CC BY
8
УДК 636.52/58:612.8]:616-092.19
Ключевые слова: транспортировка цыплят, стресс, стрессовая чувствительность птиц, цитрат лития
Keywords: transportation of chickens, stress, avian stress sensitivity, lithium citrate
Мифтахутдинов А. В.
КОМПЛЕКСНАЯ ПРОФИЛАКТИКА ТРАНСПОРТНОГО СТРЕССА
у цыплят с разной стрессовой чувствительностью
COMPREHENSIVE PREVENTION OF TRANSPORT STRESS AT CHICKENS WITH DIFFERENT STRESS SENSITIVITY
ФГБОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины» Адрес: 457100, Челябинская область, г. Троицк, ул. Гагарина, 13
The Ural State Academy of Veterinary Medicine Address: 457100, Russia, Chelyabinsk region, Troitsk, Gagarin street, 13
Мифтахутдинов Алевтин Викторович, к. в. н., доцент каф. физиологии и фармакологии
Miftahutdinov Alevtin V, Ph.D., Associate Professor at the Physiology and Pharmacology Dept.
Аннотация. В эксперименте доказано, что у стресс-чувствительных цыплят, отобранных методом моделирования локального адаптационного синдрома, по сравнению со стресс-устойчивыми цыплятами, выше степень и продолжительность течения посттранспортировочных адаптационных процессов. Литий обладает выраженным стресс-протективным действием на цыплят с разной стрессовой чувствительностью, что проявляется наименьшим повышением соотношения гетерофилов к лимфоцитам у цыплят, которым в течение пяти суток применяли цитрат лития в дозе 35 мг/кг живой массы. Наибольший эффект при профилактике транспортного стресса получен при использовании лития цитрата стресс-устойчивым цыплятам.
Summary. In the experiment it is proved that the degree and the duration of post-transport adaptative processes are higher in stress-sensitive chickens, selected by the method of modeling the local adaptation syndrome, in comparison with stress-resistant chickens. Lithium has a marked stress-protective effect on chickens with different stress sensibility which is evident as the least increase of heterophil/lymphocyte ratio in chickens being on lithium citrate in the dose of 35 mg/kg of live weight within five days. The maximum effect in prevention of transport stress was reached when applying lithium citrate to stress-resistant chickens.
Введение
Отечественными и зарубежными исследователями установлено, что транспортировка для цыплят является фактором, вызывающим развитие стрессового состояния. Под действием стресс-факторов происходят метаболические нарушения, направленность которых зависит от силы и продолжительности воздействия негативных факторов, уровня кормления кур, их продуктивности и стрессовой устойчивости. При убое цыплят, которые при отлове, погрузке и транспортировке длительно находились в состоянии стресса, замедляется процесс обескровливания, что снижает качество тушек [3].
В рамках существующих промышленных технологий избежать стрессового воздействия при транспортировке невозможно. Поэтому основным методом снижения негативных последствий транспортировки может стать повышение устойчивости птиц к стрессам. Решение этой проблемы возможно
двумя путями: с помощью использования стресс-устойчивых цыплят и применения антистрессовых препаратов.
В данной работе представлены данные о результатах практического использования обоих указанных подходов для снижения негативных последствий транспортировочного стресса у цыплят-бройлеров.
Цель работы - изучение влияния индивидуальной стрессовой чувствительности цыплят и эффективности стресс-протективных свойств лития цитрата в зависимости от уровня стрессовой чувствительности при транспортировке цыплят.
Материалы и методы исследований
В процессе экспериментальной работы оценивали воздействие лития цитрата на цыплят с разной стрессовой чувствительностью при развитии транспортировочного стресса. Для определения стрессовой чувствительности нами предложен способ, заключающийся
в моделировании локального адаптационного синдрома путем внутрикожного введения 70 % раствора скипидара в область бородки в дозе 0,1 мл и оценки результатов реакции по степени выраженности признаков острого асептического воспаления через 24 часа после постановки пробы.
Цыплят с известной стрессовой чувствительностью делили на 4 группы: первая и вторая группы цыплят служили контролем, им препарат не применяли, цыплятам третьей и четвертой группы за 2 суток до транспортировки, в день транспортировки и в течение 2 суток после транспортировки применяли водный раствор лития цитрата в дозе 35 мг на 1 кг живой массы. Первая и третья группа состояла из стресс-чувствительных цыплят, цыплята второй и четвертой группы относились к стресс-устойчивым.
