CC BY
110
Медицинская Иммунология 2005, Т. 7, Ms 5-6, стр 557-562 © 2005, СПб РО РААКИ
Оригинальные статьи
КОМПЛЕКСЫ АЛЬФА-2-МАКРОГЛОБУЛИНА С АНТИТЕЛАМИ КЛАССА IgG, ПЛАЗМИНОМ И ИХ ВЗАИМОСВЯЗЬ С ДРУГИМИ ФАКТОРАМИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ РАЗВИТИИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА
Зорина В.Н., Трофименко Н.А.*, Архипова С.В.,
Зорина Р.М., Зорин Н.А.
ГОУ ДПО Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей;
*Первая городская клиническая больница, г. Новокузнецк, Россия
Резюме. Человеческий альфа-2-макроглобулин (МГ) является не только полифункциональным белком, способным связывать широкий спектр цитокинов и протеиназ, но и эволюционно неизменным звеном врожденной иммунной системы. В то же время показано, что развитие ревматоидного артрита (РА) может привести к конформационному повреждению МГ и снижению его способности связывать и утилизировать регуляторные субстанции. Мы исследовали сывороточные концентрации комплексов МГ-IgG и МГ-ПЛ, а также общие концентрации МГ, IgG, плазмина (ПЛ), TNF-a, IL-ip, IL-6 и РФ-IgM для того чтобы оценить уровень антителогенеза к МГ у пациентов с различными степенями активности РА и взаимосвязи сформированного комплекса с некоторыми другими субстанциями, вовлеченными в развитие РА. Сывороточные образцы были взяты при обострении заболевания до лечения. Мы обнаружили значимое повышение уровней МГ-IgG в группах с высокоактивным РА, сопровождающееся повышением общего IgG, но без значительного изменения общей концентрации МГ. Мы показали, что ПЛ-МГ уровень тоже растет при усилении активности и хорошо коррелирует с ростом МГ-IgG. Мы выявили значимое увеличение содержания TNF-a, IL-ip, IL-6 и РФ-IgM при РА, без значимых корреляций с МГ-IgG. Полученные результаты позволяют предположить, что чрезмерное накопление при воспалении антител к МГ либо комплексу ПЛ-МГ, в сыворотке людей с врожденным дефицитом МГ, сопровождающееся накоплением провоспалительных цитокинов может спровоцировать каскадное развитие РА. Сывороточный уровень МГ-IgG может служить прогностическим маркером при РА.
Ключевые слова: альфа-2-макроглобулин,ревматоидный артрит, иммунокомплекс, аутоантитела, цитокины.
Zorina V.N., Trofimenko N.A., Arkhipova S.V., Zorina R.M., Zorin N.A.
ALPHA-2-MACROGLOBULIN COMPLEXES WITH IGG ANTIBODIES, PLASMIN,
AND THEIR INTERRELATION WITH OTHER FACTORS OF HUMORAL IMMUNITY DURING
THE DEVELOPMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
Abstract. Human alpha-2-macroglobulin (a2-MG) acts as a broad-spectrum cytokine and proteasebinding protein, and it represents an evolutionarily conserved arm of innate immune system. Meanwhile, previous studies
-------------------------------------- have shown that rheumatoid arthritis (RA) develop-
Адрес для п.ереписки: ment may cause alterations in a2-MG conformation
Зориной ВН. and lessen its ability to bind and utilise regulatory sub-
654005, г.Новокузнецк, Кемеровская обл., stances. We investigated serum contents of a2-MG-IgG
пр. д. 5, Новокузнецкий ГИув И.ШИ and a2-MG-plasmin complexes, as well as total con-
Тел.: (3843)45-84-18, (3843)45-56-41. centrations ofa2-MG, plasmin (Pl), IgG, IL-6, IL-ip,
факс (3843)45-42-19. TNFa and Rf-IgM, in order to evaluate the levels of
e-mail::[email protected] anti-a2-MG antibody production in sera of patients
557
Зорина В.Н., Трофименко Н.А. и др.
