость между плотностью ЛК в ткани опухоли (немелкоклеточный рак легкого) и стадией заболевания, проникновением ОК в лимфатические сосуды, а также образованием лимфогенных метастазов. Для больных немелкоклеточным раком легкого с метастазами в лимфатических узлах и с худшим показателем общей выживаемости, количество ЛК в зоне, которая окружает опухоль, значительно превышало таковое у больных без метастазов и с более благоприятным прогнозом [55]. Другие примеры выявления коррелятивной связи между повышенной плотностью ЛК и негативным прогнозом приведены в таблице 3.
Возможны 2 пути лимфогенной диссеминации ОК: либо через ЛК, предсуществующие в окружении опухолевого узла, либо через ЛК, которые формируются внутри него. Вопрос о функциональной значимости интратуморальных ЛК до сих пор остается дискуссионным. Предполагалось, что интратумо-ральные ЛК не могут участвовать в транспорте ОК с лимфотоком, поскольку они находятся в сдавленном состоянии из-за повышенного гидростатического давления внутри опухоли. Однако в ряде работ сообщается о выявлении четкой корреляционной зависимости между плотностью интратуморальных ЛК и наличием метастазов в лимфатических узлах и/или неблагоприятным прогнозом.
В частности, при опухолях головы и шеи, раке поджелудочной железы, папиллярном раке щитовидной железы, раке почки или меланоме образование ЛК происходит внутри опухолевого узла. Пролиферативная активность ЭКЛС, которая оценивалась с помощью моноклональных антител против ядерного антигена Ki67, а также наличие внутри ЛК опухолевых эмболов свидетельствует об участии новых ЛК в диссеминации ОК. Более того, у пациентов с плоскоклеточным раком головы и шеи плотность интратуморальных (но не перитуморальных) ЛК рассматривается в качестве независимого фактора неблагоприятного прогноза [56]. В то же время, согласно данным, полученным M.I. Koukourakis
и соавторами [24], интратуморальные ЛК отсутствуют при раке легкого. Хорошо развитые ЛК у таких больных, а также при раке эндометрия, выявляют лишь в зоне, которая окружает опухоль [24,25].
Вырабатывая лимфогенные факторы, ОК инициируют лимфоангиогенез не только внутри опухоли, но и в ее ближайшем окружении. Лимфогенные факторы также обладают сосудорасширяющими свойствами в отношении перитуморальных ЛК [38]. Все это свидетельствует о важности перитумораль-ного лимфоангиогенеза для распространения метастатических ОК. Такая ситуация характерна для больных РМЖ, меланомой, раком желудка, шейки матки и предстательной железы. Причем в последнем случае [59] была установлена корреляция между плотностью перитуморальных ЛК и уровнем 5-летней безрецидивной выживаемости. Напротив, ряд авторов [60,61] показали что активация пери-туморального лимфоангиогенеза является маркером более благоприятного течения заболевания и большей продолжительности жизни онкологических больных. Таким образом, проблема участия интра- и перитуморальных ЛК в метастазировании окончательно не решена и продолжает оставаться предметом интенсивных исследований.
Что касается становления локального иммунного ответа на антигены, оседающих в СЛУ метастатических ОК, то существенная роль в этих процессах отводится СЛУ. Известно несколько иммуносупрес-сирующих механизмов, реализующихся на разных этапах метастазирования. Один из них связан с поступлением в СЛУ ряда цитокинов, продуцируемых клетками первичного опухолевого узла. Важно, что перенесенные с током лимфы цитокины проявляют свои эффекты еще до колонизации лимфатических узлов ОК. В частности, показано, что у больных РМЖ или с меланомой содержание IL10 в СЛУ значительно превышает таковое в других регионарных лимфатических узлах у тех же больных [29,64]. При этом IL10 может ингибировать противоопухолевую активность моноцитов, в том числе за счет подавления продукции IL12. IL10 также способен блокировать секрецию TM-клетками таких цитокинов, как гамма-интерферон и TNF-альфа и предохранять ОК от лизиса, вызванного цитотоксическими Т-лимфоцитами. Кроме того, IL10 способствует увеличению локальной продукции других регуляторов иммунного ответа, например, TGFb и простагландина E2, которые участвуют в подавлении антигенпрезентирующей активности дендритных клеток. Другой механизм индуцированной иммуносупрессии в СЛУ связан с лимфоцитами, инфильтрирующими ткань опухоли. Оказалось, что CD8+ CD28 -Т-лимфоциты способны ингибировать пролиферацию и цитотоксическое действие цитоток CD8+CD28 -Т-лимфоцитов. Причем CD8+ CD28 -Т-лимфоциты выявляют только в СЛУ, которые содержат микрометастазы и не обнаруживают в интактных лимфатических узлах. Таким образом, иммуносупрессию, которая имеет место в СЛУ, следует рассматривать в качестве важного фактора, способствующего формированию метастазов в лимфатических узлах. ОК не только стимулируют
лимфоангионез в опухоли и дренирующих ее лимфатических узлах, но и обеспечивают в последних эффективное подавление локального иммунного ответа. При этом образование новых лимфатических сосудов и иммуносупрессия нередко происходят до выявления метастатических очагов в регионарных лимфатических узлах, что согласуется с гипотезой о формировании первичной опухоли в СЛУ так называемой предметастатической ниши.
