CC BY
28
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
ПЕРВИЧНЫЕ ИММУНОДЕФИЦИТЫ
Первичные иммунодефициты Primary immunodeficiencies
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛ ДНК ТREC И KREC В ПУПОВИННОЙ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ САНКТ-ПЕТЕРБУРГА
Дробышевская В.Г.1, 2, Любимова Н.Е.1, Семенов А.В.1, 2, Тотолян Арег А. 1 2
1 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург, Россия
2 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Первичные иммунодефициты — это большая группа заболеваний, связанных с разнообразными врожденными генетическими нарушениями механизмов иммунной защиты организма, что приводит к развитию тяжелых хронических инфекций и часто к смерти или инвалидизации в раннем возрасте за счет формирования необратимых изменений в органах и тканях. По статистике, на первом месте среди первичных иммуно-дефицитов находятся гуморальные дефекты (61%), на втором месте — комбинированные иммунодефицитные состояния (18%). (Ярцев М.Н., и соавт., 2006). Данные группы иммунодефицитов характеризуются полным или частичным отсутствием T- и/или B-клеток, или ослаблением функций этих клеток. В связи с чем особый научный интерес представляет исследование содержания у людей Т-рецепторных эксцизионных колец — TREC (T-cell receptor excision circles) и B-клеточных эксцизионных колец — KREC (kappa-deleting recombination excision circles). TREC формируются в процессе V(D) J-реарранжировки, когда часть генетического материала вырезается и замыкается в кольцо. TREC служат маркерами созревания Т-клеток, недавно эмигрировавших из тимуса и слабо вовлекавшихся в процесс пролиферации или не делившихся совсем. В ходе пролиферации клеток иммунной системы эксцизионные кольца остаются в одной из дочерних клеток, что позволяет использовать их определение как показатель пролиферации лимфоцитов и суррогатный маркер нормального развития иммунной системы. Аналогично образуются KREC (kappa-deleting recombination excision circles) — B-клеточные эксцизион-ные кольца. Содержание KREC в периферической крови является также суррогатным маркером эффективности развития B-клеточного звена иммунной системы в процессе эмбриогенеза. Определение TREC и KREC можно применять для ранней диагностики иммунодефицитных состояний (van Zelm et al., 2011).
Цели и задачи. 1. Отработка наиболее удобной для практического применения в скрининговом режиме методики выделения ДНК из образцов доноров.
2. Валидация методики количественного определения молекул ДНК TREC и KR.EC с помощью ПЦР в режиме реального времени.
3. Популяционный анализ концентрации TREC и KREC в крови условно здоровых новорожденных С.Петербурга.
Материалы и методы. В настоящем исследовании использовалась пуповинная кровь новорождённых. Образцы крови до обследования были заморожены и хранились при -80 °С. Выделение ДНК из клеток крови осуществляли ручным методом на наборе для выделения ДНК/РНК «Рибо-Преп» (ИнтерЛабСервис, РФ) согласно инструкции фирмы-производителя и с небольшими модификациями. Для определения количества TREC и KREC использовали российскую тест-систему, предоставленную Институтом химической биологии и фундаментальной медицины подробно описанной в (Медицинская иммунология, 2015. Т. 17, № 5. С. 467-478). Интерпретацию полученных результатов проводили, согласно рекомендациям разработчика. Статистический анализ осуществляли с использованием программы GraphPad Prizm 5.0
Результаты и обсуждение. В нашем случае проанализированы образцы пуповинной крови 157 новорождённых — 79 девочек и 78 мальчиков. Концентрация TREC составила от 10762 до 121068 копий/105 лимфоцитов. Среднее значение TREC 29945±1412 копий/105 лимфоцитов. Концентрация KR.EC составила от 10550 до 89533 копий/105 лимфоцитов, среднее 36199±1347 копий/105 лимфоцитов. Достоверных межполовых различий концентрации TREC и KREC выявлено не было, что совпадает с литературными данными (Хие-Цод Ои е! а1., 2012; До-нецкова А.Д. и др., 2014; Гордукова и др., 2015).
Заключение. Определение количества TREC успешно используется в разных скрининговых программах новорождённых на выявление иммунодефицитов (СЫапш е! а1., 2013; Клап е! а1., 2014). Возможность определения количества KREC для диагностики гуморальных дефектов иммунной системы так же показано в ряде зарубежных и отечественных исследований. Для установления более точного диапазона референтных величин и формулировки возможных рекомендаций использования тест-системы в широкой практике национальной программы скрининга новорожденных требуются дальнейшие эксперименты.
СОДЕРЖАНИЕ TNFa, ^N7, ^-4 И ^-10 В СЫВОРОТКЕ КРОВИ У ДЕТЕЙ С ТРАНЗИТОРНОЙ ГИПОГАММАГЛОБУЛИНЕМИЕЙ
Климов А.В., Климов В.В., Деев И.А.
Сибирский государственный медицинский университет, Томск, Россия
Транзиторная гипогаммаглобулинемия детского возраста (ТГД), относительно доброкачественная форма первичного иммунодефицита, характеризуется задержкой становления синтеза IgG, а иногда и снижением ^М