Медицинская Иммунология
with different degrees of RA activity and some interrelations of preformed immune comp-lex with some other substances implicated in RA development. Serum samples were obtained in acute phase of RA, before the treat-ment was started. We have revealed sig-ni-ficantly increased levels of a2-MG-IgG complex in the groups with severe RA, ac-com-panied by increase in total IgG levels, without significant changes in total a2-MG concentrations. We have also demonstrated that increased levels of Pl-a2-MG complex did correspond to the severity of disease, and showed statistically high correlation with a2-MG-IgG levels. We have found a significant increase of IL-1p, IL-6, TNFa and Rf-IgM in RA, in absence of significant correlations with a2-MG-IgG contents. The results obtained al-low us to suggest that abundant accumulation of serum antibodies to a2-MG or Pl-a2-MG complex during inflammation in the people with innate a2-MG deficiency, followed by increased levels of pro-inflam-ma-tory cytokines, may provoke a cascade-like development of RA. Serum levels of a2-MG may serve as prognostic marker in RA. (Med. Immunol., 2005, vol.7, №5-6, pp 557- 562)
Введение
Ревматоидный артрит (РА) - это хроническое системное аутоиммунное заболевание с неизвестной этиологией, сопровождающееся разрушением суставных хрящей и костных тканей [16]. Аутореактивность, вне всякого сомнения, играет ведущую роль в патогенезе РА. Однако единичный антиген либо отдельная иммунная реакция не может быть ответственной за развитие РА. Таким образом, РА является клиническим проявлением перехода всей иммунной системы из нормального в патологическое состояние, и сопровождается различными иммунологическими процессами, которые могут возникать как параллельно, так и в виде каскадных реакций [9]. Например, одним из факторов, участвующих в развитии РА считается Fcy IIIA рецептор (CD16), экспрессируемый на поверхности макрофагов. Селективное связывание IgG молекул данным рецептором стимулирует синтез макрофагами таких цитокинов, как TNFa, IL-1 и IL-6, которые в свою очередь участвуют в модуляции симптомов РА [11]. Альфа-2-макроглобулин (МГ), белок крови и многих других биожидкостей всех позвоночных, способный реагировать практически со всеми эндогенными протеи-назами, многими экзогенными энзимами [3, 13] и признающийся рядом авторов как древнее и эволю-ционно консервативное звено врожденного иммунитета [7], тоже принимает самое активное участие в развитии РА. Показано, что нарушение баланса про-теиназы - ингибиторы протеиназ играет существенную роль в разрушении тканей при РА [18] и что при возникновении ревматических заболеваний зафиксирован анормально высокий уровень активации плазминогена [10]. В то же время МГ, являющийся наиболее быстро реагирующим ингибитором плаз-мина, при РА часто оказывается поврежденным супероксидными анионами [14, 18]. Данная поврежденная форма МГ в комплексе с плазмином обладает значительно сниженной способностью к утилизации и надолго остается в циркуляции, что отражается на повышении концентрации комплексов МГ-ПЛ в крови и синовиальной жидкости при РА [15]. Интересно отметить, что именно комплекс МГ-протеи-наза является основным, а в некоторых случаях и единственным переносчиком факторов роста и провоспалительных цитокинов [4, 8]. В этой связи интересным представляется изучение возможности
формирования аутоантител на подобную поврежденную форму МГ при РА и исследование взаимосвязи данных аутоантител с другими белками, участвующими в вышеперечисленных реакциях.
Для достижения поставленной цели мы изучили содержание в сыворотке комплексов МГ-IgG, учитывая, что использованный нами метод позволяет определить прежде всего аутоантитела к данному белку (содержание противоуглеводных аутоантител в общем пуле МГ-IgG не превышает 30% [1]). Кроме того, мы исследовали взаимосвязь данных комплексов с уровнями МГ-ПЛ комплексов и общими концентрациями МГ, IgG, плазмина (ПЛ), TNFa, IL-1 р, IL-6 у пациентов с верифицированным диагнозом ревматоидный артрит. Помимо этого мы изучили сывороточное содержание и IgM-РФ. Кроме того, мы исследовали все вышеперечисленные показатели в сыворотке здоровых доноров в качестве контрольной группы и пациентов с верифицированным диагнозом реактивный артрит (РеА) урогенитального происхождения в качестве группы сравнения.