Заключение
Анализ приведенных данных свидетельствует о том, что за последнее десятилетие достигнут определенный прогресс в раскрытии механизмов, которые регулируют образование новых лимфатических сосудов. В частности, были выявлены основные цитокины, которые непосредственно или опосредованно стимулируют миграцию, пролиферацию и выживание ЭКЛС (VEGFC/D, bFGF, IGF, HGF, PDGF), а также маркерные белки (LYVE1, подопланин, Proxl и другие), с помощью которых можно дифференцировать ЭКЛС и ЭККС. Важно, чтобы биомаркеры ЭКЛС определялись в комбинации, а ЛК учитывались как внутри, так и по периферии опухолевого узла. Были также получены данные об участии лимфоангиогенеза в диссеминации ОК в регионарные лимфатические узлы и отдаленные органы или ткани. Более того, была установлена корреляционная связь между высоким уровнем VEGFC/D или плотностью ЛК и выявлением метастазов, а также меньшей продолжительностью жизни больных с солидными опухолями разного генеза. Дальнейшее выяснение роли лимфоангиогенеза в метастазировании опухолей важно как для прогноза онкологического заболевания, так и для разработки новых лекарственных препаратов, обладающих антиметастатической активностью.
Список литературы
1. Achen M.G., Stacker S.A. Molecular control of lymphatic metastasis // Ann NY Acad Sci. - 2008. -Vol. 1131. - P. 225-234.
2. Banerji S., Ni J., Wang S-X. et al. LYVE1, a new homologue of the CD44 glycoprotein, is a lymph-specific receptor for hyaluronan // J Cell Biol. - 1999. - Vol. 144. - P. 789-801.
3. Cao Y. Direct role of PDGFBB in lymphangiogen-esis and lymphatic metastasis // Cell Cycle. - 2005. -№ 4. - Р. 228-230.
4. Caunt M., Mak J., Liang W.C. et al. Blocking neuropilin2 function inhibits tumor cell metastasis // Cancer Cell. - 2008. - №13. - Р. 331-342.
5. CD133 identify a population of CD34 endothelial precursor cells // Blood. - 2003. - Vol. 101. - P. 168-172.
6. Chen Z., Varney M.L., Backora M.W. el al. Down-regulation of vascular endothelial cell growth factorC expression using small interfering RNA vectors in mammary tumors inhibits tumor lymphangiogenesis and spontaneous metastasis and enhances survival // Cancer Res. - 2005. - Vol. 65. - P. 9004-9011.
7. Duff S.E., Li C., Jeziorska M. et al. Vascular en-dothelial growth factors C and D and lymphangiogen-
esis in gastrointestinal tract malignancy // Br J Cancer.
- 2003. - Vol. 89. - P. 426-430.
8. Enholm B., Karpanen T., Jeltsch M. et al. Adenoviral expression of vascular endothelial growth factorC induces lymphangiogenesis in the skin // Circ Res 2001.
- Vol. 88. - P. 623-629.
9. Evangelou E., Kyzas P.A., Trikalinos T.A. Comparison of the diagnostic accuracy of lymphatic endothelium markers: Bayesian approach // Mod Pathol.
- 2005. - Vol. 18. - P. 1490-1497.
10. Facchetti F., Monzani E., La Porta C.A..New perspectives in the treatment of melanoma: antiangiogenic and antilymphangiogenic strategies // Recent Patents Anticancer Drug Discov. - 2007. - №2. - P.73 -78.
