CC BY
53
Проблемы здоровья и экологии
116
чается cagA-генотип при сравнении контрольной группы и группы пациентов с ЯБДК (р = 0,007), что показывает значимость данного гена в развитии дуоденальных язв в Республике Беларусь.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Mosaicism in vacuolating cytotoxin alleles of Helicobacter pylori. Association of specific vacA types with cytotoxin production and peptic ulceration/ J. Atherton [et al.] // J Biol Chem. — 1995. — № 28. — P. 17771-17777.
2. The N-terminal 34 kDa fragment of Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin targets mitochondria and induces cytochrome С release / A. Galmiche [et al.] // EMBO J. — 2000. — № 19. — Р. 6361-6370.
3. Covacci, A. Tyrosine-phosphorylated bacterial proteins: Trojan horses for the host cell / A.Covacci, R. Rappuoli // J. Ex. Med. — 2002. — № 191. — Р. 587-592/
4. Пиманов, С. И. Эзофагит, гастрит и язвенная болезнь: рук-во для врачей / С. И. Пиманов. — Минск: Медицинская книга, 2000. — 378 с.
5. Современные представления об этиологии и патогенезе язвенной болезни / П. Я. Григорьев [и др.] // Вестник АМН СССР. — 1990. — № 3. — С. 60-64.
6. Helicobacter pylori adhesin binding fucosylated histo-blood group antigens revealed by retagging / D. Ilver [et al.] // Science.-1998. — № 279. — Р. 373-377.
7. Expression of Lewis b blood group antigen in Helicobacter pylori does not interfere with bacterial adhesion property / Peng-Yuan Zheng [et al.] // World J Gastroenterol. — 2003. — Vol. 9, № 1. — P.122-124.
8. Клиническое значение факторов патогенности Helicobacter pylori / Е. В. Макаренко [и др.] // Рос. журн. гастроэнтерол., ге-патол., колопроктол. — 2005. — Т. 15, № 3. — С. 22-27.
9. Analysis of iceA1 transcription in Helicobacter pylori / J. P. Donahue [et al.] // Helicobacter. — 2000. — Vol. 15, № 1. —P. 1-12.
10. DupA as a risk determinant in Helicobacter pylori infection / M. Douraghi [et al.] // J. Med. Microbiol. — 2008. — Vol. 57. — P. 554-556.
11. Tummuru, M. Cloning and expression of a high molecular mass major antigen of Helicobacter pylori: Evidence of linkage to cy-totoxin production / M.Tummuru, T. Cover, M. Blaser // Infect Im-mun. — 1993. — Vol. 61. — P. 1799-1809.
12. Argent, R. H. Simple method for determination of the number of Helicobacter pylori CagA variable-region EPIYA tyrosine phosphorylation motifs by PCR / R. H.Argent, Y. Zhang, J. C. Atherton //
J. Clin. Microbiol. — 2005. — Vol. 43. — P. 791-795.
13. Adherence to gastric epithelial cells induces expression of a Helicobacter pylori gene, iceA, that is associated with clinical outcome / R. Peek [et al.] // Proc. Assoc Am Physicians. — 1998.—Vol. 110 (6).—P. 531-544.
14. Correlation of the Helicobacter pylori Virulence and Adherence Factors vacA, cagA and babA with Ulcer Disease in Four Different European Countries / M. Gerhard [et al.] // Gut. — 2001. — № 1.
15. Duodenal Ulcer Promouting Gene of Helicobacter pylori / H. Lu [et al.]// Gastroenterology. — 2005. — Vol. 128. — P. 833-848.