Материалы и методы
Мы исследовали сыворотку крови 51 больного ревматоидным артритом (РА), а также 15 больных реактивным артритом (РеА). Постановка диагноза осуществлялась на основании критериев, предложенных Американской ревматологической ассоциацией. Средний возраст больных колебался в пределах 45-60 лет и был примерно одинаковым во всех исследованных группах. Пациенты с РА были разделены на 3 группы по степеням активности заболевания, согласно рабочей классификации [6]. Учитывались такие показатели как утренняя скованность, гипертермия, содержание С-реактивного белка (СРБ), СОЭ и гамма-глобулинов. Кроме того, мы учитывали боль по шкале ВАШ и число задействованных суставов. С 1 степенью активности РА выявлено 15 больных, со 2-й - 20 и с 3-й - 16. В качестве контрольной группы, сопоставимой по половому и возрастному составу с группами больных, было обследовано 35 практически здоровых лиц, отобранных на основе диспансеризации. Во все группы больных входили как женщины, так и мужчины, примерно в одинаковом соотношении (3:1). Забор сыворот-
558
2005, Т. 7, № 5-6
Комплексы а2-МГ при ревматоидном артрите
ки крови осуществлялся при обострении заболевания, до лечения.
Альфа-2-макроглобулин и плазмин определяли методом ракетного иммуноэлектрофореза [2].
IgG определяли иммунотурбидиметрическим методом, с использованием реактивов и калибратора Spinreact (Испания).
Концентрации IL-1 р, IL-6 и TNFa определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем (ProCon, Россия).
Иммуноферментный анализ использовался и для количественного определения МГ-IgG [1, 5], однако, в отличие от оригинальной методики мы использовали разведения образцов не в 2, а в 40 раз, вследствие предполагаемо высокого уровня аутоантител при РА. Кроме того, мы использовали внешнюю калибровку, где в качестве первичных антител служили высокоочищенные антитела против IgG человека в разведении до 10 мг/л, а в качестве калибратора - высокоочищенный IgG в девятиступенчатом разведении от 1,25 мкг/мл. В качестве вторичных антител как для образцов, так и для калибровки использовался ко-ньюгат Fc фрагментов IgG с пероксидазой хрена, изготовленный согласно описанной ранее методике [5]. Разница фоновых значений между калибровкой и опытными образцами исключалась путем математического пересчета.
Аналогичным образом определялся уровень комплексов МГ-ПЛ. В качестве первичных антител использовались высокоочищенные антитела к плазми-ну (ПЛ), а в качестве вторичных - коньюгат антител к человеческому альфа-2-макроглобулину (МГ) с пероксидазой хрена, приготовленный аналогично вышеупомянутой методике. Для количественного определения комплексов использовалась внешняя семиточечная калибровка, построенная при помощи
аффинно очищенных антител к МГ в качестве первого слоя, высокоочищенного МГ в семиступенчатом разведении от 1,5 мкг/мл в качестве калибратора и коньюгата антител к МГ с пероксидазой хрена в качестве второго слоя. Остальные детали методики, включая разведение образцов, удаление разницы фоновых значений между калибровкой и опытными образцами и проявление реакции 2Н серной кислотой были аналогичны с описанной ранее методикой количественного определения МГ-IgG [5]. Специфичность обеих методик соответствовала общепринятым нормам для коммерческих тест-систем.
Уровень РФ-IgM измерялся в оптических единицах методом иммуноферментного анализа при использовании реактивов, предоставленных Вектор-Бест (Россия).
Статистическая обработка полученных данных проводилась при помощи сертифицированной РС программы для биостатистики InStat 2.0 (Sigma, США) Параметры, приводимые в работе, имеют следующее обозначение: M - среднее, m - ошибка средней, n - объем анализируемой выборки, r-коэффициент корреляции, p - достигнутый уровень значимости. Проверка нормальности распределения признаков проводилась с использованием критерия Колмогорова-Смирнова. Межгрупповое сравнение показателей производилось при помощи ANOVA теста, корреляционный анализ проводился по критерию Пирсона. Критическое значение уровня значимости - 0,05.
