CC BY
39
УДК 615.916:616.36:547.458
Т.Д. Четверикова, Л.С. Васильева, Л.О. Гуцол, Л.А. Украинская
КОРРЕКЦИЯ АРАБИНОГАЛАКТАНОМ НАРУШЕНИЙ СТРУКТУРЫ ПЕЧЕНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АНЕМИИ
Иркутский государственный медицинский университет (Иркутск)
При ежедневном пятикратном введении арабиногалактана в начальный период развития фенил-гидразиновой анемии активируются, обменные и. пролиферативные процессы, в печени, что приводит. к более полному восстановлению структуры, ткани печени после трех недель интоксикации. Ключевые слова: гепатоциты, фенилгидразин, арабиногалактан
CORRECTION OF LIVER STRUCTURAL FAILURE BY ARABINOGALACTAN AT EXPERIMENTAL HEMOLYTIC ANEMIA
T.D. Chetverikova, L.S. Vasilieva, L.O. Gutsol, L.A. Ukrainskaja
Irkutsk State Medical University, Irkutsk
Use of arabinogalactan 5 times a day every day at shakedown period, of phenylhydrazine anemia activates exchange and proliferative processes in liver, what leads to more complete reconstruction of liver tissue structure after 3 weeks of intoxication.
Key words: hepatocytes, phenylhydrazine, arabinogalactan
В огромном многообразии вредных химических веществ гидразин и его производные занимают особое место. Благодаря высокой реакционной способности и ряду специфических свойств, они нашли широкое применение в производстве фармакологических средств, пестицидов, красителей и ракетного топлива [2]. Производное гидразина — фенилгидразин — является гемолитическим ядом, вызывающим повышение проницаемости мембран, набухание эритроцитов и их внутрисосудистое разрушение. Имеются данные о повреждении печени при фенилгид-разиновой анемии, однако механизмы его полностью не раскрыты [1, 4, 12]. Одним из предполагаемых звеньев патогенного воздействия фе-нилгидразина на живой организм является активация процессов липопероксидации в клеточных мембранах [4, 13], в связи с чем антиок-сидативная терапия является достаточно обоснованным принципом саногенеза подобного рода интоксикаций. Среди природных соединений, обладающих антиоксидантной активностью, внимание исследователей привлекает класс высокомолекулярных полисахаридов, к которым относится арабиногалактан. Арабиногалактан встречается в чистом виде и в форме гликопротеидов во многих растениях и, в частности, в лиственных деревьях нашего региона, и обладает рядом уникальных свойств, что делает его привлекательным для биологического мониторинга [5, 8, 9].
Целью исследования явилось изучение влияния арабиногалактана, полученного из лиственницы сибирской, на динамику повреждения ткани печени при экспериментальной гемолитической анемии.
МЕТОДЫ
Опыты выполнены на 54 беспородных белых крысах-самцах массой 180 — 200 г. Содержание, питание, уход и выведение из эксперимента соответствовали «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных приказом № 755 от 12.08.77. У животных вызывалась токсическая гемолитическая анемия путем внутримышечного введения солянокислого фенилгидразина по 3 мг/100 г массы тела в течение двух дней [1]. Половине из них через 6 часов после второго введения фенилгидразина и затем ежедневно в течение четырех дней внутримышечно инъецировался раствор арабиногалактана в дозе 20 мг/100 г массы, остальным — физиологический раствор. В пик анемии, а также через
