Количественное определение основных классов бас в листьях и матричной настойке копытня европейского методом ВЭЖХ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ КЛАССОВ БАС В ЛИСТЬЯХ И МАТРИЧНОЙ НАСТОЙКЕ КОПЫТНЯ ЕВРОПЕЙСКОГО МЕТОДОМ ВЭЖХ

Н.Н. Щуревич, А.А. Маркарян

Кафедра фармации с курсом социальной фармации Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова ул. Складочная, 1, стр. 17, Москва, Россия, 127018

Проведен химический анализ листьев и матричной настойки из листьев копытня европейского — Asarum europaeum L. — методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Показана возможность использования метода ВЭЖХ для создания современных унифицированных методик контроля качества как сырья копытня европейского, так и гомеопатических препаратов на его основе.

Ключевые слова: копытень европейский, Asarum europaeum, ВЭЖХ, флавоноиды, аминокислоты, углеводы, полифенолы, гомеопатия.

В настоящее время трава копытня европейского находит широкое применение в медицине, особенно в гомеопатии за рубежом [1]. В литературе гомеопатических средств (ГС), применяемых на территории РФ, мы не встретили [2], хотя врачи все более привержены использовать их в своей практике. Поэтому актуальным являются исследования по созданию отечественных ГС на основе листьев копытня европейского и их стандартизация современными методами анализа, унифицированными как для сырья, так и препаратов. В ГС биологически активные соединения (БАС) находятся в микроколичествах, в связи с чем необходимо использовать наиболее чувствительные и точные методы контроля качества, такие как ВЭЖХ.

Нами проведен анализ листьев и матричной гомеопатической настойки (МГН) из листьев копытня европейского, приготовленной в соответствии с методом Общей Фармакопейной статьи «Настойки гомеопатические матричные» [3], с использованием в качестве растительного сырья высушенных листьев, а в качестве растворителя — 70% по объему этилового спирта.

По результатам проведенного фитохимического анализа в соответствии с данными литературы в листьях и НМГ копытня европейского установлено наличие следующих групп БАС: флавоноидов, полифенолов, моно- и дисахаридов, свободных аминокислот.

Для разработки методик качественного и количественного анализа негидролизованных гликозидов флавоноидов методом ВЭЖХ был использован «Agilent 1100 series» (США) с УФ-спектрофотометрическим детектором на диодной матрице с последующей компьютерной системой для сбора и обработки данных ChemStation. Условия хроматографического анализа флавоноидов: колонка Phe-nomenex Luna 5 мкм C18(2), октадецилсиликагель 5 мкм, 250x4,6; подвижная фаза: 80% (А) раствора трихлоруксусной кислоты, рН = 2,5 и 20% (В) ацетонитрила (табл. 1).

Таблица 1

Содержание гликозидов флавоноидов в листьях и МГН копытня

БАС копытня Листья, в мг/г Матричная настойка, в мг/л

Рутин 0,17 9,3

Гиперозид 0,18 4,5

Астрагалин 0,15 4,1

При количественном определении гидролизированных флавоноидов методом ВЭЖХ использовались те же условия, кроме подвижной фазы: 68% (А) раствора трихлоруксусной кислоты, рН = 2,5 и 32% (В) ацетонитрила (табл. 2).

Таблица 2

Содержание агликонов в листьях и МГН копытня

БАС копытня Сырье, в мг/г Настойка, в мг/мл

Кверцетин 0,65 0,03

Кемпферол 0,49 0,02

Изорамнетин 4,21 0,09

Идентификацию и количественное определение углеводов листьев и МНГ копытня проводили методом ВЭЖХ, используя внешние стандарты. Установлено, что листья содержат фруктозу (1,29%), глюкозу (3,45%) и сахарозу (1,14%); МНГ — фруктозу (103,7 мг/100 мл), глюкозу (102,9 мг/100 мл) и сахарозу (48,5 мг/100 мл); галактозы, рибозы и ксилозы не найдено. Методом ВЭЖХ обнаружено 14 аминокислот (листья/НМГ, мг/г): серин (0,07/5,3), гистидин (0,11/5,4), глицин (0,07/2,1), треонин (0,03/3,6), аланин (0,1/13,6), аргинин (0,42/69,9), тирозин (0,13/18,3), цистеин (0,41/12,5), валин (0,06/14,6), метионин (0,15/14,9), изолейцин (0,08/12,8), триптофан (0,02/15,8), лейцин (0,06/7,5), лизин (0,07/2,4). Преобладающими свободными аминокислотами по количественному содержанию являются аргинин, цистеин и метионин. Методом спектрофотометрии при длине волны 750 нм определено содержание полифенольных соединений в листьях копытня — 26,1 мг/г, и в МГН — 0,52 мг/г.

Химическое изучение листьев копытня европейского и МГН на их основе показало, что состав основных действующих БАС матричной настойки аналогичен таковому в нативном сырье.

ЛИТЕРАТУРА

[1] Щуревич Н.Н., Маркарян А.А. Копытень европейский. Химический состав, фармакологические свойства и применение в медицине // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия «Медицина». — 2009. — № 4. — С. 175—180.

[2] Атлас лекарственных растений России / Под ред. В.А. Быкова. — М.: Щербинская типография, 2006. — С. 140—142.

[3] ВФС 42-2799-96. — Настойки гомеопатические матричные.

QUANTITATIVE DEFINITION OF THE BASIC CLASSES OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCE FROM LEAVES AND MATRIX TINCTURE OF ASARUM EUROPAEUM BY HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

N.N. Tschurevitch, A.A. Markarian

Department of pharmacy with course social pharmacy Moscow I. M. Sechenov medical academy Skladochnaya str., h. 1/17, Moscow, Russia, 127018

The chemical analysis of leaves and matrix tincture from Asarum europaeum L. was studied by high-performance liquid chromatography (HPLC). HPLC may be used for creation of modern unified the methodic of quality assurance both raw materials of Asarum europaeum and homoeopathic preparations on its basis.

Key words: Asarum europaeum, HPLC, flavonoids, amino acids, carbohydrates, polyphenols, homoeopathy.