Результаты
Содержание РФ-IgM фактора в крови пациентов страдающих ревматоидным артритом было повышено при всех трех степенях активности по сравнению с контролем (p<0,001 во всех случаях). Выявлены
Табл.1. КОНЦЕНТРАЦИИ В СЫВОРОТКЕ ИЗУЧЕННЫХ КОМПЛЕКСОВ, ЦИТОКИНОВ, АЛЬФА-2-МАКРОГЛОБУЛИНА, IGG И ПЛАЗМИНА ПРИ РЕВМАТОИДНОМ И РЕАКТИВНОМ АРТРИТЕ
Изученные показатели Здоровые доноры, n=35 Реактивный артрит, n=15 Степени активности РА
1 степень, n=15 2 степень, n=20 3 степень, n=16
РФ-IgM (ед. опт. пл.) 0,341±0,025 0,345±0,069 1,071±0,143 1,158±0,105 1,537±0,079
а2-МГ (г/л) 2,03±0,06 1,89±0,24 1,86±0,19 2,08±0,17 2,07±0,17
а2-МГ -IgG (мкг/мл) 0,678±0,047 1,271±0,306 2,789±0,481 11,423±3,624 21,253±6,302
а2-МГ-ПЛ (мкг/мл) 0,905±0,052 1,481±0,215 4,148±1,072 4,451±0,679 8,228±1,770
IL-1 в (пкг/мл) 27,34±2,11 102,09±30,37 38,38±8,25 108,52±30,30 218,65±48,02
IL-6 (пкг/мл) 4,65±1,04 40,90±8,32 65,42±28,50 70,16±11,34 75,28±20,33
TNFa (пкг/мл) 43,91±6,60 133,13±30,51 78,64±22,24 106,08±13,46 356,46±60,30
Плазмин (мкг/мл) 112,91±2,66 106,30±5,58 90,05±6,20 92,76±7,32 94,95±4,71
IgG Ш 12,83±0,34 17,71 ±1,22 12,51±0,72 15,58±1,00 16,18±1,09
559
Зорина В.Н., Трофименко Н.А. и др.
Медицинская Иммунология
различия между концентрацией данного иммунокомплекса при 1 и 2 ст РА (p<0,01), 2 и 3 ст РА (p<0,05). Кроме того, показатели, характерные для пациентов с РеА статистически значимо отличаются от данных, полученных для 2 и 3 ст РА (p<0,001 в обоих случаях). Абсолютное содержание РФ-IgM повышено у 80% больных при 1 ст РА, 91% при 2 ст, 100% при 3 ст и 13% при РеА.
Концентрация комплексов МГ-IgG в крови больных РА была значительно выше при 2 ст (p<0,05) и особенно 3 ст заболевания (p<0,001). Средний уровень данных комплексов при 1ст РА не отличался статистически значимо от контрольных значений, но отличался от показателей, характерных для 3ст (p<0,001). Содержание комплексов МГ-IgG при РеА было значительно ниже, чем при 3ст РА (p<0,001), но не отличалось от группы контроля и 1ст РА. Абсолютные показатели концентрации МГ-IgG превышали нормальные значения у 73% больных с 1ст РА, 86% со 2ст, 100% с 3ст и только у 20% пациентов с РеА.
Сходная картина наблюдалась при изучении сывороточных уровней комплексов МГ-ПЛ. Их концентрация росла при 1ст (p<0,05) при 2 ст (p<0,01) и при 3 ст (p<0,001) по сравнению с контролем. Были выявлены статистически достоверные различия между 1 и 3 ст РА (p<0,05), 2 и 3 ст РА (p<0,05), а также между 3 ст РА и пациентами с РеА (p<0,001). Повышенное, по сравнению с нормой содержание данных комплексов было определено у 87% больных с 1ст РА, 91% со 2 ст, 100% с 3 ст и у 33% больных с диагнозом РеА.