1, 3, 5, 15 суток после него определялась концентрация гидроперекисей липидов (ГПЛ) по методу В.Б. Гаврилова и М.М. Мишкорудной [3] и малоновых диальдегидов (МДА) по методу И.Д. Стальной, Т.Г. Гаришвили [7] в печени и брались образцы ткани печени для морфологических исследований. Образцы ткани печени фиксировались в 10% нейтральном формалине и заливались в парафин. Срезы толщиной 7 мкм окрашивались гематоксилин-эозином (для обзорных морфометрических исследований), на ШИК-реакцию с контролем амилазой (для выявления гликогена в гепатоцитах) и по Перлсу (для выявления гранул гемосидерина) [6]. В паренхиме печени определялась объемная доля гепатоцитов, сосудов, очагов некроза, а также подсчитывалось процентное количество дистрофически измененных клеток, двуядерных гепа-тоцитов, измеряли размер гепатоцитов. Количество гликогена оценивалось в баллах по четырех-
Таблица 1
Структурно-функциональная характеристика печени при отравлении фенилгидразином
и введении арабиногалактана
Показатели Интактные Подопытные крысы
крысы пик 1 сутки 3 сутки 5 сутки 15 сутки
Доля сосудов, %, V 17,1 ± 0,96 26,16 ± 1,1* 9,52 ± 0,66* 6,49 ± 0,43* 9,04 ± 0,48* 8,26 ± 0,5*
Доля некроза, %, V 0,81 ± 0,26 40,96 ± 1,98* 36,44 ± 2,35* 53,52 ±1,87* 35,39 ± 3,8* 43,41 ± 2,63*
Нормальные клетки, % 99,2 ± 0,25 52,5 ± 2,7* 60,2 ± 2,4* 22,6 ± 4,96* 59,7 ± 4,4* 44 ± 4,8*
Баллонная дистрофия, % 0 0,52 ± 0,28 1,78 ± 0,44* 24,5 ± 4,45* 3,89 ± 1,38* 12,42 ± 2,86*
ФГ ЦХИ гликогена 1,7 ± ОД 1,4 ± 0,1 1,5 ± 0,1 0,4 ± 0,2* 1,3 ± 0,2 1 ± 0,1*
Двуядерные клетки, % 10 ± 1,2 11,2 ± 1,1 12,2 ± 1,5 13,4 ± 0,7* 14,2 ± 1,04* 13,9 ± 1,3
Клетки <13,5 мкм, % 18 ± 1,2 22,43 ± 3,3 23,8 ± 2,9 23,55 ± 1,4* 24,02 ± 2,8 21,48 ± 1,5
Клетки среднего размера, % 65 ± 4,3 53,47 ± 2,8 51 ± 1,4* 36,65 ± 2* 45,48 ± 13,7 48,92 ± 2,3*
Клетки > 1 8 мкм,% 18 ± 0,7 24,1 ± 4,1 25,2 ± 2,6* 39,8 ± 1,8* 30,5 ± 2,2* 29,6 ± 3,1*
Гемосидерин 0,13 ± 0,04 3,7 ± 0,7* 4,8 ± 1,2* 3,3 ± 0,9* 2,86 ± 0,54* 1,34 ± 0,3*
Доля сосудов, %, V 17,1 ± 0,96 9,3 ± 1,4*/** 14,47 ± 1,01/** 12,72 ± 0,98*/** 4,41 ± 1,46*/** 24,67 ± 0,74*/**
Доля некроза, %, V 0,81 ± 0,26 48,43 ± 2,57* 37,68 ± 2,74* 27,75 ± 2,96*/** 44,92 ± 1,82* 5,11 ± 1,55*/**
Нормальные клетки, % 99,2 ± 0,25 16,4 ± 4,2*/** 59,76 ± 3,45* 66,93 ± 2,8*/** 9,73 ± 2,7*/** 94,9 ± 3,2/**
Баллонная дистрофия, % 0 35,16 ± 4*/** 1,13 ± 4,47 0,76 ± 0,29*/** 45,35 ± 3,65* 0/**
ФГ + ЦХИ гликогена 1,7 ± 0,1 0,4 ± 0,1*/** 1,4 ± 0,2 0,4 ± 0,2* 0,4 ± 0,2*/** 1,2 ± 0,1/**
АГ Двуядерные клетки, % 10 ± 1,2 12,9 ± 1,9* 15,6 ± 1,4* 16 ± 1,9* 5,9 ± 1,2* 25 ± 1,1*/**
Клетки <13,5 мкм, % 18 ± 1,2 22,26 ± 3,6 27,37 ± 5,4 24,97 ± 2,6 25,06 ± 7,8 31,17 ± 1,2*/**
Клетки среднего размера, % 65 ± 4,3 33,44 ± 2*/** 50,71 ± 4,2 52,84 ± 2,1*/** 27,14 ± 2,1 53,78 ± 2,9
Клетки > 1 8 мкм,% 18 ± 0,7 44,3 ± 0,4*/** 21,92 ± 1,3* 22,19 ± 1,5/** 47,8 ± 3,5*/** 15,05 ± 3
Гемосидерин 0,13 ± 0,04 5,12 ± 0,84* 10,5 ± 1,25*/** 6,67 ± 0,9*/** 2,32 ± 0,7* 0,52 ± 0,08*/**
Примечание: * - статистически значимое отличие показателей при введении АГ на фоне отравления ФГ от аналогичных значений у интактных крыс; ** - статистически значимое отличие показателей при введении АГ на фоне отравления ФГ от аналогичных значений у крыс при интоксикации ФГ.