11. Farnsworth R.H., Achen M.G., Stacker S.A. Lymphatic endothelium: an important interactive surface for malignant cells // Pulm Pharmacol Ther. - 2006.
- №19. - P. 51-60.
12. Filaci G., Fenoglio D., Fravega M. et al. CD8+T regulatory lymphocytes inhibiting T cell proliferative and cytotoxic functions infiltrate human cancers // J Immunol. - 2007. - Vol. 179. - P. 4323-4334.
13. Garmy-Susini B., Makale M., Fuster M., Varner J.A. Methods to study lymphatic vessel integrins // Methods Enzymol. - 2007. - Vol. 426. - P. 415-438.
14. Gunther K., Leier J., Henning G. et al. Prediction of lymph node metastasis in colorectal carcinoma by expression of chemokine receptor CCR7 // Int J Cancer 2005. - Vol. 116. - P. 726-733.
15. He Y., Rajantie I., Pajusola K. el al. Vascular endothelial cell growth factor receptor 3mediated activation of lymphatic endothelium is crucial for tumor cell entry and spread via lymphatic vessels // Cancer Res.
- 2005. - Vol. 65. - P. 4739-4746.
16. Heckman C.A., Holopainen T., Wirzenius M. et al. The tyrosine kinase inhibitor cediranib blocks ligand-induced vascular endothelial growth factor receptor3 activity and lymphangiogenesis // Cancer Res. - 2008.
- Vol. 68. - P. 4754-4762.
17. Huang X.Z., Wu J.F., Ferrando R. et al. Fatal bilateral chylothorax in mice lacking the integrin alpha9beta1 // Mol Cell Biol. - 2000. - №20. - P. 5208-5215.
18. Ji R.C., Kato S. Lymphatic network and lymphangiogenesis in the gastric wall // J Histochem Cy-tochem. - 2003. - Vol. 51. - P. 331-338.
19. Joukov V., Pajusola K., Kaipainen A. et al. A novel vascular endothelial growth factor, VEGFC, is a ligand for the Flt4 (VEGFR3) and KDR (VEGFR2) receptor tyrosine kinases // EMBO J. - 1996. - № 15. - P. 290-298.
20. Kaiserling E., Krober S., Geleff S. Lymphatic vessels in the colonic mucosa in ulcerative colitis // Lymphology. - 2003. - Vol. 36. - P. 52-61.
21. Karpanen T., Heckman C.A., Keskitalo S. et al. Functional interaction of VEGFC and VEGFD with neuropilin receptors // FASEB J. - 2006. - №20. -P. 1462-1472.
22. Kaushal V., Mukunyadzi P., Dennis R.A. et al. Stagespecific characterization of the vascular endothelial growth factor axis in prostate cancer: expression of lymphangiogenic markers is associated with advanced-stage disease // Clin Cancer Res. - 2005. - №11. -P. 584-593.
23. Kimura H., Kato H., Tanaka N. et al. Preoperative serum vascular endothelial growth factorC (VEGFC) levels predict recurrence in patients with es-ophageal cancer // Anticancer Res. - 2008. - Vol. 28.
- P. 165-169.
24. Koukourakis M.I., Giatromanolaki A., Sivridis E. et al. LYVE1 immunohistochemical assessment of lymphangiogenesis in endometrial and lung cancer // J Clin Pathol. - 2005. - Vol. 58. - P. 202-206.
25. Krishnan J., Kirkin V., Steffen A. et al. Differential in vivo and in vitro expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)C and VEGFD in tumors and its relationship to lymphatic metastasis in immunocompetent rats // Cancer Res. - 2003 - Vol. 63. - P. 713-722.
26. Krzystek-Korpacka M., Matusiewicz M., Dia-kowska D. et al. Upregulation of VEGFC secreted by cancer cells and not VEGFA correlates with clinical evaluation of lymph node metastasis in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) // Cancer Lett. - 2007.
- Vol. 249. - P. 171-177.
27. Kuroda K., Horiguchi A., Asano T. et al. Prediction of lymphatic invasion by peritumoral lymphatic vessel density in prostate biopsy cores // Prostate. -2008. - Vol. 68. - P. 1057-1063.
28. Kyzas P.A., Geleff S., Batistatou A. et al. Evidence for lymphangiogenesis and its prognostic implications in head and neck squamous cell carcinoma // J Pathol. - 2005. - Vol. 206. - P. 170-177.