Изучение концентраций всех трех изученных цитокинов выявило практически одинаковые тенденции в изменении их сывороточного содержания. Несмотря на большие индивидуальные колебания, уровень цитокинов неуклонно рос при усилении степени активности РА. Однако статистически достоверные различия в концентрациях TNFa были выявлены только при сопоставлении данных, характерных для 3 ст РА с контролем, 1 ст и 2 ст РА и РеА (p<0,001 во всех случаях). Уровни IL-1P были статистически повышены при 3 ст РА, по сравнению со 2 ст (p<0,05), 1ст РА (p<0,001) и с данными при РеА (p<0,05) и контролем (p<0,001), а концентрации IL-6 были значимо повышены только при 2 и 3 ст РА по сравнению с контролем (p<0,05 в обоих случаях). Абсолютные показатели содержания TNFa были выше нормы в 50%, 79%, 100% при 1, 2 и 3 ст РА соответственно и у 69% больных с РеА. Повышенный уровень IL-1P был выявлен у 20% с 1 ст РА, 43% со 2 ст, 83% с 3 ст, 50% с РеА. Процент выявления повышенных по сравнению с нормой значений при изучении концентраций IL-6 был следующим -80% при 1 ст, 100% при 2 и 3 ст РА, 92% при РеА.
Уровень общего сывороточного IgG при 1 ст РА не отличался от нормы, а при 2 и 3 степенях достоверно повышался (р<0,05 и р<0,01, соответственно), как впрочем и при РеА (р<0,01). Изучение процента выявления повышенных уровней IgG при вышеупомянутых заболеваниях продемонстрировало следующее: 1ст РА - 13%, 2 ст РА - 36%, 3 ст РА - 41%, РеА - 57%.
Концентрации общего сывороточного плазмина при менее выраженных степенях активности были несколько ниже нормы (p<0,01) при 1 ст РА и (p<0,05) при 2 ст РА, а при 3 степени активности РА его уровень не отличался от нормальных показателей. Сопоставление уровня общего плазмина при РеА с содержанием данного белка в норме и при РА не выявило достоверных различий.
Среднестатистические значения общего содержания сывороточного МГ при РА и РеА не отличались от нормальных показателей, однако анализ индивидуальных показателей выявил гораздо большие индивидуальные колебания в группах больных, по сравнению с контрольной группой. В 7% при 1 ст РА, в 18% при 2 ст РА, в 29% при 3 ст РА и 20% при РеА было выявлено повышение уровня МГ, по сравнению с нормой, а в 27% при 1 ст РА, 14% при 2 ст РА, 12% при 3 ст РА и 20% при РеА, напротив, зафиксировано пониженное, по сравнению с нормой содержание МГ в крови.
Обсуждение
Присутствие комплексов МГ-IgG в крови всех без исключения здоровых доноров в небольших концентрациях, но с весьма незначительными индивидуальными колебаниями, позволяет предположить, что данные комплексы не являются артефактами и, весьма вероятно, играют определенную роль в регуляции иммунного ответа. Чрезвычайно высокий уровень корреляции концентрации комплексов МГ-IgG и уровней МГ-ПЛ, выявленный при нашем исследовании, позволяет выдвинуть следующее предположение о роли МГ-IgG в иммунном ответе.
Известно, что МГ, после связывания с протеина-зами, приобретает не только возможность связывать дополнительные регуляторные субстанции [8], но и очень короткий период полувыведения (не более 5 мин) образованных комплексов из циркуляции [13]. Однако определенная часть комплексов МГ-ПЛ все же остается в циркуляции, как в норме, так и при развитии различных патологий [8, 15]. Показано, что уровень МГ-ПЛ в сыворотке крови повышается при сепсисе, эмфиземе, периодонтите, ревматоидном артрите и некоторых других воспалительных заболеваниях [18]. Этот феномен некоторыми авторами объясняется тем, что молекула макроглобулина, нативная, либо в комплексе с протеиназой, повреждается супероксидными анионами и гипохлоридопос-редованными продуктами окисления, образующимися при активации нейтрофилов во время острого воспаления [14]. По крайней мере, установлено, что МГ, выделенный из синовиальной жидкости при ревматоидном артрите, сильно окислен и обладает сниженной функциональной активностью [19]. Такая поврежденная молекула МГ обладает не только сниженной способностью ингибировать протеиназы, но и низкой аффинностью к LRP - специфическому рецептору МГ [17]. В то же время показано, что подобное окисление ни в коей мере не влияет на способность МГ связываться с сигнальными Fc рецепторами и запускать активацию макрофагов [17].