балльной шкале (0, 1, 2, 3 балла), затем высчитывался цитохимический индекс по общепринятой формуле: ЦХИ = (0 х п0 + 1 х п1 + 2 х п2 + 3 х п3) / (п0 + п1 + п2 + п3), где п0, п1, п2, п3 — количество гепатоцитов.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Нами было показано, что во все сроки интоксикации фенилгидразином (ФГ) наблюдается значительное повреждение печени, проявляющееся развитием баллонной дистрофии и некроза. При этом объемная доля некроза в динамике эксперимента изменяется от 35,4 до 53,5 % объема печеночной ткани (табл. 1). Максимальная степень альтерации гепатоцитов выявляется на 3 сутки. В патогенезе повреждения печени возможно участие нескольких механизмов: непосредственное действие токсина на клеточные структуры, активация свободно-радикального окисления, нарушение кровообращения в органе. Доказательством последнего является высокая степень корреляции (г = —0,97) между объемом капиллярного русла и выраженностью баллонной дистрофии.
Количественный рост гепатоцитов большого размера обусловлен набуханием клеток. Прослеживается прямая связь между количеством крупных клеток и клеток с баллонной дистрофией, выраженность которой сохраняется и концу наблюдений (г = 0,9). На основании этого можно считать, что начиная с 3 суток включаются репаратив-ные процессы, что подтверждается увеличением числа молодых и двуядерных клеток.
Функция клеток Купфера при ФГ интоксикации сохраняется. Начиная с пика анемии и до 5 суток, эти клетки активно захватывают гемосиде-рин, содержание которого увеличено в 22 — 37 раз по сравнению с нормой. К 15 суткам количество гемосидерина в связи с прекращением гемолиза и активацией эритропоэза уменьшается, но к исходным величинам не возвращается.
При ежедневном пятикратном введении арабиногалактана (АГ) соответственно срокам развития гемолиза эритроцитов значения ГПЛ и МДА, и их соотношение не отличаются от нормальных величин (табл. 2).
Иными словами, в течение всего периода становления анемического синдрома наблюдается
Таблица 2
Концентрация продуктов перекисного окисления липидов в печени и их соотношение при интоксикации фенилгидразином и ведении арабиногалактана
Серия Показатели Интактные крысы Подопытные крысы
пик 1 сутки 3 сутки 5 сутки 15 сутки
ФГ ГПЛ 7,43 ± 0,9 17,5 ± 1,25* 19,5 ± 1,56* 14,2 ± 0,36* 16,2 ± 0,87* 12,9 ± 0,77*
МДА 3,34 ± 0,6 6,65 ± 1,2 5,23 ± 0,23* 1,9 ± 0,05 7 ± 0,23* 2,24 ± 0,1
ГПЛ/МДА 3,06 ± 0,74 2,87 + 0,4 3,72 ± 0,2 7,6 ± 0,3* 2,3 ± 0,09 5,9 ± 0,44*
ФГ + АГ ГПЛ 7,43 ± 0,9 9,15 ± 1,81** 9,21 ± 0,41** 10,42 ± 0,26*/** 9,04 ± 2,72 8,01 ± 0,84**
МДА 3,34 ± 0,6 3,81 ± 0,44 4,42 ± 0,37 4,69 ± 0,42** 3,05 ± 0,17** 3,9 ± 0,8
ГПЛ/МДА 3,06 ± 0,74 2,59 ± 0,77 2,14 ± 0,15** 2,31 ± 0,2** 2,81 ± 0,79 2,09 ± 0,28**
Примечание: * - статистически значимое отличие показателей при введении АГ на фоне отравления ФГ от аналогичных значений у интактных крыс; ** - статистически значимое отличие показателей при введении АГ на фоне отравления ФГ от аналогичных значений у крыс при интоксикации ФГ.