Транспортировку осуществляли летом, автомобильным транспортом по маршруту протяженностью 220 км, общее время в пути составляло около 3 часов. Во время транспортировки цыплята находились в 2 клетках площадью 2 м2 каждая, без доступа к воде и кормам. Для оценки особенностей проявления адаптационных реакций и стрессового воздействия у кур с разной стрессовой чувствительностью были изучены лейкограм-мы, с учетом показателя процентного отношения гетерофилов к лимфоцитам (Г/Л) в состоянии относительного покоя до транспортировки, непосредственно сразу после транспортировки и через сутки после транспортировки. Показатель соотношения Г/Л является надежным признаком, отражающим степень стрессированности птиц [2, 9].
Кровь для приготовления мазков брали путем пункции гребешка, в одно и то же время в период с 13 до 14 часов. Мазки окрашивали по Романовскому - Гимза, подсчет клеток крови осуществляли унифицированными методами, в каждом мазке подсчитывали 200 лейкоцитов, в каждой группе подсчитывали мазки от 6 голов.
Статистический анализ данных осуществляли с помощью программы Statistica 6.1 с использованием методов непараметрической статистики. Для анализа статистической разницы между двумя группами использовали
и-критерий Манна-Уитни, в данном случае данные представлены в виде медианы с указанием верхнего и нижнего квартиля (Ме ^1^3). Для анализа различий в графиках между четырьмя группами использовали критерий Краскела - Уоллиса.
Результаты исследований и обсуждение
Для оценки особенностей проявления адаптационных реакций и стрессового воздействия у цыплят с разной стрессовой чувствительностью были изучены лейкограммы с учетом показателя процентного отношения гетерофилов к лимфоцитам (Г/Л) в состоянии относительного покоя до транспортировки, непосредственно сразу после транспортировки и через сутки после транспортировки.
На рисунке 1 представлены показатели соотношения Г/Л. Представленные на рисунке 1 данные свидетельствуют об отсутствии статистически значимых отличий в лейкограмме цыплят с разной стрессовой чувствительностью в состоянии относительного покоя.
Транспортировка существенным образом оказала влияние на поведение цыплят и их внешний вид. Цыплята отказывались от корма и воды, на раздражители реакция либо отсутствовала, либо была незначительна, наблюдалась мышечная дрожь, синюшность слизистых оболочек, у большинства испытуемых отмечалась взъерошенность перьевого покрова.
Рис. 1. Показатели соотношения Г/Л в эксперименте. Примечание: Г/Л до транспортировки: р = 0,1378; Г/Л через 30 минут после транспортировки: р = 0,0044; Г/Л через сутки после транспортировки: р = 0,0007.
В процессе транспортировки произошла гибель одной головы из группы стресс-чувствительных цыплят, которым не применяли лития цитрат.
Анализируя представленные данные, необходимо отметить общую закономерность в развитии адаптационного процесса у цыплят, проявляющуюся в повышении соотношения Г/Л через 30 минут после транспортировки и снижающуюся через сутки. Выраженность этого процесса выше у стресс-чувствительных цыплят, через 30 минут после транспортировки соотношение Г/Л достигает значения, составляющего для цыплят контрольной группы 1,05 (0,65-1,32), для цыплят опытной группы 0,96 (0,54-1,12), что указывает на развитие стресса. У стресс-устойчивых цыплят показатель через 30 минут после транспортировки выражен в меньшей степени по сравнению со стресс-чувствительными цыплятами и соответствует для цыплят контрольной группы 0,67 (0,49-0,73) и для цыплят опытной группы 0,56 (0,25-0,63).
Механизмы, лежащие в основе лейкоцитарной реакции, основаны на разрушении клеток или перераспределении лимфоцитов в организме. В ответ на выброс глюкокор-тикоидов происходит перераспределение лимфоцитов из кровяного русла в органы и ткани; у млекопитающих животных - в основном в лимфатические узлы, селезенку, костный мозг и кожу [8]. С другой стороны, под действием глюкокортикоидов происходит активизация выхода нейтрофилов из костного мозга и других тканей и органов в кровь [6].