560
2005, Т. 7, № 5-6
Комплексы а2-МГ при ревматоидном артрите
Более того, экспрессия МГ сигнальных рецепторов усиливается в культурах синовиальных фибробластов, полученных от пациентов с ревматоидным артритом, по сравнению с контролем [12]. Таким образом, мы считаем, что антитела к молекуле МГ и образуемые МГ-IgG комплексы являются звеном раннего иммунного ответа на инвазию внешнего патогена, либо избыточную пролиферацию собственных клеток. Апоптоз клеток и локальный выброс продуктов, обладающих свойствами окислителей, провоцирует локальное накопление окисленного МГ либо комплексов МГ-протеиназа в зоне поражения. Образование тройных комплексов ПЛ-МГ-IgG и определенное превышение нормальных уровней данных комплексов в зоне поражения, вполне может служить пусковым механизмом активации макрофагов через сигнальные Fc рецепторы для защиты от внешней либо внутренней инвазии, в то время как специфический иммунный ответ еще не успел развиться. По крайней мере, высокая коррелятивная зависимость МГ-IgG и МГ-ПЛ делает это предположение весьма вероятным.
Однако развитие данного неспецифического механизма может иметь весьма неприятные последствия для людей с врожденными дефектами синтеза МГ. Показано, что вариации гена МГ связаны со степенью тяжести РА, а носители генотипа с делеция-ми гена, кодирующего МГ относятся к группе риска развития раннего активного и тяжелого РА [20]. Мы предполагаем, что накопление комплексов МГ-IgG при каком-либо серьезном либо длительном инфекционном заболевании у людей с врожденным дефектом синтеза МГ приводит избыточному накоплению вышеупомянутых комплексов в циркуляции. Обнаруженное нами увеличение концентрации МГ-IgG и МГ-ПЛ даже при реактивном артрите и при 1ст РА, на фоне неизменных концентраций общего сывороточного МГ и слабых корреляций между уровнем МГ-IgG и общим содержанием МГ (МГ-ПЛ и вовсе не коррелирует с общим МГ), позволяют предположить, что накопление комплексов связано именно с накоплением дефектных форм, а не с усилением синтеза МГ. Учитывая, что именно МГ-ПЛ комплексы являются основными переносчиками TNFa, IL-1 и IL-6 объяснимым становится и одновременное накопление этих цитокинов при РА, обнаруженное при нашем исследовании, хотя в норме TNFa и IL-1 находятся в антагонистических отношениях с IL-6. Увеличение количества МГ-IgG комплексов, на фоне снижения аффинности к LRP и усиления экспрессии Fc-сигнальных рецепторов, по всей видимости, приводит не только к активации макрофагов и последующему синтезу провоспалительных цитокинов, но и к определенной задержке в утилизации транспортируемых МГ цитокинов, с последующим накоплением последних в циркуляции. Отсутствие корреляций между комплексами МГ-IgG либо МГ-ПЛ и изученными цитокинами может быть объяснено тем, что молекула МГ может связывать несколько цитокинов одновременно [4, 8], а также тем, что в циркуляции одновременно присутствуют как нормальные молекулы МГ с быстрым периодом полу-
выведения, так и длительно циркулирующие поврежденные формы. Отсутствие стопроцентной корреляции между МГ-IgG и МГ-ПЛ и несколько большая, по сравнению с уровнями МГ-IgG концентрация МГ-ПЛ в норме, при РеА и 1 ст РА подтверждает это предположение.
Чрезмерное накопление МГ-IgG и особенно ПЛ-МГ-IgG может иметь два серьезных последствия. Во-первых, эти крупные иммунокомплексы (ведь в их составе дополнительно могут быть и цитокины) могут осаждаться на тканях мишенях. Частично сохраненная литическая активность плазмина в составе комплексов (молекула МГ никогда не ингибирует связанные протеиназы полностью [13]) приводит к повреждению клеток микроокружения, а цитокины активируют специфический клеточный иммунный ответ. Гибель клеток и выброс их содержимого приводит не только к дополнительному образованию дефектных форм МГ в зоне воспаления, но и к образованию аутоантител на ранее недоступные антигены. Показательно, что в отличие от МГ-IgG комплексов, значительное накопление РФ-^М обычно наблюдается только через полгода, а то и год, после инициации РА [6]. Таким образом, процесс принимает формы каскадного развития с последующим расширением зоны поражения и увеличением количества очагов, благодаря все большему увеличению повреждающих МГ-IgG и других агентов в циркуляции.