Поступила 29.03.2011
УДК 577.3+57.052
КОРРЕЛЯЦИЯ СТРУКТУРЫ И АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ МОЛЕКУЛ
МЕЛАТОНИНА И ТРИПТОФАНА
В. Т. Чещевик1, С. Н. Соколовская1, Е. А. Лапшина2, С. Н. Ильина3
1Институт фармакологии и биохимии НАН Беларуси, г. Минск 2Гродненский государственный аграрный университет 3Гродненский государственный медицинский университет
Изучали радикал-скэвенджерные свойства мелатонина и триптофана в системах, генерирующих алкоксиль-ные и пероксильные радикалы (эритроциты человека, обработанные окислителем терт-бутилгидропероксид (тБГП)). Структурные и электронные свойства мелатонина, триптофана и окисленных производных данных молекул были исследованы теоретически с использованием АМ1 полуэмпирического метода и ab initio метода. Высокая радикал-скэвенджерная способность мелатонина может быть обусловлена высокими значениями площади поверхности и дипольного момента молекулы, который отражает плотность заряда молекулы. С термодинамической точки зрения Ш-ацетил- N2 -формил-5-метоксикинурамин (AФMK) является самым стабильным продуктом окисления мелатонина. Сравнительное исследование радикал-скэвенджерных, структурных и электронных свойства молекул мелатонина, его предшественника — триптофана продемонстрировало, что мелатонин в отличие от триптофана является потенциальным липидным антиоксидантом и эффективным скэвенджером алкоксильных и пероксильных радикалов.
Ключевые слова: структура, электронные свойства, радикал-скэвенжер, мелатонин, триптофан.
STRUCTURE AND ANTIOXIDANT WCTIVITY ASSOCIWTIONS FOR MELATONIN MOLECULE AND ITS DERIVATIVTS
V. T. Cheshchevik1, S. N. Sakolouskaya1, E. A. Lapshina2, S. N. Iljina3
1Instutute for Pharmacology and Biochemistry NAS Belarus, Minsk 2Grodno State Agricultural University 3Grodno State Medical University
Structural and electronic properties of melatonin, tryptophan, and oxidative products of these molecules were determined theoretically by performing semi-empirical and ab initio calculations. The radical scavenging effects of melatonin and tryptophan were studied using the alkoxyl and peroxyl radical- generating systems. We have shown that melatonin, rather than tryptophan, is a potent lipid antioxidant and an effective scavenger of alkoxyl- and per-oxyl radicals.
Key word: structure, electronic properties, radical-scavenger, melatonin, tryptophan.
Проблемы здоровья и экологии
117
Введение
В ряде исследований продемонстрировано, что мелатонин является эффективным антиоксидантом и скэвенджером свободных радикалов [1]. Показано, что мелатонин связывает гидроксильные радикалы, токсические перок-сильные радикалы, но, с другой стороны, не взаимодействует непосредственно с суперок-сиданион радикалом [2]. Ранее мы продемонстрировали, что мелатонин является эффективным скэвенджером гипохлорной кислоты [3]. С целью выяснения корреляций структуры молекулы мелатонина, его физико-химических свойств и биохимической активности нами было проведено сравнительное исследование радикал-скэвенджерных, структурных и электронных свойства молекул мелатонина, его предшественника — триптофана и их производных, определены возможные молекулярные центры связывания радикалов. Радикал-скэвенджерные свойства мелатонина и триптофана изучали в системах, генерирующих алкоксильные и пероксиль-ные радикалы (эритроциты человека, обработанные окислителем тБГП). Структурные и электронные свойства мелатонина, триптофана и окисленных производных данных молекул были исследованы теоретически с использованием полуэмпирических (АМ1) методов и ab initio расчетов.
Материалы и методы исследований
В работе использовали бутилированный гидрокситолуол (БГТ), 2-тиобарбитуровую кислоту (ТБК), трихлоруксусную кислоту (ТХУ), додецил сульфат натрия, этилендиаминтетраацетат (ЭДТА), терт-бутилгидропероксид, 2, 2'- азо-бис (2-амидинпропан) дигидрохлорид (AAPH) (Sigma — Aldrich Chemie GmbH, Германия). Флуоресцентный зонд 1-(-триметиламмоний фе-нил)-6-фенил-1,3,5 -гексатриен-р-толуолсульфонат (ТМА — DPН) получен от Molecular probes, Eugene, OR, USA. Все остальные реактивы производства «Реахим» (Россия). Все растворы готовили на воде, очищенной с помощью Milli-Q системы (Millipore), имеющей проводимость 18,4 MQ см-2.