физиологическое течение процессов липоперок-сидации в печеночной ткани. По-видимому, АГ может быть адсорбентом ФГ, что приводит к ослаблению его стимулирующего действия на ПОЛ.
В пик анемии в сосудах печени формируется небольшой стаз. Капилляры сужены, их суммарный объем уменьшен в 1,8 раза по сравнению с интакт-ными животными и в 3 раза меньше, чем у животных, не получавших АГ (Р < 0,05). Как и в других сериях эксперимента, этот феномен связан с внутриклеточным отеком и развитием баллонной дистрофии. Объемная доля очагов некроза такая же, как и у крыс, которым АГ не вводился (48,4 ± 2,6 %), а число клеток с баллонной дистрофией даже больше (35,2 ± 4,5 %, Р < 0,05). Появляется тенденция к увеличению числа двуядерных и молодых клеток. Уменьшается количество клеток среднего размера в 1,9 раза (Р < 0,05). За счет внутриклеточного отека в 2,5 раза возрастает число крупных клеток (Р < 0,05). В 4,3 раза падает значение ЦХИ, что может быть связано, с одной стороны с распространенным характером дистрофических и некротических процессов, с другой стороны — с сохранением способности клеток к утилизации гликогена (Р < 0,05). Содержание гемосидерина увеличивается в 39,4 раза по сравнению с таковым у интактных животных (Р < 0,05).
Следовательно, структурные изменения печеночной ткани в пик анемии в условиях пятикратного введения АГ аналогичны таковым у животных, которым АГ не вводился. В неповрежденных клетках сохраняется способность к утилизации гликогена, поэтому его содержание в печени уменьшено.
На 1 сутки после пика анемии в сосудах печени сохраняются застойные явления. Объем капиллярного русла увеличивается в 1,6 раз по сравнению с предыдущим сроком наблюдения, но меньше, чем у интактных крыс в 1,2 раза, что указывает на частичное восстановление кровотока и улучшение трофики клеток (Р < 0,05). Резко уменьшается число гепатоцитов с баллонной дистрофией до 1,1 ± 0,5 % от объема ткани. В 1,3 раза уменьшается объем не-кротизированных участков (Р <0,05). В 1,5 раза по
сравнению с нормой возрастает число двуядерных и молодых, в 1,2 раза — больших гепатоцитов, в 1,4 раза уменьшается число клеток среднего размера (Р < 0,05). Эти данные свидетельствуют о ранней стимуляции пролиферативных процессов. ЦХИ возрастает по сравнению с предыдущим сроком наблюдения в 3,5 раза и становится нормальным, что говорит о возобновлении ресинтеза гликогена (Р < 0,05). Содержание гемосидерина выше в 2,2 раза, чем в аналогичный срок у крыс, не получавших АГ и в 81 раз больше, чем у интактных животных (Р <0,05).
Из этих данных следует, что при многократном введении АГ к 1 суткам после пика анемии интенсивность альтерации снижается, уменьшается доля некротизированных гепатоцитов. Возрастает число молодых и двуядерных клеток, что говорит об активации репаративных процессов. Устраняются явления баллонной дистрофии. Скорость ликвидации клеток с баллонной дистрофией говорит скорее не о замещении их новыми клетками, а о восстановлении обменных процессов в клетках и их внутриклеточной регенерации. Вследствие улучшения трофики и уменьшения числа поврежденных гепатоцитов возрастает количество клеток с нормальной гликогенной функцией. Более высокое содержание гемосидерина в печени позволяет предполагать стимуляцию АГ фагоцитарной функции клеток Купфера [5].