К другим серьезным последствиям может привести способность организма образовывать аутоантитела не только на видоизмененный носитель белков, такой как МГ, но и на все белки, транспортируемые данным носителем. Нами показано, что если в норме, при РеА и 1 ст РА соотношение концентраций ПЛ-МГ и МГ-IgG примерно одинаково, то при 2 ст и особенно 3 ст РА количество МГ-IgG значительно увеличено, по сравнению с уровнями МГ-ПЛ. По всей видимости, все усиливающееся накопление поврежденных форм МГ в циркуляции провоцирует все более активный синтез антител к данному белку и, в конце концов, приводит к тому, что МГ, либо его окисленная форма, начинает восприниматься иммунными клетками как частично чужеродный носитель. В этом случае начинают образовываться аутоантитела ко всем субстанциям, транспортируемым МГ. Учитывая, что данный белок является переносчиком не только цитокинов, но и других белков широкого спектра от альбумина, липопротеинов и иммуноглобулинов до белков ядра клетки и даже генов, понятным становится наличие множества различных аутоантител с неизвестными функциями, обнаруживаемое при РА и большие индивидуальные колебания в содержании этих аутоантител. Видимо этим объясняется значительный рост уровней общего IgG при тяжелых стадиях РА, несмотря на относительно слабую корреляцию с концентрациями МГ-IgG и РФ-^М, обнаруженную при нашем исследовании.
Так или иначе, мы считаем, что концентрация МГ-IgG может служить диагностическим критерием при дифференциальной диагностике РА. Высо-
561
Зорина В.Н., Трофименко Н.А. и др.
Медицинская Иммунология
кий процент выявления данных комплексов даже при 1 степени активности РА, по сравнению с реактивным артритом (73% при 1 ст и 20% при РеА), вполне сопоставим по чувствительности с ревматоидным фактором (80% и 13%, соответственно), являющимся общепризнанным маркером РА. Кроме того, концентрация комплексов МГ-IgG, равно как и МГ-ПЛ, может быть использована в качестве прогностического критерия при РА, либо для оценки эффективности проводимого консервативного лечения. Мы предполагаем, что дальнейшее изучение не общего сывороточного и синовиального содержания провоспалительных цитокинов и других белков, но комплексов МГ с этими регуляторными субстанциями позволят ближе подойти к окончательному установлению этиологии данного заболевания, а также позволят разработать более эффективные методы диагностики и лечения РА.
Список литературы
1. Зорина В.Н., Зорина Р.М., Зорин Н.А., Левченко В.Г., Горлина Н.К., Архипова С.В. Антигенспецифический способ определения иммунных комплексов белков семейства макроглобулинов с иммуноглобулином класса G в биологических жидкостях //Патент РФ №2209435 - Официальный бюллетень Российского агентства по патентам и товарным знакам «Изобретения. Полезные модели» - 2003. - №21. -Ч.3. - С.598.
2. Зорин Н.А., Жабин С.Г., Лыкова О.Ф., Зорина Р.М., Горин В.С., Белогорлова Т.И., Чирикова Т.С., Краюшкина Н.А. Белки плазмы и сыворотки крови доноров // Клин. Лаб. Диагн. - 1992. - №9-10. - С.13-15.
3. Зорин Н.А., Зорина В.Н., Зорина Р.М., Левченко В.Г. Универсальный регулятор - а -макроглобулин (Обзор литературы)// Клин. Лаб. Диагн. - 2004. - №11. - С.18-22.
4. Зорин Н.А., Зорина В.Н., Зорина Р.М. Универсальный модулятор цитокинов а -макроглобулин // Иммунология - 2004. - №5. - С.302-304.