Эритроциты. Кровь здоровых доноров (с добавлением 3 % раствора цитрата натрия) получали на Станции переливания крови г. Гродно. После удаления плазмы и слоя лейкоцитов эритроциты промывали 3 раза холодным (4 °С) изотоническим раствором NaCl, содержащим фосфатный буфер (ФБ: 0,145 M NaCl, 1,9 мМ NaH2PO4 и 8,1 мM N2HPO4, pH = 7,4). Эритроциты использовали немедленно после получения. Мембраны эритроцитов получали по методу Доджа и соавт. [4, 5]. Гемолизат готовили лизисом 0,1 мл суспензии эритроцитов (5 % ге-матокрит) в 1 мл H2O.
Перекисное окисление липидов определяли как количество ТБК-реактивных соединений (ТБКРС) в кислоторастворимой фракции суспензии эритроцитов по методу Стокса и Дормэнди [6].
Окислительный стресс индуцировали, инкубируя эритроциты человека (гематокрит 10 %) в ФБ c различными концентрациями тБГП при 21 °С в течение часа.
Результаты исследования и их обсуждение
На рисунке 1 показана концентрационная зависимость ингибирования мелатонином процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в суспензии эритроцитов, обработанной тБГП. Ингибирование, вероятно, осуществляется прямым скэвенджированием алкоксильных и пероксиль-ных радикалов, образуемых при разложении перекиси в эритроцитах. Другая возможность заключается во взаимодействии липидных перок-сильных радикалов с мелатонином, что приводит к ингибированию процессов перекисного окисления мембранных липидов. Мы сравнили эффективность взаимодействия мелатонина, триптофана и известного липидного антиоксиданта БГТ со свободными радикалами и продемонстрировали ингибирование образования ТБКРС в суспензии эритроцитов (рисунок 1) или тушение люминол-зависимой хемилюминесценции данными эффекторами в системе генерации свободных радикалов Fe24" — тБГП (рисунок 2).
Рисунок 1 — Протекторный эффект мелатонина (1, 2), триптофана (3) или БГТ (4) при тБГП-индуцированном перекисном окислении мембранных липидов в эритроцитах (1, 3, 4) и в гемолизатах (2) того же количества клеток. Суспензию клеток (5% гематокрит) или гемолизат в ФБ (рН 7,4) обрабатывали 1,25 мМ тБГП при 37 °С в течение 30 мин. Предварительно клетки или гемолизат преинкубировали с различными концентрациями мелатонина, триптофана и БГТ при 37 °С в течение 20 мин
Проблемы здоровья и экологии
118
Рисунок 2 — Эффект мелатонина (1), триптофана (2) или БГТ (3) на люминол-зависимую хемилюминесценцию, генерируемую в системе Fe2+ (1 мМ) + тБГТ (20 мМ) в ФБ (рН 7,4) при 37 °С
Концентрации мелатонина и липофильного антиоксиданта БГТ, вызывающие 50 % ингибирование окислительного процесса (IC50), составили 450 ± 55 и 180 ± 15 мкМ соответственно (рисунок 1). В то же время мелатонин не оказывал эффекта на внутриклеточные окислительные процессы: окисление внутриклеточного глутатиона и образование метНв. Как видно на рисунке 1, протекторный эффект мелатонина, наблюдаемый в гемолизатах эритроцитов после обработки тБГТ, был выше, чем в суспензии эритроцитов. На рисунке 2 показаны эффекты мелатонина, триптофана и БГТ на общую интенсивность хемилюминесценции, генерируемой в системе Fe2+ + тБГТ эритроцитах. Значения IC50 ингибирования генерации радикалов в системе «эритроциты/тБГТ» составили 490 ± 65 и 95 ± 11 мкМ для мелатонина и БГТ соответственно. Интересно, что мелатонин и в меньшей степени — триптофан повышал интенсивность люминол-зависимой хемилюминесценции, генерируемой в системе Fe2+ + тБГТ (рисунок 2).
Процессы тушения люминол-зависимой хемилюминесценции, генерируемой свободными радикалами, являются сложными, поэтому графики Штерна-Фольмера тушения хемилюминесценции не являются линейными. Используя графики Штерна-Фольмера для ингибирования образования TБКРС в эритроцитах, мы рассчитали кажущуюся константу Штерна-Фольмера, характеризующую взаимодействие мелатонина со свободными радикалами. Кажущаяся константа Штерна-Фольмера для мелатонина, которую определили из линейной части графика, составила (0,23 ± 0,05) * 104 М-1. Значения кажущихся констант Штерна-Фольмера для ингибирования перекисного окисления липидов в эритроцитах ВНТ и триптофаном, определенные из начальных линейных участков графиков Штерна-Фольмера, составили (0,85 ± 0,10) * 104 М-1 и (0,02 ± 0,005) * 104 М-1 соответственно.