На 3 сутки после пика анемии в сосудах печени сохраняются застойные явления. Объем капиллярного русла такой же как и в предыдущий срок наблюдений и меньше нормы в 1,3 раза (Р < 0,05). По сравнению с предыдущим сроком наблюдений в 1,4 раза уменьшается объем некротизированной ткани, который в 1,9 раза меньше по сравнению с этим показателем у крыс, не получавших АГ (Р < 0,05). Число двуядерных, молодых и крупных клеток по-прежнему увеличено, клеток нормальных размеров — уменьшено (Р< 0,05). Следовательно, восстановительные процессы осуществляются за счет активации пролиферативных процессов. ЦХИ вновь снижается в 3,5 раза по сравне-
нию с предыдущим сроком наблюдений и в 4,3 раза по сравнению с нормой (Р < 0,05). Вероятно, это связано с высокой потребностью в энергии пролиферирующих и восстанавливающихся клеток. Содержание гемосидерина в 51,5 раз превышает норму и в 2 раза выше, чем в аналогичный срок у крыс, не получавших АГ (Р < 0,05). Это подтверждает высказанное выше предположение о стимулирующем влиянии АГ на фагоцитарные функции макрофагов, тем более что по данным [7] в этот срок интенсивность гемолиза ослабевает.
Таким образом, в этот срок деструктивные процессы ослабевают, а пролиферативные протекают со стабильной скоростью и более эффективно, чем у крыс, которым не вводился АГ. Повышен расход гликогена, который, по-видимому, используется на активные восстановительные процессы.
К 5 суткам после пика анемии застойные явления в сосудах печени усиливаются. Диаметр капилляров вновь резко уменьшается в 3,2 раза по сравнению с предыдущим сроком и в 4 раза по сравнению с нормой (Р < 0,05). Объем очагов некроза и количество клеток с баллонной дистрофией увеличивается и достигает тех же величин, что и в пик анемии. Количество мелких гепатоцитов превышает норму в 1,5 раза, т.е. в той же степени, что и на 1, 3 сутки, а число крупных клеток больше нормы в 2,6 раза и 2,1 раза больше по сравнению с предыдущим сроком наблюдений (Р < 0,05). ЦХИ, как и в предыдущий срок, низкий (Р < 0,05). Содержание гемосидерина уменьшается и превышает нормальный показатель в 18 раз (Р < 0,05).
Таким образом, на пятые сутки формируется вторая волна повреждения ткани печени, проявляющаяся увеличением доли некротизированных гепатоцитов и клетокцитов с баллонной дистрофией, уменьшением количества гликогенсинтезиру-ющих клеток и, соответственно, содержания гликогена в печени. Пролиферативные процессы в этот срок не подавляются и остаются активными.
К 15 суткам кровоток восстанавливается в большинстве сосудов печени. Объем капиллярного русла увеличивается по сравнению с предыдущим сроком в 6 раз и по сравнению с нормой — в 1,4 раза (Р < 0,05). Гепатоцитов с баллонной дистрофией не встречается, доля некротизированных клеток снижается до 5,1 ± 1,6%, что в 9 раз меньше, чем в предыдущий срок, а также в аналогичный срок у крыс, которым АГ не вводился (Р < 0,05). По сравнению с нормой число двуядерных гепатоцитов увеличивается в 2,5 раза, молодых — в 1,8 раз; количество больших клеток возвращается к исходным величинам (Р < 0,05). ЦХИ возвращается к норме (Р < 0,05). Содержание гемосидерина падает и превышает этот показатель у интактных крыс только в 4 раза (Р < 0,05).