Gross W. В., Siegel H. S., 1983, подробно описали этот феномен у птиц [9], впоследствии были представлены доказательства зависимости соотношения Г/Л от уровня глюкокортикоидов в крови кур Maxwell M. H., 1993 [10]. Забудский Ю. И., 2002, Al Murrani et al., 1997, [2, 5] разработали на основании показателя Г/Л методики прогнозирования продуктивности и резистентности кур в условиях промышленного содержания. Campo J. L., Davila S. G., 2002, доказали, что существует генетическая предрасположенность закономерностей изменения по-
казателя соотношения Г/Л под действием меняющихся факторов внешней среды; эта предрасположенность передается по наследству [7]. На взаимосвязь стрессовой чувствительности, динамики соотношения Г/Л, продуктивности и сохранности птицы указывает в своих работах Al Murrani W. K. et al., 2006 [4].
По данным многочисленных исследователей, занимающихся вопросами стрессов и стрессовой чувствительности птиц (Gross W. В., 1983; Maxwell M. H., 1993; Al-Murrani W. K., 2006; Забудский Ю. И., 2002), при изучении показателя соотношения Г/Л четко прослеживается закономерность величины стрессового воздействия и уровня повышения соотношения Г/Л [2, 5, 9, 10]. Соотношение Г/Л выше 0,6 указывает на развитие стресса, менее 0,3-0,4 - на нормальное соотношение процессов возбуждения и торможения, уровень от 0,4 до 0,6 - на стадию, которую по классификации неспецифических адаптационных реакций организма Гаркави Л. Х. с соавт. (1998) можно отнести к стадии активации или ориентировки стресса [1]. Повышение соотношения Г/Л более 0,8, согласно результатам наших исследований и данным вышеперечисленных авторов, указывает на сверхпороговый уровень внешнего воздействия и чрезмерную активацию стресс-реализующих систем, приводящую к развитию стрессовых повреждений организма.
Показатель соотношения Г/Л во всех группах увеличивается статистически достоверно, в первой группе повышение средних значений произошло в 4,2 раза (р = 0,006170), во второй группе - в 2,6 раз (р = 0,003948), в третьей группе - в 2,8 раз (р = 0,003948) и в четвертой группе - в 1,8 раз (р = 0,006486).
При межгрупповом сравнении показателя соотношения Г/Л, полученного через 30 минут после транспортировки, необходимо отметить, что имеется статистически выраженная разница между группами (p = 0,0044). В контрольных группах, цыплятам которых не применяли лития цитрат, у стресс-чувствительных цыплят показатель соотношения Г/Л выше на 53,2 % (р = 0,028460), в опытной группе показатель стресс-чувствительных кур также выше на 80,4 %
(р = 0,006486). Наименьшее повышение показателя отмечается у стресс-устойчивых цыплят, которым применяли цитрат лития, наивысшее повышение показателя отмечается у стресс-чувствительных цыплят контрольной группы. Сравнивая разницу показателя соотношения Г/Л у цыплят с одинаковой стрессовой чувствительностью опытной и контрольной группы до транспортировки с показателем, полученным через 30 минут после транспортировочного воздействия, необходимо отметить, что показатель статистически равнозначен и у стресс-чувствительных цыплят соответствует значению р = 0,465209, у стресс-устойчивых - р = 0,078170.
Через сутки после транспортировки происходит снижение показателя соотношения Г/Л во всех группах, межгрупповые различия статистически высокодостоверны (р = 0,0007). В первой группе показатель, полученный через сутки после транспортировки, статистически равнозначен данным, полученным через 30 минут после транспортировки (р = 0,117186), и снижается на 28,6 %, соотношение Г/Л по сравнению с фоновым показателем остается выше в 3 раза (р = 0,006170).
Во второй группе через сутки после транспортировки происходит снижение показателя на 26,3 % (р = 0,045328) по сравнению с показателем, полученным через 30 минут после воздействия, и выше почти в 2 раза (р = 0,003948) по сравнению с исходными данными, полученными до проведения транспортировки.
В третьей группе показатель соотношения Г/Л через сутки после проведения транспортировки становится ниже на 42,7 % (р = 0,003948) и по сравнению с фоновым показателем повышен на 61,2 % (р = 0,010406). В четвертой группе снижение показателя через сутки после транспортировки становится ниже на 39,6 % (р = 0,016310) по сравнению с данными, полученными через 30 минут после транспортировки, и становится статистически равнозначным (р = 0,521840).
При межгрупповом сравнении показателя соотношения Г/Л, полученного через сутки после транспортировки, необходимо отметить, что в контрольных группах у стресс-
чувствительных цыплят показатель соотношения Г/Л выше на 31,6 % (р = 0,006170), в опытной группе показатель у стресс-чувствительных цыплят также выше на 41,6 % (р = 0,010406).