Мелатонин ингибировал тБГТ-индуцирован-ную люминол-зависимую хемилюминесценцию в
эритроцитах, что подтверждает предположение о непосредственном взаимодействии алкоксильных и пероксильных радикалов с мелатонином (рисунок 2). Люминол-зависимая люминесценция, как известно, отражает внутри- и внеклеточный уровень генерируемых свободных радикалов. Мы предполагаем, что мелатонин и в меньшей степени — триптофан увеличивали хемилюминесценцию в системе Fe2+ + тБГТ, восстанавливая Fe3+ в Fe2+ (рисунок 2). Подобным образом найдено, что серотонин увеличивал образование гидроксильных радикалов в системе Fe3+-Э1ДГА, аскорбат, перекись водорода вследствие прямого восстановления Fe3+-Э1ДГА в Fe2+-Э1ДгА. Термическое разложение азосоединения ААРН приводит к образованию свободных радикалов, локализованных на атоме углерода, которые быстро реагируют с кислородом, давая пероксильные радикалы. Мы показали эффективное взаимодействие мелатонина с пероксильными радикалами, используя ААРН-люминол систему (данные не представлены). Далее мы определили кажущиеся константы Штерна-Фольмера для ингибирования эффекторами процессов генерации радикалов в данной системе. Кажущиеся константы Штерна-Фольмера для мелатонина, триптофана и ВНТ, определенные из линейного участка графиков, составили (0,42 ± 0,05) * 104 М-1, (0,04 ± 0,01) * 104 М-1 и (0,53 ± 0,08) * 104 М-1 соответственно. Рассчитанные значения констант Штерна-Фольмера продемонстрировали способность мелатонина непосредственно взаимодействовать со свободными радикалами. Ради-кал-скэвенджерные свойства мелатонина намного превосходят таковые для триптофана и близки к радикал-скэвенджерным свойствам БГТ, известного антиоксиданта.
Описано несколько механизмов взаимодействия радикалов с мелатонином. Предполагается, например, что мелатонин при взаимодействии с гидроксильным радикалом, отдает электрон на гидроксильный радикал с образованием катион-радикала мелатонина [7]. При
Проблемы здоровья и экологии
119
взаимодействии катион-радикала с суперокси-данионом образуется Ш-ацетил-К2-формил-5-метоксикинурамин (АФМК) [7]. С другой стороны, с термодинамической точки зрения на основе математических расчетов Турьянский с соавторами предположил, что мелатонин может напрямую взаимодействовать с гидроксильным радикалом с образованием 2-гидроксиизомера мелатонина [8]. Стасика и соавт. предположили, что С2 углеродный атом индольного кольца мелатонина является самым вероятным центром радикальной атаки, а С3 атом — наименее возможный центр взаимодействия с радикалами [9].
В таблице 1 представлены некоторые свойства молекул мелатонина, триптофана и их производных, значения энергий и дипольных моментов. Как видно из полученных в таблице 1 данных, молекула мелатонина имеет относительно большой дипольный момент (4,76 Д) по сравнению с молекулой триптофана (3,32 Д). Значение энергии связывания для молекулы
мелатонина, полученное по методу АМ1, составило -3433,27 ккал/моль, что выше соответствующего значения -2891,53 ккал/моль, полученного для молекулы триптофана. Теплота образования молекулы мелатонина (-32,94 ккал/моль) ниже теплоты образования молекулы триптофана (-41,4 ккал/моль). Молекула мелатонина имеет значительно большую площадь поверхности (412,75 А2) по сравнению с молекулой триптофана (289,73 А2). В молекулах цикло 3-гидроксимелатонина и цикло 3-гидрокситрип-тофана третье пентагональное кольцо, образованное в результате окисления молекул мелатонина и триптофана, соответственно, выдвинуто из плоскости индольного кольца. Для молекулы цикло 3-гидроксимелатонина полуэмпирический метод (АМ1 метод) дает значение угла между плоскостями индольного и третьего пентагонального колец, равное 119°. Соответствующий угол в молекуле цикло 3-гидрокситриптофана составил 122°.