29. Lee J.H. et al. Quantitative analysis of melanoma-induced cytokinemediated immunosuppression in melanoma sentinel nodes // Clin Cancer Res. - 2005.
- №11. - P. 107-112.
30. Li Q., Dong X., Gu W. et al. Clinical significance of coexpression of VEGFC and VEGFR3 in nonsmall cell lung cancer. Chin Med J (Engl). - 2003. - Vol. 116.
- P. 727-730.
31. Loges S., Clausen H., Reichelt U. et al. Determination of microvessel density by quantitative realtime PCR in esophageal cancer: correlation with histologic methods, angiogenic growth factor expression, and lymph node metastasis // Clin Cancer Res. - 2007.
- Vol. 13. - P. 76-80.
32. Makinen T., Jussila L., Veikkola T. et al. Inhibition of lymphangiogenesis with resulting lymphedema in transgenic mice expressing soluble VEGF receptor3 // Nat Med. - 2001. - № 7. - P. 199-205.
33. Makinen T., Veikkola T., Mustjoki S. et al. Isolated lymphatic endothelial cells transduce growth, survival and migratory signals via the VEGFC/D receptor VEGFR3 // EMBO J. - 2001. - №20. - P. 4762-4773.
34. Maruyama K., Ii M., Cursiefen C. et al. Inflammationinduced lymphangiogenesis in the cornea arises from CD11bpositive macrophages // J Clin Invest.
- 2005. - Vol. 115. - P. 2363-2372.
35. Muller A., Homey B., Soto H. et al. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis // Nature. - 2001. - Vol. 410. - P. 50-56.
36. Nagy J.A., Vasile E., Feng D. et al. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor induces lymphangiogenesis as well as angiogenesis // J Exp Med. - 2002. - Vol. 196. - P. 1497-1506.
37. Nakashima T., Kondoh S., Kitoh H. et al. Vascular endothelial growth factorC expression in human gallbladder cancer and its relationship to lymph node metastasis // Int J Mol Med. - 2003. - №11. - P. 33-39.
38. Nathanson S.D. Insights into the mechanisms of lymph node metastasis // Cancer. - 2003. - Vol. 98.
- P. 413-423.
39. Pepper M.S., Tille J.C., Nisato R., Skobe M. Lym-phangiogenesis and tumor metastasis // Cell Tissue Res. - 2003. - Vol. 314. - P. 167-177.
40. Renyi-Vamos F., Tovari J., Fillinger J. et al. Lym-phangiogenesis correlates with lymph node metastasis, prognosis, and angiogenic phenotype in human nonsmall cell lung cancer // Clin Cancer Res. - 2005.
- №11. - P. 7344-7353.
41. Rissanen T.T., Markkanen J.E., Gruchala M. et al. VEGFD is the strongest angiogenic and lymphang-iogenic effector among VEGFs delivered into skeletal muscle via adenoviruses // Circ Res. - 2003. - Vol. 92.
- P. 1098-1106.
42. Salameh A., Galvagni F., Bardelli M. et al. Direct recruitment of CRK and GRB2 to VEGFR3 induces proliferation, migration, and survival of endothelial cells through the activation of ERK, AKT, and JNK pathways // Blood. - 2005. - Vol. 106. - P. 3423-3431.
43. Scheele J., Stangi R., Altendorf-Hofmann A. Hepatic metastases from colorectal carcinoma: impact of surgical resection on the natural history // Br J Surg.
- 1990. - Vol. 77. - P. 1241-1246.
44. Schoppmann S.F., Birner P., Stockl J. et al. Tumorassociated macrophages express lymphatic en-dothelial growth factors and are related to peritumoral lymphangiogenesis // Am J Pathol. - 2002. - Vol. 161.
- P. 947-56.
45. Shields J.D., Fleury M.E., Yong C. et al. Autolo-gous chemotaxis as a mechanism of tumor cell homing to lymphatics via interstitial flow and autocrine CCR7 signaling // Cancer Cell. - 2007. - №11. - P. 526-538.
46. Skobe M., Hawighorst T., Jackson D.G. et al. Induction of tumor lymphangiogenesis by VEGFC promotes breast cancer metastasis // Nat Med. - 2001.
- №7. - Vol. 192-198.
47. Stacker S.A., Hughes R.A., Williams R.A., Achen M.G. Current strategies for modulating lymphangio-genesis signalling pathways in human disease // Curr Med Chem. - 2006. - №13. - P. 783-792.