Выводы
Согласно теории общих неспецифических адаптационных реакций организма Гарка-ви Л. Х. с соавт., 1998, реактивность стресс-устойчивых цыплят, по сравнению с реактивностью стресс-чувствительных, более высокого уровня, что характеризуется развитием реакции активации более низких «этажей», выражающейся в различном уровне показателя соотношения Г/Л. Обнаруженные изменения соотношения Г/Л непосредственно после транспортировки и через сутки после транспортировки имеют общую направленность для цыплят всех групп, выражающуюся в повышении под действием стрессирую-щего фактора уровня гетерофилов в крови и снижения количества лимфоцитов. Стрессовая чувствительность оказывает воздействие на степень и продолжительность течения посттранспортировочных адаптационных процессов у цыплят.
При анализе показателей цыплят, которым применяли лития цитрат, и цыплят контрольной группы четко прослеживается закономерность, выражающаяся в обнаруженном антистрессовом действии лития цитрата. Антистрессовая активность лития цитрата может быть связана, с одной стороны, с нор-мотимическим воздействием лития и снижением эмоционального воздействия, с другой стороны, со стресс-протективными свойствами лития, связанными со способностью лития тормозить выход катехоламинов из нервных окончаний и ускорять разрушение норадре-налина в клетках. Наивысшая активация стресс-реализующих систем организма цыплят в ответ на транспортировочное воздействие наблюдается у стресс-чувствительных цыплят, которым не применяли цитрат лития, у стресс-устойчивых цыплят, которым применяли цитрат лития, отмечается наименьшее повышение уровня соотношения Г/Л, что связано с индивидуальными особенностями цыплят с разной стрессовой чув-
ствительностью и стресс-протективным действием цитрата лития.
Список литературы
1. Гаркави, Л. Х. Антистрессорные реакции и ак-тивационная терапия / Л. Х. Гаркави, Е. Б. Квакина, Т. С. Кузьменко. - М. : Имедис, 1998. - 565 с.
2. Забудский, Ю. И. Современные методы диагностики состояния стресса у сельскохозяйственных птиц / Ю. И. Забудский // Материалы Третьей между-нар. ирано-российской конференции «Сельское хозяйство и природные ресурсы». - М., 2002. - С. 34-42.
3. Кавтарашвили, А. Ш. Проблема стресса и пути ее решения / А. Ш. Кавтарашвили, Т. Н. Колокольнико-ва // Животноводство России. - 2010. - N° 6. - С. 15-17.
4. Al-Murrani, W. K. Association between heterophil/ lymphocyte ratio, a marker of 'resistance' to stress, and some production and fitness traits in chickens / W. K. Al-Murrani, A. J. Al-Rawi, M. F. Al-Hadithi, B. Al-Tikriti // British Poultry Science. - № 47. - 2006. - P. 443-448.
5. Al-Murrani, W. K. Heterophil lymphocyte ratio as a selection criterion for heat resistance in domestic fowl /
W. K. Al-Murrani, A. H. Z. Al-Sam, A. M. Al-Athari // British Poultry Science. - 1997. - № 38. - P. 159-163.
6. Bishop, C. R. A non-steady-state kinetic evaluation of mechanism of cortisone-induced granulocytosis / C. R. Bishop, J. W. Athens, D. R. Boggs, H. R. Warner, G. Cartwrig, M. Wintrobe // Journal of Clinical Investigation. - № 47. - 1968. - P. 249-264.
7. Campo, J. L. Estimation of Heritability for Heterophil/Lymphocyte Ratio in Chickens by Restricted Maximum Likelihood. Effects of Age, Sex, and Crossing / J. L. Campo, S. G. Davila // Poultry Science. - № 81. -2002. - P. 1448-1453.
8. Dhabhar, F. S. A hassle a day may keep the doctor away: stress and the augmentation of immune function / F. S. Dhabhar // Integrative and Comparative Biology. -№ 42. - 2002. - P. 556-564.
9. Gross, W. B. Evaluation of the heterophil/ lymphocyte ratio as a measure of stress in chickens / W. B. Gross, H. S. Siegel // Avian Diseases. - № 27. -1983. - P. 972-979.
10. Maxwell, M. H. Avian blood leucocyte responses to stress / M. H. Maxwell // World's Poultry Science Journal. - № 49. - 1993. - P. 34-43.