Таблица 1 — Расчеты молекулярных свойств, значений энергии и дипольных моментов молекул мелатонина, триптофана и продуктов окисления этих молекул
Показатель Мелатонин АФМК Цикло 3-гидрокси мелатонин Триптофан Формил кинуренин Цикло 3-гидрокси триптофан
Число электронов 124 140 132 108 124 116
Мультиплетность Синглет Синглет Синглет Синглет Синглет Синглет
Группа мол. симметрии C1 C1 C1 C1 C1 C1
Площадь поверхн., А2 412,75 478,33 368,89 289,73 348,32 290,92
Объем, А3 741,91 802,74 730,16 618,37 673,39 628,82
Энерг. гидра-та, ккал/моль -6,90 2,54 -7,32 -14,21 -3,55 -14,75
АМ1
Общая энергия, кал/моль -67772,5 -82565,2 -75164,8 -60607,3 -75395,13 -68006,99
Энергия связыв., ккал/моль -3433,27 -3646,81 -3535,98 -2891,53 -3100,19 -3001,63
Теплота обр., ккал/моль -32,94 -127,37 -76,11 -41,4 -130,9 -91,94
Ab initio
Общая энергия, ккал/моль -471104,9 -563733,5 -517448,2 -422666.6 -515310,5 -469032,3
Кин. энергия, ккал/моль 466534,0 558457,9 512436,3 418791.7 510644,2 464707,6
НОМО, эВ -5,585 -6,441 -5,494 -6,110 -6,563 -6,186
LUMO, эВ 6,581 6,122 7,036 6,266 5,487 7,155
А Е, эВ 12,166 12,563 12,530 12,376 12,050 13,341
Самый низкий энерг. ур., эВ -550,7 -552,6 -552,0 -552,205 -552,756 -552,692
Самый высокий энерг. ур., эВ 31,86 30,43 31,07 31,42 30,543 31,248
Дипольный момент, Д 4,76 4,603 4,349 3,320 4,766 2,244
В работах Эркоса и соавторов теоретически исследованы структурные и электронные свойства мелатонина и его шести изомеров [10]. Наши расчеты молекулярных свойств молекул мелатонина и цикло-3-гидроксимелатонина согласуются с данными Эркоса и соавторов [10]. Мелатонин является высоко полярной молекулой, следовательно, он легко взаимодействует с молекулами своего окружения. Эркос и соавторы предположили, что отрицательный избыточный заряд на индольном кольце молекулы
мелатонина способствует взаимодействию с радикалами [10]. Согласно нашим расчетам по методу ab initio, суммарный отрицательный заряд на гексагональном и пентагональном кольцах триптофана выше соответствующих зарядов в молекуле мелатонина (таблица 1). Мы предполагаем, что плотность заряда, мерой которой является дипольный момент молекулы, а не избыточный заряд, обуславливает сильные радикал-скэвенджерные свойства молекулы мелатонина. Из расчетов по методу
Проблемы здоровья и экологии
120
АМ1 следует, что молекула АФМК имеет самую высокую энергию связывания и теплоту образования по сравнению с молекулой цикло-3-гидроксимелатонина (таблица 1) или по сравнению с другими продуктами окисления молекулы, которые были рассчитаны Эркосом и соавторами [10], или по сравнению с молекулой триптофана (таблица 1). Из наших данных следует, что АФМК является самым стабильным продуктом среди всех рассмотренных продуктов окисления мелатонина (таблица 1). В то же время следует отметить, что разница между теплотой образования молекулы мелатонина и продуктов его окисления близка к разнице между теплотой образования молекулы триптофана и продуктов его окисления (таблица 1). Следовательно, с термодинамической точки зрения окисление мелатонина не является предпочтительным по сравнению с окислением триптофана. Избыточный положительный заряд на С2 атоме (+0,042 е) пентаго-нального кольца молекулы мелатонина делает этот атом возможной точкой нуклеофильной атаки или атомом, от которого может отщепиться водород. Однако не только избыток заряда на атоме, но и термодинамическая стабильность образовавшегося интермедиата играют важную роль в образовании соответствующего продукта реакции.