Следовательно, в условиях пятикратного введения АГ к 15 суткам после пика анемии в печени активируются пролиферативные и обменные процессы, что подтверждается увеличением доли неповрежденных гепатоцитов, смещением соотношения клеток различного размера в сторону пре-
обладания молодых и двуядерных, относительной нормализацией гликогенной функции печени.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Обсуждая полученные результаты, необходимо учесть специфичность действия ФГ и АГ. Хорошо известно, что для ФГ клетками-мишенями прежде всего являются эритроциты [4, 11], а для АГ — гепатоциты [9, 10]. АГ, вводимый вместе с ФГ и далее до наступления пика анемии, по-видимому, связывает его и тем самым предохраняет эритроциты от токсического действия ФГ. В то же время гепатоциты, к которым полисахарид обладает сродством, становятся клетками-мишенями для ФГ. Поэтому гепатотоксическое действие ФГ проявляется в пик анемии сильнее, чем без введения. Вместе с тем, альтерация печени развивается постепенно, и гепатоциты успевают воспользоваться резервными запасами гликогена для ранней стимуляции восстановительных процессов. В результате к 3 суткам дистрофические изменения исчезают, кровоток восстанавливается, и объем некроза уменьшается в 2 раза. В гепатоцитах, по-видимому, частично восстанавливается баланс между расщеплением и ресинтезом гликогена, что приводит к восстановлению его резерва. Положительное действие АГ отражается и на активации фагоцитоза и накоплении гемосидерина клетками Купфера, несмотря на значительно более низкий уровень гемолиза эритроцитов. Это согласуется с результатами исследований [5], которые указывают на способность АГ стимулировать фагоцитоз. По нашим данным, АГ обладает еще одним важным свойством — прямо или опосредованно стимулировать пролиферацию и внутриклеточную регенерацию гепатоцитов. К 5 суткам, вероятно, действие АГ прекращается, вновь возрастает степень дистрофии и некроза паренхимы печени, ухудшается капиллярный кровоток. Потребность клеток в энергии возрастает, и, соответственно, запасы гликогена уменьшаются. К завершающему этапу наблюдений структура паренхимы печени и гликогенсинтезирующая функция печени восстанавливаются, ЦХИ возвращается к норме, количество гемосидерина в печени уменьшается и нормализуется. Таким образом, несмотря на двухфазную динамику повреждения печени и нарушение ее функциональной активности, восстановительные процессы в условиях введения АГ протекают более полноценно.
ЛИТЕРАТУРА
1. Белокриницкая Т.Е. Влияние полипептидов эритроцитов на систему эритрона при экспериментальной анемии / Т.Е. Белокриницкая, Б.И. Кузник, В.Х. Хавинсон // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 1992. - Т. 114. - С. 132- 133.
2. Биохимия гидразинов: Монография / Н.И. Портяная, В.В. Соколовский, Б.Г. Осибенко и др.; Под ред. Н.И. Портяной, Г.Г. Юшкова. -Ангарск: Изд-во Ангарской государственной технической академии, 2005. - 92 с.
3. Гаврилов В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.И. Мишкорудная // Лаб. дело. - 1983. - № 3. - С. 33-36.
4. Глутатион-зависимая антиоксидантная система у крыс в условиях острого отравления производными гидразина / С.А. Куценко, А.И. Карпи-щенко, В.А. Башарин и др. // Авиакосм. и экол. мед. - 2001. - Вып. 1. - С. 68-73.
5. Иммуномодулирующие свойства арабинога-лактана лиственницы сибирской (Larix sibirica L.) / В.И. Дубровина, С.А. Медведева, Г.П. Александрова и др. // Фармация. - 2001. - № 5. - С. 26-27.
6. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники / Г.А. Меркулов. - Л.: Медицина, 1969.
- 424 с.
7. Стальная И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы биохимии; Под ред. В.Н. Оре-ховича. - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68
8. Четверикова Т.Д. Эритроцитопротекторный эффект арабиногалактана при эксперимен-
тальной гемолитической анемии / Т.Д. Четверикова, Л.С. Васильева, О.В. Гаврилова // Сиб. мед. журнал. — 2004. — Т. 48, №7. — С. 39.
9. Arabimogalactan derivatives and uses there of / W. Jung Chu, P. Enriques, S. Palmacci et al. // Biotechol. Adv. — 1997. — N 1. — P. 246.
10. Arabinogalactan for hepatic drug delivery / E.V. Groman, P.M. Enriquez, W. Jung Chu et al. // Bioconjugate Che. — 1994. — N 5. — P. 547 — 556.
11. Horn S. Phagocytosis of phenylhydrazine oxidized and G-6PD-Deficient red blood cells: the roleof cell-bound immunoglobulins / S. Horn, N. Bashan, J. Gopas // Blood. - 1991. - Vol. 78, N7.
- P. 1818-1825.
12. Release of free, redox-activ iron in the liver and DNA oxidative damage following phenylhyd-razine intoxication / M. Ferrali, C. Signorini, L. Sug-herini et al. // Biochem. Pharmacol. - 1977. -Issue 11. - P. 1743-1751.
13. The reaction of phenylhydrazinewith microsomal cCtochrome P-450 / H.G. Jonen, J. Werringloer et al. // The J. of Biological chemistry. - 1982. -Vol. 257, N8. - P. 4404-4411.