5. Зорина В.Н., Зорина Р.М., Левченко В.Г., Воронина Е.А, Зорин Н.А. Концентрация комплексов макроглобулин - IgG, как возможный критерий для прогнозирования гестоза и оценки степени его тяжести// Клин. Лаб. Диагн. - 2001. - №8. - С.48-49.
6. Насонова В.А., Астапенко М.Г. Клиническая ревматология. Руководство. - М: Медицина, 1989. -592 с.
7. Armstrong P.B., Quigley J.P. а -macroglobulin: an evolutionarily conserved arm of the innate immune system// Dev. Comp. Immunol. - 1999. - Vol.23. -P.375-390.
8. Birkenmeier G. Targetting the proteinase inhibitor and immune modulatory function of human a-Mac-
roglobulin// Mod. Asp. Immunol. - 2001. - Vol.2. -P.32-36.
9. Blass S., Engel J.M., Burmester G.R. The immunologic homunculus in rheumatoid arthritis. A new viewpoint of immunopathogenesis in rheumatoid arthritis and therapeutic consequences// Zeitschrift Fur Rheumatologie - 2001. - Vol.60. - P.1-16.
10. Dominguez M., Cacoub P., Garcia de la Torre
I. , Piette T.J., Salazar Paramo M., Godeau P., Anglees Cano E. Autoantibodies to receptor induced neoepitopes of fibrinolytic proteins in rheumatic and vascular diseases // J. Rheumatol. - 2001. - Vol.28. -P.302-308.
11. Kramer P.R., Kramer S.F., Guan G. 17 betaestra-diol regulates cytokine release through modulation of CD16 expression in monocytes and monocytederived macrophages // Arthritis Rheum. - 2004. - Vol.50. -P.1967-1975.
12. Misra U.K., Gonzalez-Gronow M., Gawdi G., Pizzo S.V. Upregulation of the a -macroglobulin signaling receptor on rheumatoid synovial fibroblasts// J. Biol. Chem. - 1997. - Vol.272. - P. 497-502.
13. Petersen C.M. a -macroglobulin and pregnancy zone protein. Serum levels, a -macroglobulin receptors, cellular synthesis and aspects of function in relation to immunology// Danish Med. Bull. - 1993. - Vol.40. - P.409-446.
14. Stief T.W., Kropf J., Kretschmer V., Doss M.O., Fareed J. Singlet oxygen ((1)O2) inactivates plasmatic free and complexed a -macroglobulin// Thromb. Res.
- 2000. - Vol.98. - P.541-547.
15. T chetverikov I., Verzijl N., Huizinga T.W., TeKo-ppele J.M., Hanemaaijer R., DeGroot J. Active MMPs captured by a -macroglobulin as a marker of disease activity in rheumatoid arthritis // Clin. Exp. Rheumatol.
- 2003. - Vol.21. - P.711-718.
16. Walsmith J., Roubenoff R. Cachexia in rheumatoid arthritis// Int. J. Cardiol. - 2002. - Vol.85. - P.8999.
17. Wu S.M., Boyer C.M., Pizzo S.V. The binding of receptorrecognized a -macroglobulin to the low density lipoprotein receptorrelated protein and the a M signaling receptor is decoupled by oxidation // J. Biol. Chem. - 1997. - Vol.272. - P.20627-20635.
18. Wu S. M., Pizzo S.V. Mechanism of hypochlo-ritemediated inactivation of proteinase inhibition by a -macroglobulin // Biochemistry - 1999. - Vol.38. -P.13983-13990.
19. Wu S.M., Pizzo S.V. Alpha(2)-Macroglobulin from rheumatoid arthritis synovial fluid: functional analysis defines a role for oxidation in inflammation // Arch. Biochem. Biophys. - 2001. - Vol.391. - P. 119-126.
20. Zapico I., Coto E., Rodriguez A., Alvarez C., Torre
J. C., Alvarez V.A. A DNA polymorphysm at the a -macroglobulin gene is associated with the severity of rheumatoid arthritis // J. Rheumatol. - 2000 - Vol.27. -P. 2308-2311.
поступила в редакцию 25.02.2005 отправлена на доработку 09.03.2005 принята к печати 18.03.2005
562