Заключение
Таким образом, мы показали, что мелатонин в отличие от триптофана является потенциальным липидным антиоксидантом и эффективным скэвенджером алкоксильных и пе-роксильных радикалов. Мы предположили, что
высокая радикал-скэвенджерная способность мелатонина может быть обусловлена высокими значениями площади поверхности и дипольного момента молекулы, который отражает плотность заряда молекулы. С термодинамической точки зрения, согласно нашим расчетам N1-ацетил-К2-формил-5-метоксикинурамин (АФМК) является самым стабильным продуктом окисления мелатонина.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Pharmacological actions of melatonin in oxygen radical pathophysiology / R. J. Reiter [et al.] // Life Sci. — 1997. — Vol. 60(25). — P. 2255-2271.
2. Melatonin: a potent, endogenous hydroxyl radical scavenger/ D. X. Tan [et al.] // Endocrine J. — 1993. — Vol. 1. — P. 57-60.
3. Hypochlorous acid-induced oxidative stress in Chinese hamster B14 cells: viability, DNA and protein damage and the protective action of melatonin/ I. B. Zavodnik [et al.] // Mut Res. — 2004. — Vol. 559. — P. 39^8.
4. The preparation and chemical characteristics of hemoglobin-free ghosts of human erythrocytes/ J. T. Dodge [et al.] // Arch. Bio-chem. Biophys. — 1963. — Vol. 100. — P. 119-130.
5. Comparison of human red cell lysis by hypochlorous and hypo-bromous acids: insights into the mechanism of lysis / M. C. M. Vissers [et al.] // Biochem. J. — 1998. — Vol. 330. — P. 131-138.
6. Stocks, J. The autoxidation of human red cell lipids induced by hydrogen peroxide/ J. Stocks, T. Dormandy // Brit. J. Haematol. — 1971. — Vol. 20. — P. 95-111.
7. The significance of the metabolism of the neurohormone melatonin: antioxidative protection and formation of bioactive substances / R. Hardeland [et al.] // Neurosci. Biobehav. Rev. — 1993. — Vol. 17. — P. 347-357.
8. Turjanski A.G., Reactions of melatonin and related indoles with free radicals: a computational study / A. G. Turjanski [et al.] // J. Med. Chem. — 1998. — Vol. 41. — P. 3684-3689.
9. Stasica, P. Hydroxyl radical reaction with melatonin molecule: a computational study / P. Stasica, P. Paneth, J. Rosiak // J Pineal Res. — 2000. — Vol. 29. — P. 125-127.
10. Erkog, S. Theoretical investigation of melatonin and its hydroxy isomers / S. Erko9, F. Erko9, N. Keskin // J. Mol Struct. — 2002. — Vol. 587. — P. 73-79.
Поступила 01.03.2011
ОБЩЕСТВЕННОЕ ЗДОРОВЬЕ И ЗДРАВООХРАНЕНИЕ, ГИГИЕНА
УДК [616.33-006.6+616-006.4]-06(476.2)(476.5)
СРАВНЕНИЕ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ ПЕРВИЧНО-МНОЖЕСТВЕННЫМИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ОПУХОЛЯМИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА, ПРОЖИВАЮЩИХ В РЕГИОНАХ С РАЗЛИЧНОЙ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ НАГРУЗКОЙ
А. Ю. Крылов1, В. Б. Масякин2, А. П. Богданович2, С. Н. Никонович2, Э. А. Надыров2
белорусская медицинская академия последипломного образования, г. Минск Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», г. Гомель
Проведен сравнительный анализ заболеваемости первично-множественными злокачественными образованиями у 749 пациентов с раком желудка из Витебской и 712 из Гомельской областей Республики Беларусь, выявленных в 1991-2007 гг. Установлено, что динамика заболеваемости ПМЗО у больных раком желудка, проживающих в регионах с различной экологической нагрузкой, в целом была примерно одинакова и характеризовалась монотонным ростом. При этом наблюдающиеся в отдельные годы различия в показателях заболеваемости наиболее вероятно отражали возрастно-половые особенности населения в изучаемых регионах.
Ключевые слова: первично-множественные злокачественные опухоли, рак желудка, заболеваемость, Витебская и Гомельская области.