48. Stacker SA, Caesar C, Baldwin ME, et al. Vascular endothelial growth factorD promotes the metastatic spread of cancer via the lymphatics // Nature Med.
- 2001. - № 7. - P. 186-191.
49. Stefansson I.M., Salvesen H.B., Akslen L.A. Vascular proliferation is important for clinical progress of endometrial cancer // Cancer Res. - 2006. - Vol. 66. - P. 3303-3309.
50. Straume O., Jackson D.G., Akslen L.A. Independent prognostic impact of lymphatic vessel density and presence of lowgrade lymphangiogenesis in cutaneous melanoma // Clin Cancer. - 2003. - № 9.
- P. 250-256.
51. Taipale J., Makinen T., Arighi E. et al. Vascular endothelial growth factor receptor3 // Curr Top Micro-biol Immunol. - 1999. - Vol. 237. - P. 85-96.
52. Takeuchi H., Fujimoto A., Tanaka M. et al. CCL21 chemokine regulates chemokine receptor CCR7 bearing malignant melanoma cells // Clin Cancer Res. - 2004.
- №10. - Р. 2351-2358.
53. Takeuchi H., Kitajima M., Kitagawa Y. Sentinel lymph node as a target of molecular diagnosis of lymphatic micrometastasis and local immunoresponse to malignant cells // Cancer Sci. - 2008. - Vol. 99. - P. 441-450.
54. Tamura M., Oda M., Tsunezuka Y. et al. Chest CT and serum vascular endothelial growth factorC level to diagnose lymph node metastasis in patients with primary nonsmall cell lung cancer // Chest. - 2004. - Vol. 126. - P. 342-346.
55. The Lymphatic Continuum Revisited. Rockson SG: Ed. Ann N Y Acad Sci, 2008. - Vol. 1131. - 243 p.
56. Van den Eynden G.G., Van der Auwera I., Van Laere S.J. et al. Induction oflymphangiogenesis in and around axillary lymph node metastases of patients with breast cancer // Br J Cancer. - 2006. - Vol. 95. - P. 1362-1366.
57. Van der Auwera I., Cao Y., Tille J.C. et al. First international consensus on the methodology of lymphangiogenesis quantification in solid human tumours // Br J Cancer. - 2006. - Vol. 95. - P. 1611-1125.
58. Vihinen P.P., Hilli J., Vuoristo M.S. et al. Serum VEGFC is associated with metastatic site in patients with malignant melanoma // Acta Oncol. - 2007. - Vol. 46.
- P. 678-684.
59. Vlahakis N.E., Young B.A., Atakilit A., Sheppard D. The lymphangiogenic vascular endothelial growth factors VEGFC and D are ligands for the integrin alpha9beta1 // J Biol Chem. - 2005. - Vol. 280. - P. 4544-4552.
60. Wang T.B., Deng M.H., Qiu W.S., Dong W.G. et al. Association of serum vascular endothelial growth factorC and lymphatic vessel density with lymph node metastasis and prognosis of patients with gastric cancer // World J Gastroenterol. - 2007. - Vol. 28.
- P. 1794-1798.
61. Whitehurst B., Flister M.J., Bagaitkar J. et al. AntiVEGFA therapy reduces lymphatic vessel density and expression of VEGFR3 in an orthotopic breast tumor model // Int J Cancer. - 2007. - Vol. 121. - P. 2181-2191.
62. Wong S.Y., Haack H., Crowley D. et al. Tumor-secreted vascular endothelial growth factorC is necessary for prostate cancer lymphangiogenesis, but lymphang-iogenesis is unnecessary for lymph node metastasis // Cancer Res. - 2005. - Vol. 65. - Р. 9789-9798.
63. Woo S.U., Bae J.W., Yang J.H. et al. Overexpression of interleukin10 in sentinel lymph node with breast cancer // Ann Surg Oncol. - 2007. - №14. - Р. 3268-3273.
64. Yu X.M., Lo C.Y., Lam A.K. et al. Serum vascular endothelial growth factor C correlates with lymph node metastases and highrisk tumor profiles in papillary thyroid carcinoma // Ann Surg. - 2008. - Vol. 247. -P. 483-489.
Перепечатано с разрешения автора Источник: Онкология. - 2009. - Т. 11.
- №2. - С. 93-102.
